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CICLO REPLICATIVO DE LOS VIRUS

Extrado de Principles of Molecular Virology Alan J. Cann. 2nd. Edition. Academic Press 1997. Pedro E. Morn Agosto 2003 Los criterios utilizados para clasificar los virus han variado en la medida que ha cambiado nuestra percepcin sobre ellos:

Segn las enfermedades: Muchas de las primeras civilizaciones, como las del antiguo
Egipto y Grecia, saban de los efectos patognicos de diferentes virus. Desde esas pocas tenemos descripciones precisas y sorprendentes de enfermedades de humanos, animales y vegetales, aunque la naturaleza del agente responsable de esas calamidades an no se conoca. El principal problema de establecer una clasificacin de los virus sobre la base de esas descripciones, es que diferentes virus producen sntomas similares; por ejemplo, infecciones respiratorias con fiebre pueden ser causadas por diferentes virus.

Segn la morfologa: En la medida que se perfeccionaron las tcnicas de anlisis y

aument la lista de virus identificados, fue posible clasificar los virus en funcin de las caractersticas estructurales de la partcula viral, durante las dcadas de 1930 a 1950. Si bien esto era un notable avance respecto a las bases de clasificacin mencionadas en el punto anterior, an quedaban dificultades para diferenciar entre virus que son morfolgicamente similares pero causan diferentes cuadros clnicos -por ej. los picornavirus-. Durante esta poca, la serologa fue una importante herramienta para la clasificacin viral, y la morfologa de la partcula viral sigue siendo un elemento vlido para dicha clasificacin.

Clasificacin funcional: En los ltimos aos se ha puesto mayor nfasis en las estrategias de replicacin de los virus . En este punto es importante considerar la composicin y estructura del genoma de los virus y los condicionamientos que imponen sobre la replicacin. Este enfoque se ha acelerado con el desarrollo de la biologa molecular, debido a la importancia central que tiene el genoma viral en esta nueva tecnologa. El anlisis molecular de los genomas virales permite una identificacin rpida e inequvoca de diferentes cepas, adems de tener valor predictivo sobre las propiedades de nuevos virus que poseen estructuras genmicas conocidas.
En un sentido teleolgico, -asumiendo al virus como un organismo inanimado con un propsito consciente-, el objetivo bsico de un virus es replicar su informacin

gentica.
La naturaleza del genoma viral es por lo tanto relevante para determinar qu pasos son necesarios para lograr este objetivo. En realidad, hay una gran cantidad de variaciones que pueden ocurrir en estos procesos, an en aquellos virus con estructuras genmicas similares. La

2 razn de esto se encuentra en la relacin de la compartimentalizacin nuclear y citoplasmtica de la clula eucariota, con la informacin gentica y la capacidad bioqumica del genoma viral. El tipo de clula infectada por el virus tiene un efecto importante en el proceso de replicacin. Para los virus con hospedadores eucariotes, el tema es generalmente complejo. Hay muchos ejemplos de virus animales que desarrollan diferentes ciclos replicativos en diferentes tipos celulares. Sin embargo, la capacidad de codificacin de los genomas obliga a los virus a elegir una estrategia de replicacin. Esta debera ser una que implique una gran seguridad -para el virussobre la clula hospedadora. En algunos casos puede tratarse de un genoma viral pequeo y con la necesidad de codificar slo la informacin esencial para unas pocas protenas, -por ej. los parvovirus-. Por el contrario, los virus con genomas ms grandes y complejos por ej. los poxviruscodifican la mayor parte de la informacin necesaria para la replicacin; y el virus slo obtiene de la clula la energa necesaria y el sistema de sntesis de macromolculas, -ej. ribosomas-. Los virus con genoma de RNA, que poseen una RNA polimerasa asociada, no tienen necesidad aparente de ingresar al ncleo de la clula, aunque durante el ciclo de replicacin algunos lo hacen, -ej. ortomixovirus, retrovirus etc.-. Los DNA virus replican en su mayora en el ncleo celular; sin embargo algunos , como los poxvirus, han evolucionado hasta poseer la capacidad bioqumica suficiente como para poder replicar en el citoplasma, con mnimos requerimientos de las funciones celulares.

