INFORME DE LABORATORIO No 6: ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN MOLECULAR.

LABORATORY REPORT No. 6: MOLECULAR ABSORPTION SPECTROSCOPY.

Carmona Q. Karen, Galindo A. Anyoly, Flrez D. Javier, Mercado P. Jess, Romero C. Jhan. Universidad de Crdoba, Montera, Colombia.

Responsable: Saudith Burgos M.Sc Resumen: Objetivo. Relacionar al estudiante con los conocimientos adquiridos en forma
terica sobre los procesos de determinacin de la cantidad de sustancia en una muestra, por el mtodo espectroscpico, llevar a la prctica los conocimientos adquiridos en forma terica sobre los procesos de determinacin de la cantidad de sustancia en una muestra, por el mtodo espectroscpico. El mtodo aplica para el anlisis de alimentos, agua potable, superficial, salinas, etc. Materiales y mtodos. Para la realizacin este proceso, se dio la utilizacin de cinco Matraces aforados, pipetas, beaker, hidroxilamina, solucin de acetato de sodio, fenantrolina, muestra problema, agua destilada, espectrmetro (PERKIN ELMER, Lambda 11/Bio uv/vis spectrometer), dndose inicialmente se preparacin tres soluciones a concentraciones dadas, a partir de una solucin madre ya dada, se tomo una solucin estndar y se le agrego un amortiguador o reductores, aforndose y preparndose para una anlisis instrumental. Resultados. Nos encontramos con las bases para la realizacin de una curva de valoracin, y la asimilacin de procesos electroqumicos, su evaluacin, el manejo de concentraciones y lo que implica su asimilacin de luz y absorcin. Conclusiones. En esta prctica observamos claramente la influencia tecnolgica en aplicaciones qumicas y biolgicas en general, el mejoramiento de lo que son dichos proceso y la precisin (mas no la exactitud) con que se hacen la mediciones, el manejo de concentraciones y las implicaciones que tienen la absorcin y la luz en un proceso Bioqumico.

Palabras

clave:

Hierro,

Absorbancia,

concentracin,

espectrmetro,

iones

hidrogeniones. Abstract: Target. Acquaint the student with the theoretical knowledge acquired in the form on the processes of determining the amount of substance in a sample, the spectroscopic method, implement the knowledge acquired in theory on the processes of determining the amount of substance in a sample, by spectroscopic method. The method applies to the analysis of food, drinking water, surface, saline, etc. .. Materials and Methods. For carrying out these processes, the use of five gave flasks, pipettes, beaker, hydroxylamine, sodium acetate solution, phenanthroline, sample, distilled water spectrometer (Perkin Elmer Lambda 11/Bio uv / vis spectrometer) preparation initially giving three solutions to given concentrations from a stock solution already given, will take a standard solution and I add a buffer or reducing, aforandose and preparing for

instrumental analysis. Results. We find the basis for the realization of a titration curve, and the assimilation of electrochemical processes, assessment, and management concentrations implying assimilation and absorption of light. Conclusions. In this practice we see clearly the influence of technology in chemical and biological applications generally improving what are these process and accuracy (but not accuracy) with which the measurements are made, the handling of concentrations and the implications of the light absorption and Biochemist'' process''.

Key words: Iron, absorbance, concentration, spectrometer, ions hydrogen ions. INTRODUCCIN
La espectrometra ultravioletavisible implica la espectroscopia de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano. En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a transiciones electrnicas. Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de fluorescencia, que trata con transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometra de absorcin mide transiciones desde el estado basal al estado excitado. determinada longitud de onda, I es la intensidad de transmisin, L la longitud de ruta a travs de la muestra, y c la concentracin de las especies absorbentes. Para cada especie y longitud de onda, es una constante conocida como absortividad molar o coeficiente de extincin. La Absorbancia y extincin a veces son definidas en trminos de logaritmo natural en lugar de logaritmo de base 10. La ley de Beer-Lambert es til para la caracterizacin de muchos compuestos, pero no sirve como relacin universal para la concentracin y absorcin de todas las sustancias. En molculas complejas de gran tamao, como los tintes orgnicos (Xylenol Naranja o Rojo Neutro, por ejemplo), a veces se encuentra una relacin polinmica de segundo orden entre la absorcin y la concentracin. (1)

