Virologa

Profesor: Mario Castillo mario.castillo.r@uandresbello.edu

Virus
Qu son los virus?
Entidades biolgicas microscpicas que consisten en cido nucleico rodeado por una cubierta proteica , cuyo genoma SOLAMENTE se replica en el interior de clulas vivas como bacterias, animales o plantas. Adems utiliza la maquinaria metablica celular para la sntesis de elementos especializados en la transmisin del genoma viral a otras clulas.

Definicin
Los virus no tienen actividad metablica fuera de la clula hospedera. No poseen RIBOSOMAS ni aparato de sntesis proteica. No poseen sistemas para generar ENERGIA (ATP). Son parsitos intracelulares obligados. Los virus son los microorganismos ms pequeos que se conocen. Su tamao vara entre 20 y 300 nm. Para observarlos se requiere el uso de microscopio electrnico (Resolucin 1nm).

Tamao viral
Los virus son los microorganismos ms pequeos que se conocen.
Su tamao vara entre 20 y 300 nm

(Las bacterias miden 1000 nm y los glbulos rojos 7500 nm de dimetro).

Taxonoma viral

Los virus pueden clasificarse segn los siguientes criterios: Organismo hospedero Morfologa de las partcula viral Tipo de genoma viral

Taxonoma viral: Organismo hospedero

Bacterifago T4

Bacterias

Virus de VIH

Virus de

Animales

Virus Mosaico del Tabaco

Plantas

Estructura viral
Las partculas virales presentan una reducida gama de diseos o simetras. Entre stas se destacan:

Simetra icosadrica Simetra helicoidal Simetra binaria Simetra compleja

Morfologa- Estructura viral

Virus Herpes simplex (Icosadrico con envoltura)

Adenovirus (Icosadrico desnudo)

Morfologa- Estructura viral

Virus de la rabia Helicoidal con envoltura

Simetra binaria

Poseen una cabeza con simetra icosadrica y una cola con simetra helicoidal.

Bacterifago Mu Estructura tpica de un bacterifago; virus bacteriano con simetra binaria

Simetra compleja
Presentan una nucleocpside helicoidal o icosadrica recubierta por una envoltura laxa. Pueden ser ovoides, esfricos o pleomrficos (irregulares).

Virus de la viruela (Small pox) Compleja sin envoltura Virus de la hepatitis B Conpleja con envoltura

Taxonoma viral: Morfologa de la partcula viral

Cubierta Lipdica Cubierta Proteica (Cpside)

Acido Nucleico

Con envoltura

Sin envoltura

Cpside
Funciones de la Cpside (Cubierta Proteica): a. Transporta el cido nucleico desde una clula a otra. b. Protege al genoma viral de la accin de nucleasas del hospedero. c. Posee sitios de reconocimiento para receptores celulares (virus desnudos). d. Propiedades antignicas.

Capsmeros Acido Nucleico

Nucleocapside

Capsmeros

Simetra icosadrica
Presentan una nucleocpside esfrica con geometra de poliedro regular de 20 caras triangulares (30 aristas y 12 vrtices). Pueden ser desnudos o estar recubiertos de envoltura.

Estructura tpica de la nucleocpside de un virus icosadrico

Simetra helicoidal
Estructura ms simple. Presentan una nucleocpside cilndrica que puede estar extendida o bien enrollada sobre s misma. Pueden ser desnudos o estar recubiertos de envoltura.