CICLO DE REPLICACIN VIRAL A los fines prcticos de explicar un prototipo bsico de ciclo replicativo, el ciclo de replicacin viral puede ser dividido en 7 pasos. Cabe aclarar que estas divisiones son arbitarias. Este esquema de ciclo replicativo se refiere a virus que infectan mamferos. Cualquiera sea la naturaleza del hospedador, -procariotes, invertebrados, aves o mamferostodos los virus deben pasar de alguna forma cada uno de estos estados a fin de completar exitosamente sus ciclos de replicacin. No todos los pasos que se describirn aqu pueden ser detectables como estados diferentes para todos los virus, a menudo parecen ocurrir en forma casi simultanea, como si fuesen un nico evento. Alguno de estos estados han sido estudiados minuciosamente y se conoce gran cantidad de informacin sobre ellos; otros sin embargo continan conservando cierto grado de misterio y en algunos casos estn virtualmente sin resolver. Debido a que los pasos de la replicacin viral que aqu se describen son arbitrarios, y dado que la replicacin involucra un ciclo, se debe comenzar el tema en un punto determinado; por lo tanto podramos considerar la interaccin de un virus con la clula hospedadora como el punto inicial del ciclo.

1-UNIN VIRUS-CLULA
Tcnicamente, la unin de un virus a una clula consiste en una unin especfica de una protena viral de unin (antireceptor) a una molcula celular receptora (receptor).

Actualmente se conocen muchos ejemplos de receptores virales:

VIRUS

RECEPTOR

FUNCIN
Receptor de seal Carbohidrato Carbohidrato Receptor de seal. molcula tipo inmunoglobulina.

Virus de la inmunodeficiencia Antgeno de diferenciacin Felina (Retrovirus) de leucocitos (CD9) Rotavirus porcino del grupo A cido silico Coronavirus bovino cido silico Virus rbico (Rabdovirus) Receptor de Acetilcolina Virus Visna (Retrovirus) Complejo mayor de histocompatibilidad I

La molculas receptoras sobre las superficies celulares pueden ser protenas (generalmente glucoprotenas), o residuos de carbohidratos presentes en glucoprotenas o glucolpidos. Las protenas generalmente presentan alta especificidad como receptores, mientras que los carbohidratos son menos especficos. Algunos virus complejos como los poxvirus y los herpesvirus utilizan ms de un receptor, por lo tanto poseen vas alternativas para ingresar a una clula. Los virus de vegetales enfrentan un problema en especial para poder iniciar una infeccin; la superficie externa de las plantas est compuesta por capas protectoras de pectinas y resinas, adems cada clula est rodeada por una gruesa pared de celulosa cubriendo la membrana citoplasmtica. Hasta el momento no se conoce ningn virus de vegetales que utilice receptores especficos como los de los virus de mamferos y bacterias; mas bien dependen de la presencia de una lesin en la pared celular para introducir directamente la partcula viral en la clula. Este hecho se logra por la presencia de vectores asociados a la transmisin del virus -por ej. los artrpodos- o simplemente por el dao mecnico en las clulas. Esta falta de receptores constituye un problema especial para los virus de plantas, dado que luego de la replicacin inicial en una clula se les dificulta la diseminacin de la nueva progenie viral en el resto de los tejidos del vegetal. Algunos de los ejemplos de interaccin virus-receptor mejor conocidos son los de la familia Picornaviridae: la molcula receptora de uno de los picornavirus de humanos -gnero rhinovirus-, es la molcula de adhesin intercelular 1 -ICAM-1-, la funcin normal de esta molcula es unir las clulas a sustratos adyacentes. Estructuralmente la ICAM-1 es similar a una inmunoglobulina con dominios constantes y variables homlogos a los de los anticuerpos, y es considerada miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas. Para el gnero poliovirus, el receptor es una protena integral de membrana, la que tambin es miembro de la familia de inmunoglobulinas, con un dominio variable y dos constantes. A diferencia del ICAM-1, la funcin de esta protena an es desconocida.

