Seminario del Instituto de Fisiologa Celular: Diversity of parasite mitochondria as a drug target Que impartir el Dr.

Kiyoshi Kita Graduate School of Medicine, The University of Tokyo Viernes 7 de marzo de 2014, 12:00 horas Auditorio Antonio Pea Daz del propio Instituto Entrada libre http://www.ifc.unam.mx/

UNIDAD 3. Nutricin Microbiana

!! 3.4

Medios de cultivo: clasificacin, diseo y aplicaciones.

Composicin qumica de una bacteria (E. coli)

Molcula
!Macromolculas totales Protenas Polisacridos Lpidos ADN ARN !Monmeros totales Aminocidos y precursores Azucares y precursores Nucletidos y precursores !Iones inorgnicos Total

% del peso seco (2.8x10-13 g)

96 55 5 9.1 3.1 20.5 3 0.5 2 0.5 1 100%

Microorganismos
Fuente de energa Oxido-reduccin Quimitrofas Compuestos orgnicos Quimiohetertrofos Fuente de carbono

Clasificacin
Luz Fottrofas Fuente de carbono Compuestos orgnicos Fotohetertrofos CO2 Fotoauttrofos

Compuestos orgnicos Quimiohetertrofos CO2 Compuestos inorgnicos Quimiolittrofos Fuente de carbono Compuestos Orgnicos Mixtrofos CO2 Litoauttrofos

Macronutrientes en los medios de cultivo

Elemento
Carbono (C)

Forma encontrada en el medio ambiente

CO2, compuestos orgnicos

Forma qumica en los medios de cultivo

Glucosa, malato, acetato, piruvato, cientos de otros compuestos o en mezclas complejas (extracto de levadura, peptona y otros) H2O, compuestos orgnicos H2O, O2, compuestos orgnicos Inorgnicos: NH4Cl, (NH4)2SO4, KNO3, N2 Orgnicos: Aminocidos, bases nitrogenadas de nucletidos y otros compuestos de nitrgeno; PEPTONAS

Hidrgeno (H) Oxgeno (O) Nitrgeno (N)

H2O, compuestos orgnicos H2O, O2, compuestos orgnicos NH3, NO3, N2, compuestos orgnicos nitrogenados

Macronutrientes en los medios de cultivo

Elemento
Fsforo (P) Azufre (S)

Forma encontrada en el medio ambiente

PO43H2S, compuestos orgnicos de S, metales (FeS, CuS, ZnS, NiS y otros)

Forma qumica en los medios de cultivo

KH2PO4, Na2HPO4 Na2SO4, Na2S2O3, Na2S, cistena u otros compuestos orgnicos con azufre

Potasio (K) Magnesio (Mg)

K+ en solucin o varias sales de K Mg2+ en solucin o varias sales de Mg

KCl, KH2PO4 MgCl2, MgSO4

Macronutrientes en los medios de cultivo

Elemento
Sodio (Na)

Forma encontrada en el medio ambiente

Na+ en solucin o como NaCl y otras sales de Na

Forma qumica en los medios de cultivo

NaCl

Calcio (Ca)

Ca2+ en solucin o como CaSO4 y otras sales de Ca Fe2+ o Fe3+ en solucin como FeS, Fe(OH), otras muchas sales de Fe

CaCl2

Fierro (Fe)

FeCl3, FeSO4 y otras soluciones de fierro (o Fe3+, EDTA, Fe2+ citrato)

Micronutrientes en los medios de cultivo

Elemento
Cobalto Cobre Manganeso Molibdeno Nquel Selenio Tungsteno Vanadio Zinc

Funcin celular
Vitamina B12, transcarboxilasa Protenas, citocromo c oxidasa, SOD Activador enzimtico, SOD. Enzimas, nitrogenasa de molibdeno, nitrato reductasa. Hidrogenasa, monxido de carbono deshidrogenasa. Hidrogenasas, aminocido selenio-cistena. Formato deshidrogenasa. Nitrogenasa de vanadio. Anhidrasa carbnica, alcohol deshidrogenasa.

Factores de crecimiento
Vitamina
cido p-amino benzoico (PABA) cido flico Biotina Niacina (cido nicotnico) Cobalamina (B12) Riboflavina cido pantotnico Tiamina (B1) Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina) Grupo Vitamina K, quinonas

Funcin
Precursor del cido flico Metabolismo de un carbono, transferencia de grupos metilo Biosntesis de cido grasos, beta descarboxilaciones, fijacin de CO2 Precursor del NAD+; transferencia de electrones en reacciones redox Reduccin y transferencia de fragmentos de un solo carbono. Precursor de FAD, FMN, transporte de electrones. Precursor de la CoA Alfa descarboxilaciones, transcetolasas. Transformaciones de aminocidos y cetocidos. Transportadores de electrones (ubiquinonas, menaquinonas, etc.)

Medios de Cultivo
Composicin Estado
Naturales o Complejos Sintticos Lquido Fluido 0.1% de agar Semislido 0.2 a 0.8% de agar Slido 1.5 a 2% de agar

Uso

Enriquecidos o nutritivos De enriquecimiento Selectivos Diferenciales De transporte De mantenimiento o conservacin Pruebas Bioqumicas

Clasificacin por composicin de los medios de cultivo

Naturales o complejos. Son medios que no tienen una composicin definida. Sangre, suelo, frutas, etc. o medios que contengan ingredientes cuya composicin no est completamente definida como el extracto de levadura, peptonas o el agua de la llave.

