Profrmaco doxorubicina activado por catepsina B para la terapia dirigida contra el cncer (Revisin)

YAN-JUN ZHONG1, 2, LI-HUA SHAO1, 2 y YAN LI1, 2 1 Departamento de Oncologa, Hospital Zhongnan de la Universidad de Wuhan, 2Hubei clave Laboratorio de Tumor. Los comportamientos biolgicos y Hubei Cancer Center Estudio clnico, Wuhan 430071, Repblica Popular de China Recibido el 25 de octubre 2012, aceptado 03 de diciembre 2012 DOI: 10.3892/ijo.2012.1754

Resumen. La Doxorrubicina (DOX) es uno de los medicamentos citotxicos ms eficaces contra el cncer utilizado para el tratamiento de hematolgicos tumores malignos, as como para una amplia gama de tumores slidos. Sin embargo, las aplicaciones clnicas de esta droga han sido durante mucho tiempo limitadas debido a su severa toxicidad dosis-dependiente. Por lo tanto, DOX derivados y anlogos se han desarrollado para abordar esta cuestin. Un tipo de DOX profrmaco, activado por la catepsina B (Cat B), que es muy regulado en alza en los tumores malignos y lesiones pre malignas, ha sido desarrollado para lograr una mayor concentracin de DOX en el tejido tumoral y una concentracin ms baja en el tejido normal, a fin de mejorar la eficacia y reducir la toxicidad a las clulas normales. En esta revisin, nos centramos en profrmacos DOX Cat B-activados y discutimos la eficacia de estos profrmacos, demostrada por los desarrollos clnicos y preclnicos. Correspondencia a: Profesor Yan Li, del Departamento de Oncologa, Zhongnan Hospital de la Universidad de Wuhan, 169 Donghu Road, Wuhan 430071, P.R. de China E-mail: liyansd2@163.com Abreviaturas: Cat B, catepsina B, DOX, doxorubicina ; HPMA ,N - ( 2 - hidroxipropil ) metacrilamida ; PK1 , copolmero de HPMA - Gly - Phe - Leu - Gly doxorrubicina ; PK2 , galactosamina - dirigida poli ( HPMA ) - doxorrubicina ; P - DOX , HPMA copolmero - doxorrubicina conjugados ; P -( GFLG ) DOX - Ab, HPMA copolmero - DOX -OV - TL16 , p -( GFLG ) - DOX - GalN , copolmero de HPMA - Gly - Phe - Lys - Gly -Dox - N acilado galactosamina , p -( GFLG - DOX ) -lac , con lactosa HPMA copolmero - doxorrubicina conjugado , p -( GFLG - DOX ) Trigal , trivalente galactosa que contienen copolmero HPMA - doxorrubicina conjugado ; Ma - GFLG DOX , ( N - metacriloil - glicil ) - dl - fenilalanil leucilglicil - DOX , D2- GFLG -P- DOX , dendrmeros PAMAM ( D- NH2) - Gly - Phe - Leu - Gly - HPMA -

doxorrubicina ; CEM - Arg - Arg - Ala-Leu - Ala - Leu - DOX , 6 - maleimidocaproico cido - Arg - Arg Ala-Leu - Ala-Leu - DOX , EMC - Phe - Lys- PABC DOX , - maleimidocaproico cido - Phe - Lys- PABC - DOX , PG- Phe - Lys- DOX , poliglicerol hiper - Phe - Lys - DOX ; Z - Phe - Lys - PABC - DOX , benciloxicarbonil - Phe - Lys - PABC - DOX Palabras clave: quimioterapia para el cncer , la catepsina B, doxorubicina, profrmacos , terapia dirigida Contenido 1. Introduccin 2. Las estrategias de profrmacos en el tratamiento del cncer 3. La catepsina B (Cat B) como una enzima activadora del Profrmaco 4. Profrmacos DOX Cat B-activados 5. Conclusiones 1. Introduccion. La quimioterapia es un enfoque teraputico importante para el tratamiento de cncer. La doxorrubicina (DOX;. Fig. 1), una antraciclina aislada a partir de cepas de Streptomyces, es uno de los medicamentos ms eficaces contra el cncer, usados para el tratamiento de neoplasias hematolgicas y una amplia gama de tumores slidos, incluyendo linfoma, Sarcoma de Kaposi, tumores seos, as como de estmago, de mama y cnceres de ovario (1,2). DOX en su forma de sal se distribuye fcilmente en casi todos los tejidos y los compartimentos intracelulares a travs de difusin pasiva o transporte activo tras administracin intravenosa, lo que resulta en efectos txicos indiscriminados en todos las clulas expuestas a la misma. Por lo tanto, la aplicacin clnica de DOX es limitado por sus efectos secundarios dependientes de la dosis, tales como la toxicidad en mdula sea, cardiotoxicidad, nefrotoxicidad y hepatotoxicidad.

