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28/09/2012

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El sistema inmune adaptativo es caracterstico de los vertebrados. Si bien existen ortlogos de muchas molculas del sistema inmune innato que son compartidas (por ejemplo los Toll Like Receptors o pptidos antimicrobianos (defensinas), que se han encontrado desde plantas a mamferos), hay una serie de macromolculas que son caractersticas del sistema inmune de los vertebrados con madbulas. Estas macromolculas, que iremos viendo a lo largo del curso, incluyen: los anticuerpos, el receptor de los linfocitos T y Molculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad . En particular los anticuerpos y el receptor de los linfocitos T, son las molculas que confieren al sistema inmune adaptativo la capacidad de reconocer especficamente virtualmente cualquier estructura qumica que pueda ingresar al organismo, y sobre esta base montar una respuesta inmune adaptada al patgeno en cuestin.

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Cmo comenz la identificacin de los componentes que mediaban la proteccin?. En 1890 se realiz un trabajo en el que se inyectaron ratones con preparaciones de Clostridum tetani, luego de unas semanas se transfirieron 2 ml de sueros de los mismos a un nuevo grupo de ratones. Cuando estos ltimos se infectaron con la bacteria sobrevivieron, mientras que murieron los ratones del grupo control que no recibi suero. Esto demostr que el contacto con componentes del patgeno induca la produccin de sustancias que conferan proteccin y que estas se encontraban en el suero. En 1939 Tiseliu y Kabat, demostraron en que fraccin del suero se encontraban estas sustancias. Para esto inmunizaron ratones con ovoalbumina (OVA). Luego de algunos das extrajeron el suero, y lo adsorbieron con OVA (con lo cual eliminaron del suero los componentes reactivos). Comparando por electroforesis ambos sueros se concluy que la sustancia responsable del reconocimiento especfico estaba en la fraccin gama. De ah el nombre inmunoglobulinas que utilizamos como sinnimo de anticuerpos. La manipulacin del sistema inmune para producir anticuerpos que confirieran proteccin a las enfermedades (vacunas) o para utilizarlos en la inmunizacin pasiva (por ejemplo sueros como el antitetnico que neutralizaban toxinas) le dio gran impulso a la denominada inmunidad humoral. Esta domin el escenario de la inmunologa hasta mediados del siglo pasado, donde comenz a hacerse evidente el rol que cumplan los componentes celulares del sistema inmune, lo que culmin con el descubrimiento del papel de los linfocitos T, que tambin posee un receptor de reconocimiento en su membrana (TCR), de caractersticas similares a los anticuerpos, que determina la especificidad de las importantes funciones que esta clula juega en el funcionamiento del sistema inmune

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En el sistema inmune adaptativo hay tres tipos de mleculas que intervienen en el reconocimiento del antgeno. Los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig) que se presentan como receptores de membrana (BCR) en los linfocitos B, o son secretados por estos una vez que se han transformado en plasmocitos. El receptor T (TCR) de los linfocitos T, que segn el tipo de cadena que lo forme puede ser o . Mientras que la funcin de estos ltimos es compleja y alguna de ellas todava quedan por entender. Los linfocitos con receptores reconocen pptidos unidos a molculas del complejo mayor de compatibilidad (MHC) que son receptores de membrana presentes en un variado nmero de clulas. La interaccin TCR con el pptido MHC media importante funciones reguladoras y efectoras de estos linfocitos Las molculas de MHC son el tercer tipo de estructura que participan en el reconocimiento del antgeno y su funcin principal es formar un complejo con pptidos derivados de patgenos y de esta forma reclutar la accin de los correspondientes linfocitos T especficos. Mientras que el reconocimiento en el caso de las Igs y los TCRs es de muy alta especificidad, las molculas de MHC interactan con el antgeno con baja especificidad, de esta forma un nmero limitado de molculas de MHC pueden presentar una elevado nmero de pptidos. Existen dos tipos de molculas de MHC, MHC de clase I y clase II. Mientras que los primeros estn presentes en todas las clulas nucleadas, los ltimos estn restringidos a un nmero limitado de clulas del sistema inmune.

