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RECUENTO DE MESFILOS
CEY/2014
MICROBIOLOGA
OBJETIVOS
Conocer la tcnica para hacer recuento de mesfilos aerobios Estudiar la importancia de este recuento como indicador de la contaminacin de los alimento Practicar diluciones, siembras y recuento de microorganismos
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ASPECTOS GENERALES
Para investigar el contenido de microorganismos viables en un alimento, la tcnica utilizada es la cuenta en placa. La variedad de especies y tipos diferenciables por sus necesidades nutricionales, temperatura requerida para su crecimiento, oxgeno disponible, etc., hacen que el nmero de colonias contadas constituyan una estimacin de la cifra de microorganismos presentes y refleja si el manejo sanitario del producto es el adecuado.
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ASPECTOS GENERALES
Es de utilidad para productos: Fresco-enfriados Congelados Precocidos o alimentos preparados. Se cuantifican tipos de bacterias que pueden crecer a 30-35 C en condiciones aerobias ya sean provenientes de la piel de las heces, manos, equipos, suelo, agua, etc.
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PROCEDIMIENTO
Dilucin en tubos.
PROCEDIMIENTO
Siembra por duplicado Adicin del PCA
EVIDENCIAS
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BROC
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EJEMPLO
N- De colonias entre 30 y 300 Dilucin= 10-3 , factor de dilucin= 1000 Recuento de colonias: muestra A= 75 colonias y muestra B= 85 colonias Media= 80 colonias Resultado
N= C X D 3
8x10 U.F.C/mL
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INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Unidades formadoras de colonias, UFC/g o ml, de bacterias aerobias en placa en agar para cuenta estndar, incubadas 48 horas a 35 C.
CANTIDAD DE MESFILOS MUESTRA A Incontables Incontables Incontables Incontables 1.27 x108 UFC/ml 7.6x108 UFC/ml
CANTIDAD DE MESFILOS MUESTRA B Incontables Incontables Incontables Incontables 1.13x108 UFC/ml 8.1x108 UFC/ml
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Excesiva contaminacin de la materia prima Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son Mesfilos La inmediata alteracin del producto.
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NORMAS DE REFERENCIA
placa ISO 7218:2007.
NTC/ISO 17025 2005-10-26 dos diluciones ISO 17604:2003 conteo de microorganismos en la el proceso de sacrificio. ISO 15214:1998 ISO 21149:2006
Los mtodos ISO (2 placas por dilucin, confirmacin de 5 colonias) suelen utilizarse como mtodos de referencia Los mtodos NF (1 placa por dilucin, confirmacin de 3 colonias) se suelen emplear como mtodos de rutina, siendo los dos mtodos normalizados.
NORMAS DE REFERENCIA
RANGOS PARA EL RECUENTO
NORMAS DE REFERENCIA
mesfilas LCTICAS - TCNICA DE COLONIAS DE RECUENTO a 30C
IS 16068 : 2013/ ISO 15214 : 1998 Mtodo horizontal para el recuento de bacterias
ISO 7218 : 1996 Microbiologa de los alimentos humano y para animales Reglas generales para los exmenes microbiolgicos ISO 6887-1 Preparacin de muestras de ensayo, suspensin inicial y diluciones decimales para examen microbiolgico
https://law.resource.org/pub/in/bis/S06/is.16068.2013.pdf http://www.iso.org/iso/home.htm
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UFC mximas permitidas en jugos sin pasterizar BUENA MESOFILOS/g COLIFORMES TOTALES/g COLIFORMES FECALES/g SULFITO REDUCTOR/g HONGOS/LEVADURAS/g 20000 9 <3 <10 1000 ACEPTABLE 50000 <9 <3 <10 3000
UFC mximas permitidas en jugos pasterizados BUENA MESOFILOS/g COLIFORMES TOTALES/g COLIFORMES FECALES/g SULFITO REDUCTOR/g HONGOS/LEVADURAS/g 1000 <3 <3 <10 100 ACEPTABLE 3000 200
Estos limites son establecidos por la NTC 4092. Procesamiento y conservacin de frutas, UNAL sede Bogot: http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/agronomia/2006228/teoria/obpulpfru/p2.htm
OBSERVACIONES
Qu fuentes de error podra usted tener en el desarrollo del mtodo?
En proceso de dilucin:
Esto sucede por usar la misma pipeta para pasar muestra de un tubo a otro para la dilucion. Lo ideal es usar una pipeta estril para cada tubo.
Tiempo:
Exceder el tiempo de los 20 min para depositar la muestra y el agar en las cajas. Esto podra generar contaminacin del medio.
Temperatura:
Asegurarnos de que la incubadora que ser utilizada este a la temperatura que el microorganismo requiere.
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OBSERVACIONES
En el caso de utilizar una muestra solida, que tratamiento le haria antes de proceder a las diluciones? 1. Pesar una cantidad de 10.0 g de la muestra por analizar en un recipiente o bolsa plstica estril de tamao adecuado. 2. Adicionar un volumen de 90.0 mL del diluyente, segn sea el caso, llevado a una temperatura similar a la de la muestra. 3. Operar la licuadora o el homogeneizador de 1 a 2 minutos hasta obtener una suspensin completa y homognea, segn se indique en la tcnica correspondiente para cada alimento. An en los equipos ms lentos, el tiempo de homogenizacin debe ser < 2.5 minutos. 4. Permitir que las partculas grandes se sedimenten, y transferir la cantidad deseada (alcuota), tomando sta de las capas superiores de la suspensin.
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OBSERVACIONES
:
Cuando la dilucin primaria es muy viscosa o pegajosa, adicionar ms diluyente, lo cual debe tomarse en cuenta para los clculos y expresin de
resultados.
Muestras slidas y semislidas congeladas:
1.
2.
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CUESTIONARIO
MATERIAL LCTEO Leche cruda para la industria lctea Leche cruda de vaca para preparar productos lcteos Leche de vaca transformada utilizada para preparar productos lcteos Leche pasterizada y otras leches tratadas trmicamente Leche cruda de otras especies, elab. (tratamiento trmico) Leche cruda de otras especies, elab. (tratamiento trmico) Aguas de consumo humano y de consumo pblico envasadas Mataderos y salas de despiece: Superficies de trabajo MESFILOS AEROBIOS (UFC/Ml, a 30C)
CUESTIONARIO
Si usted va a realizar un recuento de bacterias termfilas. Qu procedimientos utilizara?
.
Un recuento para termfilos se efecta sembrando 1mL de la solucin madre o dilucin decimal en caja de Petri y vertiendo PCA para el recuento. Se incuba 2 das a 55C.
CUESTIONARIO
Si un alimento presenta un recuento de mesfilos aerobios muy alto, que cree usted que esto indique?. Explique.
.
Recuentos elevados indican: 1- Excesiva contaminacin de la materia prima 2Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin 3-La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son mesfilos 4- La inmediata alteracin del producto
PREGUNTAS
Si un alimento presenta un recuento de mesfilos aerobios muy alto, Cmo cree usted que afectara el alimento?. Explique.
- Alimentos
- Alteracin del poder nutritivo - Alteracin de las propiedades organolpticas
- Enfermedades
- Infecciones - Intoxicaciones alrgicas
CONCLUSIONES
Se estima la biota total, mas no el tipo de microorganismo El mtodo refleja: -La calidad sanitaria. -Las condiciones higinicas de la materia prima. -La manipulacin durante la elaboracin. Tiene un valor limitado como indicador de la presencia de patgenos Permite conocer las condiciones de salubridad de un alimento
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