activado por enzimas, que se convierte en 5fluorouridinamo 5-fluoro-2-desoxiuridina en clulas tumorales para lograr la citotoxicidad especfica (23). Los profrmacos se pueden dividir en frmacos de alto y bajo peso molecular en trminos de peso molecular ( Mw ) . Los primeros se internalizan por endocitosis pasiva o activa, y en ltima instancia se localizan en los componentes lisosmicas de las clulas, mientras los ltimos suelen entrar en las clulas, principalmente por difusin ( 24 ). La Mw y la biodistribucin de los medicamentos tienen efectos importantes en la eficacia antitumoral. Frmacos macromoleculares se acumulan en tejidos tumorales debido a la mayor permeabilidad y retencin del efecto (25-27). Un Mw por debajo del umbral renal (~ 50.000 g /mol) se pierde rpidamente de la circulacin , por lo tanto , drogas de peso macromolecular pueden haber aumentado la vida media intravascular, lo que resulta en un aumento de la eficacia teraputica ( 27 ). El N (2 - hidroxipropil) metacrilamida ( HPMA ) , conocido como uno de los vehculos de frmacos polimricos prototpicos ms utilizados, fue utilizado por primera vez para sintetizar frmacos polimricos en la dcada de 1970 , debido a sus propiedades no txicas y no inmunognico y su larga vida media ( 28,29 ). Se ha demostrado que un HPMA copolmero Mw de 200.000 a 600.000 gMol es deseable para la orientacin pasiva eficiente de los tumores slidos (30). Los profrmacos que llevan HPMA se han desarrollado en estudios preclnicos e incluyen caplostatin (31,32), P- GDM (33,34) y P - HYD - IgG (35), as como en la fase III de los estudios clnicos y incluido HPMA copolmero Gly - Phe - Leu - Gly doxorrubicina (PK1) (36-39), galactosamina - dirigida poli (HPMA) doxorrubicina (PK2) (40-42), PK3 (36), PNU166945 (43), AP5346 (44-48) y AP5280 (49-51). 3. La catepsina B (Cat B) como una enzima activadora del profrmaco Algunas enzimas asociadas a tumores, tales como proteasas, glucuronidasas o carboxylesterases, expresadas intra o extracelular en las clulas cancerosas, pueden liberar o activar profrmacos. Cat B, una proteasa lisosomal de cistena en las clulas y tejidos normales, se considera uno de los mejores ejemplos de proteasas intracelulares. Es muy upregulated en tumores malignos y premalignos lesiones en los niveles de ARNm y protenas (52). Cat B se localiza en vesculas perinucleares, presumiblemente lisosomas en las clulas normales. Sin embargo en las clulas tumorales y oncogenicastransformadas, Cat B se localiza en vesculas perinucleares, en las vesculas a lo largo del citoplasma y en la periferia de la clula (53). Cat B Pericelular

Figura 1. Estructura de DOX. DOX contiene un grupo amino (-NH2) en el sexto anillo, que puede conjugar con un grupo carboxilo (-COOH), y un grupo carbonilo (-C = O) en otro anillo de seis miembros que puede reaccionar con grupos amino.

Estos son los dos sitios ms comunes para conjugar profrmaco diseo.Para reducir los efectos secundarios de este frmaco, se han hecho esfuerzos significativos para desarrollar derivados y anlogos de DOX con menos efectos txicos y propiedades farmacolgicas mejoradas. Varias estrategias se han investigado en clnica y ensayos preclnicos, incluyendo varios mtodos de administracin, combinaciones con otros frmacos quimioterpicos [por ejemplo, adriamicina, bleomicina, vinblastina y dacarbazina (ABVD), ciclofosfamida, Hidroxidaunomicina, oncovina y prednisona (CHOP)] (3), la adicin de nutrientes antioxidantes (4) y cardioprotectors (5-7), el desarrollo de los liposomas (8) y nanopartculas (9), los efectos del ejercicio agudo (10) y el desarrollo de profrmacos (11-13). En esta revisin, nos centramos en las estrategias de profrmacos DOX. 2. Las estrategias de profrmacos en el tratamiento del cncer Los profrmacos son derivados de frmacos que permanecen inactivos en su forma de prototipo, pero se metaboliza en el cuerpo para generar el frmaco activo en el sitio de accin. Son particularmente tiles en el desarrollo de nuevos frmacos quimioteraputicos antitumorales, que llevan a la toxicidad reducida, mejoran la especificidad y la evitacin de resistencia a mltiples frmacos (14,15). El uso de profrmacos para la terapia dirigida se basa normalmente en la clula tumoral asociada a marcadores de superficie, tales como antgenos o receptores, cuya expresin difiere entre las clulas normales y cancerosas (16,17). Se han interpuesto variadas estrategias profrmaco, incluyendo activos y enfoques de orientacin pasiva con anticuerpos, protenas del suero, liposomas y polmeros sintticos (18-22). Ha habido algunos profrmacos clsicos y de xito clnico, como capecitabina, un profrmaco