4 Dado que se ha podido conocer con alto grado de detalles la estructura de la cpside de un importante nmero de picornavirus, ha sido posible en los ltimos aos determinar los componentes virales responsables de la unin al receptor. En la superficie de cada cara triangular de la cpside icosahdrica capsmero- hay una depresin -una especie de hoyo- denominada CAN, formada por los bordes de los monmeros VP1, VP2 y VP3, -protenas caractersticas de los picornavirus-. Existen evidencias bioqumicas de drogas inhibidoras que tienen accin sobre esas depresiones y pueden bloquear la unin de los rhinovirus a las clulas, dado que la interaccin entre la partcula viral y la molcula receptora ICAM-1 ocurre en estos CAONES. A diferencia de otras reas de la superficie del virus, los residuos de aminocidos que conforman la superficie interna del CAN, son relativamente invariables. Su funcin antignica est protegida dado que las molculas de anticuerpos son demasiado grandes como para poder ubicarse dentro del can. Este es un dato importante, ya que cualquier cambio estructural en esta regin, aunque permita que el virus pueda evadir una respuesta inmune, producira una alteracin en el mecanismo de unin al receptor. En los poliovirus, en vez de un can hay una especie de canal que rodea el vrtice de cada pentmero de la cpside. Las regiones -altamente variables- de la cpside, a las que se unen los anticuerpos estn localizadas en las prominencias de cada lado del canal, que es demasiado estrecho como para permitir que los anticuerpos se unan a los residuos de aminocidos localizados en la base.. Estos residuos invariables- son los que interactan con el receptor celular. An entre la familia Picornaviridae hay variaciones; aunque hay 90 serotipos de rhinovirus que utilizan el ICAM-1 como receptor, otros 10 serotipos utilizan protenas relacionadas a receptores de lipoprotenas de baja densidad. Otros utilizan factores de adhesin vascular, o como en el caso del virus de la fiebre aftosa utilizan una molcula del tipo de las integrinas. Otro ejemplo de interaccin virus-receptor es el del virus de la influenza -virus de la gripe , familia Ortomixoviridae-. La hemaglutinina es una de las protenas presentes en las espculas de la superficie viral, -la otra protena es la neuraminidasa-. La hemaglutinina es la responsable de la unin del virus al receptor, cido silico, -cido Nacetil neuramnico- que est presente en una gran cantidad de molculas glucosiladas. Debido a esto, hay poca especificidad de unin virus-clula, por lo tanto los virus de la influenza pueden unirse a una amplia variedad de tipos celulares -por ejemplo causan aglutinacin de glbulos rojos-, adems de unirse a aquellas clulas en las que causan infeccin productiva. La neuraminidasa de los ortomixovirus y de los paramixovirus presenta otra caracterstica en esta etapa del ciclo de replicacin: en la mayora de los casos la unin a los receptores celulares es un proceso reversible; si no se produce la penetracin del virus a la clula, el virus puede desprenderse de la superficie celular. Algunos virus tienen mecanismos de separacin especficos, y la protena neuraminidasa es uno de estos. La neuraminidasa es una esterasa que cliva corta- el cido silico en cadenas de azcares. Esto es importante particularmente para el virus de la influenza. Dado que la molcula receptora -cido silico- est ampliamente distribuida, el virus tiende a unirse inespecficamente a una gran variedad de clulas y a restos celulares. Sin embargo, el desprendimiento de la superficie celular despus de haberse unido al receptor, generalmente conduce a cambios en el