LEY DE BEER-LAMBERT La espectrometra UV-Vis se utiliza con mayor frecuencia en forma cuantitativa para determinar las concentraciones de especies absorbentes en solucin, usando la Ley de Beer-Lambert: donde A es la Absorbancia medida, I0 es la intensidad de la luz incidente a una

MATERIALES: para la realizacin de

los procedimientos se emplearon los siguientes materiales y reactivos: cinco Matraces aforados, pipetas, beacker, hidroxilamina, solucin de acetato de sodio, fenantrolina, muestra problema, agua destilada, espectrmetro (PERKIN ELMER, Lambda 11/Bio uv/vis spectrometer).

MTODO: para la determinacin de Fe

se emple el mtodo de Fenantrolina y se llevo a cabo en los laboratorios de qumica orgnica y Anlisis instrumental de la Universidad de Crdoba.

La absorbancia de los diferentes

Resultados: complejos coloreados, se midi en

El procedimiento desarrollado fue el siguiente: Inicialmente se prepararon 3 soluciones a diferentes concentraciones (0.5 ppm, 1.0 ppm y 1.5 ppm). el rango del espectro visible (540 nm), utilizando un espectrmetro.

RESULTADOS Y CLCULOS Tabla (1) Absorbancia

CONCENTRACI N BK 0.5 ppm 1.0 ppm 1.5 ppm M. Problema VOLMENE ABSORBANCI S A 1 mL. 0.007 nm 1.25 ml 0.038 nm 2.5 ml 0.094 nm 3.75 0.149 nm 10 ml 0.107 nm

Las soluciones se prepararon a partir de una solucin madre de concentracin 10 ppm Fe.

Se calcul un volumen estndar para cada solucin y se agregaron 0.5 ml de hidroxilamina, 4ml de sln acetato de sodio y 8 ml de fenantrolina en cada una de las soluciones. Se agit cada solucin y se afor 25 ml.

Clculo de los volmenes estndar: V1=C2V2/C1 V1= (25ml) (0.5ppm)/ (10ppm) = 1.25ml V1= (25ml) (1.0ppm)/ (10ppm) = 2.5ml V1= (25ml) (1.5ppm)/ (10ppm)= 3.75ml

Este procedimiento tambin se realiz para un Bk (blanco reactivo) y 10 ml de muestra problema.

Despus de preparadas las cinco soluciones se esper al rededor de 15 minutos y fueron llevadas al laboratorio de anlisis instrumental.

Anlisis
CONCENTRACIN Absorbancia BK 0,007 0,5 0,038 1 0,094 1,5 0,149 M. PROBLEMA 0,107 ECUACIN DE REGRESIN pendiente 0,111 interseccin -0,01733333 BK = 0,219219219 concentracin desconocida (para evaluar el posible M. problema error) 1,12012012 ANLISIS DEL ERROR Error estndar en y 0,000408248 La primera parte del proceso para la realizacin ptima de dicha prctica constaba en los clculos de volmenes estndares con los cuales se iba a trabajar, dependientes por lo tanto de las concentraciones, resultados que pueden inferirse en errores espectromtricos y en porcentajes en el nivel de absorbancia dados o expresados en el laboratorio. La tabla 2. Esta realizada en base a la relaciones entre las absorbancias y la concentraciones a travs de una hoja de clculo teniendo como punto de partida un referencia bibliogrfica (2). Realizando clculos de medidas estndares y curvas de calibracin, observamos un punto estndar de error en Y muy bajo, prcticamente nulo, dado de la estimacin producto de un rango entre la absorbancia del BK y la Muestra problema y las concentraciones de BK y muestra problema, al igual que los puntos de interseccin y el de la pendiente. Al observar la grfica y su tendencia a una lnea recta podramos ya sea influir o un error en la concentracin de la muestra problema con la cual se trabaj o un posible error aleatorio que es el menos probable en la determinacin de la absorbancia, ya sea por el estimulo o influencia de los volmenes, el mal posicionamiento de la muestra o el cual podemos evaluar con ms fundamentos que pueden ser la alteracin en la concentracin de la muestra dada. Desde otro punto al realizar la evaluacin de una concentracin tericamente desconocida de la muestra problema y del BK, arroja que el BK tiene una concentracin racional con el rango de la grafica que expresa el resultado y mantiene su rango o la normalidad de la lnea, mientras la muestra problema que es la que altera bruscamente la direccionalidad de la grafica y en la que nos demuestra que esto sucede como

