UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA DEPARTAMENTO DE CITOHISTOLOGA INMUNOLOGA E INMUNOPATOLOGA

Electroforesis e inmunoelectroforesis
Prctica 3 1. Introduccin
Electroforesis: Mtodo de laboratorio en el que se utiliza una corriente elctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas segn su tamao y carga elctrica a travs de una matriz gelatinosa.

Inmunoelectroforesis: Es una serie de mtodos bioqumicos para la separacin y caracterizacin de protenas basado en la electroforesis y la reaccin con los anticuerpos . Es una tcnica que se realiza en dos fases: primero se separa la mezcla de antgenos por electroforesis y posteriormente el antgeno que se desea detectar se hace reaccionar con un anticuerpo especfico colocado en un pocillo lateral. Por difusin llegan a encontrarse los antgenos y el antisuero, apareciendo el complejo Ag-Ac visible en forma de lneas de precipitacin que pueden ser estudiadas por comparacin con un sistema estndar.
Todas las variantes de inmunoelectroforesis requieren inmunoglobulinas ( anticuerpos que reaccionan con las protenas se separan o se caracterizan).

2. Objetivos
Objetivo General: Que el estudiante se familiarice con tcnicas de biologa molecular de electroforesis e inmunoelectroforesis.

Objetivos Especficos: Conocer la tcnica de electroforesis y su aplicacin en la inmunologa. Explicar cada uno de los pasos de las diferentes tipos de electroforesis y el principio de cada uno. Observar en forma virtual los diferentes mtodos electroforticos.

3. Antecedentes
La electroforesis es un mtodo que permite evaluar los componentes proteicos del suero y otros fludos biolgicos. La lectura en un densitmetro del patrn electrofortico, caracterstico de varias patologas, proporciona los valores porcentuales y absolutos de cada fraccin proteica de la muestra en estudio. Las partculas o molculas que se separan de acuerdo a su carga neta al ser sometidas a la accin de un campo elctrico aplicado externamente. La separacin electrofortica depende de factores como el pH y fuerza inica de la solucin tampn, tipo de soporte, voltaje aplicado y calor generado en el proceso. La inmunoelectroforesis es una tcnica cualitativa que permite la identificacin de diferentes componentes proteicos a travs de arcos de precipitacin, que tienen movilidad electrofortica semejante, pero poseen diferente peso molecular y/o diferentes determinantes antignicos. Se realiza preferentemente en geles agarosa y se distinguen dos etapas:

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1) La muestra de protenas se somete a separacin electrofortica y 2) terminada la electroforesis, las protenas son precipitadas con antisueros poli o monoespecficos, aplicados en el agar en un canal paralelo al eje de migracin. Luego de un perodo de difusin en cmara hmeda, se observan arcos de precipitacin cuya forma y posicin dependen de las caractersticas inmunoqumicas y de la concentracin de cada protena. La electroforesis es la base para muchos mtodos de deteccin en inmunologa, que se basan en la transferencia de las protenas, el ADN, el ARN o una protena en un vehculo. Se conocen los siguientes tipos: Southern blot: Northern blot Western blot Eastern blotting Southwestern blot Suroeste blot

1. Materiales - Computadoras con internet 2. Cuestionario a. Realice un cuadro comparativo entre las tcnicas de trasferencia de protenas:
i. Southern blot: ii. Northern blot iii. Western blot iv. Eastern blotting

b. Realizar el laboratorio virtual y resolver preguntas 1. Deben de leer el documento dado por el laboratorio virtual que se les subi al blog con el nombre Teora Laboratorio virtual para tener la informacin terica del experimento, las instrucciones y las preguntas que deben resolver. Inicia en la pgina 8 del documento con el ttulo Western Blotting technique. 2. Para realizar el experimento deben entrar al siguiente link llamado Laboratorio Virtual que tambin est en su blog. 3. Dar click en el botn AGREE para el acuerdo de restriccin de uso. 4. Luego entrar al MAIN MENU 5. Escoger la opcin nmero 12 Serological Testing en ese momento se desp legar el laboratorio virtual. 6. Deben ir a la barra de herramientas/ Experiment y dar click en que se llama Western Blotting technique. 7. Ya que estn en el experimento deben seguir las instrucciones dadas por el documento de la prctica virtual.