5 virus -por ej. prdida o alteraciones de las protenas virales de unin-, lo que produce una disminucin o prdida de las posibilidades de subsecuentes uniones a otras clulas. As, en el caso del virus de la influenza, el clivage del cido silico por la neuraminidasa deja residuos unidos al sitio activo de la hemaglutinina, impidiendo que la molcula se una a otro receptor. En la mayora de los casos, la presencia -o ausencia- de receptores en la superficie de la clula determina el TROPISMO de un virus, vale decir en que tipo de clula hospedadora es capaz de replicar. Este paso inicial de la replicacin -la interaccin entre el virus y la clula hospedadora- tiene una gran influencia en la patognesis del virus y en determinar el curso de una infeccin viral. En algunos casos se requiere la interaccin con ms de una protena para que la partcula viral pueda ingresar a la clula. Un ejemplo de esto es el proceso mediante el cual los adenovirus ingresan a la clula. La accin inicial es la unin de la protena presente en las fibras del virus a una protena -no identificada- en la superficie celular. Sin embargo esto no es suficiente, para la entrada del virus se requiere un paso ms que consiste en la unin de la protena viral pentona- a una vitronectina; esta protena no es un receptor para los adenovirus, sino que es un factor complementario que se requiere para la penetracin viral. En algunos casos, la unin a receptores especficos puede ser reemplazada por interacciones no especficas o inapropiadas entre la partcula viral y la clula. Es posible que la partcula viral pueda ingresar accidentalmente a la clula mediante procesos como la pinocitosis o fagocitosis . Sin embargo sin la presencia de alguna forma de interaccin fsica que mantenga al virus en estrecho contacto con la superficie celular, la frecuencia con la que ocurre este hecho accidental es muy baja. Tambin puede ocurrir que algunas partculas virales, cubiertas con anticuerpos, se unan a molculas receptoras para el Fc dispuestas sobre la superficie de monocitos y otras clulas sanguneas, y de esta forma ingresan a la clula. Este fenmeno se ha observado en algunos casos donde la presencia de anticuerpos anti-virales ha dado como resultado una potenciacin en el mecanismo del ingreso de las partculas virales a la clula y un incremento en la patogenicidad, en vez de producir la neutralizacin viral como cabra esperar.

2-INGRESO A LA CLULA
La penetracin a la clula blanco ocurre normalmente en un tiempo muy breve luego de la unin del virus al receptor en la superficie celular. A diferencia del proceso anterior, el ingreso a la clula es generalmente un proceso dependiente de energa, esto significa que la clula debe estar metabolicamente activa . En este paso hay tres mecanismos involucrados: 1) TRANSLOCACIN: La partcula viral atraviesa la membrana citoplasmtica. Este proceso es poco frecuente en los virus y no est completamente entendido. Puede estar

6 mediado por protenas de la cpside viral y receptores especficos de membrana. 2) ENDOCITOSIS: El virus ingresa en vacuolas intracelulares. Este es probablemente el mecanismo de ingreso ms comn en los virus. No se necesita de la presencia de protenas virales especficas -excepto de aquellas involucradas en la unin al receptorpero si es necesaria la formacin de vesculas endocticas en la membrana celular y la posterior internalizacin de estas. Este mecanismo involucra un cambio de pH en el endosoma para liberar posteriormente el genoma del virus dentro del citoplasma. 3) FUSIN: Slo ocurre con los virus envueltos. En este proceso ocurre una fusin de la envoltura viral con la membrana celular, ya sea directamente en la superficie celular o en una vescula citoplasmtica luego de la endocitosis. La fusin requiere de la presencia de una protena de fusin especfica en la envoltura del virus -por ejemplo la hemaglutinina en el virus de la influenza o las glucoprotenas de transmembrana en los retrovirus-. Estas protenas promueven la unin de las membranas del virus y de la clula, esto resulta en la liberacin de la nucleocpside directamente en el citoplasma. Este proceso no es dependiente pH. El proceso de endocitosis es casi universal en las clulas animales; se forman vesculas en la membrana plasmtica, las que posteriormente son englobadas e internalizadas al citoplasma. La vida media de estas vesculas es muy breve, en pocos segundos la mayora se fusionan con endosomas liberando su contenido en esas vesculas ms grandes. Hasta este momento cualquier virus contenido en estas estructuras, an est separado del citoplasma por una bicapa lipdica , por lo tanto no se puede decir estrictamente que ha ingresado en la clula. Posteriormente, los endosomas se fusionan con los lisosomas, el ambiente interno se vuelve progresivamente ms hostil, se acidifica en la medida que el pH desciende y aumenta la concentracin de enzimas degradativas . Esto significa que el virus debe liberarse de la vescula e ingresar al citoplasma antes de ser degradado. Hay una serie de mecanismos por los cuales esto ocurre, incluyendo la fusin de membranas. La liberacin de la partcula viral desde el endosoma y su pasaje al citoplasma estn conectados estrechamente -y a menudo imposible de separar- del proceso de liberacin de las estructuras, liberacin del genoma -.

3-PRDIDA DE ENVOLTURAS (LIBERACIN DEL GENOMA)

En este paso la cpside es parcial o totalmente removida dejando expuesto el genoma viral, generalmente en forma de complejo nucleoproteico. Este paso es uno de los estados de la replicacin viral que menos ha sido investigado hasta el momento, por lo tanto la informacin disponible es relativamente escasa. La remocin de la envoltura viral que ocurre durante la fusin de las membranas, forma parte de este proceso de liberacin del genoma. La fusin entre las envolturas virales y las membranas endosmicas se produce por la accin de protenas virales de fusin.

