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Desinfeco e Esterilizao
ESTERILIZAO: Processo que visa a destruio total de todas as formas de vida de um material ou ambiente, atravs de mtodos fsicos ou qumicos. DESINFECO: Consiste na destruio, remoo ou reduo dos microrganismos presentes num material inanimado. Visa eliminar a potencialidade infecciosa do objeto, superfcie ou local. ASSEPSIA: Procedimentos que visam evitar o retorno da contaminao a um objeto, superfcie ou local. ANTI-SEPSSIA: Desinfeco de tecidos vivos, como pele e mucosas. Pode ser feita, por exemplo, atravs do Clorexidine a 0,12% para anti-sepsia intra bucal. LIMPEZA: Remoo de sujidades que indispensavelmente antecede os procedimentos de desinfeco ou esterilizao.
Desinfeco e Esterilizao
*- Formas vegetativas **- Bacilos lcool-cido resistentes; ***- Ativos contra esporos Agente Espectro de ao* Uso Modo de ao Tempo de exposio Curto (10-15 min) Desvantagens
lcoois (70-80%)
Antisspticos Desinfectantes
Desinfectantes
Fenis
Efeito imediato
Antisspticos Sanitizantes Desinfectantes (instrumentos cirrgicos) Tratamento da gua Antisspticos Desinfectantes Antisspticos Desinfectantes Desinfectantes (instrumentos e superfcies) Antisspticos
Cloro
Gram-positivas Gram-negativas BAAR Gram-positivas Gram-negativas BAAR Gram-positivas Gram-negativas BAAR Gram-positivas Gram-negativas BAAR Gram-positivas Gram-negativas
Inativao enzimtica agente oxidante Inativao enzimtica Inativao enzimtica Desnaturao protica agente alquilante Inativao enzimtica
Efeito imediato
Odor irritante pouco ativo contra esporos Odor irritante pouco ativo contra esporos Pouco ativo contra esporos Tempo de exposio longo
Iodo
Efeito imediato
Iodforos
Efeito imediato
Aldedos***
Metais pesados
Meios de cultura
Estado fsico em slidos, quando contm agentes solidificantes, principalmente gar (cerca de 1 a 2,0 %); semi-slidos, quando a quantidade de gar e ou gelatina de 0,075 a 0,5 %, dando uma consistncia intermediria, de modo a permitir o crescimento de microrganismos em tenses variadas de oxignio ou a verificao da motilidade e tambm para conservao de culturas; e lquidos, sem agentes solidificantes, apresentando-se como um caldo, utilizados para ativao das culturas, repiques de microrganismos, provas bioqumicas, dentre outros.
Meios de pr-enriquecimento - so aqueles que permitem a dessensibilizao de microrganismos injuriados, i.e., para amostras que sofreram algum tipo de tratamento (trmico ou qumico). Ex. gua peptonada, caldo lactosado (isolamento de salmonelas de leite em p). Meios de Enriquecimento - quando proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos nmeros ou de crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Esses meios tm a propriedade de estimular o crescimento de determinados microrganismos, mas existem alguns que tambm podem inibir o crescimento de outros. Ex. Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina para cultivo de Salmonelas (lquidos), Caldo Tioglicolato para Clostridium perfringens.
Diferenciais - quando contm substncias que permitem estabelecer diferenas entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de Metileno (diferencial para coliformes), gar MacConkey para a diferenciao de enterobactrias, gar sangue, agar BairdParker para isolamento e diferenciao de cocos Gram positivos (slidos).
Seletivos - os que contm substncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros. Exemplo: meios com telurito de potssio (para isolamento de Corynebacterium diphtheriae), gar Salmonella-Shigella (SS) e gar MacConkey, meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de Salmonella, meios com 7,5% de cloreto de sdio, meio Baird-Parker, para isolamento de Staphylococcus aureus, meios com antibiticos para isolamento de diversos microrganismos (TSC, SFP, , meio de Blaser, meio de Skirrow, etc.). A maioria deles tambm diferencial, permitindo diferenciar as colnias (slidos) dos microrganismos.