participa en los procesos de degradacin asociados con el tumor, proliferacin, invasin y metstasis. Por otra parte, la exposicin a DOX puede inducir un tiempo-y regulacin por incremento dependiente de la dosis de expresin de Cat B en los niveles de ARNm y protenas (5). Cat B escinde Leu, Arg-Arg, Ala-Leu, PheArg, Phe-Lys, Ala-Phe-Lys, Gly-Leu-Phe-Gly, GlyPhe-Leu-Gly y Ala-Leu- Ala-Leu (18,54-58). Hay varios profrmacos DOX de baja y alta Mw que pueden ser activados por Cat B. Adems, Tambin sido diseado DOX inmunoconjugados, en el que DOX est vinculado a un anticuerpos carcinoma-especifico a travs de oligopptidos Cat B-activados (59). En todos estos conjugados se han demostrado liberacin de DOX rpida y casi cuantitativa en presencia de Cat B. La velocidad de liberacin DOX depende de la duracin y la estructura del espaciador. El tetrapptido, Gly-Phe-Leu-Gly, se ha encontrado que es uno de los espaciadores ms adecuados. Al respecto, en este la interaccin estrica entre el sustrato peptdico y Cat. B tiene un impacto significativo en la liberacin de DOX a partir de profrmacos (60). Por lo tanto, para disminuir la interaccin estrica, es necesario integrar un espaciador auto-immolative, tales como paraaminobenzyloxycarbonyl (PABC) entre el frmaco y el sustrato oligopptido. 4. Profrmacos DOX Cat B-activados Ejemplos de profrmacos DOX Cat B-activados se ilustran en la fig 2 y se resumen en la Tabla I.

Profrmacos DOX que contiene el tetrapptido Gly-Phe-Leu-Gly. El tetrapptido, Gly-Phe-Leu-Gly, se ha demostrado ser el ms eficaz con respecto tanto a la estabilidad del plasma y rpida hidrlisis en la presencia de Cat B. Por lo tanto, muchos profrmacos DOX se basan en este tetrapptido. PK1. PK1 [FCE28068; P (GFLG)-ADR; DOXHPMA; doxorrubicina HPMA copolmero conjugado; HPMA-doxorrubicina, 8% en peso de DOX; figura. 3A], un profrmaco polimrico de Mw ~ 30.000 gMol, fue la primera macromolecular profrmaco en entrar en ensayos clnicos, y ha llegado a la fase II de ensayos clnicos. Los estudios preclnicos que utilizan las clulas tumorales, incluyendo L1210 u - , v D DOX-resistente clulas de carcinoma, han demostrado que PK1 puede evitar parcialmente el ATP impulsado por P-glicoprotena (Pgp) en comparacin con la bomba de eflujo libre DOX (65-67). Las dosis IC50 de DOX libre y PK1 cuentan para las diferencias en los mecanismos de captacin celular (65). En los estudios preclnicos en modelos animales, incluyendo B16F10 el melanoma, la leucemia L1210, M5076, LS174T humano colorrectal xenoinjertos (64) y de ovario humano sensible y resistente modelos de carcinoma (68), PK1 ha demostrado una eficacia mejorada.

Tabla I. Lista de profrmacos DOX Cat B-activados Nombre DOX PK1 PK2 P-DOX P(GFLG)DOX P-(GFLGDOX) P-(GFLGDOX) P-(GFLGDOX) Ma-GFLG DOXSeparador biodegradable Ninguno Gly-Phe-LeuGly Gly-Phe-LeuGly Gly-Phe-LeuGly Ab-Gly-PheLeu-Gly GalN-Gly-PheLeu-Gly Lac-Gly-PheLeu-Gly Trigal-Gly-PheLeu-Gly Gly-Phe-LeuGly Mw ( g / mol ) 543,5 30,000 27,000 22,0001,230,000 270 000 25000/ 46000 20,00032,000 20,00032,000 NA Proporcin DOX 100 % 8 (wt%) 8 (wt%) NA 3,3 (% en peso) 5.6/1.5 (% en peso) 1,4% en moles 2,1 % en moles NA Situacin actual Clnica Phase II Phase I/II Preclnica Preclnica Preclnica Preclnica Preclnica Preclnica MTD 60-80 mg/m2 320 mg/m2 160 mg/m2 ND ND ND ND ND ND Refs ( 69 ) (36,38,39, 61-71) (10,11,40, 41,72-76) 26,77,78 (59,79-81) (59,82,90) (90) (90) (91,92)

D2GFLG-P (DOXH) HMW1D TET1D EMCArg-ArgAla-LeuAla- LeuDOX Ac-PheLysPABCDOX EMC-PheLysPABCDOX PG-PheLys- DOX Z-PheLysPABCDOX BR96-SCPhe -Lys PABCDOX