Tabla (2) absorbancia y procesos dados a travs de la relacin entre concentracin y absorbancia.
0.16 0.14 0.12 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0

ABSORBANCIA

consecuencia de la concentracin de la muestra problema la cual es menor a la de la muestra anteriormente utilizada y que tiene una concentracin de 1.5. Los precedentes que forman o explican la importancia de una anlisis espectroscpico es la interaccin entre la materia y la energa radiante, que dicta que cuando una partcula, tomo o cualquier forma de materia absorbe un fotn esta se vuelve ms energtica, y cuando una partcula de materia por el contrario emite un fotn esta partcula quedara menos energtica, estos son algunos de los procesos que nos permitirn realizar anlisis espectroscpicos (evaluar directamente niveles de absorcin). (3) Las concentraciones de cada una de las sustancias, su variacin, su aumento o su disminucin en estas es la que evala los niveles de absorcin, la representacin de la cantidad de luz o los fotones absorbidos o no absorbidos por la sustancias, muestras o anlitos. La identificacin de cada una de las redes de absorcin o del objetivo dado a evaluar a la hora de ver el nivel de absorcin se hace a travs de un monocromador, el cual permite solo el paso hacia la muestra que se examina, es decir nuestro anlito eligiendo un nivel de radiacin o un rango entre este (radiacin franca monocromtica), estas lecturas son las que nos aportan las bases tanto para anlisis cuantitativo como cualitativo en un tipo de anlisis de estos. Uno de los recursos que nos permiten la obtencin de resultados viables est dado por el uso de elementos como un mismo recipiente de manejo de los volmenes, el cual nos proporciona precisin en dicho anlisis. (4) Otro de los puntos que se pueden tocar es la evaluacin de los errores que se pueden presentar ya que la mediciones

de los porcentajes estn sujetos a errores al azar (fluctuaciones) en el funcionamiento normal de los instrumentos, su reproductividad de los ajustes de control del instrumento, las constancias de respuestas del detector y de la intensidad de la energa radiante, la duplicidad en el llenado de la celda espectrofotomtrico y la colocacin en la cmara de la muestra, (5) los cuales pueden incidir en nuestra presentacin de resultados, en la grafica a realizar y en fluctuaciones bruscas ya dadas en la realizacin de un procedimiento marcado. A la hora de medir la utilidad de este tipo de anlisis e inmiscuidlo en la biologa en el momento de por ejemplo realizar evaluaciones o anlisis volumtricos (esenciales en nuestros trabajos como bilogos) principalmente en la valoracin de medios de trabajo y contaminaciones en el ambiente se pueden considerar esenciales los tres tipos de anlisis, pero dejando de lado el posible error humano y lo que implica un error de este tipo, la forma en que se realizan, su exactitud y su precisin y tomando como el principal medio de trabajo un laboratorio la espectrometra seria la principal herramienta y la ms adecuada ayudado por sus trabajos de mano con las innovaciones y aparatos tecnolgicos (espectrmetro). Revalidando la importancia de este mtodo en nuestro campo de trabajo se destaca su eficiencia en la agricultura, en la adecuacin de medios de trabajos, de ambientes naturales acto para el desarrollo de cultivos, cosechas, etc., por la dependencia de la principales reservas del suelo (nutrientes, componentes orgnicos), y las cuales podemos controlar o mejorar dependiendo de nuestras necesidades a travs de este tipo de anlisis, las mediciones consecuentes y el manejo del medio. Tambin se puede destacar El blanco