Meios de triagem - meios que avaliam determinadas atividades metablicas permitindo caracterizao e identificao perfunctria ou presuntiva de muitos microrganismos (gar trplice acar e ferro, meio Instituto Adolfo Lutz, uria, etc.); Identificao - prestam-se para a realizao de provas bioqumicas e verificao de funes fisiolgicas de organismos submetidos a identificao (meios Oxidao/Fermentao, gar Citrato, Caldo nitrato, meio semislido, caldo triptofano, meio de Sulfito Indol Motilidade, etc.; Dosagem - empregados nas determinaes de vitaminas, antibiticos e aminocidos;
Meios de triagem - meios que avaliam determinadas atividades metablicas permitindo caracterizao e identificao perfunctria ou presuntiva de muitos microrganismos (gar trplice acar e ferro, meio Instituto Adolfo Lutz, uria, etc.); Identificao - prestam-se para a realizao de provas bioqumicas e verificao de funes fisiolgicas de organismos submetidos a identificao (meios Oxidao/Fermentao, gar Citrato, Caldo nitrato, meio semislido, caldo triptofano, meio de Sulfito Indol Motilidade, etc.; Dosagem - empregados nas determinaes de vitaminas, antibiticos e aminocidos;
Contagem - empregados para a determinao quantitativa da populao microbiana (Agar de Contagem em Placas, TSC, Agar Batata Dextrose, gar Baird-Parker, etc.); Estocagem ou manuteno - utilizados para conservao de microrganismos no laboratrio, i.e. garantem a viabilidade de microrganismos (gar Sabouraud, Meios com leite, gar suco de tomate, gar sangue, gar Simples, meio semi-slido, etc.).
Meio de cultura
Microscpio
Em 1591, aos holandeses Hans Janssen e seu filho Zacarias, fabricantes de culos deram inicio ao primeiro microscpio utilizando duas lentes de vidro montadas nas extremidades de um tubo. O holands Antonie Van Leewenhoek construiu microscpios de apenas uma lente, pequena e quase esfrica, entre duas placas de cobre, aperfeioando o instrumento. Com essas descobertas, Robert Hooke desenvolveu um aparelho com duas lentes ajustadas nas extremidades de um tubo de metal.
Microscpio
Microscpio
Verificar a voltagem e ligar o equipamento rede eltrica
Abrir totalmente o diafragma e colocar o sistema condensador - diafragma na posio mais elevada, pois a que permite melhor iluminao.
Microscpio
Movimentar o revlver, colocando em posio a objetiva de menor aumento (4X)
Microscpio
Ajustar o foco com o boto micromtrico
A objetiva de 100 x chamada de imerso. Movimentar o revlver de forma que a objetiva de 100 x fique a meia distncia da posio de encaixe. Colocar uma gota do leo de imerso sobre a preparao.
Movimentar o revlver de forma que a objetiva de 100 x encaixe corretamente. Ajustar o foco com o boto micromtrico
Microscpio
Finalizado a observao microscpica, desligar a lmpada, girar o revlver de forma a encaixar a objetiva de 4 x, baixar a platina, retirar a lmina e enxugar a objetiva de 100 x com papel fino (NO ESFREGAR A LENTE)
Cmara de NeuBauer
Cmara de NeuBauer
Observando-se ao microscpio, percebe-se que existem trs tipos de quadrantes denominados A, B e C, que juntos formam um quadrado maior.
Cmara de NeuBauer
Como o quadrante A tem 0,1 mm3 de volume, ao serem contados os esporos nos 4 quadrantes, tem-se o nmero de esporos em um volume de suspenso igual a 0,1 mm3 x 4 = 0,4 mm3 (=0,0004 cm3). Logo o no mdio de esporos (no observado 4) est contido em um volume igual a 0,0004 cm3 4 = 0,0001 cm3. Para se obter o nmero estimado de esporos/ml faz-se o seguinte clculo:
N mdio de microorganismo dos campos A ______________ 0,0001 cm3 x microorganismo ______________1 cm3
(n mdio de esporos contados nos campos A) x 104
Cmara de NeuBauer
No quadrante B - contar o nmero de esporos observados em 3 subquadrantes (b) de B, dois do canto e um central. Como o quadrante B (com 0,1 mm3 de volume) dividido em 20 subquadrantes, ao serem contados os esporos nos 3 sub-quadrantes (b), tem-se o nmero de esporos em um volume de suspenso igual a 0,005 mm3 x 3 = 0,015 mm3 (= 0,000015 cm3). Logo em 1 sub-quadrante (b) temos o no mdio de esporos (no observado 3) em um volume de 0,000015 cm3 3 = 0,000005 cm3. Para se obter o nmero estimado de esporos em B, com um volume 20 vezes maior que b, devemos considerar que temos 20 vezes mais esporos contidos em um volume de 0,000005 cm3 x 20 = 0,0001 cm3. Para se obter o nmero estimado de esporos/ml faz-se o seguinte clculo: no mdio de microorganismo em b x 20 ---------- 0,0001 cm3 x esporos ---------- 1 cm3