Gly-Phe-LeuGly Gly-Phe-LeuGly Gly-Phe-LeuGly Ala-Leu-AlaLeu

215 000 115 000 19 600

9,2 (% en peso) 7,4 (% en peso) 10,5 (% en peso)

Preclnica Preclnica Preclnica

ND ND ND

(91,93) (93) (93)

NA

NA

Preclnica

ND

(94-96)

Phe-Lys

1045,5

52,0 (% en peso)

Preclnica

ND

(12)

Phe-Lys

1,133

50,0 (% en peso) 45,0 (% en peso) 50,6 (% en peso)

Preclnica

ND

(2,18,104) (18,41,105 ) (104)

Phe-Lys

1207,8

Preclnica

ND

Phe-Lys

1074,0

Preclnica

ND

Phe-Lys

NA

NA

Preclnica

ND

(104)

Mw, peso molecular; DOX, doxorrubicina, MTD, la dosis mxima tolerada, NA, no disponible, ND, no se hace. En la liberacin de DOX de PK1 in vitro e in vivo usando anlisis de HPLC se ha mostrado solamente un pico, que representa DOX (64). PK1 no libera DOX en el plasma y el frmaco covalentemente enlazado es biolgicamente inactivo despus de la administracin intravenosa. En la Fase I de los estudios clnicos sobre pacientes con tumores slidos, incluyendo colorrectal, de mama, vas biliares, pncreas, tracto urinario, la cabeza / cuello, pulmn no microctico (CPNM), el mesotelioma y el cncer de estmago, ha demostrado que la dosis mxima tolerada (MTD) para PK1 es 320 mg/m2, que es 4 a 5 veces mayor que la dosis clnica habitual de DOX libre (60-80 . PK1 disminuye toxicidades no especficas de rganos por varios pliegues y permite que al frmaco activo ser entregado intracelularmente, mientras que el mantiene la actividad antitumoral (36,39). Los estudios de fase II utilizando PK1 han demostrado disminucin de la toxicidad con la actividad evidente cncer de mama, el cn t NSCL. s, SPECT cmara con drogas 123I -etiquetados han demostrado acumulacin del tumor evidente en dos tipos de cncer de mama metastsico (38). PK1 y DOX libre difieren mucho en sus efectos antiproliferativos y seales de muerte celular en clulas de cncer EL-4, el tratamiento con DOX libre aumenta la fosforilacin de p38, mientras PK1 aumenta slo ligeramente, PK1 tambin aumenta significativamente la fosforilacin de ERK, mientras DOX libre disminuye ligeramente (70). Adems, la terapia de profrmaco enzima dirigida por polmero (PDEPT) combinado a copolmero de HPMA-Cat B y PK1 ha mostrado actividad frente a una CDR-L23 xenoinjerto, mientras que PK1 solo no, y en tumores de melanoma B16F10 PDEPT se ha demostrado ms eficaz que cualquier PK1 solo o DOX libre (71).

Figura 2. Ejemplos de profrmacos DOX. Profrmacos DOX macromoleculares se conjugan con portadores de polmeros, oligopptidos, con o sin anticuerpos, que pueden combinarse con los antgenos situados en la superficie de la clula tumoral y ligandos que pueden ser reconocidos por receptores en la superficie de la clula tumoral. Profrmacos DOX de bajo peso molecular se combinan con oligopptidos, con o sin anticuerpos y ligandos. Los profrmacos DOX permanecen inactivos en los vasos sanguneos y los tejidos normales, pero se activan por Cat B en los tejidos tumorales y las clulas tumorales, la liberacin de DOX libre, que se traduce en la citotoxicidad especfica. DOX, doxorrubicina, Cat B, catepsina B.

PK2. PK2 (FCE28069, 27.000 gmol, 8% en peso de DOX; Fig. 3B), el conjugado de polmero que contiene slo dirigido galactosamina para entrar en ensayos clnicos, se ha diseado para dirigir el receptor de asialoglicoprotena (ASGPR) que se expresa selectivamente en los hepatocitos y las lneas celulares de hepatoma (40,72). Los estudios farmacocinticos utilizando PK2 en ratas y ratones han demostrado eficacia en el hgado con un > 70% del DOX libre dirigido selectivamente al hgado despus de la administracin intravenosa (73,74). Los estudios preclnicos en ratas han demostrado que PK2 muestra una reduccin de ~ 5 veces en la cardiotoxicidad en lugar de DOX libre despus de la administracin intravenosa o intraperitoneal a diferentes dosis (11,64). Por otra parte, la actividad antitumoral se ha demostrado mejor en modelos de tumores de roedores (69).

