PRACTICA No 2

LOS AMINOCIDOS Y LAS PROTEINAS COMO ELECTROLITOS: SU CAPACIDAD AMORTIGUADORA EN EL ORGANISMO HUMANO

FUNDAMENTO BIOQUIMICO: Una propiedad importante de los aminocidos, consecuencia del hecho de que todos ellos tienen grupos carboxilo (-COOH) y grupos amino (-NH2) es su conducto como electrolitos. Es costumbre considerar los grupos COOH como de naturaleza acdica y los grupos NH2 como de carcter bsico. Hemos estudiado en las clases tericas el comportamiento de los aminocidos como iones dipolares y la conducta de ellos durante su titulacin con cido y lcalis de modo que se comportan como verdaderas sustancias tampones, amortiguadores buffers, para el sostenimiento del pH del medio interno dentro de estrechos lmites (7.35 a 7.45). Explicamos tambin el comportamiento amortiguador del ion dipolar glicina al aadirle iones H+ o al aadirle OH- impidiendo las variaciones bruscas del pH sanguneo. La representacin de un aminocido tal como la glicina por la frmula NH2CH2COOH sugiere que se trata de una sustancia en la que el grupo amino acta como una base conjugada y el grupo COOH como un cido. Se ha observado, sin embargo, que esta formulacin no es la correcta del estado inico de un aminocido en solucin acuosa. La verdadera representacin es aquella que dimos del ion dipolar (A) y que es la siguiente: (Estructura A) H R C COOEstructura (A) NH3 H R C COOH Estructura (B) NH2

Y que es la forma en la cual se encuentran en el torrente circulatorio, es decir, al pH fisiolgico (7.4) los grupos carboxilo existen como la base conjugada, esto es, como in carboxilato R-COO-; y al mismo pH, la mayora de los grupos amnicos estn predominantemente en la forma protnica R-NH3+ La estructura (A) inica es la prevalente en la sangre y en la mayora de los tejidos. La estructura (B) no puede existir a ningn pH. La conveniencia nos ensea sin embargo que la estructura (B) se use por razones didcticas y para explicar la mayora de las ecuaciones que entraan reacciones distintas a las de los equilibrios protnicos. La contribucin ms importante a la conducta de una protena como electrolito procede de los grupos ionizables existentes en las cadenas laterales de los aminocidos. La curva de titulacin de una protena aminocido con cido lcali vendr determinada en gran medida por el nmero de cada uno de estos grupos ionizables de las cadenas laterales de sus unidades de aminocidos. Por estas razones las soluciones de protenas tienen una poderosa capacidad tampn.

Esta propiedad amortiguadora es de importancia decisiva en los sistemas biolgicos y ha sido estudiada con especial cuidado con relacin a los amortiguadores de la sangre humana cuyo pH es controlado dentro de estrechos lmites, tal como les expliqu en la clase terica. Les dije que los valores de pH sanguneo varan dentro de lo normal entre 7.35 a 7.45, cuando la sangre alcanza valores por debajo de 7.35 se produce acidosis; y cuando los valores de pH se elevan por encima de 7.45 se produce alcalosis. La sangre contiene otros dos sistemas tampones que son: 1) El Sistema bicarbonato/Acido carbnico (pK: 6,1) 2) El sistema fosfato monosdico/disdico (pK: 6,8) La protena ms importante de la sangre del ser humano es la Hemoglobina que tiene gran capacidad tampn en la proximidad del pH 7.4, lo cual se debe a su elevado contenido de histidina (grupo imidazol) Aproximadamente el 60% de la capacidad tampn de la sangre total se debe a la Hb, y un 20% es atribuible a las protenas del plasma (seroalbminas y globulinas). Recordemos que segn lo propuesto por Bronsted: un cido es una sustancia que al ionizarse genera iones Hidrgeno, H+, una base es toda sustancia capaz de aceptar estos iones hidrgeno. Como los cidos ceden protones y las bases los captan, a cada cido le corresponde, como es lgico, una base conjugada. Es decir, si un cido cede un protn, el ion, as formado, puede captarlo de nuevo comportndose como base. Por lo tanto, los procesos de cesin captura de protones transcurren de forma reversible: Cesin de protones AH Acido captacin de protones A+ H+

