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CONTAGEM MANUAL DE PLAQUETAS PELO MTODO DE MASPES & JAMRA

INTRODUO
A contagem de plaquetas uma prtica rotineira em laboratrios mesmo naqueles com !ematologia totalmente automati"ados# Dentre as principais limita$%es da automa$&o destaca'se a ele(a$&o do coe)iciente de (aria$&o *+,- em trombocitopenias sendo relatado um +, de ./0 nas contagens entre 1/ mil a 2/ mil3mm4 c!egando a 2/0 em contagens abai5o de 6/ mil plaquetas3mm 4 *.-# +on(m mencionar que uma contagem e5ata e5tremamente importante nas trombocitopenias gra(es# No 7rasil muito di)undido o uso de equipamentos ++'24/ 8 e ++'22/8 )abricados pela +9:;# Tais sistemas de automa$&o em !ematologia satis)a"em o bin<mio custo'bene)=cio para laboratrios de pequeno e mdio porte porm apresentam como limita$&o n&o reali"arem a contagem de plaquetas# Adicionalmente ainda rotineira a reali"a$&o manual do !emograma e que os sistemas totalmente automati"ados de !ematologia apresentam limita$%es para contagem de plaquetas em di(ersas situa$%es#

INT9R>9R?N+IA@ ARB'ANA:CTI+A@
As inter)erDncias pr'anal=ticas respondem pela maior parte das contagens de plaquetas diminu=da# A coleta torna a )ase mais cr=tica# Os erros podem ser atribu=dos aE +oleta traumtica coleta demorada (enopun$&o mFltipla# +onseqGDnciasE Agrega$&o plaquetria ;icrocogulos +ogulos Agrega$&o plaquetria dependente de 9DTA @atelitismo plaquetrio

@IHNI>I+ADO +:CNI+O
As contagens de plaquetas mais precisas s&o importantes no tratamento de um paciente trobocitopDnico a di)eren$a de um nFmero de plaquetas de 2#/// e 6/#/// mm 4 representa uma di)eren$a real em risco de sangramento potencialmente )atal *6-# 150 mil a 400 mil/mm3E inter(alo de re)erDncia normalI De 100 mil a 150 mil/mm3E o paciente permanece geralmente assintomtico e com o tempo de sangramento normalI I !e"i#" a 50 mil a 100 mil/mm 3E !emorragias aps trauma gra(eI o tempo de sangramento est ligeiramente prolongadoI I !e"i#" a 50 mil/mm3E aparecimento de les%es purpFricas aps trauma ligeiro e !emorragias aps cirurgia en(ol(endo mucosas isto contra'indica a cirurgiaI I !e"i#" a $0 mil/mm3E !emorragias espontJneas *geralmente petquias intracranianas ou outras-# mas tambm

;9TODO:OHIA@
MTODOS INDIRETOS
Os mtodos indiretos consistem em (eri)icar a propor$&o de plaquetas em es)rega$o de sangue corado e relacionar estes dados com o nFmero de eritrcitos por mil=metro cFbico# A contagem de plaquetas )eita obrigatoriamente em obKeti(a de imers&o onde os eritrcitos se encontram bem soltos sendo que esta a)irma$&o apresenta conota$%es subKeti(as#

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:imita$%es dos mtodos indiretosE 9le(ado coe)iciente de (aria$&o Di)iculdade em padroni"a$&o da tcnica#

