Leccin Tema 4.

- Especificacin Celular
Niveles de compromiso: diferenciacin "The greatest of all of wonders of the material universe: the existence, in a simple, unorganized egg, of a power to produce a definitive adult animal" William K. Brook, embrilogo americano, 1883. Niveles de compromiso La diferenciacin es la generacin de tipos celulares especializados. Sin embargo, esta no es ms que la ltima fase de una serie de sucesos que comprometen a un blastmero determinado a transformarse en un tipo celular concreto. La diferenciacin puede afectar a numerosos aspectos moleculares y celulares como la expresin de genes (composicin proteica especfica), el tamao, la forma, la polaridad, la actividad metablica, la sensibilidad a ciertas seales, etc. Durante la diferenciacin, ciertos genes son expresados mientras que otros son reprimidos. Este proceso es intrnsecamente regulado por factores epigenticos internos y externos de las clulas. As, la clula diferenciada se desarrollar en estructuras especficas y adquirir determinadas funciones. Compromiso: Especificacin y Determinacin La diferenciacin (cambios celulares visibles) va precedida por un proceso de compromiso de las clulas hacia un destino determinado. Durante estas fases de compromiso, la clula puede no presentar caractersticas diferenciadas; sin embargo, su destino de desarrollo ha quedado restringido. Este proceso de compromiso puede ser dividido en dos fases o estados (Harrison, 1933; Slack, 1991): Especificacin: En la primera fase, la clula adquiere un compromiso lbil y reversible. Decimos que una clula est especificada cuando es capaz de diferenciarse autnomamente siempre y cuando se sita en un medio ambiente neutral como una placa de petri o un tubo de ensayo (este medioambiente se considera neutral con respecto a su va de desarrollo).En esta fase de especificacin, el compromiso celular puede ser revertido. Determinacin: Durante esta segunda fase, la clula adquiere un compromiso irreversible. Una clula est determinada cuando puede diferenciarse autnomamente (de acuerdo a su destino original) independientemente de su entorno, incluso si se sita en otra regin del embrin (entorno no-neutral). Si esto ocurre, se asume que el compromiso es irreversible.

Fig. 1.- Distincin entre destino celular, especificacin y determinacin. En este esquema, observamos un embrin constituido por las regiones A y B que se diferencian en dos tipos celulares representados por hexgonos y cuadrados, respectivamente. El mapa de destino (primer panel) indica el desarrollo normal. En el 2 panel, observamos como las clulas de la regin B, injertadas en la regin A, se desarrollan igual que los tipos celulares de la regin A. Esto es debido a que el destino de la regin B no ha sido an determinado. Si las clulas de la regin B estuvieran determinadas en el momento del injerto, se diferenciaran como clulas B (3er panel). Puede ocurrir que las clulas B del 2 panel estn especializadas (4 panel) y se diferencien a clulas B cuando son situadas en un ambiente neutral (como una placa de cultivo)

Existen 3 principales estrategias para adquirir el compromiso y ningn embrin utiliza slo una de ellas. Todas las estrategias estn basadas en mecanismos que reparten cierto conjunto de factores de transcripcin a clulas diferentes en el embrin temprano. Especificacin Autnoma ESPECIFICACIN AUTNOMA En este primer mecanismo las clulas son especificadas por sus propios componentes citoplasmticos. El blastmero hereda un conjunto de factores de transcripcin del citoplasma del huevo y estos factores de transcripcin regulan la expresin gnica, dirigiendo a la clula hacia una determinada ruta de diferenciacin. El citoplasma de huevo no es homogneo. Contiene diferentes determinantes morfogenticos (factores de transcripcin y/o ARNm) que, al estar repartidos heterogneamente por el citoplasma ovular, son heredados por distintos blastmeros durante la segmentacin (divisiones asimtricas). As, la especificacin celular se produce por la adquisicin diferencial de ciertas molculas citoplasmticas presentes en el huevo, por el tipo de citoplasma que hereda durante la segmentacin. La segmentacin siempre produce los mismos linajes celulares en cada embrin de la especie. El destino de los blastmeros es invariable, constante. Es caracterstica de embriones de invertebrados, especialmente de moluscos, anlidos y tunicados.