que se utiliza en cualquier anlisis de una muestra, est preparada igual que todas las dems pero si el anlito que se quiere evaluar. Esta lectura te sirve para restarle a las lecturas de las muestras con el anlito, es decir quitar las lecturas provenientes de las interferencias dadas por solventes y otras impurezas que pueden afectar el valor real del anlisis y a al final tienes el valor solamente del anlito, (6) por otra parte hay que tener claro que Para construir una curva de calibracin se debe tener por lo menos una serie de elementos de concentracin conocida ya que se basa en la existencia de una relacin en principio lineal entre un carcter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometra) y la variable a determinar (concentration). (7) Para todo esto hay que revalidar que el mnimo de deteccin se define como la razn de cambio en la respuesta del instrumento al cambiar a un correspondiente estimulo de concentracin (valor mnimo) que puede captar como ese valor mnimo. El valor 0.0044 es la absorbancia que corresponde a la mnima diferencia medible con precisin (D T = 1.0% T) en instrumentos con escala de % T entre 0.0 y 100.0; una absorcin de 1% corresponde a 0.0044 unidades de absorbancia, aplicando: A = log [100 / (100-% absorcin)] = log [100 / (100-1)] = 0.00436 Una respuesta no lineal en la grfica de A vs C indica un cambio en el valor de la sensibilidad en funcin de la concentracin. Conforme la concentracin del anlito se aproxima a cero, la seal desaparece dentro del

ruido y se rebasa el lmite de deteccin. (8)

Conclusiones:
El nivel de absorbancia, esta dado por las concentraciones y el nivel de luz o la calidad de los fotones presentes en una muestra los cuales se prestan para el aumento o la disminucin de las concentraciones de diferentes maneras. La utilizacin de la energa influye directamente en los espectros visibles y su medicin. Las concentraciones, su alteracin, disminucin o aumento altera la realizacin de una grafica de calibrado. Los mtodos de espectrometra y volumetra de una manera general tienen un gran uso y prestan funciones importantes en los anlisis de alimentos, industrias afines, etc. y un gran medio de desenvolvimiento y ayuda a la hora de un anlisis biolgico.

Agradecimiento:

A los profesores Saudith Burgos, Juan Gabriel Snchez, Mirna Lloreda, a las instalaciones de la Universidad de Crdoba y a todo el grupo de trabajo.

Referencias:

Freeman. ISBN 0-7167-44643.

8. Harris,

1. http://www.espectrometria.com/es pectrometra_ultravioleta-visible. 2. Skoog West Holler Croug, Qumica analtica 7 ed., aplicaciones de los mtodos espectroscpicos atmicos y moleculares cap. 23, estndares externos y curvas de calibracin pg. 621 figura 23-4. 3. Compendio de anlisis qumico cuantitativo, Mtodos de uso de energa radiante y aparatos, Cap. 15, Interacciones entre la materia y la energa radiante, absorcin y emisin Pg. 403.

Daniel Charles (2003). Quantitative chemical analysis. San Francisco: W.H. Freeman. ISBN 0-7167-44643.

4. Compendio de anlisis qumico cuantitativo, aplicaciones analticas de los mtodos de absorcin de energa radiante, Cap. 16, determinacin espectrofotomtrica de hierro pg. 440. 5. Compendio de anlisis qumico cuantitativo, aplicaciones analticas de los mtodos de absorcin de energa radiante, Cap. 16, error fotomtrico pg. 421.

6. http/www.Bioqumica.com/unaram aparaeldesarrollodelavida/.co

7. Harris,

Daniel Charles (2003). Quantitative chemical analysis. San Francisco: W.H.