1.

Obtencin del material vegetal.- la recoleccin se la hace en un da soleado, cuando la planta se encuentra en floracin para as aprovechar las hojas y las flores.

2.

Clasificacin y limpieza.- se lava el material recolectado y se lo clasifica separando las hojas, los tallos y las flores. No se saca la raz para que rebrote y crezca fcilmente y mejor, adems que no tiene poder tintreo como para ser utilizado.

3.

Secado.- para secar el material, ste debe estar sin agua, se puede realizar la rama completa o separando las hojas del tallo y las flores. Se la deja por 6 das aproximadamente a la sombra. El material seco debe estar crujiente para poder realizar el siguiente proceso.

4. 5. 6. 7.

Molienda.- triturar el material en un molino manual hasta un tamao aproximado de las partculas de 2 a 3 mm. Extraccin.-se la realiza mediante la maceracin con etanol puro (96%) para obtener el extracto total.. Filtracin.- se la realiza por el mtodo al vaco para acelerar el proceso y separar la parte lquida del slido en menor tiempo. Concentracin.- se concentra el material hasta un 50% de su volumen a bao de Mara con temperatura de 40C y 0 de presin atmosfrica para evitar la degradacin de los colorantes y los principios activos presentes en la planta.

DETERMINACIN DEL COLORANTE

En el anlisis fitoqumico de la Baccharis latifolia se indica la presencia de flavonoides que son colorantes vegetales; especficamente es un flavonol llamado quercetina, cuya frmula qumica es la siguiente:

OH HO O

OH OH H

6.2.1 -

Procedimiento.

Colocar en un baln aforado O 50 gr de planta seca molida. Aadir 350 ml de etanol. Agitar con una varilla de vidrio para que el alcohol penetre en todo el material. Dejar por 48 horas el macerado bien tapado. Agitar espordicamente.

OH

6.6 FILTRACIN

La filtracin se la realiza por el mtodo al vaco, utilizando un papel filtro sobre un embudo, y ste en un matraz, al cual se le aade una bomba de vaco para acelerar el proceso y obtener un residuo completamente seco. Se obtiene 49.8 gr de residuo, y 250 ml de extracto total ya que los 100 ml son absorbidos por la planta.

6.7 CONCENTRACIN Se concentra el material hasta un 50 % de su volumen en el rota vapor, a bao Mara con temperatura de 40C y 0 de presin atmosfrica para evitar la degradacin delos colorantes y de los principios activos presentes en la Baccharis latifolia. De la filtracin se obtiene 250 ml de extracto total, se procede a concentrar al 50%, y se obtiene l25 ml, recuperndose l25 ml de etanol, el mismo que puede ser reutilizado.

6.3 PURIFICACIN Se trat de purificar el colorante obtenido mediante la extraccin por agitacin mediante la polaridad, pero es un gasto innecesario ya que los solventes orgnicos son costosos, es por esto que se trabaj slo con el extracto total de hojas y flores en estado seco y fresco.

ANLISIS DEL COLORANTE OBTENIDO

7.1. DETERMINACIN DE LA SOLUBILIDAD

El comportamiento de los colorantes en el bao de teido se ver influenciado por su polaridad. La solubilidad de compuestos orgnicos en funcin de las polaridades tanto del solvente como de la sustancia a disolver.

7.1.1. POLARIDAD

La polaridad se refiere a la posesin, por una molcula de centros positivos y negativos separados, las cuales provienen de los tomos y su ordenamiento o configuracin. El grado de separacin entre los centros o polos determinar el grado de polaridad y por ende el grado de atraccin.

La polaridad de los compuestos orgnicos se incrementa con el nmero de grupos funcionales y disminuye al aumentar el peso molecular.

Se realiz con los siguientes solventes de diferente polaridad.

n hexano diclorometano Acetato de etilo Etanol Agua.

POLARIDAD

7.1.1.1. Procedimiento Colocar 1 gr de hojas molidas en cada solvente, aforando a 50 ml, dejar macerar por 48 h y filtrar.

Para el agua: colocar 1gr de hojas molidas 50 ml de agua a ebullicin durante 1 hora y filtrar.

7.2. DETERMINACIN DEL COLORANTE

En el anlisis fitoqumico descrito en el captulo anterior de la Baccharis latifolia, se indica la presencia de flavonoides, que es un colorante vegetal; ahora se va a determinar que tipo de flavonoide existe.

7.2.1. Procedimiento para verificar la reaccin de Shinoda El extracto alcohlico de la planta se coloca un pequeo trozo de Magnesio y unas tres gotas de HCl concentrado. Las coloraciones generalmente se desarrollan unos dos minutos despus de la adicin del cido y sus intensidades dependen de la cantidad de flavonoides presentes en la muestra. Cuando el extracto vegetal es muy pigmentado, la interpretacin del resultado se hace difcil.

La evidencia positiva de la presencia de flavonoides est dado por coloraciones desde el anaranjado hasta el rojo es indicativo que si hay flavonas; rojo o magneta de flavonoles; magenta, violeta-azul de flavonas; amarillo de isoflavonas, chalconas y auronas no tiene color.

Proceso 1.- Colocar en dos tubos de ensayo 10 ml de extracto alcohlico, el # 1 sirve de patrn referencial. 2.- Agregar al tubo # 2 3gotas (0,5 ml) de HCl concentrado y 3 virutas de magnesio 3.- Observar cuidadosamente los cambios de coloraciones dentro de 10 minutos siguientes.

Al realizar este proceso se observ un color amarillo intenso, determinando as que el colorante existente en la Baccharis latifolia es un flavonol llamado quercetina..

7.3. REACCION CON LOS LCALIS Los extractos acuosos de las plantas pueden mostrar variaciones de color con el agregado de un lcali, si hay la presencia de flavonas se ponen de color amarillo y flavonoles de amarillo a naranja.

7.3.1. a. b. c.

Procedimiento Colocar en un tubo de ensayo 10 ml del extracto alcohlico. Adicionar 5 gotas de hidrxido de sodio al 10%. Observar si hay cambios de color.

Al realizar este proceso con el extracto total de flores se obtuvo un color amarillo intenso y poco menos con las hojas. Entonces en las hojas existe la presencia de flavonoles.

7.4 REACCIN CON LOS ACIDOS Los extractos de plantas pueden variar de color con el agregado de los cidos, dando un color fuertemente amarillo para flavonas y flavonoles.

7.4.1. Procedimiento a. b. c. Colocar en un tubo de ensayo 10 ml del extracto. Adicionar 3 gotas de HSO. Observar si hay cambio de color.

El extracto adquiere un color amarillo

7.5 PROPIEDADES FSICO QUMICAS De acuerdo a los estudios realizados se determin que el colorante tiene las siguientes propiedades fsico qumicas.

a.

Las flavonas y flavonoles son solubles en: a ebullicin

_ agua -

Etanol

Diclorometano Acetato de etilo N hexano

b.

La frmula qumica del flavonol quercetina es:

OH HO O

OH OH

OH
Quercetina

H O

H HO O

OH

OH
Apigenina

H O

Las hojas poseen una grasa vegetal que hace difcil el proceso de extraccin. Las flavonoides tienen estructuras ricas en grupos hidroxilos Se unen fcilmente a superficies protecas. La presencia de flavonoides en los extractos vegetales hace difcil su extraccin.