Fig 2.-Especificacin autnoma (desarrollo en mosaico). (A-C) Diferenciacin de las clulas (ciliadas) deltrocoblasto del molusco Patella. (A) Vista lateral del embrin de 16 clulas. Las clulas de futuro trocoblasto estn coloreadas . ( B) Embrin de 48 clulas. (C) Larva ciliada, vista desde el polo animal. (D-G) Diferenciacin de una clula del trocoblasto aislada de un embrin de 16 clulas y cultivada in vitro. (E,F) Resultado de la primera y segunda divisin. ( G) Productos ciliados de (F). Incluso en cultivo, estas clulas se dividen y se transforman en ciliadas en el momento correcto. (Modificacin de la Figura. 3-7, Gilbert Developmental Biology, 8 ed.)

Tradicionalmente, se ha denominado desarrollo en mosaico, puesto que el embrin parece estar construido como un mosaico de partes independientes y auto-diferenciables. As, si se elimina un determinado blastmero del embrin temprano, esta clula aislada slo originar aquellos tipos de clulas que habra formado si an estuviera en el embrin. Por su parte, el embrin carecer de aquellas clulas que producira el blastmero eliminado. Cuando la mayora de las clulas de un embrin temprano son determinadas por especificacin autnoma, puede parecer que todo el animal se especifica de la forma. Sin embargo, no ocurre e incluso en los embriones de Tunicados, el sistema nervioso se origina por interacciones celulares.

Especificacin Condicional ESPECIFICACIN CONDICIONAL Es la capacidad de las clulas de alcanzar sus destinos respectivos por interacciones con otras clulas.

Fig. 3.- Especificacin condicional. (A) En qu se transforme una clula depende de su posicin en el embrin. Su destino es determinado por interacciones con las clulas vecinas. (B) Si eliminamos unas clulas del embrin, las restantes pueden regular y compensar la parte perdida.

Los factores juxtacrinos y paracrinos secretados por las clulas vecinas determinarn, en gran manera, en qu se transformar una clula. La Especificacin condicional fue demostrada por Driesch (1892) cuando intentaba demostrar la Teora del Plasma Germinal de Weismann que propona justo lo contrario. En este caso, el destino de una clula depende de su localizacin en el embrin. Una clula tiene la capacidad de transformarse en muchos tipos celulares diferentes. Sin embargo, las interacciones con otras clulas restringen su destino. As, si se elimina un blastmero de un embrin temprano, las restantes clulas embrionarias alteran sus destinos normales para asumir las funciones del blastmero perdido. Esta capacidad de las clulas embrionarias de cambiar sus destinos para compensar las partes perdidas, se denomina regulacin (Fig. 3). Por su parte, el blastmero aislado tambin puede generar una amplia variedad de tipos celulares, alguno de los cuales no los habra generado si continuara en el embrin.

La capacidad de desarrollo regulativo es crtico en el desarrollo de los gemelos idnticos (monocigticos). En la formacin de tales gemelos, las clulas de estos embriones se dividen en dos grupos durante la segmentacin y cada grupo de clulas produce un individuo totalmente diferenciado. Ningn embrin utiliza slo uno de estos mecanismos para especificar sus clulas. As, podemos observar especificacin autnoma incluso en los embriones regulativos tales como el erizo de mar. De manera similar, los tunicados, ejemplos de desarrollo autnomo, tambin muestran interacciones regulativas entre sus clulas del sistema nervioso y algo menos en las musculares. Gradientes de Morfgenos Morfgeno es toda aquella molcula difusible que determina el destino de una clula por su concentracin. Los morfogenos pueden ser factores de transcripcin producidos dentro de una clula (ver Drosophila). Tambin pueden ser factores paracrinos producidos por un grupo de clulas y que viajan hacia otra poblacin celular, especificndo a las clulas diana de manera diferente segn la concentracin del morfgeno.

Las clulas no comprometidas situadas cerca de la zona de produccin del morfgeno estarn expuestas a las mayores concentraciones del mismo y son especificadas a un tipo celular A. Las clulas situadas ms lejos del origen del morfgeno que estarn expuestas a una concentracin menor y por debajo de un determinado umbral, se especificarn a un 2 destino celular. En las zonas ms alejadas del origen, la concentracin de morfgeno ser mucho menor y una clula del mismo tipo no comprometido inicial ser especificada en una 3 forma. Especificacin sincitial En los embriones tempranos de insectos, los ncleos se dividen dentro del huevo, sin que se divida la clula, originndose un sincitio. Por lo tanto, la especificacin de futuras (presuntivas) clulas dentro de un citoplasma comn se denomina especificacin sincitial. Este tipo de especificacin es utilizada por la mayora de los insectos y comparte elementos de las anteriormente estudiadas.