Logo, o nmero de esporos/mL igual a: (no mdio de esporos contados em b) x (2,0 x 105)
Cmara de NeuBauer
No quadrante C - contar o nmero de esporos em 5 sub-quadrantes (c) de C, os 4 dos cantos e o sub-quadrante central. Clculos: Como o quadrante C (com 0,1 mm3 de volume) dividido em 25 subquadrantes, ao serem contados os esporos nos 5 sub-quadrantes (c), tem-se o nmero de esporos em um volume de suspenso igual a 0,004 mm3 x 5 = 0,02 mm3 (= 0,00002 cm3). Logo em 1 sub-quadrante (c) temos o no mdio de esporos (no observado 5) em um volume de 0,00002 cm3 5 = 0,000004 cm3. Para se obter o nmero estimado de esporos em C, que tem um volume 25 vezes maior que c, devemos considerar que temos 25 vezes mais esporos contidos em um volume de 0,000004 cm3 x 25 = 0,0001 cm3. Para se obter o nmero estimado de esporos/ml faz-se o seguinte clculo: no mdio de esporos em c x 25 ---------- 0,0001 cm3 x esporos ---------- 1 cm3 (= 1 ml) Logo, o nmero de esporos/ml igual a: (no mdio de esporos contados em c) x (2,5 x 105)
gua
A importncia do controle de qualidade da gua por meio de anlises peridicas to grande que a lei n 3.718 de 19/01/83 institui sua obrigatoriedade. Segundo a lei, encargo do responsvel pelo local de consumo providenciar os atestados de potabilidade da gua. Anlises peridicas iro garantir a sanidade da gua proveniente da rede hidrulica, poo ou fonte, indicando o momento exato de realizar a lavagem das caixas d'gua.
Tcnicas de semeadura
Meio Lquido
Meio semi-slido
Mtodo de difuso
Com um swab de algodo com a suspenso bacteriana. Remova o excesso de umidade girando o swab contra a parede do tubo. SWAB
A suspenso sobre a superfcie estril de uma placa contendo gar Muller-Hinton, utilizando sucessivamente trs direes para obter um inculo uniformemente espalhado sobre toda a superfcie do gar
Distribuir cinco discos de antibitico, sendo cada um de um antimicrobiano diferente, sobre a superfcie do gar inoculado, seguindo o esquema abaixo. Deixe uma distncia de aproximadamente 1 cm entre a borda da placa e o disco.
10 30 10 30 30
Halos de Inibio (mm) Moderada Intermedirio Sensvel mente sensvel 12 > 13 22 > 23 14 > 15 18 > 19 11 > 12
Se para um determinado microrganismo, utilizando-se o antimicrobiano Gentamicina, foi medido o dimetro de um halo de inibio e constatou-se que este era de 16 mm, tal microrganismo deve ser classificado como sensvel para a Gentamicina. Entretanto se o dimetro do halo fosse de 13 mm o microrganismo seria classificado como intermedirio a Gentamicina. No caso de no formao de um halo de inibio, o microrganismo seria considerado resistente.
Se so contadas 105 colnias em uma placa onde foi feita diluio de 10-2 , o clculo final ser: UFC= 105 x 10 x 102 = 1,05 x 105 UFC/mL
Urina
24 horas
Desprezar a primeira urina da manha e marcar hora.Colher toda a urina das prximas 24 horas ate o dia seguinte no mesmo horrio que foi desprezada a primeira urina.No se pode perder nenhuma urina neste perodo(o laboratrio fornecer o frasco para coleta.)
A dieta deve ser seguida durante trs dias antes do exame. No comer carne vermelha e seus derivados (presunto, apresentado, salsicha, nabo, rabanete, beterraba, brcolis, couve flor. Evitar os medicamentos AAS, aspirina, anti-flamatorio no esterides, vitamina C, sulfato ferroso, anti coagulante. No ter realizado tratamento dentrio ate 7 dias antes do exame.no colher as fezes durante o perodo menstrual.
Fezes
FLUORETO DE SDIO com EDTA (Tampa Cinza): captao dos ons Clcio, e inibio da glicose. Principal uso: glicemia.
HEPARINA (tampa verde): um anticoagulante natural. Atua interferindo na converso principal uso: de protombina em trombina.
