AGAR CALDO UREA Se utiliza para la valoracin de la produccin de ureasa por algunas enterobacterias.

Este medio contiene glucosa peptona urea ! ro"o de #enol. Las bacterias $ue producen ureasa a partir de la urea dan lugar al carbonato de amonio ! el indicador se vuelve ro"o p%rpura. Obs&rvese en la tabla de reacciones bio$u'micas $ue solo el g&nero (roteus da esta reaccin positiva. ) Utilizacin de urea como #uente de carbono. ) La enzima ureasa *idroliza la urea en amoniaco ! an*'drido carbnico ante la variacin del p+ por la alcalinizacin el indicador Ro"o ,enol vira de amarillo claro a ligeramente rosado o rosa me-icano. ) Se utiliza solamente para la deteccin de la ureasa en especies del g&nero (roteus. ) Si los nutrientes suministrados por el e-tracto de levadura se consumen antes $ue la bacteria muestre crecimiento no podr. determinarse con e-actitud su capacidad de *idrolizar urea. ) (ero si es capaz de *idrolizar la urea pero no utilizar el amoniaco como #uente de nitrgeno no se produce crecimiento ! puede dar un #also negativo.

Christensen Medio (Urea Agar Base).

Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad uresica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.

Fundamento

En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osm tico, y el ro!o de fenol es el indicador de p". #lgunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando

amonaco y di $ido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el ro!o de fenol del amarillo al ro!o. En este medio, la fermentaci n de la glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o %lebsiella.

Resultados
Microorganismo Proteus mirabilis #&'' ()*+, %. pneumoniae #&'' +**/*) Escherichia coli #&'' 12311 S. fle$neri #&'' ,1*11 S. typhimurium #&'' ,(*15 Actividad uresica Positiva Positiva d0bil 4egativa 4egativa 4egativa Color del medio -o!o.-osado -o!o.-osado #marillo #marillo #marillo

Limitaciones

.6acterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser %lebsiella, Enterobacter y 'itrobacter, viran al color ro!o.rosado de todo el medio de cultivo luego de varios das de incubaci n. .4o calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone facilmente.

Caractersticas del medio

Medio preparado7 amarillo

S M Medio
Es un medio semis lido destinado a verificar la movilidad, producci n de indol y de sulfuro de hidr geno en un mismo tubo. Es 8til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
El tript fano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser o$idado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un con!unto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de %ovac9s o de Erlich, para originar un compuesto de color ro!o. :as cepas m viles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la punci n de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formaci n de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un p" mayor a +.1.

esultados
Ce!as m"viles# producen turbidez del medio, que se e$tiende mas all de la lnea de siembra. Ce!as inm"viles# el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra. Ce!as S$% !ositivas# ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio. Ce!as S$% negativas# el medio permanece sin cambio de color. Ce!as indol !ositivas# desarrollo de color ro!o luego de agregar el reactivo de %ovac9s o de Erlich. Ce!as indol negativas# sin cambio de color.

Microorganismo

Movilidad

ndol

&roducci"n de cido sul'hdrico . . ; ; ; .

E. coli #&'' 12311 %. pneumoniae #&'' +**/*) P. mirabilis #&'' ()*+, S. typhimurium #&'' ,(*15 S. enteritidis #&'' ,)*+/ S. fle$neri #&'' ,1*11

; . ; ; ; .

; . . . . .

Limitaciones
.En las bacterias aerobias estrictas, que s lo crecen en superficie, la movilidad puede ser difcil de observar. .#lgunas bacterias productoras de melanina como M. morganii, pueden dar un color parduzco, que no debe confundirse con el color negro debido a la producci n de cido sulfhdrico.

Caractersticas del medio

Medio preparado7 mbar.

Simmons Citrato Agar

Medio utilizado para la diferenciaci n de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como 8nica fuente de carbono y energa.

Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoam nico es la 8nica fuente de nitr geno y el citrato de sodio es la 8nica fuente de carbono. #mbos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. :as sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osm tico, y el azul de bromotimol es el indicador de p", que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como 8nica fuente de carbono, usan sales de amonio como 8nica fuente de nitr geno, con la consiguiente producci n de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a trav0s del ciclo del cido tricarbo$lico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, o$alacetato y piruvato. Este 8ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producci n de citrato permeasa.

