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Los enzimas son biocatalizadores producidos en las clulas, que catalizan, es decir facilitan y aceleran las reacciones qumicas que tienen lugar en los seres vivos, ya que disminuyen la energa de activacin que se necesita para que tengan lugar dichas reacciones, permitiendo que se produzcan a velocidades y temperaturas adecuadas.
Este aumento de velocidad es rpido para concentraciones bajas de sustrato y, a medida que este aumenta, se va haciendo ms lento hasta que la concentracin del sustrato alcanza un cierto valor, a partir del cual, aunque aumente la concentracin del mismo, no aumenta la velocidad de la reaccin. Esto es debido a que el enzima esta saturada por el sustrato; es decir, todas las molculas del enzima estn unidas al sustrato formando el complejo E-S. Cuando ocurre esto, se dice que la reaccin ha alcanzado la velocidad mxima. En 1913 Leonor Michaelis y a Maud Menten estudiaron la variacin de la velocidad de una reaccin enzimtica en funcin de la concentracin del sustrato y propusieron la siguiente ecuacin, que es vlida para concentraciones de sustrato no saturante. Dnde: V es la velocidad de la reaccin para una determinada concentracin de sustrato. Vmax es la velocidad mxima de la reaccin. [S] es la concentracin del sustrato. Km es una constante denominada constante de Michaelis-Menten, es caracterstica de cada enzima. Si en la ecuacin (1) hacemos V = Vmax y despejamos Km obtenemos que Km = [S] Km. Se puede definir como la concentracin de sustrato necesario para que la velocidad de la reaccin sea la mitad de la velocidad mxima. Se mide en unidades de concentracin. La Km nos indica la afinidad de un enzima por su sustrato: Si Km es alta indica que el enzima tiene poca afinidad por el sustrato ya que se necesita una concentracin de sustrato elevada para alcanzar la mitad de la velocidad mxima. Si Km es baja indica que el enzima tiene mucha afinidad por el sustrato ya que se necesita una concentracin de sustrato baja para alcanzar la mitad de la velocidad mxima. Temperatura La T influye en la actividad enzimtica. En general por cada 10C que aumente la temperatura la velocidad de la reaccin aumenta de 2 a 4 veces. Esta regla se cumple hasta que la temperatura alcanza un valor mximo (T ptima) donde la actividad es mxima. Esto se debe a que al aumentar la T aumenta el movimiento de las molculas y, por tanto aumenta la probabilidad de encuentro entre el S y el E. Si la T aumenta por encima de la T ptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimtica debido a que la enzima se desnaturaliza.
Cada enzima posee una T ptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37C. Los animales poiquilotermos debido a que carecen de mecanismos para regular la T corporal, se ven obligados a hibernar en la estacin fra pues la actividad de sus enzimas debido a las bajas temperaturas es muy baja.
pH
El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica, debido a que el pH influye en la ionizacin de los grupos funcionales de los aminocidos que forman la protena enzimtica. Cada enzima realiza su accin dentro de un determinado intervalo de pH, dentro de este intervalo habr un pH ptimo donde la actividad enzimtica ser mxima. Por debajo del pH mnimo o por encima del pH mximo el enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la mayora de las enzimas el pH ptimo est prximo a la neutralidad, aunque hay excepciones.
Inhibidores
Son compuestos qumicos que se unen al enzima, en distintos puntos del mismo y disminuyen o incluso impiden su actividad. Estos compuestos pueden ser de distintos tipos: iones, molculas orgnicas y a veces el producto final de la reaccin. A la accin que realizan se la denomina inhibicin. La inhibicin puede ser: Inhibicin irreversible: Cuando el inhibidor impide permanentemente la actividad enzimtica, bien porque se une de forma permanente con grupos funcionales importantes del centro activo o bien porque altera su estructura. A estos inhibidores se les denomina venenos y a la inhibicin que realizan se la denomina envenenamiento del enzima. Ej. La penicilina que inhibe las enzimas que sintetizan la pared bacteriana. El in cianuro acta sobre la citocromo oxidasa (enzima respiratorio). Inhibicin reversible: El inhibidor se une al enzima de forma temporal mediante enlaces dbiles e impide el normal funcionamiento del mismo, pero no la inutiliza permanentemente. Puede ser de dos tipos:
Competitiva:
impidiendo que lo haga el sustrato. Es decir ambos, inhibidor y sustrato compiten por unirse al centro activo del enzima. La accin suele anularse aumentando la concentracin del sustrato
Objetivos: Conocer el efecto de la temperatura en la actividad enzimtica de la catalasa. Identificar las temperaturas que producen una menor o mayor actividad enzimtica. Observar como influye el estado fsico del hgado (entero y molido) en la actividad enzimtica.