Cpside
Estructura tpica de la nucleocpside de un virus helicoidal

Envoltura (Cubierta lipdica)

1. Proviene de la membrana de la clula del hospedero 2. Posee sitios de unin para receptores celulares
Sin envoltura Componentes (Cubierta externa) Protenas (cpside) Es estable Temperatura cido Proteasas Detergentes Desecacin Liberado por lisis celular Con envoltura Membrana, lpidos, protenas glicoprotenas (manto) Es lbil Temperatura cido Proteasas Detergentes Desecacin Liberado por gemacin, exocitosis y/o lisis celular Debe permanecer en ambientes hmedos. No sobreviven en condiciones adversas (Ej.: tracto gastrointestinal)

Propiedades

Consecuencias

Puede propagarse fcilmente y sobrevivir en condiciones adversas

Tipo de genoma viral

El material gentico de los virus puede estar compuesto por DNA o RNA. Si es DNA se puede encontrar como hebra simple o doble, lineal o circular. Si es RNA se puede encontrar como hebra doble o como una hebra simple De sentido positivo (o mensajero) De sentido negativo (o anti-mensajero). El genoma RNA tambin puede fragmentado en varias molculas. estar

Clasificacin genoma

Para la sntesis de protenas virales (estructurales y enzimas) se requiere la generacin de una molcula de RNA capaz de ser traducida por la maquinaria de la clula hospedera: RNA de hebra simple y polaridad positiva (mRNA)

Genoma viral
Virus DNA Con envoltura Sin envoltura

dsDNA

dsDNA

ssDNA

Hepadnaviridae

Herpesviridae

Poxiviridae

Papovaviridae

Adenoviridae

Parvoviridae

HBV

HHV EBV VZV

Vaccinia (cow pox) Variola (small pox)

HPV

Adenovirus (serotipo 1-49)

B19

Genoma viral

Virus RNA Con envoltura Sin envoltura

+ssRNA

-ssRNA

dsRNA

ssRNA

Genoma viral
Con envoltura

+ssRNA

-ssRNA

Flavi/Toga/ Coronaviridae

Retroviridae

Filoviridae

Ortho/Paramyxo viridae

Bunyaviridae

HCV Virus Rubeola SARS

HIV

Virus bola

Virus Influenza Virus parainfluenza Sarampin Virus sincitial

Hantavirus

Genoma viral
Sin envoltura

dsRNA

ssRNA

Rotavirus

Caliciviridae/ Astroviridae

Picornaviridae

Rhinovirus

Diarrea en nios

Gastroenteritis

Resfro comn

Resumen Formas de Clasificacin

El cido nucleico que conforma su genoma DNA RNA Hebra simple Hebra doble Positiva Negativa Icosadrica La simetra de su nucleocpside Helicoidal Compleja La presencia o ausencia de envoltura Desnudo Con envoltura Eucarionte Procarionte

El nmero de hebras de c. nucleico de su genoma

La polaridad de su genoma

Su hospedero

Ciclo Replicativo Viral

1. 2. 3. 4. 5. Reconocimiento de la clula blanco. Unin o adsorcin. Entrada o penetracin. Prdida de la envoltura o desnudamiento. Sntesis macromolecular (multiplicacin): a. Sntesis temprana de mRNA y protenas no estructurales (enzimas y protenas de unin al cido nucleico). b. Replicacin del genoma. c. Sntesis tarda de mRNA y protenas estructurales. d. Modificacin post-traduccional de protenas. Ensamblaje del virus (maduracin). Liberacin del virus: a. Lisis celular (virus desnudos). b. Exocitosis o lisis celular (virus con envoltura).

6. 7.

Reconocimiento de la clula blanco

Tropismo celular La afinidad biolgica de un virus por un tejido, en un hospedero particular, esta determinado por la presencia de receptores especficos que el virus usa para reconocer, adherirse y entrar a las clulas que componen dicho tejido (Una vez que el virus penetra en la clula blanco, se requieren ciertos factores intracelulares que permitirn su replicacin efectiva...)

Virus HIV adherido a la superficie de un linfocito T

Adsorcin

Receptor viral

Protena de unin

Clula

Envoltura viral

Membrana Celular

Replicacin Virus con manto

1) El virus es capaz de unirse e interactuar especficamente con su clula blanco por medio de protenas virales que interactan con receptores celulares. 2) En algunos casos el manto, compuesto de lpidos y protenas, se fusiona a la membrana celular la nucleocpside se libera en el citoplasma. 3) Usualmente, el virus entra por endocitosis y queda dentro de una vescula. 4) La cpside se remueve enzimticamente y el material gentico es liberado.