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El sistema inmune adaptativo funciona sobre la base de una distribucin clonal de receptores vinculados al reconocimiento especfico. Que significa esto?: Que en el proceso de generacin de los linfocitos, se produce en forma aleatoria un receptor de membrana con una determinada especificidad, es decir con la capacidad de reaccionar con una nica estructura qumica. De este modo, en cada clula hay una nica especificidad. Ntese que este proceso conlleva el riesgo de producir clones reactivos contra componentes propios. Por esta razn que existen mecanismos de tolerancia para eliminar los clones autoreactivos. Una vez que se ha generado el repertorio de linofcitos, opera un mecanismo de seleccin clonal por el cual los clones con especificidad por componentes propios son eliminados, mientras que los clones con especificidad por componentes no-propios o alterados (como los de las clulas tumorales) son estimulados por el antgeno para proliferar (aumento de nmero) y diferenciarse (cambios fenotpicos). Los cambios fenotpicos dan lugar a la aparicin de clulas que van a contribuir a la destruccin de la agresin (por ejemplo capaces de secretar anticuerpos) mientras que otras se convierten en clulas de memoria, que aseguran una rpida respuesta en caso de que vuelva a producirse la infeccin.

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Las clulas protagonistas del sistema inmune adaptativo son el linfocito B y el linfocito T. La funcin principal del linfocito B es la secrecin de anticuerpos . Los anticuerpos o inmunoglobulinas son glicoprotenas que tienen sitios de unin al antgeno y una regin constante vinculada a las funciones efectoras de los mismo. Se encuentran como receptores de membrana formando complejos con otras protenas (BCR) o como productos solubles secretados por linfocitos B diferenciados en plasmocitos. A travs de su unin los anticuerpos ejercen una serie de funciones efectoras: a) bloquean o neutralizan directamente al antgeno que reconocen (por ejemplo si se unen al la regin de un virus que interacta con la clula que va a infectar, se bloquea la infeccin), b) opsonizan patgenos favoreciendo su fagocitosis por clulas como los macrfagos y neutrfilos, los cuales tienen receptores que se unen a la regin constante de los anticuerpos, c) disparan la va clsica del complemento al unirse al patgeno a travs de la activacin del componente C1q del complemento, y d) median la actividad de citotoxicidad celular de las NK y eosinfilos al unirse a los antgenos expresados en clulas infectadas o tumorales, o a la superficie de parsitos.

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La estructura bsica de los anticuerpos consiste de dos cadenas pesadas idnticas (aprox 50 kDa c/u para IgG), y dos cadenas livianas tambin idnticas de aprox 25 kDa. Ambas estn constituidas por dominios de aprox. 110 amino cidos, estos dominios tienen un plegamiento (estructura terciaria) caracterstico constituido por dos hojas beta antiparalelas conectadas por un puente disulfuro y unidas por una sere bucles. En el caso de la regin variable, es en estos bucles o loops que se encuentran los residuos que interactan con el ligando (antgeno). La combinacin de los dominios N-terminales de las cadenas livianas y pesadas (denominado dominios variables VH y VL) da lugar al sitio de unin al antgeno (denominamos antgeno a la molcula que reacciona con un anticuerpo). Hay dos sitios de unin al antgeno por molcula, que tambin se llaman paratopes. La existencia de dos partopes permite reforzar la interaccin con antgenos multivalentes, as como la formacin de agregados que permiten la eliminacin final del antgeno. Para facilitar la unin de ambos partopes, existe una regin bisagra que adapta el ngulo que forman los dos brazos de la Ig al unirse al antgeno. Esta caracteristica estructural ha sido explotada por algunos patgenos que desarrollaron proteasas capaces de digerir estas regiones y privar al anticuerpos unido de sus funciones efectoras. Los dominios de las cadenas pesadas ms cercanos al C-terminal, forman la regin denominada Fc , no todos los anticuerpos son idnticos en esta regin y estas diferencias dan lugar a la existencias de distintas clases de inmunoglobulinas. Alli se encuentran los sitios de unin al componente C1q del complemento, y en distintas clulas como macrfagos, neutrfilos, NK, existen receptores (de distintos tipos) para esta regin. Por esta razn, la regin Fc est asociada con muchas de las funciones efectoras de las Ig. La regin Fc se encuentra fuertemente glicosilada en las distintas clases.