Resultados
(&ositivo# crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad. ()egativo# el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

Microorganismo %lebsiella pneumoniae #&'' +**/*) S. typhimurium #&'' ,(*15 E. coli #&'' 12311 S. fle$neri #&'' ,1*11

Citrato !ermeasa Positivo Positivo 4egativo 4egativo

Color del medio #zul #zul <erde <erde

Limitaciones

.Si se usa un in culo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarillo.amarronado. Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualizaci n azul de un resultado positivo. .=n culos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos. .'uando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la agu!a de inoculaci n antes de inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. 'ualquier arrastre de materia orgnica puede originar resultados falsos positivos.

*S Agar
Medio universalmente empleado para la diferenciaci n de enterobacterias, en base a la fermentaci n de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producci n de cido sulfhdrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, el e$tracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. :a lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producci n de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones >e+, , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El ro!o de fenol es el indicador de p", y el cloruro de sodio mantiene el balance osm tico. Por fermentaci n de az8cares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador ro!o de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidr geno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

Resultados
,.Pico alcalino?fondo cido @pico ro!o?fondo amarilloA7 el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 1.Pico cido?fondo cido @pico amarillo?fondo amarilloA7 el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y?o sacarosa. ).Pico alcalino?fondo alcalino @pico ro!o?fondo ro!oA7 el microorganismo es no fermentador de az8cares. (.:a presencia de burbu!as, o ruptura del medio de cultivo, indica que el

microorganismo produce gas. 2.El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico. Microorganismo &ico-Fondo &roducci"n de gas ; ; ; . ; . . &roducci"n decido sul'hdrico . . ; ; ; . .

E. coli #&'' 12311 %. pneumoniae #&'' +**/*) P. mirabilis #&'' ()*+, S. typhimurium #&'' ,(*15 S. enteritidis #&'' ,)*+/ S. fle$neri #&'' ,1*11 P. aeruginosa #&'' 1+52) #7 cido %7 alcalino

#?# #?# %?# %?# %?# %?# %?%

Caractersticas del medio

Medio preparado7 ro!o

Agar TSI(Triple azucar hierro)

Determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especfico incorporado en un medio de crecimiento bsico, con produccin o no de gases, junto con la determinacin de posible cido sulfhdrico. El agar TSI es un medio diferencial que determina tanto la fermentacin de los hidratos de carbono la produccin de cido sulfhdrico. !as bacterias pueden utili"ar cualquiera de los sustratos incorporados en el medio ser metaboli"ados, caractersticas que son utili"adas para la diferenciacin de #stas, principalmente para las Enterobacterias.

Este medio contiene lactosa con una concentracin de $% glucosa &.$%, lo cual permite la obser'acin de la fermentacin de uno o de ambos carbohidratos por parte de las bacterias, adems de la produccin de gas de cido sulfhdrico. !a fermentacin es un proceso que se lle'a a cabo en condiciones aerbicas (pico de flauta) anaerbicamente (capa inferior). En el pico de flauta la glucosa (monosacrido) es cataboli"ada inicialmente por medio del ciclo anaerbico de Embden*+e erhof, utili"ado tanto por los aerobios como por los anaerobios para dar cido pir,'ico, posteriormente #ste ser degradado a tra'#s del ciclo de -rebs para dar ./0, 10/ energa. 2or otra parte la lactosa (disacrido) ser primero degradada a sus monosacridos correspondientes (glucosa galactosa).

El medio TSI contiene una cantidad limitante de glucosa una concentracin $& 'eces ma or de lactosa. !as Enterobacterias los fermentadores de glucosa comien"an metaboli"ando este a",car, a que las en"imas que utili"an la glucosa estn presentes como constitu entes de las bacterias, #stas pueden obtener ma or energa por utili"acin del a",car ms simple.

Todos los otros carbohidratos deben ser con'ertidos en glucosa para entrar en el ciclo de Embden*+e erhof. !a utili"acin de la glucosa se reali"a en forma aerobia sobre la estra, donde el o3geno presente act,a como aceptor terminal de electrones en la parte terminal de la columna en condiciones de anaerobiosis. 4na 'e" que una bacteria fermentadora de glucosa ha reducido toda la glucosa disponible a piru'ato, comen"ar a metaboli"ar el piru'ato a tra'#s del ciclo aerbico de -rebs (sobre la estra), formando productos finales cidos. El cido en el medio hace 'irar el amarillo del indicador de p1, rojo de fenol. Entonces, luego de 5 horas de incubacin, la "ona de la estra el fondo del tubo inoculado con un fermentador de glucosa tendrn un color amarillo. Si el microorganismo no fermenta la glucosa, el fondo permanecer rojo (indicando que no ha 'ariacin del p1) o se alcalini"ar (lo que puede 'isuali"arse por un color rojo algo ms intenso que del medio original), demostrando que la bacteria no es miembro de la familia Enterobacteriaceae.