Replicacin Virus con manto

Fusin de membrana

Endocitosis

Replicacin Virus con manto

El virus es liberado por exocitosis.

Virus respiratorio sincicial (Paramixovirus)

Replicacin Virus sin manto

El virus desnudo puede ingresar por fusin entre la cpside y la membrana citoplasmtica, lo que causa rearreglos en las protenas de la cpside lo que permite el paso del cido nucleico hasta el citoplasma.

Replicacin
Liberacin del material genmico

Replicacin citoplsmatica

Replicacin Nuclear

Replicacin

Sntesis Proteica

Ensamblaje y liberacin

Bacterifagos
Crecer un csped bacteriano sobre una placa de agar. Agregar Bacterifago La infeccin se observa como una zona limpias sin crecimiento.

Bacterifagos

Ciclo Ltico: Fago se replica en el hospedero, ocasionando lisis celular

Ciclo Lisognico: DNA viral se integra al genoma bacteriano replicndose junto con ste.

Infecciones virales
El mecanismo ms comn de contagio es el indirecto a travs de diversos vehculos, como el agua y los alimentos, por ejemplo, el enterovirus. Sin embargo, muchos virus pueden contagiarse por contacto directo, por va area e incluso, por va parenteral.

Rutas ms comunes de infeccin de los virus. 1)Boca y Faringe. 2)Tracto Respiratorio. 3)Estmago e Intestino. 4)Piel . 5)Inyecciones. 6)Mordedura de insectos.

Virus Hepatitis B
Hepatitis B virus (HBV) perteneciente a la familia Hepadnaviridae Genoma circular dsDNA de 3,2Kpb DNA polimerasa posee transcriptasa reversa Nucleocpside icosahdrica que est formada por 180 a 240 copias de una protena denominada Hepatitis B core antigen (HBcAg) La nucleocpside se encuentra rodeada por una envoltura en la que se reconocen tres protenas virales denominadas small (S), medium (M) y large (L): Estas protenas se conocen como Hepatitis B surface antigens (HBsAg)

Tratamientos Virus Hepatitis B

Interfern

Lamivudina

Adefovir

Va administracin Efectos secundarios

Subcutnea Elevados

Oral Mnimos Escasas 20% al ao 60% a los 4 aos Bajo

Oral Nefrotoxicidad a dosis altas Escasas Excepcional <1% al ao Intermedio

Contraindicacio Numerosas nes Resistencia al frmaco Costo Ninguna

Alto

Virus Hepatitis C
Hepatitis C virus (HCV) HCV pertenece a la familia Flaviridae Virus con envoltura ssRNA de hebra positiva Gran variabilidad en su genoma (RNA polimerasa sin actividad correctora) por lo que vacunacin puede proteger slo contra ciertas cepas

Virus Hepatitis C

Virus Hepatitis C

Estructura genmica

Replicacin

Virus Influenza
Familia Orthoviridae Genoma -ssRNA segmentado Nucleocpside helicoidal que se encuentra rodeada por envoltura Presenta como antgenos Hemaglutinina y Neuraminidasa

Virus Influenza

Retrovirus. VIH
Human Immunodeficiency Virus (HIV) HIV-1, HIV-2 pertenecen a la familia Retroviridae Genoma de dos copias de ssARN de hebra positiva Tienen enzima transcriptasa reversa (RNA a cDNA) Mide unos 120 nm de dimetro y es aproximadamente esfrico. Clula blanco Linfocitos CD4.

Retrovirus. VIH
HIV-1 Responsable de la pandemia. Gran variabilidad gentica. Evolucin rpida y mas agresiva. HIV-2 Endmico en frica oriental. Sumamente raro en Amrica. Enfermedad menos agresiva y de Evolucin lenta.