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La estructura bsica de los anticuerpos consiste de dos cadenas pesadas idnticas (aprox 50 kDa c/u para IgG), y dos cadenas livianas tambin idnticas de aprox 25 kDa. Ambas estn constituidas por dominios de aprox. 110 amino cidos, estos dominios tienen un plegamiento (estructura terciaria) caracterstico constituido por dos hojas beta antiparalelas conectadas por un puente disulfuro y unidas por una sere bucles. En el caso de la regin variable, es en estos bucles o loops que se encuentran los residuos que interactan con el ligando (antgeno). La combinacin de los dominios N-terminales de las cadenas livianas y pesadas (denominado dominios variables VH y VL) da lugar al sitio de unin al antgeno (denominamos antgeno a la molcula que reacciona con un anticuerpo). Hay dos sitios de unin al antgeno por molcula, que tambin se llaman paratopes. La existencia de dos partopes permite reforzar la interaccin con antgenos multivalentes, as como la formacin de agregados que permiten la eliminacin final del antgeno. Para facilitar la unin de ambos partopes, existe una regin bisagra que adapta el ngulo que forman los dos brazos de la Ig al unirse al antgeno. Esta caracterstica estructural ha sido explotada por algunos patgenos que desarrollaron proteasas capaces de digerir estas regiones y privar al anticuerpos unido de sus funciones efectoras. Los dominios de las cadenas pesadas ms cercanos al C-terminal, forman la regin denominada Fc , no todos los anticuerpos son idnticos en esta regin y estas diferencias dan lugar a la existencias de distintas clases de inmunoglobulinas. Alli se encuentran los sitios de unin al componente C1q del complemento, y en distintas clulas como macrfagos, neutrfilos, NK, existen receptores (de distintos tipos) para esta regin. Por esta razn, la regin Fc est asociada con muchas de las funciones efectoras de las Ig. La regin Fc se encuentra fuertemente glicosilada en las distintas clases.

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La reaccin antgeno (Ag) - anticuerpo (Ac) es una reaccin de equilibrio que est gobernada por la ley de accin de masas. Ka=[AgAc]/[Ag][Ac] es la constante de asociacin (en la consideracin terica de un nico paratope de la molcula que reacciona con un antgeno univalente). El inverso de Ka es la constantes de disociacin: Kd=1/Ka y es la forma que se usa generalmente para cuantificar la afinidad de los anticuerpos. Los valores de afinidad de los anticuerpos van desde bajas afinidades Kd =10-6-10-7 a altas afinidades Kd = 1010-10-11 M. La alta afinidad de los anticuerpos, que se optimiza en el transcurso de la respuesta inmune tiene una gran relevancia biolgica. As por ejemplo, se requieren anticuerpos de alta afinidad para que el complejo AgAc se forme a bajas concentraciones de anticuerpo (tal como ocurre en el caso de un segundo encuentro con el patgeno, o en sitios de difcil acceso), tambin es importante que el complejo AgAc se forme a bajas concentraciones de antgeno. Por ejemplo una sola molcula de la txina diftrica puede eliminar una clula y por tanto an a muy bajas concentraciones es necesario neutralizarla rpidamente. Las fuerzas que determinan la unin son las que se observan en otras interacciones entre macromolculas. Estas fuerzas dbiles dependen fuertemente de la orientacin y la distancia, y por tanto de la complementariedad de la interface de unin. La alta exigencia de complementariedad es la razn ltima de la especificidad de los anticuerpos, que a veces se asimila al concepto de llavecerradura. (http://www.picotwist.com/index.php?content=smb&option=odg)

La regin del antgeno con la que reacciona el anticuerpo se denomina eptope. En el caso de antgenos protecos se pueden distinguir los eptopes continuos o discontinuos. Mientras que en los primeros los principales residuos de contacto provienen de un regin de la secuencia primaria de la protena, en los segundos los residuos involucrados son aproximados en el espacio por el plegamiento de la

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La reaccin antgeno (Ag) - anticuerpo (Ac) es una reaccin de equilibrio que est gobernada por la ley de accin de masas. Ka=[AgAc]/[Ag][Ac] es la constante de asociacin (en la consideracin terica de un nico paratope de la molcula que reacciona con un antgeno univalente). El inverso de Ka es la constantes de disociacin: Kd=1/Ka y es la forma que se usa generalmente para cuantificar la afinidad de los anticuerpos. Los valores de afinidad de los anticuerpos van desde bajas afinidades Kd =10-6-10-7 a altas afinidades Kd = 1010-10-11 M. La alta afinidad de los anticuerpos, que se optimiza en el transcurso de la respuesta inmune tiene una gran relevancia biolgica. As por ejemplo, se requieren anticuerpos de alta afinidad para que el complejo AgAc se forme a bajas concentraciones de anticuerpo (tal como ocurre en el caso de un segundo encuentro con el patgeno, o en sitios de difcil acceso), tambin es importante que el complejo AgAc se forme a bajas concentraciones de antgeno. Por ejemplo una sola molcula de la txina diftrica puede eliminar una clula y por tanto an a muy bajas concentraciones es necesario neutralizarla rpidamente. Las fuerzas que determinan la unin son las que se observan en otras interacciones entre macromolculas. Estas fuerzas dbiles dependen fuertemente de la orientacin y la distancia, y por tanto de la complementariedad de la interface de unin. La alta exigencia de complementariedad es la razn ltima de la especificidad de los anticuerpos, que a veces se asimila al concepto de llavecerradura. (http://www.picotwist.com/index.php?content=smb&option=odg)