En un estudio pivote en un paciente con carcinoma hepatocelular multifocal, formacin de imgenes por HPLC mostr 123I-basada en el aclaramiento bifsico de PK2 del plasma (vida media, 78 1 y 990 15 min) y ~ 30% de la droga liberada acumulada en el hgado a las 24 h. Por otra parte, el anlisis SPECT mostr que la concentracin de radiactividad era 3 a 4 veces mayor en el tejido heptico peritumoral que en el propio tejido tumoral (40). L s s s s st u TD P s DOX u v t varios pacientes con carcinoma hepatocelular han mostrado respuestas parciales y / o enfermedad estable (41). La -cmara de imagen y escaneo CT han puesto de manifiesto que el 15-20% del total de PK2 se retiene en el hgado y se concentra principalmente en el tejido de hgado normal (normal frente al tejido tumoral, 5:1), lo que sugiere que el polmero

galactosamina-especfica es principalmente entregado a las regiones normales del hgado debido a la mayor expresin ASGPR en el hgado normal (75) y la fagocitosis por las clulas de Kupffer con la expresin del receptor "partcula galactosa '(76). A pesar de esta disparidad en la distribucin de PK2, la concentracin de frmaco en el tejido tumoral fue todava de 12 a 50 veces mayor de lo que habra sido con la administracin libre de DOX solo. HPMA copolmero-doxorrubicina conjugados (P-DOX). P-DOX conjugados (fig. 3C) (77,78) contiene el oligopptido Gly-Phe-Leu-Gly y la N2, N5-bis (Nmetacriloil-glicil-fenilalanil-leucil-glicil) ornitina reticulante, el cual permite la sntesis de conjugados de P-DOX con varios Mws, 22 a 1230 kDa. La tasa de aclaramiento de la P-DOX de la sangre es Mwdependiente y es mucho ms lento que el de DOX libre (26,77). Se ha demostrado que la eficacia teraputica aumenta a medida que aumenta la Mw de P-DOX en ratones desnudos portadores de subcutneos OVCAR3 xenoinjertos. La baja concentracin residual de PDOX en los tejidos (aparte de los tumores) ayuda a evitar los efectos secundarios potenciales a largo plazo

(77). La toxicidad contra precursores hematopoyticos normales y linfocitos de ratones endogmicos se reduce considerablemente (78). HPMA. Copolmero-DOX-OV-TL16 (GFLG)-DOX-Ab]. [P-

P-(GFLG)-DOX-Ab (270.000 gmol, 3,3% en peso de DOX;. Fig. 4A) es reconocida por el antgeno OA3, que desempea un papel en el transporte de membrana y / o la transduccin de seales por suabarca multimembrane estructura de dominio (59 ,7981). El P-(GFLG)-DOX-Ab se absorbe rpidamente por las clulas OVCAR-3 y se transporta en su compartimento lisosomal. DOX se libera posteriormente a partir del conjugado en el sitio con un espaciador GFLG degradables, difunde a travs de la membrana lisosomal y se acumula en los ncleos celulares (80). Los datos preliminares sobre la retencin relativa de DOX en la MDR (A2780/AD) clulas han indicado una mayor concentracin de DOX intracelular despus de la incubacin con el copolmero de HPMA-DOX conjugado en comparacin con DOX libre (59).

Figura 3. Estructuras qumicas generales de (A) PK1, (B) y PK2 (C) P-DOX, en el que se compleja con DOX (2hidroxipropil) metacrilamida (HPMA), por el enlazador tetrapptido, Gly-Phe-Leu-Gly (GFLG).

Figura 4. Estructuras qumicas generales de (A) P-(GFLG)-DOX-Ab, (B) P-(GFLG)-DOX-GalN, (C) P-(GFLG)-DOX-lac y (D) P-(GFLG )-DOX-Trigal, en el que DOX conjugado con HPMA es, por el enlazador tetrapptido, Gly-Phe-Leu-Gly (GFLG).

Copolmero de HPMA-Gly-Phe-Lys-GlyDox-N-acilado galactosamina [P-(GFLG)-DOXGalN]. P-(GFLG)-DOX-GalN (25.000 gmol;. Fig. 4B), contiene galactosamina N-acilado (GalN), que fue diseado para ser reconocido por ASGPR en clulas HepG2 carcinoma hepatocelular humano (59,82) y los miembros individuales de la familia de galectina (por ejemplo, galectina-3) en el adenocarcinoma de colon humano (83,84). La galectina-3 se expresa en tejidos normales y altamente expresado en los tejidos neoplsicos (85-87), aunque exactamente lo contrario se ha demostrado que se producen (88,89). En SW-480 y las clulas SW-620, la presencia de galectina-3 en la superficie celular se ha demostrado por citometra de flujo, sin embargo, no se ha detectado en la superficie de las clulas Colo-205. La citotoxicidad celular de P(GFLG)-DOX-GalN determinada por ensayo de MTT ha demostrado ser ~ 10 veces mayor que P-GFLGDOX y 10 veces mayor en las clulas Colo-205 que en SW-480 y SW -620 clulas (90). Esto sugiere la participacin de otras galectinas, como la galectina-1, 4, -7 y -8, en la focalizacin P-(GFLG)-DOX-GalN.