M%&#'# 'e () i# A tcnica consiste em contar as plaquetas e5istentes em cinco campos que de(em conter cerca de 6// !emcias cada campo logo se )a" regra de trDs relacionando o nFmero de plaquetas contado o nFmero de !emcias contado e o nFmero de !emcias por mm4 de sangue# M%&#'# 'e N#*a +,-. 9ste mtodo ad(m de estudos com contadores automati"ados determinam o nFmero de plaquetas pela multiplica$&o por um )ator de 6/#/// que trans)orma o nFmero de plaquetas por campo em nFmero de plaquetas por mil=metro cFbico o )ator determinado )oi obtido em estudos com contadores automati"ados# Neste tipo de estimati(a n&o se )a" necessrio correlacionar eritrcitos e plaquetas tampouco saber a contagem de eritrcitos#;as por outro lado requer de modo determinante que a anlise da mdia de plaquetas por campo ao )inal da contagem de de" campos# De(e ser reali"ada obrigatoriamente em local onde a e5tens&o de eritrcitos seKa n=tida e maKoritariamente solta mas ainda assim com alguns eritrcitos ainda se tocando independente do nFmero de eritrcitos por campo o que requer de uma tima prtica por isso operadores menos e5perientes de(em dobrar os cuidados com sangues anDmicos porque a regi&o ideal para a(alia$&o dos eritrcitos certamente ter menor nFmero de clulas que aquela mesma regi&o de es)rega$o corado de um paciente normal ou seKa n&o anDmico e com nFmero maior de eritrcitos#

MTODO DIRETO AUTOMATIZADO


Os mtodos diretos de contagem de plaquetas podem ser reali"ados por sistemas automati"ados ou contagem em cJmara de Neubauer# M%&#'# Di"e&# A-&#ma&i/a'# @&o duas as tecnologias bsicas de contagem de clulasE ImpedJncia eltrica e tecnologia de contagem de clulas por di)ra$&o da lu"# Atualmente grande parte dos contadores automati"ados baseia'se no princ=pio de impedJncia eltrica ou de sinais pticos para contar plaquetas no sangue peri)rico usando o (olume de part=culas para cont'las *4-# Dentre as limita$%es dos mtodos automati"ados destacam'seE Aresen$a de macroplaquetas Aresen$a de agregados plaquetrios Alto coe)iciente de (aria$&o em trombocitopenias in)eriores a 1/ mil3mm 4

MTODO DIRETO EM CAMARA DE NEUBAUER


Todos os mtodos em cJmara apresentam como limita$%esE @&o trabal!osos 9rros inerentes de(ido M distribui$&o irregular de clulas na cJmara de contagem

M%&#'# 'e 0"e+,e" & C"# .i&e 9st )undamentado em determinar as plaquetas em cJmara de Neubauer aps dilui$&o de sangue total em o5alato de am<nio a .0 *lise os eritrcitos- desta )orma obter o nFmero de plaquetas3mm 4 de sangue# Aara esta tcnica se )a" dilui$&o .E6/ diluindo 6/N: de sangue total em 1//N: de diluente enc!er a cJmara e dei5'lo em repouso por 6/ minutos em cJmara Fmida )a"er a leitura e determinar o nFmero total de plaquetas obser(ados nos cinco quadrados do quadrante central do ret=culo ou seKa no local tambm destinado M contagem de !emcias# Des(antagensE 9rros inerentes M contagem em cJmara Detritos celulares que di)icultam a contagem

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M%&#'# 'e T#'' & Sa !#"' Trata'se de um mtodo direto de contagem de plaquetas em cJmara de Neubauer# A amostra pre(iamente dilu=da .E6// numa das seguintes dilui$%es *1-E a- :=quido de Rees e 9cOerE citrato de sdio 4 L g )ormol 1/0 / 6 m: a"ul de cresil bril!ante / . g e gua destilada .// / m:# 9ste l=quido preser(a as !emcias permitindo contagem simultJneaI b- :=quido de :eaOe e HuPE o5alato de sdio . Q g )ormol 1/0 Q / m: +ristal de (ioleta / /2g e gua destilada .// / m:I c- :iquido de Rrig!t e SinnicuttE duas partes de solu$&o aquosa de a"ul de cresil bril!ante e trDs partes de solu$&o aquosa de cianeto de potssio .E.1//# A dilui$&o colocada em cJmara de Neubauer# Dei5a em repouso em cJmara Fmida por ./ minutos e procede a leitura em aumento de 1// (e"es# +onta'se as plaquetas nos cinco quadrantes da regi&o central *destinado M contagem de eritrcitos-# O resultado multiplicado por ./#///# Des(antagensE 9rros inerentes M contagem em cJmara Aresen$a de (rios elementos )ugurados na rea de contagem *eritrcitos-