La regin del antgeno con la que reacciona el anticuerpo se denomina eptope. En el caso de antgenos protecos se pueden distinguir los eptopes continuos o discontinuos. Mientras que en los primeros los principales residuos de contacto provienen de un regin de la secuencia primaria de la protena, en los segundos los residuos involucrados son aproximados en el espacio por el plegamiento de la

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La reaccin antgeno (Ag) - anticuerpo (Ac) es una reaccin de equilibrio que est gobernada por la ley de accin de masas. Ka=[AgAc]/[Ag][Ac] es la constante de asociacin (en la consideracin terica de un nico paratope de la molcula que reacciona con un antgeno univalente). El inverso de Ka es la constantes de disociacin: Kd=1/Ka y es la forma que se usa generalmente para cuantificar la afinidad de los anticuerpos. Los valores de afinidad de los anticuerpos van desde bajas afinidades Kd =10-6-10-7 a altas afinidades Kd = 1010-10-11 M. La alta afinidad de los anticuerpos, que se optimiza en el transcurso de la respuesta inmune tiene una gran relevancia biolgica. As por ejemplo, se requieren anticuerpos de alta afinidad para que el complejo AgAc se forme a bajas concentraciones de anticuerpo (tal como ocurre en el caso de un segundo encuentro con el patgeno, o en sitios de difcil acceso), tambin es importante que el complejo AgAc se forme a bajas concentraciones de antgeno. Por ejemplo una sola molcula de la txina diftrica puede eliminar una clula y por tanto an a muy bajas concentraciones es necesario neutralizarla rpidamente. Las fuerzas que determinan la unin son las que se observan en otras interacciones entre macromolculas. Estas fuerzas dbiles dependen fuertemente de la orientacin y la distancia, y por tanto de la complementariedad de la interface de unin. La alta exigencia de complementariedad es la razn ltima de la especificidad de los anticuerpos, que a veces se asimila al concepto de llavecerradura. (http://www.picotwist.com/index.php?content=smb&option=odg)

La regin del antgeno con la que reacciona el anticuerpo se denomina eptope. En el caso de antgenos protecos se pueden distinguir los eptopes continuos o discontinuos. Mientras que en los primeros los principales residuos de contacto provienen de un regin de la secuencia primaria de la protena, en los segundos los residuos involucrados son aproximados en el espacio por el plegamiento de la

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Los conceptos de Afinidad y Especificidad tienden a confundirse. Un anticuerpo de mayor afinidad por un antgeno NO NECESARIAMENTE es ms especfico. La especificidad es un concepto relativo y depende de con que otras molculas pueda o no presentar reactividad cruzada. Ejemplo de una llave: Si asimilamos una llave a un anticuerpo, diramos que la llave es especfica para una dada cerradura (antgeno), pero si por casualidad o por similitud abre otras cerraduras, entonces eso sera el equivalente a la reactividad cruzada Otro punto importante es el de la alta afinidad de los anticuerpos. Durante la respuesta inmune la afinidad de los anticuerpos mejora, hasta alcanzar valores muy altos. En la lmina se explica el significado biolgico de la afinidad.

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Mientras que la afinidad representa la fuerza de unin de un partope con un eptope, la avidez representa la fuerza global de la interaccin cuando intervienen varios sitios de unin. La avidez aumenta geomtricamente respecto a la afinidad, a medida que aumenta el nmero de sitios de unin involucrados, y tiene por tanto una importante consecuencia biolgica cuando se dan uniones multivalentes, como veremos, ocurre con ciertas clases de anticuerpos. Adems de la reaccin antgeno - anticuerpo, el fenmeno de avidez se manifiesta en muchas otras interacciones que ocurren en el sistema inmune, como en la activacin de la va clsica del complemento por la agregacin de IgG, o cuando dos clulas interaccin a travs de la unin de sus receptores de superficie como cuando ocurre la activacin de clulas NK, donde slo a travs de la unin de mltiples receptores de baja afinidad se logra la intensidad de unin (avidez) necesaria para promover la accin citotxica de estas clulas.