Figura 5. Estructura de TET1D, en el que DOX se combina con el tetrapptido, Gly-Phe-Leu-Gly (GFLG).

Lactosa que contiene copolmero HPMAconjugado de doxorrubicina [P-(GFLG-DOX)-lac]. P-(GFLG-DOX)-lac (Fig. 4C) (90), tambin puede ser bioreconocida como galectina-3 en la superficie de las clulas de cncer de colon. La citotoxicidad in vitro determinada por ensayo MTT es mayor que la de la P-producto no glicosilada (GFLG)DOX y casi 1000 veces menor que la de DOX libre de HepG2 humanos en clulas de carcinoma hepatocelular y Colo-205, SW-480 y SW-620 clulas de adenocarcinoma de colon. Copolmero-doxorrubicina HPMA contiene galactosa Trivalente conjugado [P-(GFLG-DOX)Trigal]. P-(GFLG-DOX)-Trigal (fig. 4D) contiene galactosa trivalente, que tambin puede ser bioreconocida como galectina-3 en la superficie de clulas de adenocarcinoma de colon. La citotoxicidad de la P-(GFLG-DOX)-Trigal ha demostrado ser al menos 10 veces mayor que la del producto P-(GFLG)DOX no glicosilada en Colo-205, SW-480 y SW-620 clulas de adenocarcinoma de colon (90).

(conjugados amida) mostr que la presencia de Cat B aumento la tasa de liberacin de DOX (91). HMW1D. HMW1D (115.000 gMol, 7,4% en peso DOX), un polmero ramificado y profrmaco, contiene portadores solubles en agua de polmeros de drogas, copolmeros de HPMA, y una secuencia de oligopptido biodegradables, GFLG, la vinculacin ms cortas cadenas de polmero (Mw, 20.000 gmol) en un alto Mw estructura (Mw, 110.000 gmol) para mejorar la acumulacin pasiva de la droga mediante el aumento de su Mw. Un estudio in vitro demostr que este profrmaco es sensible al pH (HMW1D) y puede ser degradado por Cat B (5x10, 3 C, pH 6,0 (93). TET1D. TET1D (19.600 gmol, 10,5% en peso de DOX, Fig. 5) (93) es un conjugado de doxorrubicina unida a polmero no especfica, contiene un enlace hidrazona, lo que mejora significativamente la velocidad de liberacin de DOX, en comparacin con la de los clsicos profrmacos HPMA polmeros que portan DOX unido a travs de enlaces amida limitados a un mximo de 8-9% en peso. Un estudio in vitro usando clulas T-esplenocitos y celulas EL-4 de linfoma de ratn mostro que la toxicidad de TET1D es mucho mayor en comparacin con la de los conjugados clsicos similares y un estudio in vivo usando EL4 linfoma de clulas T en ratones C57BL/10 mostr que la actividad antitumoral tambin increment significativamente. Un estudio in vitro mostro que TET1D puede ser activado por Cat B, sin embargo, Cat. B no es esencial en la liberacin de DOX, ya que tambin contiene un separador sensible al pH que es estable bajo condiciones fisiolgicas (pH 7,4, por ejemplo, sangre) y hidrolticamente degradable en un ambiente cido suave (pH 5,0, por ej, endosoma) (93). Profrmaco DOX que contiene el tetrapptido, AlaLeu - Ala Leu - 6 - maleimidocaproico cido - Arg - Arg - Ala-Leu - Ala-Leu - DOX ( EMC - Arg - Arg - Ala-Leu - Ala-Leu - DOX ) . EMC - Arg - Arg Ala - Leu - Ala-Leu - DOX lleva maleimida (94), puede rpidamente y de forma selectiva reaccionar in situ con la cistena - 34 posicin

N-metacriloilo-glicil)-dl-fenilalanil-leucil-glicil-DOX (Ma-GFLG-DOX). Ma-GFLG-DOX contiene el tetrapptido, GlyPhe-Leu-Gly (91,92). Sigue siendo bastante estable en tampn a pH 7,4 (modelo de la corriente sangunea), pero en las versiones DOX es estable bajo condiciones cidas suaves o en la presencia de Cat B (rica en el microambiente del tumor). Los dendrmeros PAMAM (D-NH2)-Gly-Phe-LeuGly-HPMA-doxorrubicina (D2-GFLG-P-DOX). D2-GFLG-P-DOX (215.000 gmol, 9,2% en peso DOX), que est unido a travs de un DOXsensible al pH al enlace hidrazona (91,93), se prepar mediante el injerto de los copolmeros de HPMA semioligomeros, que tienen por debajo del umbral de Mws renal, a un dendrmero PAMAM ncleo a travs de un enlace biodegradable GFLG oligopptido. Un estudio in vitro utilizando tampones de fosfato a pH 5,0 o 7,4 a 3 C z ju ados), y en un Cat B que contiene (5x10t p s t 3 C