Experimento: Materiales:
Procedimiento
Se tritura un poco del hgado de pollo con el mortero (se agrega agua destilada). Luego filtrarlo mediante un colador y gasa fina que impedir que el paso de los trozos de hgado que no hayan podido ser triturados. Se deja un trozo de hgado sin triturar.
Se coloca en 10 tubos 1 ml. De solucin de enzima. En el tubo restante se coloca un trocito de hgado.
Se separa 4 tubos: 2 se colocan en agua caliente y 2 en hielo (se utilizaran despus). Tambin se aparte un tubo para que sea entibiado con el calor de la mano de alguna compaera del grupo.
1. Accin de la catalasa
En el primer tubo con 1 ml. de solucin de enzima agregamos 1 ml. de agua oxigenada (H2O2). Tenemos que el agua oxigenada se ha descompuesto ya que la catalasa est actuando de manera de lo divide: 2 H2O2 CATALASA Se produce una reaccin instantnea. 2 H2O + O
3. Efecto de temperatura
En el cuarto tubo con 1 ml. de solucin de enzima (hielo) agregamos 1 ml. de agua oxigenada (H2O2). En el quinto tubo con 1 ml. de solucin de enzima (T corporal) agregamos 1ml. de agua oxigenada (H2O2). En el sexto tubo con 1 ml. de solucin de enzima (100 C) agregamos 1 ml. de agua oxigenada (H2O2). Para toda reaccin enzimtica debemos tener una temperatura ptica por lo que observamos que en el cuarto tubo con solucin enzimtica en hielo la reaccin fue moderada, en agua caliente fue nula (se desnaturaliza) y en la de calor corporal fue reaccin instantnea.
4. Efecto de pH
En el sptimo tubo con 1 ml. de solucin de enzima agregamos cido clorhdrico (HCl) mas 1 ml. de agua oxigenada (H2O2). En el octavo tubo con 1 ml. de solucin de enzima agregamos agua destilada ms 1 ml. de agua oxigenada (H2O2). En el noveno tubo con 1 ml. de solucin de enzima agregamos hidrxido de sodio (NaOH) mas 1 ml. de agua oxigenada (H2O2). Observamos que la reaccin fue nula para el sptimo tubo con cido clorhdrico ya que este por ser un cido fuerte desnaturaliza a la solucin de enzima, una reaccin moderada para el octavo tubo ya que el pH del agua es neutro y en el noveno tubo la reaccin fue lenta ya que est en un pH alcalino.
Conclusiones:
En la accin de la catalasa acta descomponiendo los elementos de hidrogeno y oxigeno del agua oxigenada y a su vez provocando una reaccin instantnea con el exceso de burbujas que se puede observar en el primer tubo. En el efecto de concentracin de enzimas decimos que a una mayor concentracin hay una mejor reaccin enzimtica en este caso rpida por la cantidad de burbujas que salieron del hgado triturado ms el agua oxigenada en cambio, una menor concentracin conlleva a una baja reaccin enzima como paso con el hgado sin triturar por lo que tuvo una moderada cantidad de burbujas. En efecto de la temperatura sabemos que de be de haber una temperatura ptima para que se realice la reaccin enzimtica pero en estos casos el tubo que estuvo expuesto al hielo por tener una baja temperatura se desnaturalizo al igual que el tubo que estuvo a altas temperaturas en el agua caliente, en estos dos casos se produce la desnaturalizacin ya que no se encuentran a una temperatura optima, reaccionando con el hielo con una reaccin moderada de burbujas y agua caliente con una reaccin nula; por otra parte la temperatura corporal produce una reaccin instantnea. En el efecto del pH el rango de pH ptimo tambin es muy variable entre las diferentes enzimas. Si el pH del medio se aleja del ptimo de la enzima, esta ver modificada su carga elctrica al aceptar o donar protones, lo que modificar la estructura de los aminocidos y por tanto la actividad enzimtica. El cido clorhdrico por tener un pH acido se desnaturaliza por lo que tiene una reaccin nula, el agua tiene un pH neutro y produce una reaccin moderada de burbujas y por ltimo el hidrxido de sodio tiene un pH alcalino reaccionando de manera ms lenta. En la concentracin del sustrato la proporcin tiene que ser proporcional y lo vemos en el onceavo tuvo con una reaccin rpida y de menor manera en decimo tubo con una reaccin moderada de burbujas.
Cuestionario
1. Por qu se desnaturaliza la protena antes de la digestin?
Dado que las sustancias que intervienen en estas reacciones son, generalmente, muy estables, se requerira una gran cantidad de energa para que reaccionaran entre s, ya que, si no, la velocidad de reaccin sera nula o demasiado lenta. Para acelerar la reaccin en un laboratorio bastara con aumentar la temperatura o bien con aadir un catalizador, es decir, una sustancia que aumente la velocidad de la reaccin.