Tratamiento VIH

Inhidores Anlogos de Nuclesidos (INTR)

Inhidores NO Anlogos de Nuclesidos (INNTR)

Inhibidores de la Proteasa (IP)

Triterapia
1.Inhibidores de la transcriptasa inversa Nombre comercial Nombre genrico Abreviatura _______________________________________________ Retrovir Zidovudina AZT Vdex Didanosina ddI Hvid Zalcitabina ddC Epivir Lamivudina 3TC Zerit Stavudina d4T Viramune Nevirapina NVP 2. Inhibidores de la proteasa Nombre comercial Nombre genrico Abreviatura _________________________________________________ Invirase Saquinavir SAQ (HGC) Fortavase Saquinavir SAQ (HGC) Norvir Ritonavir RIT Crixivan Indinavir IND Viracept Nelfinavir NLF

Retrovirus. VIH
Evolucin de la infeccin Fase primaria tasa de replicacin elevada y una respuesta inmune an no constituida. Fase de cronicidad replicacin muy

disminuida con una alta tasa de latencia, adems de una respuesta inmunitaria activa pero incapaz de eliminar el virus. Fase terminal escaso control inmunolgico debido al agotamiento del sistema inmune.

Retrovirus. VIH

Curso tpico de la infeccin por VIH. Los detalles, en particular los plazos, varan ampliamente de un infectado a otro. En azul, evolucin del recuento de linfocitos T CD4+. En rojo, evolucin de la carga viral.

Diagnstico de infecciones virales

Determine HIV-1/2

Diagnstico de infecciones virales

Organizacin
Association of State and Territorial Public Health Laboratory Directors/CDC Prueba Du Pont (FDA) Cruz Roja Americana

Criterios
Dos cualquiera de: - p24 - gp41 - gp120/gp160 p24 y p31 y p41 o gp120/gp160 3 bandas. 1 de cada grupo de productos genticos: - GAG - POL - ENV 2 bandas: p24 o p31 ms gp41 o gp120/160

Consortium for Retrovirus Serology Standarization

Herpesviridae
8 patgenos humanos Genoma dsDNA que vara entre 150-220Kpb Virus largos (150-200 nm), cpside icosahdrica con envoltura Codifican enzimas que participan en el metabolismo de c. Nucleicos Enzima Timidina kinasa es el blanco de numerosos antivirales Ejemplos: Human Herpesvirus 1 y 2 o Herpes simplex 1 y 2 (HSV-1; HSV-2) Human Herpesvirus 3 o Varicella-zoster (VZV) Human Herpesvirus 4 o Epstein-Barr virus (EBV) Human Herpesvirus 5 o Cytomegalovirus (CMV) Human Herpesvirus 6, 7 y 8 (HHV-6; HHV-7; HHV-8)

Herpesviridae

Infeccin primaria: Existe replicacin viral y el paciente es infeccioso. Generalmente asintomtica

Latencia: El virus permanece en su clula blanco y no puede ser eliminado por las defensas. No existe replicacin viral, el paciente no es infeccioso y no hay manifestacin clnica de la enfermedad

Reactivacin: Ocurre peridicamente y los pacientes vuelven a desarrollar los sntomas de la enfermedad. Hay replicacin viral y pacientes son infecciosos

Herpesviridae
Alpha-herpes virus HSV1, HSV2 y VZV: Se replican rpidamente en varios tipos celulares especialmente en el epitelio escamoso estratificado Beta-herpes virus CMV, HHV6 y HHV7: Se replican lentamente Gamma-herpes virus EBV y HHV8: Se replican lentamente y la infeccin est asociada a linfocitos. Son capaces de inducir la proliferacin celular (cncer)

Replicacin
1) El manto se fusiona con la membrana, la nucleocpside es liberada al citoplasma

2) La nucleocpside es enzimticamente degradada

3) El DNA ingresa al ncleo eucarionte y se transcribe y el RNA es traducido

4) Las protenas se ensamblan generando nuevos virus que son liberados por exocitosis

Herpes Simplex Virus

Enfermedades asociadas a HSV-1 y 2: Gingivoestomatitis herptica (mucosa oral) Herpes genital (mucosa genital) Queratitis herptica (piel) Eczema herpeticum (ojos)

Virus Herpes Simplex 1 (HSV-1): Infecta mayoritariamente mucosa oral. Virus Herpes Simplex 2 (HSV-2): Infecta mayoritariamente mucosa genital.