7 Estas generalmente son activadas por la aparicin de un dominio de fusin -oculto hasta ese momento- como consecuencia de cambios conformacionales en la protena, inducidos por el descenso del pH en la vescula. El proceso inicial de prdida de envolturas puede ocurrir dentro del endosoma -producido por el cambio del pH- o directamente en el citoplasma. Ciertos productos qumicos, como monesina, nigericina o cationes como cloroquina y amonio pueden utilizarse para bloquear la acidificacin de las vesculas, por lo tanto interfieren en el paso de liberacin del genoma, cuando dicho proceso se produce dentro del endosoma. La endocitosis puede resultar un proceso peligroso para los virus, pues si permanecen demasiado tiempo dentro de la vescula pueden ser daados en forma irreversible por la acidificacin o por las enzimas lisosmicas. Algunos virus pueden controlar este proceso, por ejemplo la protena M2 del virus de la influenza es un canal de membrana, que permite la entradas de iones hidrgeno en la nucleocpside, facilitando la prdida de las envolturas. Esta protena M2 es multifuncional y cumple tambin un rol en la maduracin del virus. El resultado de la prdida de las envolturas depende de la estructura y la composicin qumica de la nucleocpside; estos dos factores determinan el siguiente paso del ciclo de replicacin. En las cpsides de herpesvirus y adenovirus se producen cambios estructurales luego de la penetracin a la clula, de todos modos permanecen intactas durante un largo perodo. Estas cpsides contienen secuencias que inducen la unin al citoesqueleto, y sta interaccin permite el transporte de la cpside completa hasta el ncleo de la clula. La prdida de envolturas se produce en los poros de la membrana nuclear, de esta manera la nucleocpside ingresa al ncleo. En los reovirus y poxvirus no ocurre una prdida de envolturas completa, y muchas de las reacciones de replicacin del genoma son catalizadas por enzimas codificadas por el virus, dentro de partculas citoplasmticas.

4-REPLICACIN DEL GENOMA Y EXPRESIN GENTICA

La estrategia de replicacin de un virus depende de la naturaleza de su material gentico. En este aspecto los virus pueden ser divididos en siete grupos -clasificacin de Baltimore 1971-. El control de la expresin gnica determina el desarrollo del curso de una infeccin viral (aguda, crnica, persistente o latente).

VIRUS DE CLASE I
Virus de DNA de doble cadena. Esta clase puede subdividirse en dos grupos: a) Replicacin exclusivamente nuclear. La replicacin de estos virus es dependiente en gran medida de factores celulares. -Flias. Herpesviridae, Adenoviridae, Poliomaviridae, Papilomaviridaeb) Replicacin citoplasmtica. Estos virus han evolucionado y adquirido los factores necesarios para la transcripcin y replicacin de sus genomas; poseen una RNA polimerasa DNA dependiente asociada al virin, por lo tanto son bastante independientes de la maquinaria celular. -Flias. Poxviridae y Asfarviridae-

VIRUS DE CLASE II
Virus de DNA de cadena simple. La replicacin ocurre en el ncleo, involucra la formacin de una doble cadena de DNA intermediaria, que sirve como templado (molde) para la sntesis del nuevo DNA de cadena simple. -Flias. Parvoviridae y Circoviridae-

VIRUS DE CLASE III

Virus de RNA de cadena doble. Estos virus tienen genoma segmentado, cada segmento es transcripto por separado para producir mRNAs monocistrnicos individuales. -Flias. Reoviridae y Birnaviridae-

VIRUS DE CLASE IV
Virus de RNA simple de sentido positivo. Estos virus pueden dividirse en dos grupos: a) Orden nidovirales: Producen mRNAs monocistrnicos subgenmicos, unidos en su extremo 3 -Flias. Coronaviridae y Arteriviridaeb) Virus con mRNAs policistrnicos : El genoma (RNA +) forma el mRNA, el cual es traducido luego de la infeccin, resultando en la sntesis de una poliprotena, la que es posteriormente clivada para formar las protenas maduras. Algunas delas familias producen mRNA subgenmicos. -Flias. Picornaviridae, Caliciviridae, Flaviviridae, Togaviridae y Astroviridae-