;9TODO:OHIA D9 ;A@A9@ T UA;RA *4Trata'se de um procedimento de contagem de plaquetas manual e direto descrito em .V22 e modi)icado posteriormente por Oli(eira T 7arreto em 6//4# No processo de separa$&o dos eritrcitos do plasma tanto por sedimenta$&o espontJnea quanto por bai5a )or$a centri)uga as plaquetas se arranKam de uma maneira uni)orme distribu=das no plasma e mantm em (alores constantes embora boa parte de plasma li(re de plaquetas )ique retida entre os eritrcitos sedimentados o que torna o plasma sobrenadante superconcentrado de plaquetas *4-# Alternati(amente o (alor de plaquetas no plasma pode ser corrigido empregando a tabela *ane5o .- com =ndices calculados atra(s da )rmulaE 1la2/mm3 *a 3-e W plaq3mm4 plasma 5 XY.// Z *[t \ [t36-]3.//^

AMOSTRA
@angue total com 9DTA

MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
;aterial para determina$&o de !ematcrito *manual ou automati"ado+entr=)uga +Jmara de Neubauer ;icroscpio Alaca de Aetri .// mm com algod&o umedecido Tubos de ensaio .65_2 mm *tubos de !emliseAipetadores automticos

S#l-45# 'il-i'#"a 6!#"mali a 178 >ormol 1/0 Na+l / L20 q#s#p# . / m: .// m:

QUADRANTES DE CONTAGEM
Os quadrantes no ret=culo de Neubauer destinados M contagem s&o os mesmos recomendados para eritrcitos e est&o indicados na )igura . como [. [6 [4 [1 e [2E

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>igura .E quadrantes de contagem para protocolos A 7 e +#

PROCEDIMENTO
Um critrio que assegura a e5atid&o e reprodutibilidade dos resultados que a soma nos cinco quadrantes de contagem *[.\[6\[4\[1\[2- seKa entre .2/ a 6// plaquetas# 9m amostras plaquetopDnicas dilui$%es alternati(as de(em ser empregadas sendo ent&o sugeridos quatro protocolos de contagem con)orme o grau de trombocitopenia# O9&e 45# 'e 1la*ma "i+# em 1la2-e&a* 6PRP8 .# Determinar o !ematcrito do paciente por centri)uga$&o ou automa$&oI 6# +entri)ugar o sangue total do paciente *6 2 a 1 / m:- a .#/// rpm por um minuto# Alternati(amente pode dei5ar a amostra em repouso por 4/ min P"#&#+#l# A : PARA AMOSTRAS N;O<PLAQUETOP=NICAS .# Aipetar VL/ N: de solu$&o diluente em um tubo .65_2 mmI 6# Aspirar 6/ N: de ARA e diluir no tubo com solu$&o diluidora *.E2/-I 4# 9nc!er o ret=culo de NeubauerI 1# +olocar em cJmara Fmida e dei5ar em repouso por 6/ min em posi$&o !ori"ontalI 2# +ontar as plaquetas nos cinco quadrantes de contagem de !emcias *[.\[6\[4\[1\[2- em aumento de 1//5 *obKeti(a de 1/5 e ocular de ./5-# P"#&#+#l# 0 : PARA AMOSTRAS PLAQUETOP=NICAS Aroceder como protocolo A empregando dilui$&o de .E6/E 6/ N: ARA \ 4L/ N: solu$&o diluente#

P"#&#+#l# C : PARA AMOSTRAS PLAQUETOP=NICAS 9mpregar dilui$&o de .E./E 6/ N: ARA \ .L/ N: solu$&o diluente#

