TAREA N7 1.

Enzimas.

Explique fundamentando su respuesta : a. El aumento de la velocidad observado en las reacciones catalizadas por enzimas. b. Dos caractersticas de las enzimas (no considere la descrita en el punto a) fundamentales en el metabolismo celular. De un ejemplo para cada caso.

En una reaccin enzimtica la concentracin inicial de S es igual a 2 x 10-5 M. En seis minutos de reaccin la mitad del sustrato ha sido utilizado. El Km de la reaccin es 5 x 10-3 M. Calcular: a. k obs. (constante cintica observada de la rxn). b. V mx de la reaccin. 2. 3. Cul ser la [S] necesaria para obtener v = 1/4 V mx si el Km = 0,005 M? Qu valor debe alcanzar la velocidad de reaccin si [S] = Km? Sin graficar y de acuerdo a los datos de la tabla conteste: [S] (M) v (mol / min) 5 x 10 -2 0.25 -3 5 x 10 0.25 5 x 10 -4 0.25 -5 5 x 10 0.20 5 x 10 -6 0.071 5 x 10 -7 0.0096 a. b. c. d. Cul es la V mx de la reaccin? Cul es el Km de la enzima? Demuestre, si esta reaccin sigue la cintica de Michaelis y Menten. Cul es la velocidad a [S] = 1 x 10-6M y [S] = 1 x 10-1 M? e. Calcular la cantidad de producto formado, durante los primeros cinco minutos de reaccin a [S] = 2x10-3 M. f. Suponga que la [E] aumenta en un factor de 4. Cul es el valor de Km? De V mx? En estas condiciones, qu valor de velocidad inicial (vo) se obtiene si [S] = 5 x 10-6 M?

4.

5.

Una enzima cataliza la conversin de sustrato producto. a. Calcular Km y V mx segn datos de la tabla. b. Calcular la k cintica observada de la reaccin cuando la concentracin de S es saturante y cuando la [S] << Km.

[S] M 2.5 x 10- 6 3.33 x 10- 6 4.0 x 10- 6 5.0 x 10- 6 1.0 x 10- 5 2.0 x 10- 5 4.0 x 10- 5 6.

v moles/(lt x min) 24 30 34 40 60 80 96

Qu concentracin de I competitivo se requiere para obtener un 75% de inhibicin a una concentracin de sustrato de 1.5 x 10-3 M si el Km = 2.9 x 10-4 M y Ki = 2 x 10-5 M ? En cunto debe ser aumentada la concentracin de sustrato para obtener la velocidad original sin inhibidor? Una enzima tiene un Km = 4,7 x 10-5 M. Si la V mx de la reaccin es 22 [moles / lt x min]. Cul ser la velocidad observada en presencia de : a. b. 2 x 10-4 M de S y 5 x 10-4 M de Inh competitivo. 2 x 10-4 M de S y 5 x 10-4 M de Inh no competitivo. Cul es el % de inhibicin en ambos casos ?

7.

La constante de inhibicin (Ki) para ambos inhibidores es 3 x 10-4 M. 8. El sitio activo de una esterasa contiene un residuo aminoacdico cido y uno bsico. El S se une solamente cuando los residuos se encuentran con carga. a. Esquematice el sitio activo. b. Esquematice el complejo ES. c. Indique cual es el pH ptimo de este enzima si pK COOH = 4.0 y pK +NH3 = 7.0 b. Esquematice el sitio activo en condiciones inactivas.

9.

La penicilina es hidrolizada por la penicilasa, una enzima presente en bacterias resistentes al antibitico. La masa de la enzima presente en Staphilococcus aureus es 29,6 Kdaltons. Se usa una solucin de 10.0 ml que contiene 10-9 g de esta enzima para medir la cantidad de penicilina hidrolizada por min. en funcin de la concentracin de penicilina presente en la solucin. Se obtienen los siguientes resultados: [penicilina] (mM) 0.1x10-2 0.3x10-2 0.5x10-2 1.0x10-2 3.0x10-2 5.0x10-2 velocidad (moles/min) 0.11x10-3 0.25x10-3 0.34x10-3 0.45x10-3 0.58x10-3 0.61x10-3

a. b.

Calcule los parmetros cinticos (V max., Km) utilizando el mtodo de Hanes y Woolf. Calcule el k cat. c. En base a los resultados obtenidos es sta una enzima michaeliana? Justifique su respuesta.

10.

Se estudi la velocidad de la reaccin catalizada por la piruvato quinasa en funcin de la concentracin del fosfoenol- piruvato (PEP) con los resultados indicados en la fila A.

PEP ADP

Mg

Piruvato ATP

(Se supone que el ADP est saturante). Tambin se dan los datos de los efectos de dos inhibidores de est reaccin. En la fila B los datos se refieren al 2-fosfoglicerato 10 mM como inhibidor y en la fila C se refieren a la fenilalanina 10 mM como inhibidor. Comentar estos datos. [PEP] (mM) 0,25 0,30 0,50 1,00 velocidad ( mM/min ) 1,10 1,25 1,63 2,05 0,73 0,83 1,15 1,68 0,60 0,68 0,90 1,25

2,00 2,43 2,08 1,50

Inhibidor A/ nada B/ 2-fosfoglicerato C/ fenilalanina

Calcule Vmax, Km y Ki. Comente los resultados.