Base

El cido y la base conjugada forman un par cido/base. Las soluciones que contienen cidos dbiles y sus sales se llaman soluciones tampn, buffers amortiguadores. Su finalidad es impedir amortiguar las bruscas variaciones del pH. El pH de una solucin amortiguadora puede calcularse utilizando la ecuacin de HendersonHaselbach: SAL pH = pK + log -----------ACIDO

A partir de esta ecuacin se deduce que el pH de una disolucin tampn depende de la naturaleza del cido que la integra y de la proporcin entre la sal y el cido (logaritmo de la relacin entre ambos) y no de las concentraciones absolutas de cada uno de estos componentes. La eficacia amortiguadora es mxima cuando el cociente de la relacin sal/cido es prximo a la unidad. El objetivo de la presente prctica es demostrar la capacidad tampn de un sistema amortiguador empleando un cido dbil y la sal del cido dbil y estudiar la curva de titulacin valoracin de un cido dbil HA, como el cido actico (0.1N) y una base fuerte NaOH 0.1N y las variaciones del pH con respecto a diferentes proporciones relativas

entre la sal y el cido de una solucin tampn. (el pKa del cido actico es 4.76) antes de agregar la base, el pH se debe solamente a la presencia del cido. Pero tan pronto como se aade algo de la base (NaOH 0.1N), sta reacciona con una cantidad equivalente del cido y forma una cantidad equivalente de sal y agua. El cido dbil ms su sal disuelta constituyen una solucin tampn (par amortiguador), cuyo pH puede calcularse mediante el uso de la ecuacin de H-H: pH = pK log sal/cido. Se determinar el pH con el potencimetro y se evaluarn los cambios en el pH con la adicin de volmenes definidos de una base conocida (NaOH 0.1N). Graficaremos en un sistema de coordenadas cartesianas los valores de pH vs los ml de base agregados y obtendremos as la curva de titulacin para el cido. Se emplear el equipo potencimetro para determinar el pH, instrumento que determina el pH en funcin de la fuerza electromotriz (p de Nernst) de una celda formada por un electrodo de referencia, la solucin problema y un electrodo de vidrio muy sensible a los hidrogeniones. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS: Potencimetro. Beakers de 50 ml de vidrio (11 para cada mesa de trabajo). Baguetas de vidrio (3 por cada mesa). Pipetas de 10 ml graduadas 1/10 (3 por cada mesa). Agua destilada. Solucin de CH3-COOH 0.1N. Solucin de NaOH 0.1N. Papel milimetrado cuadriculado.

PARTE EXPERIMENTAL: Mezclar los volmenes de CH3-COOH 0.1N y de NaOH 0.1N con agua destilada sealados en la tabla siguiente, mezclar bien y luego medir el pH en cada uno de los 11 beakers con el potencimetro. Beaker N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Acido actico 0.1 N (ml) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 NaOH 0.1N (ml) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Agua destilada (ml) 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 pH

En cada mesa los alumnos construirn su grfica de valoracin colocando en las coordenadas los valores de pH en orden creciente y en el eje de las abscisas los volmenes de NaOH 0.1N aadidos en cada beaker:

pH

ml NaOH aadidos CUESTIONARIO: 1.- Graficar la curva de valoracin del cido actico 0.1N vs. NaOH 0.1N. 2.- Identificar el punto de semi-valoracin y mxima capacidad tampn. 3.- Explique que es un par tampn, como funciona y porqu las protenas sanguneas son amortiguadores. 4.- Describa las principales sustancias amortiguadoras del organismo humano.