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No todas las molculas de Ig tienen la misma composicin en las regiones constantes y hay distintos tipos de cadena pesadas, lo que determina la existencia de distintas clases de inmunoglobulinas. Existen diferencias de secuencias e incluso algunas poseen un dominio adicional. En los humanos existen 5 clases, IgA, IgD, IgE, IgG e IgM. A su vez, dentro de las IgA hay dos subclases, y cuatro dentro de las IgG. Las diferencias estructurales de las cadenas pesadas confieren distinta funcionalidad a las clases y subclases de Ig, que en definitiva se vinculan a diferencias en cuanto a su interaccin con los distintos receptores para la regin Fc, con los componentes del complemento, con la flexibilidad de la molcula, su grado de poilmerizacin, etc. Tambin hay dos tipos de cadenas livianas, y , pero a diferencia de lo que ocurre con las cadenas pesadas, estas diferencias no se relacionan con la funcionalidad de la molcula.

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La IgM es el receptor de membrana de los linfocitos B vrgenes , y la primer clase de inmunoglobulina secretada luego de su activacin. En esta situacin, cuando an no se ha producido la mejora de su afinidad por el proceso conocido como hipermutacin somtica, los 10 sitios de unin del la molcula pentamrica de IgM pueden unir simultneamente varios determinantes antignicos y de esta forma reforzar la interaccin (fenmeno de avidez). Como ventaja adicional, la interaccin con antgenos multivalentes como las superficies microbianas, fuerza un cambio estructural que expone sitios en su Fc, que resultan ahora accesibles al componente C1q del complemento, iniciando as la va clsica de activacin del complemento (parte inferior de la figura), que se ver en detalle ms adelante en el curso. La IgM es un indudable ejemplo en el cual se refleja claramente la relacin entre las caractersticas estructurales y la funcionalidad de la molcula. Por otro lado su gran tamao impide su difusin en los tejidos y esto limita la accin de la IgM en estos sitios. Su accin principal es en la sangre y la linfa. La IgM tambin es secretada en la cavidad peritoneal y pleural, principalmente por linfocitos B especiales (clulas B-1 y BZM que se vern ms adelante), los cuales son fcilmente estimulables por antgenos T independientes.

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La unin de C1q a la IgM unida al patgeno permite la activacin C1s y C1r, C1s es una serine proteasa que al activase pude cortar C4 liberando el componente C4a con actividad anafilatoxina y C4b que ahora expone un grupo tioester reactivo que reacciona con nuclefilos en la superficie del patgeno. Luego C2 es tambin procesado dando lugar a C2b que se une al C4b en la superficie del patgeno formando el complejo C4b.2b que acta como una convertasa de C3, que procesa C3 en C3a y C3b, el resto de la va sigue como se ha visto para las vas alternativa y de las lectinas

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La IgA, en forma monomrica, se encuentra en el suero en concentraciones de 13 mg/ml y acta fundamentalmente en la neutralizacin de patgenos o sus productos dado que no fija complemento. Existen dos cadenas pesadas de tipos alpha, que dan lugar a los isotipos IgA1 e IgA2. El segundo es aproximadamente el 10% del total de IgA en suero. La IgA tiene una funcin principal es en la proteccin de las mucosas, donde se encuentra formando un dmero (IgA secretora) unido por un polipptido denominado cadena J, y actuando en la neutralizacin de toxinas y adhesin de patgenos. La IgA secretora aparece en las lgrimas, mucus, saliva, leche y secreciones intestinales. En estas ltimas, la subclase IgA2 (dimrica) es el isotipo dominane. Mediante un proceso de transitosis mediada por un receptor conocido como receptor-poli-Ig, la IgA dimrica sintetizada en la lmina propia atraviesa las clulas del epitelio,. Una vez que la IgA lleg a la luz del lmen, el receptor es fragmentado por protelsis, y parte del mismo (denominado pieza secretoria) protege la IgA dimrica de la protelisis. La IgA es resistente a las condiciones del tracto digestivo y es transferida al recin nacido con la leche materna.