SORO: (tampa vermelha): sem anti-coagulante. Principal uso: bioqumica no estudo de colesterol total e fraes.
Agulhas a vcuo
Giardia lamblia
Exame urina
O famoso exame de urina, um dos procedimentos laboratoriais mais comuns, empregado para avaliar e identificar problemas nos rins e no aparelho urinrio. claro que existem vrios tipos, hoje vou explicar apenas o exame mais comumente realizado: Exame de Rotina da Urina, tambm conhecido como EAS (Elementos Anormais e Sedimento). Na Coleta preciso que a urina seja colhida desprezando-se a parte inicial. Esse procedimento ajuda a eliminar resduos e bactrias eventualmente presentes na urina, o que poderia dar um falsoresultado de infeco.
Teste de gravidez
Gonadotrofina corinica humana (HCG) um hormnio de glicoprotena produzido na gravidez que feito pelo embrio logo aps a concepo e mais tarde pelo sinciciotrofoblasto (parte da placenta)
Negativo: Ocorre a formao de uma linha colorida na posio controle e ausncia de linha colorida na posio teste Positivo: ocorre a formao de uma linha colorida na posio de teste e outra linha colorida na posio de controle. A linha indica que existe uma concentrao de HCG igual ou maior que 25 mUI/mL
Esfregao sanguneo
O esfregao de sangue usado para fazer uma diferenciao entre os leuccitos, isto , fazer uma contagem do nmero de neutrfilos, linfcitos, moncitos, eosincitos e basfilos. Chegando-se a uma porcentagem de cada clula encontrada.
Esfregao sanguneo
Em trs recipientes, contendo cada um respectivamente: fixador incolor, lugol vermelho para corar plaquetas, lugol roxo. Adiciona se a placa no 1 recipiente por duas vezes em seguida no 2 recipiente por duas vezes ou mais. Por ultimo no 3 recipiente, por varias vezes. Lava se com gua e deixa secar. Apos secas, estas so analisadas no microscpio e a contagem das clulas so feitas em um aparelho o leucotron.
Resultados do hemograma
Contador de Clulas
VCM Volume Corpuscular Mdio . HCM Hemoglobina Corpuscular Mdia. CHCM concentrao de hemoglobina corpuscular mdia
Referncias
AVERSI-FERREIRA; T. A. Biologia: Celular e Molecular. Editora Atomo, Campinas, SP, 2008 BRANCALHAO; R. M. C. SOARES; M.A.M. Microtecnicas em biologia celular. EDUNIOESTE. Cascavel, 2004 CISTERNAS, J. R. Fundamentos de Bioqumica Experimental, 2a Edicao. Editora Atheneu, Sao Paulo, 2005 FERNANDES, J. Qumica Analtica Qualitativa: Cursos Tcnicos e Profissionalizante do 2 Grau, Curso de Qumica Industrial e Curso Superior de Qumica. Hemus Editora Ltda, Sao Paulo, 1982 FERNANDES, J. Qumica Analtica Quantitativa: Cursos Tcnicos e Profissionalizante do 2 Grau,Curso de Qumica Industrial e Curso Superior de Qumica. Hemus Editora Ltda, Sao Paulo, 1982
Referncias
GIBAS, C. JAMBECK, P. Desenvolvendo Bioinformtica. Editora Campus Ltda, Rio de Janeiro, 2001 KOLTZ, J. C. TREICHEL, P. JR. Quimica e reacoes quimica. Tradutor Horacio Macedo 3a edicao. LTCLivros Tecnicos e Cientificos Editora S.A., Rio de Janeiro,1998 LEHNINGER, A. NELSON. D. L. COX, M. M. The Foundations of Biochemistry. 4 Ed. USA. 2004 MANO, E. B. SEABRA, A. P. Prtica de Qumica Orgnica. 3a edicao , Editora Edgard Blucher Ltda, So Paulo, 1987 MASTERTON; L. W. SLOWINSKI; E. J. STANITSKI; C. L. Traducao Jossyl de Souza Peixoto. Principios de Quimica. Sexta Edicao. Editora Guanabara Koogan S.A., Rio de Janeiro, 1990
Referncias
NASCIMETO; J. B. MATOZO, H. C. Anlises Clinicas. Relatrio Tcnico Supervisionado de Concluso do Curso Tcnico de QumicaEMIP-Escola Municipal Governador Israel Pinheiro, Joo MonlevadeMG, 2010.