DESARROLLO
3.- Un tampn, buffer, solucin amortiguadora o solucin reguladora es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un cido dbil y su base conjugada, es decir, sales hidrolticamente activas. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una disolucin frente a la adicin de cantidades relativamente pequeas de cidos o bases fuertes. Este hecho es de vital importancia, ya que meramente con un leve cambio en la concentracin de hidrogeniones en la clula se puede producir un paro en la actividad de las enzimas. Se puede entender esta propiedad como consecuencia del efecto ion comn y las diferentes constantes de acidez o basicidad: una pequea cantidad de cido o base desplaza levemente el equilibrio cido-base dbil, lo cual tiene una consecuencia menor sobre el pH.1 Cada sistema buffer tiene su propio rango efectivo de pH, el cual depender de la constante de equilibrio del cido o base empleado. Son importantes en el laboratorio y en la industria, y tambin en la qumica de la vida. Tampones tpicos son el par amonaco-catin amonio, cido actico-anin acetato, anin carbonato-anin bicarbonato, cido ctrico-anin citrato o alguno de los pares en la disociacin del cido fosfrico. Las proteinas tienen un comportamiento anftero y sto las hace capaces de neutralizar las variaciones de pH del medio, ya que pueden comportarse como un cido o una base y por tanto liberar o retirar protones (H+) del medio donde se encuentran. 4.- Los amortiguadores cido-base son soluciones que en presencia de un cido o una base
mantiene el pH, el organismo cuenta principalmente con tres sistemas amortiguadores que trabajan en conjunto:

Sistema amortiguador de bicarbonato.- Esta solucin est formada por una mezcla de cido carbnico H2CO3 y su sal que acta como base conjugada, el bicarbonato sdico NaHCO3. Esta forma constituye una de las formas en que el organismo regula el pH. Este sistema es el amortiguador ms importante del lquido extracelular y posee una gran capacidad para evitar cambios bruscos en el pH de la sangre arterial.
Regulacin respiratoria del equilibrio cido-base.

En el metabolismo corporal normal se producen alrededor de 15 000 mmol de CO2 por da; aunque el CO2 no es un cido, es un xido cido que al combinarse con el H2O presente en la sangre, forma H2CO3, el cual se ioniza en H+ y HCO3- y por consiguiente aumenta la concentracin de iones de H+ (acidemia; pH arterial <7,35). La acidosis estimula los quimioreceptores que controlan la respiracin e incrementan la ventilacin alveolar; como resultado, la presin del C02 (PC02) descender en los pacientes con acidosis y el pH tender a la normalidad, un sntoma tpico es la hiperventilacin (respiracin tpica inducida por la academia) que es un mecanismo crtico para amortiguar el efecto de la carga cida sobre la

concentracin de HCO3-. Contraria a la acidosis metablica, se puede producir alcalosis metablica La alcalosis metablica (pH > 7,4), la cual se da con hipoventilacin, elevando los niveles de PCO2 nunca por arriba de 50 a 55 mmHg en un intento de corregir el pH y evitar la hipoxemia.
Regulacin renal del equilibrio cido-base.

El mecanismo renal constituye un sistema de regulacin a largo plazo que no cesa hasta la correccin completa del desequilibrio, esto ocurre a travs de la neutralizacin de iones hidrgenos con iones bicarbonatos a nivel de los tbulos renales, epitelio y liquido extracelular.
Sistema amortiguador de fosfato.- Igual que el bicarbonato, el amortiguador de fosfatos

se forma a partir de las especies H2PO4- y HPO4=. Este sistema, junto con el de protenas (numeral 1,2 ms adelante), y hemoglobinatos ayudan a regular el pH del lquido intracelular.
Sistema amortiguador de protenas.- Este sistema es uno de los mejores reguladores del

organismo y opera de manera similar al del bicarbonato, hay que recordar que las protenas estn formadas por aminocidos unidos por enlaces peptdicos, con un extremo cargado negativamente proveniente del grupo cido carboxlico, y el otro extremo cargado positivamente proveniente del grupo amino (base). Los amortiguadores constituidos por aminocidos libres, protenas (amortiguadores intracelulares) y hemoglobina (superamortiguador), se consideran buffer zwitterionicos