Despu#s de haber agotado la cantidad limitada de glucosa, una bacteria con capacidad para utili"ar la lactosa o sacarosa comen"ar a degradarlas. .omo el medio contiene $& 'eces ms lactosa que glucosa, las bacterias encontrarn sustrato suficiente para continuar la formacin de productos finales cidos. !uego $6 7 08 horas de incubacin todo el medio TSI permanecer de color amarillo. Esta reaccin se denomina cido sobre cido (9:9) el organismo se identifica como un fermentador de lactosa. !a produccin de gas pro'ocar la ruptura de la columna de agar o la empujar hacia la parte superior, de modo que un fermentador de lactosa que produce gas dar una reaccin 9:9 ms gas.

Interpretacin $. ;ojo en pico de flauta< alcalino= degradacin aerbica de glucosa. 9marillo en capa profunda< cido= degradacin anaerbica de la glucosa. 0. 9marillo en pico< cido 9marillo en capa profunda< cido >. ;ojo en pico de flauta< alcalino Sin cambio de color en capa profunda< alcalina. 8. 2roduccin de 10S< precipitado negro ?. 2roduccin de gases< 2roduccin de burbujas, descomposicin del medio, ligera muesca del medio sobre el costado del tubo o despla"amiento del medio del fondo, dejando un espacio libre.

Forma de reporte de resultados.

$. - : 9 (@ermentacin de glucosa solamente) 0. 9 : 9 (@ermentacin de glucosa lactosa) lactosa).

>. - : - (Ao fermentacin de glucosa

!os resultados se escriben siempre siguiendo un patrn. 2rimero la reaccin del pico de flauta seguida por la reaccin de la capa profunda, separadas por una barra.

isina $ierro Agar.

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarbo$ilaci n ? desaminaci n de la lisina y en la producci n de cido sulfhdrico.

Fundamento

En el medio de cultivo, la peptona y el e$tracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. :a glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarbo$ilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la producci n de cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de p", el cual es de color amarillo a p" igual o menor a 2.1, y de color violeta a p" igual o mayor a /.5. Por decarbo$ilaci n de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el vira!e del indicador al color violeta. :a decarbo$ilaci n de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. :os microorganismos que no producen lisina decarbo$ilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un vira!e de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 1( hs de incubaci n se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. :a producci n de sulfuro de hidr geno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formaci n de sulfuro de hierro. :as cepas de los g0neros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un cido alfa.ceto.carb nico, el cual, con la sal de hierro y ba!o la influencia del o$geno forma un color ro!izo en la superficie del medio.

Resultados
.( /ecar0o1ilaci"n de la lisina# .Prueba Positiva7 Pico violeta?fondo violeta. .Prueba 4egativa7 Pico violeta?fondo amarillo. %(/esaminaci"n de la lisina# Pico ro!izo?fondo amarillo. Esto sucede con cepas del g0nero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp. +(&roducci"n de cido sul'hdrico# .Prueba positiva7 Ennegrecimiento del medio @especialmente en el lmite del pico y fondoA Microorganismos Proteus mirabilis #&'' ()*+, Salmonella typhimurium #&'' ,(*15 Salmonella enteritidis #&'' ,)*+/ Providencia spp. 'itrobacter freundii Color en el !ico de Color en la 2nnegrecimiento 'lauta 0ase del tu0o del medio -o!o P8rpura P8rpura -o!o P8rpura #marillo P8rpura P8rpura #marillo #marillo 4egativo Positivo Positivo 4egativo Positivo

Morganella spp.3 EdBarsiella spp. %lebsiella pneumoniae #&'' +**/*) Escherichia coli #&'' 12311

-o!o P8rpura P8rpura P8rpura

#marillo P8rpura P8rpura P8rpura

4egativo Positivo 4egativo 4egativo

3Algunas es!ecies de Morganella s!!.4 !ueden desaminar la lisina.

Caractersticas del medio

Medio preparado7 color violeta.

1.- Lisina descarboxilasa positivo

Descarboxilacin positiva, H2S positivo

.-Lisina descarboxilasa ne!ativa

".- Lisina desaminasa positivo

1.- #itrato positivo

2.- #itrato ne!ativo

F$%D&'(%)*+ '*)ILID&D sim

M 5 Medio.
Medio usado para la identificaci n de Enterobacteriaceae en base a su movilidad, actividad de ornitina decarbo$ilasa y producci n de indol.