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La IgG es la clase ms abundante en suero, y existen cuatro subclases que en los humanos son: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Hay importante diferencias estructurales que se reflejan en diferencias de funcionalidad. Las subclases con actividades efectoras ms potentes (en cuanto a activacin de complemento, opsonizacin, etc.) son la IgG1 e IgG3, siendo la IgG1 la subclase ms abundante de IgG (6070%). Generalmente las IgG1 y IgG3 reaccionan contra antgenos protecos, y son los principales isotipos o subclases que median las reacciones de activacin de complemento y fagocitosis. La IgG2, por otro lado, se caracteriza por ser producida principalmente contra carbohidratos, como los de las cpsulas bacterianas, y muchas veces se produce en forma T independiente (en ausencia de colaboracin de los linfocitos T). Los nios hasta aproximadamente los 5-7 aos, no producen eficientemente respuestas contra antgenos T independientes y los niveles de IgG2 son comparativamente mucho ms bajos que en adultos, por esta razn son susceptibles a infecciones por bacterias capsuladas, con recurrentes infecciones de odos por ejemplo. El isotipo IgG4 que es muy poco abundante en condiciones normales no tiene una clara funcionalidad, su regin Fc es ineficiente en la activacin de complemento o en facilitar la fagocitosis, y por lo tanto no tiene una componente inflamatoria asociada. Su funcin principal es probablemente la neutralizacin, en particular vinculada la regulacin por competencia de la IgE, y se ve un notable aumento de IgG4 (entre 100 y 1000 veces) en los tratamientos de desensitizacin de alergia, o en apicultures que estn expuestos regularmente al veneno de abejas. Por su tamao y abundancia algunos isotipos de IgG de alta afinidad son la clase principal de anticuerpos que difunden a los tejidos, donde llevan a cabo la neutralizacin de toxinas o microrganismos, o bien se unen a estos ltimos dando lugar a las funciones efectoras que estn asociadas a su regin Fc.

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La IgE que aparece en niveles bajsimos en plasma en condiciones normales, puede aumentar mucho su concentracin en el caso de infecciones por parsitos. Ejerce sus funciones debido a la existencia de receptores para su Fc. En los mastocitos (clulas que se encuentran en los sitios de entrada de patgenos, mucosa y piel y que contienen grnulos de histamina y puede secretar poderosos agentes pro inflamatorios como lpidos y citoquinas) y en su equivalente en circulacin (basfilos ), as como en los eosinofilos activados , en los que existen receptores de alta afinidad (FcRI) para esta Ig, que le permiten mediar sus funciones. Dada la alta afiinidad de estos receptores, an a las bajas concentraciones a las que ocurre la IgE, los mastocitos se encuentran armados con molculas de IgE que pueden mediar su activacin por componentes parasitarios. La diferenciacin de linfocitos B a un fenotipo secretor de IgE ocurre por la presencia de IL4 e IL5 resultante de la colaboracin con clulas T especificas para pptidos derivados del parsito, que en el contexto de la infeccin parasitaria desarrollaron a su vez ese fenotipo. La alergia se da en individuos, que por razones que no se conocen claramente, tienden a producir IgE contra antgenos ambientales inocuos. Estos antgenos, cuando ingresan al organismo entrecruzan las IgE unida a la superficie de los mastocitos dando lugar a su degranulacin con la consiguiente liberacin de agentes proinflamatorios como la histamina.

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Los anticuerpos actan como sondas especficas, dirigiendo la accin efectora de diferentes tipos de clulas que actan sobre el patgeno sobre una clula propia infectada o alterada. Los receptores para la regin Fc de las inmunoglobulinas median la interaccin entre la clula efectora y el blanco. Este grupo de mecanismos efectores se definen como Citotoxicidad mediada por anticuerpos (abreviado en ingls como ADCC), aunque algunos autores reservan esta denominacin al citotoxicidad por clulas NK.

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Las molculas de Ig que proviene de un mismo clon de linfocitos B son idnticas, pero debido a las diferencias en el paratope las molculas de Ig que provienen de distintos clones de linfocitos B son en realidad distintas protenas. An as, en todos los casos se conserva la estructura bsica necesaria para su funcionalidad. La pregunta que plantea esta diapositiva, trae la atencin sobre el diseo evolutivo que gener una molcula con la capacidad de variar ilimitada mente la regin de unin al antgeno sin afectar la estructura global de la molcula. Una solucin nada obvia.

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Las primeras evidencias sobre los factores estructurales que determinan la especificidad de las Ig se obtuvo a travs de la secuenciacin de un nmero elevado de Ig monoclonales obtenidas a partir de mielomas. La comparacin de secuencias mostr que en la regin variable existan posiciones que variaban con una frecuencia mucho mayor. Estas posiciones se acumulaban en tres regiones de la cadena pesada y tres de la liviana. Dichas regiones se denominaron regiones determinantes de la complementaridad (CDR). El conocimiento de estructura de Ig obtenido a travs de cristalografa de rayos X mostr que los 6 CDR se agrupan en una misma regin del espacio formando el paratope.