de la albmina circulante despus de la administracin intravenosa y liberar el frmaco en el sitio del tumor (95,96). La albmina es un portador de frmaco prometedor debido a su acumulacin pasiva en los tumores slidos, que tienen un alto recambio metablico, la angiognesis, hipervasculatura, defectuosa arquitectura vascular y el deterioro del drenaje linftico (97) . La albmina tiene propiedades no txicas, no inmunognicas, biocompatibles y biodegradables (98) y se ha demostrado la absorcin preferencial del tumor en varios modelos animales de xenoinjertos tumorales (99). La eficacia antitumoral de EMC - Arg - Arg Ala - Leu Ala - Leu -Dox ha demostrado ser comparable a la de DOX libre en un modelo M-3366 de xenoinjerto de cncer de mama a dosis equivalentes (94). Adems, la unin a albmina del profrmaco DOX, DOX - EMCH (INNO-206), se ha examinado en ensayos clnicos (100.101).

Profrmacos DOX que contienen el dipptido, PheLys-Ac-Phe-Lys-PABC-DOX. Ac-Phe-Lys-PABC-DOX (PDOX, 1045,5 gMol, 52,0% de DOX, la fig. 6A) contiene el dipptido, Phe-Lys, que es especfico para Cat B y el separador auto-immolative, PABC (12,102-104). Un estudio in vivo utilizando un modelo desnudo de ratones con cncer gstrico con carcinomatosis peritoneal mostr que en comparacin con conexin DOX, PDOX (16 mg/kg, dos veces la de DOX en trminos de contenido molecular iguales) produce mejores efectos antitumorales en cuanto al ndice peritoneal experimental de carcinomatosis (EPCI) (Fig. 7A) y el peso corporal (Fig. 7D), y la reduccin de hgado (Fig. 7B y C), rin (fig. 7E y F) y el corazn (Fig. 7G-I) toxicidades (12 ).

Figura 6. Estructura de (A) Ac-Phe-Lys-PABC-DOX, (B) EMC-Phe-Lys-PABC-DOX, (C) de Z-Phe-Lys-PABC-DOX y (D) BR96-SCPhe-Lys-PABC-DOX, en el que DOX est relacionada con el separador auto-immolative, para-aminobenzyloxycarbonyl (PABC) y el dipptido, Phe-Lys (FL).

Figura 7. El profrmaco Cat. B activado Ac - Phe - Lys - PABC - DOX (PDOX) mejora la eficacia del tratamiento y reduce la toxicidad en el tratamiento de cncer gstrico con carcinomatosis peritoneal [modificado a partir de un estudio previo (12)]. (A) Efectos de DOX y PDOX en un modelo de carcinomatosis peritoneal se muestran con el puntuacin del ndice de carcinomatosis peritoneal experimental detallado ( EPCI ); tanto DOX y PDOX redujeron significativamente la EPCI . PDOX reduce la toxicidad general y toxicidad para el hgado, el rin y el corazn en particular. (D) Los ratones desnudos en el grupo PDOX tenan pesos corporales similares a los del grupo de control a lo largo del periodo de estudio , mientras que los ratones desnudos en el grupo de DOX mostraron una disminucin progresiva en el peso corporal despus de 4 dosis de la inyeccin intraperitoneal . Efectos de PDOX y DOX en gran hgado y los parmetros de la funcin renal se muestran en (B) ALT, (C) AST, (E) BUN y (F) Cr. en PDOX disminuy significativamente en comparacin con la hepatotoxicidad DOX en trminos de AST. PDOX disminuy significativamente la toxicidad miocrdica en comparacin con DOX mediante la reduccin de (G) CK, (H) de CK- MB y (I) LDH. ALT, alanina aminotransferasa, AST, aspartato aminotransferasa, urea, nitrgeno ureico en sangre, Cr, creatinina, CK, creatina quinasa, CK -MB, la creatina quinasa isoenzima MB, LDH, lactato deshidrogenasa.

-maleimidocaproico

cido-Phe-Lys-PABC-DOX (EMC-Phe-Lys-PABC-DOX). EMC-Phe-Lys-PABC-DOX (Fig. 6B) (2, 18, 104) ha exhibido diferencias dramticas en la actividad antitumoral in vitro y entre los estudios in vivo. Un estudio de citotoxicidad in vitro usando la lnea celular del tumor pancretico, AsPC1 LN, y la lnea celular de cncer de melanoma, clulas MDA-MB-231 en LN, mostraron que DOX era ~ 6 veces ms activo que el

profrmaco. Sin embargo, un estudio in vivo utilizando un modelo de xenoinjerto desnudo en ratones con cncer de mama de clulas MDA-MB-435 mostr que el profrmaco exhibe actividad antitumoral superiores (el tamao del tumor, 15% de que en ratones desnudos tratados con el vehculo) en comparacin con DOX (tumor tamao, 49% de que en ratones desnudos tratados con el vehculo) en una comparacin de toxicidad equivalente (2).