Fundamento

Medio de cultivo semis lido, altamente nutritivo debido a la presencia de e$tracto de levadura, peptona y triptena. #dems, la triptena aporta grandes cantidades de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizaci n de la prueba del indol. :a de$trosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la detecci n de la enzima ornitina decarbo$ilasa, el p8rpura de bromocresol es el indicador de p", que en medio alcalino es de color p8rpura y en medio cido es amarillo. Por su composici n, es posible detectar ) reacciones en un mismo tubo7 movilidad, presencia de ornitina decarbo$ilasa e indol. :a movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea de inoculaci n. :a reacci n positiva a la ornitina est dada por un color p8rpura del medio. Cebido a la fermentaci n de la glucosa se reduce el p" produciendo una condici n cida y originando que el indicador de p" p8rpura de bromocresol vire al amarillo. :a presencia de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarbo$ilasa, la cual decarbo$ila la ornitina presente. Por decarbo$ilaci n, se alcaliniza el medio, con el consecuente vira!e del indicador hacia el color p8rpura. El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color ro!o luego de agregar unas gotas de reactivo de %ovac9s o de Erlich, indica un resultado positivo.

Resultados
.(Movilidad# .-esultado positivo7 presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra. .-esultado negativo7 crecimiento solamente en la lnea de siembra. %(5rnitina decar0o1ilasa# .-esultado positivo7 color p8rpura. .-esultado negativo7 color amarillo. # veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio. +(&rue0a del indol# :a prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. .-esultado positivo7 color ro!o al agregar el reactivo revelador.

.-esultado negativo7 el color del reactivo revelador permanece incoloro. amarillento. Microorganismo E. coli #&'' 12311 %. pneumoniae #&'' +**/*) P. mirabilis #&'' ()*+, Crecimiento Movilidad 6ueno 6ueno 6ueno ; . ; ndol ; . . 5rnitina decar0o1ilasa ; . ;

Caractersticas del medio

Medio preparado7 p8rpura transparente a ligeramente opalescente.

MR(6& Medio
Medio utilizado para la realizaci n del ensayo de -o!o de Metilo y <oges ProsDauer. Es particularmente 8til para la clasificaci n de enterobacterias.

Fundamento

En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. :a glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a trav0s de distintas vas metab licas. Seg8n la va utilizada, se originarn productos finales cidos @cido lctico, cido ac0tico, cido f rmicoA, o productos finales neutros @acetil metil carbinolA. Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser reconocida por la adici n de un indicador como ro!o de metilo, para revelar la presencia de productos cidos, y por la adici n de alfa naftol e hidr $ido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros. <oges y ProsDauer, describieron una coloraci n ro!iza que apareca despu0s de adicionar hidr $ido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta coloraci n se debe a la o$idaci n del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un color ro!o.

Revelado de !rue0as 0io7umicas

a(&rue0a del ro8o de metilo# #Eadir unas gotas de una soluci n de ro!o de metilo al *.*(F, observar el color del medio. 0(&rue0a del 6oges &ros9auer# #Eadir *,/ ml de alfa naftol al 2F en alcohol etlico absoluto y *.1 ml de hidr $ido de potasio al (*F a 1.2 ml de cultivo. #gitar vigorosamente el tubo, y de!ar a temperatura ambiente durante ,*.,2 minutos. Gbservar el color de la

superficie del medio.

Resultados
.(&rue0a del ro8o de metilo# Positivo7 color ro!o. 4egativo7 color amarillo. %(&rue0a de 6oges &ros9auer# Positivo7 desarrollo de un color ro!o en pocos minutos despu0s de una completa agitaci n del tubo. 4egativo7 ausencia de color ro!o. Microorganismo E. coli #&'' 12311 %. pneumoniae #&'' +**/*) P. mirabilis #&'' ()*+, S. typhimurium #&'' ,(*15 'itrobacter freundii Enterobacter aerogenes Crecimiento 6ueno 6ueno 6ueno 6ueno 6ueno 6ueno RM ; . ; ; ; . 6& . ; . . . ;

Limitaciones
En algunas cepas positivas para la prueba <P, pueden no desarrollar el color ro!o en la superficie mediante el revelado por la metodologa descripta anteriormente. En estos casos, se recomienda calentar el medio de cultivo para favorecer el desarrollo de color ro!o.

Caractersticas del medio

Medio preparado7 mbar claro, transparente sin precipitado.