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El dominio de inmunoglobulina es una forma de plegamiento de protenas ampliamente distribuido en la naturaleza; muchas de las molculas del sistema inmune contienen dominios de este tipo, y forma la superfamilia de las inmunoglobulinas . En el caso de la regin variable de las cadenas pesadas y livianas, este tipo de plegamiento aproxima en el espacio los respectivos CDRs.

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La asociacin de las cadenas livianas y pesadas combina los 6 CDRs conformando el paratope. Los CDR3 de cada cadena ocupan la porcin central del paratope y tiene un papel fundamental en la interaccin con el antgeno. Los CDR3, son los ms diversos dentro de las inmunoglobulinas.

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Esta slide se usa en clase para mostrar la animacin de la estructura del dominio de inmunoglobulina, la molcula de IgG, y la estructura del los CDRs y los sitios de contacto en la unin al antgeno. Esta animacin est disponible en la pgina de la Ctedra donde dice estructuras.

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La estructura de la molcula de inmunoglobulina presenta gran variacin a nivel del sitio de unin al antgeno. En los distintos ejemplos lo que se observa es una tendencia a maximizar la superficie enterrada en la unin, que por otra parte asegura el mayor contacto posible y por tanto la mayor afinidad de unin. Ntese que estructuras pequeas como los haptenos (a), se acomodan en partopes que presentan cavidades, mientras que en el caso de macromoleculas como se muestra en (c y d) hay una importante regin del partope que reacciona con el antgeno. El caso (b) corresponde a un pptido que en general se acomodan en ranuras.

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Los anticuerpos producidos en la respuesta inmune a un antgenos sea por una infeccin o por inmunizacin con ese antgeno es de naturaleza policlonal. Esto es el resultado de que distintos clones de clulas B son activados y se diferencian en clulas plamticas productoras de anticuerpos. Cada uno de estos clones de clulas plasmticas producir un determinado isotipo o subclase de anticuerpo, con una dada afinidad por el epitope que reconoce, y habr tambin clones que reaccionan contra distintos eptopes en el mismo antgeno. Existen desde hace aos distintas tecnologas para fabricar anticuerpos mucho ms definidos, con una nica especificidad y la misma afinidad, lo cual representa una ventaja para muchas aplicaciones prcticas de los anticuerpos, tales con su uso como herramientas analticas o su aplicacin como molculas teraputicas. La tecnologa ms comn para fabricar estos anticuerpos el la tecnologa de hibridomas en la cual se logra la inmortalizacin y el clonado del clon de linfocitos B de inters. La lnea celular as establecida secretar anticuerpos monoclonales, que son bsicamente la misma molcula (aunque suelen presentar diferencias en el grado de glicosilacin).

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La inmortalizacin se logra a travs de la fusin de los linfocitos B con clulas de mieloma modificadas. Estas ltimas, por su naturaleza tumoral, tienen la capacidad de crecer indefinidamente en cultivo celular, y han sido modificadas para que no secreten anticuerpos por si mismas. El resultado de la fusin es una lnea celular que puede crecerse en cultivo y que secreta los anticuerpos codificados por los genes del linfocito B con la cual se fusion. La lnea de mieloma utilizada en la fusin es deficiente en las enzimas implicados en la sntesis 'de novo' del DNA como la timidina kinasa (TK) o la hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT). Los productos de la fusin celular (hibridomas) son cultivados en medio HAT (de hipoxantina, aminopterina y timidina), dado que en este medio solo pueden sintetizarse DNA por la va de novo, las clulas de mieloma que no se fusionaron no pueden reproducirse y mueren, sobreviviendo solo aquellas que se fusionaron con los linfocitos. Las clulas hbridas obtenidas tras el proceso de fusin son heterocariontes y contienen un nmero elevado de cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que en las sucesivas divisiones se irn perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los 80 cromosomas. Como consecuencia de dicho proceso algunas clulas pierden la capacidad de secrecin de anticuerpos o bien funciones bsicas para la viabilidad celular. Por ello tan pronto como se identifica como positivo un pocillo se somete a un proceso de clonacin para evitar el crecimiento de clulas no productoras que al ser metablicamente ms eficientes acabaran por dominar el cultivo. Una tecnologa adicional para la obtencin de anticuerpos monoclonales es la creacin de bibliotecas de anticuerpos en fagos filamentosos (phage display). Estas bilbiotecas se preparan clonando los genes de inmunoglobulinas del animal inmunizado, en un vector que puede ser empacado en la envoltura viral del fagos del tipo M13. Estas bibliotecas pueden luego ser seleccionadas por la afinidad del