PG-Phe-Lys-DOX. Hiperramificado poliglicerolPhe-Lys-DOX (PG-Phe-Lys-DOX, 45% DOX) (18, 41, 105), contiene el dipptido, Phe-Lys, y poliglicerol hiper-ramificado. La liberacin del frmaco de los conjugados sugiri una activacion eficaz de PG-Phe-Lys-DOX y la liberacin de DOX en la presencia de Cat B. El IC50 de PG-Phe-Lys-DOX en la lnea celular de cncer de mama, MDA-MB-231, y la lnea celular de carcinoma de pncreas, AsPC1, fue de 1,10 0,4 y 2,4 0,6 mM, respectivamente, ambos de los cuales eran ms bajos que el de DOX libre (105). Z-Phe-Lys-PABC-DOX. Benciloxicarbonil-Phe-Lys-PABC-DOX (ZPhe-Lys-PABC-DOX;. Fig. 6C), es estable en el plasma humano y libera rpidamente DOX en la p s C t B 3 C, pH 5,0 (vida media, 8 min), que es 30 veces ms rpido que el de la Val-Cit conjugado. Por otro lado, la velocidad de liberacin es significativamente ms rpida que Z-Phe-Lys-DOX, lo que sugiere que un separador auto-immolative, tal como PABC, es til para la liberacin de conjugados de DOX (104). BR96-SC-Phe-Lys-PABC-DOX. BR96-SC-Phe-Lys-PABC-DOX (Fig. 6D) contiene el anticuerpo monoclonal quimrico, BR96, que se une especficamente a un antgeno relacionado con Lewisy, asociado al tumor expresado en la superficie de muchas clulas de carcinoma humano. Un estudio in vitro utilizando lneas de clulas humanas carcinomal que expresan diferentes niveles del antgeno BR96 demostr que la citotoxicidad de BR96-Phe-Lys-PABC-DOX estaba directamente relacionada con el nivel de expresin del antgeno en la membrana celular: a nivel ms alto de antgeno BR96, mayor ser la sensibilidad a la BR96-Phe-Lys-PABCDOX. La citotoxicidad de BR96-Phe-Lys-PABC-DOX en BR96-antgeno que expresan las lneas celulares altas es mayor que el de la no-unin de IgG-SC-PheLys-PABC-DOX conjugado (> 220 veces), lo que confirma su especificidad al antgeno BR96 (104). Otros profrmacos DOX que contienen dipptidos.

Dubowchik (104) y de Groot (106) sintetizaron una serie de otros profrmacos que contienen DOX, los dipptidos, Phe-Lys, Ala-Phe-Lys o Arg, incluyendo Z-Phe-Lys-PABC-DOXHCl, MC-Phe-Lys (MMT)PABC-DOX, MC-Phe-Lys-PABC-DOXCl2CHCO2H Z-Phe-Lys (Alloc)-DOX, Z-Phe-Lys-DOXHCl, ZAla-Lys (Alloc)-PABC-DOX, Z-Ala-Lys-PABCDOXHCl, Z-Phe-Arg (NO2)-PABC-DOX, Z-Phe-Arg (Ts)-PABC-DOX, Fmoc-Phe -Lys (Aloc)-PABC-DOX y H-Phe-Lys (Aloc)-PABC-DOX. Sin embargo, se carece de los datos relativos a su actividad antitumoral. 5. Conclusiones Durante las ltimas dcadas, se han hecho esfuerzos importantes para desarrollar pro-frmacos antitumorales con mayor eficacia y menor toxicidad. Numerosos profrmacos DOX se han sintetizado por estrategias de modificacin de estructura. Profrmacos DOX Cat B-activados liberan los frmacos libres en presencia de Cat B y en un entorno subacidilico. Un nmero de estudios en clulas de cncer in vitro y en estudios de xenoinjertos tumorales in vivo han demostrado que los profrmacos DOX Cat B-activados van a ser menos txicos in vitro e in vivo ms eficaces, lo que demuestra el papel de la Cat B. Sin embargo, an quedan muchos retos y preguntas. La mayora de los estudios mencionados en esta revisin se encuentran en una fase preclnica muy temprana con poca informacin sobre las propiedades fisicoqumicas, citotoxicidad y eficacia antitumoral en las clulas tumorales y xenoinjertos. La distribucin subcelular de los profrmacos, los frmacos libres liberados y los mecanismos antitumorales siguen sin estar claros. Estudios futuros son necesarios y deberan centrarse en la evaluacin preclnica y clnica de los profrmacos existentes, en lugar de sintetizar nuevos frmacos candidatos en este campo.