Herpes Simplex Virus

Las lesiones producen por dao directo del virus y/o indirectamente por la accin inflamatoria del SI

Gingivoestomatitis herptica Herpes labial

Herpes Simplex Virus

Diagnstico Generalmente por la manifestacin clnica. Si existen dudas se realiza un cultivo de HSV desde los fluidos obtenidos de las vesculas o saliva Deteccin Anticuerpos de tipo IgM o IgG anti HSV (glicoprotena G)

Diagnstico de infecciones virales

Citologa virus Herpes simple

Tratamiento Herpes Simplex Virus

Tratamiento: Anlogos de nuclesido (Aciclovir) que inhiben la repliacin viral

Papovaviridae
Se conocen ms de 70 tipos de Human papillomaviruses (HPV), algunos de los cuales son parte de la flora viral encontrada en la piel Genoma dsDNA Virus de 55 nm con cpside icosahdrica sin envoltura Las clulas blanco son las clulas epiteliales de la dermis Ejemplos: HPV-16 y HPV-18 cncer cervical y neoplacias nasofarngeas HPV-13 y HPV-32 (Focal epithelial hyperplasia or Heck's disease)

Virus Papiloma. Virus Oncognicos

Virus Papilloma. Virus oncognico

El virus es trasmitido por relaciones sexuales. Mientras que el hombre suele ser portador asintomtico, en la mujer se pueden producir distintos tipos de cuadros, principalmente en el rea genital: Verrugas, Displasia, Cncer:.

Verruga

Enfermedad de Heck

Virus Papilloma. Virus oncognico

Diagnstico de infecciones virales

Hybrid Capture II HPV

Tratamiento Papiloma Virus

En la actualidad existen dos vacunas: Una Tetravalente (tipos 6, 11, 16 y 18) y otra Bivalente (16 y 18)

Ambas generan una respuesta inmune humoral (generan Ac) contra la protena L1 de la cpside del virus

Deteccin de infecciones virales

Diagnstico de infecciones virales

La tcnica primaria de diagnstico para la mayora de infecciones virales es el aislamiento del virus en cultivo de tejidos

Las tcnicas serolgicas son de gran utilidad ya que es una prueba fcil de realizar en un laboratorio clnico (deteccin directa del antgeno en lquidos corporales o en tejidos)

Actualmente el diagnstico molecular es una herramienta rpida y confiable

Diagnstico de infecciones virales

Identificacin definitiva de los aislamientos
La combinacin del historial clnico y accin citopatognica proporciona la informacin suficiente para identificar virus como el Herpes simple, CMV, VZV, adenovirus y sincitial respiratorio. Adicionalmente las pruebas inmunolgicas proporcionan la informacin necesaria para detectar el antgeno viral o los anticuerpos dirigidos contra ese antgeno. - Neutralizacin - Hemaglutinacin - Inmunofluorescencia - Aglutinacin - ELISA - Radioinmunoensayo (RIA) Para el diagnstico por pruebas moleculares se utiliza hibridacin con sondas, PCR y RT-PCR (este ltimo utilizado principalmente para determinar la carga viral del paciente).

Prevencin y tratamiento
Vacunas

Prevencin y tratamiento
En la actualidad existen vacunas disponibles contra HBV y virus de la influenza

El mecanismo de accin de la mayora de los antivirales involucra la inhibicin de la replicacin viral