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La inmortalizacin se logra a travs de la fusin de los linfocitos B con clulas de mieloma modificadas. Estas ltimas, por su naturaleza tumoral, tienen la capacidad de crecer indefinidamente en cultivo celular, y han sido modificadas para que no secreten anticuerpos por si mismas. El resultado de la fusin es una lnea celular que puede crecerse en cultivo y que secreta los anticuerpos codificados por los genes del linfocito B con la cual se fusion. La lnea de mieloma utilizada en la fusin es deficiente en las enzimas implicados en la sntesis 'de novo' del DNA como la timidina kinasa (TK) o la hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT). Los productos de la fusin celular (hibridomas) son cultivados en medio HAT (de hipoxantina, aminopterina y timidina), dado que en este medio solo pueden sintetizarse DNA por la va de novo, las clulas de mieloma que no se fusionaron no pueden reproducirse y mueren, sobreviviendo solo aquellas que se fusionaron con los linfocitos. Las clulas hbridas obtenidas tras el proceso de fusin son heterocariontes y contienen un nmero elevado de cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que en las sucesivas divisiones se irn perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los 80 cromosomas. Como consecuencia de dicho proceso algunas clulas pierden la capacidad de secrecin de anticuerpos o bien funciones bsicas para la viabilidad celular. Por ello tan pronto como se identifica como positivo un pocillo se somete a un proceso de clonacin para evitar el crecimiento de clulas no productoras que al ser metablicamente ms eficientes acabaran por dominar el cultivo. Una tecnologa adicional para la obtencin de anticuerpos monoclonales es la creacin de bibliotecas de anticuerpos en fagos filamentosos (phage display). Estas bilbiotecas se preparan clonando los genes de inmunoglobulinas del animal inmunizado, en un vector que puede ser empacado en la envoltura viral del fagos del tipo M13. Estas bibliotecas pueden luego ser seleccionadas por la afinidad del

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Estructuralmente, el receptor y el fragmento Fab de las inmunoglobulinas son muy similares. Cada cadena del receptor T consta de dos dominios uno constante y otro variable, pero adems ambas cadenas tiene un dominio transmembrana y una extensin citoplasmtica, que se vincula a su funcin como receptor de membrana.

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Los linfocitos T tiene una funcin central en la regulacin de la respuesta inmune y participan adems directamente en la destruccin de los agentes agresores . Reconocen al antgeno a travs de su receptor de membrana (TCR) que no se secreta. Hay dos tipos de receptores y . La funcin de los linfocitos T con receptores es menos comprendida y nuestro conocimiento principal es sobre los linfocitos T con receptores . A diferencia de las inmunoglobulinas que pueden unirse a un amplio espectro de estructuras qumicas, los linfocitos T con receptores solo reconocen pptidos asociados a receptores de membrana (denominadas molculas del complejo mayor de histocompatibilidad, MHC) presentes en clulas propias del individuo. Cuando un linfocito T virgen reconoce a su antgeno (si se cumplen una serie de condiciones) es estimulado a proliferar y diferenciarse. Esta diferenciacin puede dar lugar a tres tipos de clulas efectoras: a) linfocitos T citotxicos (CTL) que actan por ej. en las infecciones virales destruyendo la clula infectada, b) linfocitos T inflamatorios (TH1) que colaboran con el macrfago aumentando su capacidad de destruir los patgenos fagocitados, c) linfocitos T colaboradores (TH2) que colaboran con el los linfocitos B en la produccin de anticuerpos, favoreciendo los procesos de maduracin de la afinidad, cambio de clase y generacin de linfocitos B de memoria.

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Tanto la Ig como el TCR se presentan como complejos de membrana con componentes que participan en la transmisin de la seal. En el caso de las inmunoglobulinas en los linfocitos B vrgenes, el receptor IgM (que como se observa no es pentamrico como la IgM secretada) est acompaada de dos cadenas con dominios de inmunoglobulinas Ig e Ig que participan en la sealizacin. El TCR es an ms complejo

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En este cuadro se observan algunas propiedades de las inmunoglobulinas, ntese que los tipos IgG1 e IgG3 dominantes en la mayora de la infecciones bacterianas y virales tienen una gran versatilidad de accin. Esto junto a su larga vida media y concentracin le da mucho sentido al hecho de que las IgG sean las Igs transferidas al feto. Obsrvese tambin que no existe una funcin particular detectada para la IgD, cuya principal funcin es la de ser junto a la IgM las Igs de superficie en los linfocitos virgenes maduros.

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