VIRUS DE CLASE V
Virus de RNA simple negativo. Los genomas de estos virus pueden dividirse en dos grupos: a) Genomas segmentados : El primer paso en la replicacin es la transcripcin del genoma (RNA-) por accin de la RNA polimerasa RNA dependiente, asociada al virin; esta enzima produce un mRNA monocistrnico, que sirve como molde para la replicacin del genoma. Algunos de estos virus poseen un RNA ambisentido. -Flias. Ortomixoviridae, Bunyaviridae y Arenaviridaeb) Genoma no segmentado -Orden mononegavirales- . La transcripcin se realiza como en el caso anterior, la RNA polimerasa viral produce un mRNA monocistrnico de la misma longitud del genoma viral. -Flias. Paramixoviridae, Rabdoviridae, Filoviridae y Bornaviridae-

VIRUS DE CLASE VI
Virus de RNA simple positivo diploide con una forma DNA intermediaria. No puede actuar directamente como mRNA, sino que sirve como molde para la sntesis de DNA por accin de la enzima viral Transcriptasa reversa. -Flia. Retroviridae-

VIRUS DE CLASE VII

Virus de DNA doble cadena, circular e incompleto con una forma RNA intermediaria. Estos virus tambin utilizan la Transcriptasa reversa, pero a diferencia de los anteriores esta transcripcin ocurre en la partcula viral durante la maduracin. Cuando infectan una clula la primera accin es completar la cadena de DNA incompleta, luego se produce la transcripcin. -Fla. Hepadnaviridae-

5-ENSAMBLE
Este paso consta de la unin de todos los componentes necesarios para la formacin de la estructura bsica de la partcula viral en un determinado sitio de la clula. El sitio del ensamble depende del lugar de replicacin del virus y del mecanismo por el cual el virus es liberado de la clula, estos eventos varan para los diferentes virus. Por ejemplo, los picornavirus, poxvirus y reovirus se ensamblan en el citoplasma, mientras que los adenovirus, herpesvirus y parvovirus lo hacen en el ncleo. Al igual que con los primeros estados de la replicacin, no siempre es posible identificar el ensamble, la maduracin y liberacin de los virus como fases distintas y absolutamente delimitadas. El sitio del ensamble tiene una gran influencia sobre todos esos procesos. En la mayora de los casos, las membranas celulares son utilizadas como lugar de anclaje de las protenas virales, y esto es lo que inicia el proceso de ensamble. Aparentemente cuando los niveles intracelulares de protenas virales y molculas de genomas llegan a un punto crtico de concentracin, se dispara -por un mecanismo no muy bien conocido- el proceso de ensamble. Muchos virus producen altos niveles de concentracin de componentes estructurales dentro de compartimentos subcelulares, estos se conocen como CUERPOS DE INCLUSIN. Estos cuerpos de inclusin son una caracterstica comn de los ltimos estados de la infeccin celular. El tamao y ubicacin de estas inclusiones en las clulas infectadas, -visibles con microscopio ptico- son generalmente caractersticas de algunos virus en particular: por ejemplo la infeccin con el virus de la rabia resulta en la formacin de grandes inclusiones citoplasmticas -perinucleares-, denominadas Corpsculos de Negri. La concentracin de componentes de la estructura viral en un sitio determinado puede ser potenciada por la interaccin de protenas asociadas a membranas. Este mecanismo es particularmente importante en el caso de los virus envueltos, que son liberados de la clula por GEMACIN. En algunos casos la formacin de la partcula viral puede ser un proceso relativamente simple, dirigido slo por la interaccin entre las subunidades estructurales de la cpside y controlado por las reglas de la simetra. Otras veces, el ensamble resulta un proceso complejo, de varios pasos, que involucra protenas estructurales del virus y otras protenas, celulares y codificadas por el virus, que actan como molde para guiar el ensamble del virin. La encapsidacin del genoma viral puede ocurrir en los primeros pasos del ensamble -por ej. los virus con simetra helicoidal ensamblan su cpside alrededor del genoma-, o en los ltimos estados cuando el genoma es empaquetado dentro de una caparazn proteica casi completa.