Los medios sintticos son aquellos cuya composicin en completamente conocida, sus componentes son extrapuros, como en los medios empleados para investigacin.

Medios de cultivo deshidratados

Clasificacin por estado de los medios de cultivo

Medios lquidos. Generalmente tienen componentes completamente solubles. Son tiles en la propagacin de microorganismos pero tienen la desventaja de que no se pueden detectar contaminaciones.

Agar
Extrado a partir de un tipo de algas rojas (de los gneros Gelidium y Gracilaria), Agar es un gelificante que se emplea en Japn desde el siglo XV. En 1859 se introdujo en Europa como alimento caracterstico de la cocina china y a principios del siglo XX se empez a aplicar en la industria alimentaria. Es una fuente de fibra y tiene capacidad de formacin de gel en proporciones muy bajas. Permite la elaboracin de gelatinas calientes.

Clasificacin por estado de los medios de cultivo

Los medios fluidos contienen agar en una concentracin aproximada a 0.1%, el medio tiene una consistencia lquida pero la presencia de agar disminuye la velocidad de disolucin de O2 ambiental. Se emplea generalmente en el cultivo de microorganismos anaerobios y microaeroflicos.

Medio fluido de tioglicolato con resarzurina (indicador de oxido/reduccin)

Clasificacin por estado de los medios de cultivo

Los medios de cultivo semislidos contienen de entre el 0.2 y el 0.8% de agar, son suaves y permiten observar la movilidad de los microorganismos. Esta consistencia es utilizada en los medios de transporte, las pruebas de movilidad, pruebas bioqumicas y pruebas genticas.

Clasificacin por estado de los medios de cultivo

Los medios slidos contienen entre 1.5 a 2.0% de agar, esto los hace tener una consistencia dura y forman un soporte para el crecimiento microbiano. Se emplean para cultivo, aislamiento, diferenciacin, cuantificacin, pruebas de sensibilidad y en algunos casos para conservacin (inclinados).

Uso. Medios enriquecidos

Contienen componentes ricos nutritivamente y permite el crecimiento de microorganismos no exigentes. Ejemplos: !Agar cuenta estndar (cuenta en placa) !Infusin cerebro y corazn (BHI) !Agar Soya Tripticasena (TSA) !Agar nutritivo (AN) !Agar sangre (AS)

Uso. Medios de enriquecimiento

Contiene componentes y condiciones que permiten el desarrollo de un tipo microbiano y disminuyen la velocidad de crecimiento de la flora acompaante. Ejemplos:

!Caldo tetrationato Pre-enriquecimiento para Salmonella

!Agua peptonada pH 9 Deteccin de V. cholerae

!Caldo selenito Deteccin de Salmonella, Enterobacter sakazakii y Yersinia enterocolitica

Uso. Medios selectivos

Contienen componentes que permiten el desarrollo de un tipo microbiano e inhiben el crecimiento de los dems microorganismos. Ejemplos: !Agar cetrimida (Pseudomonas) !Caldo bilis verde brillante (coliformes totales) !Agar Bacillus cereus !Agar Sabouraud cicloheximida (hongos patgenos primarios)

Uso. Medios diferenciales

Contiene componentes que permiten diferenciar las actividades metablicas de los microorganismos inoculados. La presencia de indicadores o el uso de reveladores despus de la incubacin ponen de manifiesto la actividad. Ejemplos: !Agar DNAsa !Agar almidn !Agar cromognico para Candida

Uso. Medios diferenciales y Selectivos

!Agar sal y manitol (MSA) (estafilococos) !Agar eosina azul de metileno (EMB) (bacterias entricas Gram negativas) !Agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) Shigella !Agar Endo (coliformes) !Agar Mc Conkey (Bacterias Gram negativas)

Uso. Medios de conservacin

Algunos medios de cultivo son empleados para la conservacin temporal de microorganismos, como son: !Medio slido en caja a 4C (hasta 1 semana). !Medio de agar inclinado 4C (hasta 2 semanas) con sello de glicerol estril a 4C (varios meses dependiendo del microorganismo). !Medio fluido de tioglicolato con carne molida con sello de aceite mineral estril a temperatura ambiente (varios meses dependiendo del microorganismo). En la liofilizacin tambin se emplea la leche descremada (aos).

Uso. Medios de transporte

Son medios que se emplean para el transporte de muestras sin alterar la viabilidad y la proporcin de microorganismos. Tienen consistencia semislida, con amortiguador de pH y reducidos en nutrientes para preservar la proliferacin de microorganismos por varias horas. Las muestras se recolectan con asas o con hisopos de alginatos que no inhiben a los microorganismos. !Medio Amies !Medio de Stuart

Uso. Pruebas Bioqumicas

Son medios de cultivo que tienen los nutrientes para poner en evidencia la actividad metablica de un microorganismo puro. Pueden emplear reveladores y/o indicadores.