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Cromatografa

Principios de cromatografa
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de especies qumicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil. En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se disuelve en una fase mvil, que puede ser un gas un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se hace pasar a travs de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie slida. Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con ms fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los componentes que unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

Principios de la tcnica
En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una columna que contiene a la fase fija. La separacin cromatogrfica en HPLC es el resultado de las interacciones especficas entre las molculas de la muestra en ambas fases, mvil y estacionaria A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no est limitada por la volatilidad o la estabilidad trmica de la muestra. La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas, productos naturales lbiles, materiales polimricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Con una fase mvil lquida interactiva, otro parmetro se encuentra disponible para la selectividad, en adicin a una fase estacionaria activa. La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y ms posibilidades para la separacin. HPLC preparativa Es la tcnica escogida para aislamiento y purificacin de productos de valor en las industrias qumicas y farmacuticas as como en la biotecnologa y la bioqumica. La cromatografa preparativa comprende un amplio rango de aplicaciones, desde el aislamiento de 1g de muestra para identificacin espectroscpica hasta el aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de 100 g.

Aplicaciones

Campos de Aplicacin de HPLC Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos Productos de alimentacin: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos Productos de la industria qumica: Aromticos condensados, tensoactivos, propulsores, colorantes Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB

Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos Medicina clnica: cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina, estrgenos. Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa Separacin y purificacin de metabolitos Separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de orina Purificacin y separacin de enantimeros Purificacin de compuestos naturales Purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas

Equipos
HPLC analtico 1200 Series de Agilent Technologies Bomba cuaternaria G1311 Detector de longitud de onda variable G1314B Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D Detector de ndice de refraccin G1362A Detector de fluorescencia G1321A HPLC preparativo 1200 Series de Agilent Technologies Dos Bombas preparativas G1361A Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D Muestreador automtico G1329A Colector de fracciones G1364B