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6- MADURACIN
Este es el estado del ciclo replicativo en el cual el virus se hace infeccioso. La maduracin generalmente incluye cambios estructurales en la partcula viral, estos cambios pueden ser el resultado de cortes especficos de protenas de la cpside para formar productos maduros, o de cambios conformacionales en las protenas durante el ensamble. Estos eventos conducen frecuentemente a cambios estructurales sustanciales en la cpside, por ej. las diferencias de antigenicidad entre la partcula viral incompleta y la madura. Las proteasas virales frecuentemente estn involucradas en la maduracin, aunque en algunos casos pueden actuar enzimas celulares o una mezcla de enzimas celulares y virales. Ciertamente hay un cierto riesgo en la participacin de enzimas proteolticas celulares en este proceso, dado que la falta de especificidad sobre el sustrato podra ocasionar fcilmente la completa degradacin de las protenas de la cpside. Sin embargo las proteasas codificadas por el virus, en general son altamente especficas para determinadas secuencias de aminocidos y estructuras; frecuentemente slo cortan una unin peptdica en particular en una estructura proteica grande y compleja como la cpside. Adems, en cierta forma son controladas al ser empaquetadas dentro de la partcula viral durante el ensamble y slo se activan cuando toman contacto con las secuencias especficas para la conformacin de la cpside, por ejemplo al localizarse en un sitio hidrofbico o por cambios de pH o concentracin de determinados iones dentro de la cpside. Las proteasas de los retrovirus son un buen ejemplo de enzimas involucradas en la maduracin, que estn bajo este tipo de control. El core de los retrovirus est compuesto por protenas codificadas por el gen gag y la proteasa es empaquetada en el core antes de la liberacin de la clula por gemacin. En algn momento del proceso de gemacin, la proteasa corta los precursores de la protena gag en productos maduros -protenas de la cpside, nucleocpside y matriz de la partcula viral madura-. Para algunos virus el ensamble y la maduracin ocurren dentro de la clula y son procesos inseparables, mientras que para otros la maduracin puede ocurrir slo despus de la liberacin de la partcula viral. De todos modos, y en cualquiera de los casos, el proceso de maduracin prepara al virus para la infeccin de nuevas clulas.

7-LIBERACIN
Los virus en general pueden liberarse de la clula mediante dos tipos de mecanismos: lisis y gemacin. Para los virus lticos -la mayora de los virus desnudos-, la liberacin es un proceso simple: la clula infectada se rompe y libera las partculas virales. En el caso de los virus que se liberan por gemacin, estos adquieren su envoltura lipdica y las protenas asociadas en el momento en que pasan a travs de la membrana plasmtica o de vesculas intracelulares. La liberacin de los virus por esta va puede resultar altamente perjudicial para la clula -por ej.en el caso de paramixovirus, rabdovirus, togavirus- o no -por ej. retrovirus-; de todos modos en cualquiera de los casos el proceso es controlado por el virus: la interaccin fsica de las protenas

11 de la cpside sobre la superficie interna de la membrana celular fuerza a la partcula viral a pasar a travs de dicha membrana. El ensamble, la maduracin y liberacin son generalmente procesos simultneos en los virus que se liberan por gemacin. El tipo de membrana a travs de la cual geman los virus depende del tipo de virus, por ej. puede ser a travs de la membrana celular como en el caso de los retrovirus y togavirus, a travs de la membrana citoplasmtica -ortomixovirus, coronavirus, bunyavirus, rabdovirus, hepadnavirus- o a travs de la membrana nuclear como en los herpesvirus.

En resumen, la replicacin de los virus implica tres procesos bsicos: a) El inicio de la infeccin. b) La replicacin y expresin del genoma. c) La liberacin del virin maduro desde la clula infectada. El estudio en detalle de cada uno de estos procesos, muestra que existen muchas diferencias entre los ciclos replicativos de los diferentes virus. Estas diferencias estn determinadas por la biologa de la clula hospedadora y la naturaleza del genoma viral. De todos modos, a los fines prcticos de estudiar el proceso de replicacin viral, es posible hacerlo desde una visin general tomando como esquema los tres procesos bsicos mencionados, que en una u otra forma son cumplidos por todos los tipos de virus.