P"#&#+#l# D : PARA AMOSTRAS SE>ERAMENTE PLAQUETOP=NICAS Aroceder como no protocolo + mas quando a contagem nos cinco quadrantes de !emcias *[.\[6\[4\[1\[2- )or in)erior a .2/ plaquetasI +ontar todo o quadrante central indicado pela regi&o circundada na )igura 6#

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>igura 6E quadrantes de contagem para protocolo D#

CLCULOS
Os resultados da contagem em cJmara representam o (alor de plaquetas no plasma de(endo utili"ar o )ator de corre$&o *>+- para con(ers&o de plaq3mm 4 plasma para plaq3mm4 sangue atra(s da )ormula abai5o# 9sta )ator tem um (alor )i5o para cada (alor de !ematcrito# A tabela no ane5o . apresenta os (alores de acordo com o !ematcrito# >+ W XY.// Z *[t \ [t36-]3.//^ De(e'se considerar tambm o )ator de dilui$&o empregado# +om os clculos abai5o se obtm a contagem de plaquetas por plaq3mm 4 sangue K considerando a dilui$&o empregada *protocolo- e o )ator de corre$&o pelo !ematcrito *>+-# P"#&#+#l# A *[.\[6\[4\[1\[2- 5 62// 5 >+` P"#&#+#l# 0 *[.\[6\[4\[1\[2- 5 ./// 5 >+` P"#&#+#l# C *[.\[6\[4\[1\[2- 5 2// 5 >+` P"#&#+#l# D *auadrante central- 5 .// 5 >+`

` Ane5o .

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R9>9R?N+IA@
.# :9IT9 :A+I @I:,A UUNIOR ;NI ;IRANDA ;@# C#m1a"a45# E &"e a C# &a3em 'e Pla2-e&a* 1el#* M%&#'#* Ma -al e A-&#ma&i/a'## Nebslab L. ed# 6//_ p# ./Q'..1# 6# RAAAAORT @# I# ?ema&#l#3ia@ introdu$&o# 6# ed# @&o AauloE Roca .V//# 4# O:I,9IRA R# A# H# ?em#3"ama@ como )a"er e interpretar# @&o AauloE :i(raria ;edica Aaulista 6//_# 1# :I;A AO et al# M%&#'#* 'e la9#"a&A"i# a1li+a'#* B +lC i+a# Rio de UaneiroE Huanabara Soogan 6//.#

AN9cO@
Ane5o .E )ator de corre$&o *>+- para con(ers&o de plaq3mm 4 plasma para plaq3mm4 sangue pela )rmula matemtica >+ W XY.// Z *[t \ [t36-] 3.//^ ?ema&A+"i&# ./0 ..0 .60 .40 .10 .20 .Q0 ._0 .L0 .V0 6/0 6.0 660 640 610 620 6Q0 6_0 6L0 6V0 4/0 4.0 460 440 410 420 (C / _Q_ / _24 / _4L / _61 / _./ / QV2 / QL. / QQ_ / Q26 / Q4L / Q61 / Q/V / 2V2 / 2L. / 2QQ / 226 / 24_ / 264 / 2/V / 1V1 / 1L/ / 1QQ / 12. / 14_ / 164 / 1/L ?ema&A+"i&# 4Q0 4_0 4L0 4V0 1/0 1.0 160 140 110 120 1Q0 1_0 1L0 1V0 2/0 2.0 260 240 210 220 2Q0 2_0 2L0 2V0 Q/0 Q.0 (C / 4V1 / 4L/ / 4Q2 / 42. / 1/L / 4V1 / 4L/ / 4Q2 / 42. / 44Q / 466 / 4/L / 6V4 / 6_V / 6Q2 / 62/ / 64Q / 666 / 6/_ / .V4 / ._V / .Q1 / .2/ / .42 / .6. / /L2

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