El citoplasma del huevo de insectos no es uniforme. En Drosophila, por ejemplo, la especificacin anterior-posterior se origina por gradientes de concentracinde morfgenos dentro del citoplasma del huevo. En la porcin ms anterior del huevo, hay un ARNm que codifica la protena Bicoid, mientras en el extremo posterior se encuentra el ARNm que codifica la protena Nanos. Cuando el huevo es fecundado, estos dos ARNm son traducidos de manera que la protena Bicoid forma un gradiente que es ms alto en el extremo anterior, y la protena Nanos forma otro gradiente que es ms alto en el extremo posterior. As, a lo largo del huevo de Drosophila nos encontramos dos gradientes de morfgenos opuestos uno de la protena Bicoid que viene de la parte anterior y otro de la protena Nanos proveniente de la parte posterior. Bicoid y Nanos son factores de transcripcin. Estas dos protenas forman un sistema coordinado basado en diferentes concentraciones y proporciones, de forma que cada regin del embrin contiene una proporcin diferente de las dos protenas. Las protenas que forman estos gradientes activan la trascripcin de genes que especifican los segmentos de la larva y de la mosca adulta. As, los ncleos de una regin con grandes cantidades de Bicoid y pocas de Nanos sern instruidos a activar aquellos genes necesarios para producir la cabeza. Los ncleos de regiones con un algo menos de Bicoid pero con pequeas cantidades de Nanos sern instruidos a activar los genes que generan el trax. Los ncleos de regiones que tienen poco o nada de Bicoid y altas concentraciones de Nanos sern instruidos a formar estructuras abdominales. Cuando los ncleos del sincitio son finalmente incorporados a las clulas, estas tendrn ya especificado su destino final.

Figura 2.- Especificacin sincitial en Drosophila melanogaster. La especificacin anterior-posterior se origina por gradientes de morfgenos dentro del citoplasma del huevo. El ARNm Bicoid est estabilizado en la porcin ms anterior del huevo, mientras el ARNm Nanos est trabado al extremo posterior. Cuando el huevo es fecundado, se traducen estos dos ARNm. La protena Bicoid forma un gradiente que es ms alto en el extremo anterior, y la protena Nanos forma un gradiente que es ms alto en el extremo posterior. La proporcin de estas dos protenas forma un sistema coordinado; as, cada posicin a lo largo del eje puede distinguirse de las otras posiciones. Cuando se produce la divisin nuclear, la cantidad de cada protena presente activa diferencialmente la transcripcin de los genes que especifican los segmentos de la larva y de la mosca adulta (Figura 3-11, Gilbert Developmental Biology, 8 ed)

Resumen Caractersticas de los tipos de especificacin celular Especificacin Autnoma Predomina en la mayora de los invertebrados Especificacin por la adquisicin diferencial de ciertas molculas citoplasmticas presentes en el huevo La especificacin del tipo celular precede a cualquier migracin celular embrionaria a gran escala La segmentacin invariable produce siempre los mismos linajes celulares en cada embrin de la especie. El destino de los blastmeros es generalmente invariable. Produce un desarrollo en mosaico: las clulas del embrin no pueden cambiar su destino si se pierde un blastmero Especificacin condicional Predomina en vertebrados y en unos pocos invertebrados Especificacin por interacciones entre clulas. Las posiciones relativas son importantes La segmentacin (variable) produce clulas sin un destino asignado.. La especificacin va precedida o acompaada por reordenaciones y migraciones celulares masivas La capacidad de desarrollo regulativo: permite que las clulas adquirir funciones diferentes Especificacin sincitial Predomina en la mayora de las clases de insectos Especificacin de las regiones corporales por interacciones entre regiones citoplasmticas antes de que se produzca la celularizacin del blastodermo. La segmentacin no produce destinos celulares rgidos para ncleos especficos. Tras la celularizacin, se suele producir especificacin condicional y autnoma.