EL MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO

CONTENIDO

INTRODUCCION ..................................................................................................... 3

1.OBJETIVOS .......................................................................................................... 4

2. MATERIALES ...................................................................................................... 5

3.PROCEDIMIENTO................................................................................................ 6

4.RESULTADOS Y DISCUCION ............................................................................. 7 5.CONCLUSION19

WEBGRAFIA ......................................................................................................... 20

ANEXOS.21

INTRODUCCION

En las prcticas de laboratorio de Biologa es importante conocer previamente cada instrumento que se va a utilizar; uno de los ms importantes y que con ms frecuencia se lo usara es el microscopio ptico compuesto, conocer su funcionamiento en general y las partes que lo componen, es fundamental para darle un buen uso y correcto manejo, nuestra intencin es que el estudiante aprenda a familiarizarse y pueda realizar adecuadamente las practicas en el laboratorio.

1. OBJETIVOS

Reconocer un instrumento bsico dentro del laboratorio como es el microscopio ptico compuesto. Identificar las partes pticas como mecnicas del microscopio, sus respectivas funciones y uso adecuado. Saber cules son los diferentes cuidados que debemos tener con este instrumento. Conocer algunas de las formulas y procedimientos para encontrar los datos tcnicos de los objetivos.

2. MATERIALES

Microscopio ptico compuesto Regla milimtrica Guas de trabajo Lpiz Bata y gorro

3. PROCEDIMIENTO

OBTENER GUIA DE TRABAJO

ADQUIRIR MICROSCOPIO

OBSERVAR CADA PARTE DEL MICROSCOPIO

ACLARACION DE DATOS POR PARTE DEL DOCENTE Y DEL AUXILIAR DE LABORATORIO

IDENTIFICAR Y TOMAR NOTA DE CADA UNA DE LAS FUNCIONES Y CUIDADOS QUE SE DEBEN TENER

RECONOCER SUS PARTES OPTICAS Y MECANICAS

DESARROLLO DE LA GUIA DE TRABAJO

ENTREGA DEL INFORME

4. RESULTADOS Y DISCUSION

En la segunda prctica de Biologa desarrollamos los siguientes puntos que nos ayudan a reconocer las partes y funciones del Microscopio ptico Compuesto.

PARTES MECANICAS DEL MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO Base y brazo

BRAZO.- llamada tambin asa, es una pieza en forma de C, unida a la base por su parte inferior mediante una bisagra, permitiendo la inclinacin del tubo para mejorar la captacin de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie. Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revlver. Adems sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro. BASE O PIE.- Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio. Sirve como base del microscopio. En los microscopios antiguos tena forma de herradura o de trpode pero en la actualidad suele ser una plataforma rectangular. En l se integra la fuente luminosa y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular.

Figura 1. la flecha indica la base o pie del Microscopio ptico compuesto.

PLATINA: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparacin, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminacin situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la preparacin de delante hacia atrs o de izquierda a derecha y viceversa. En la parte posterior de uno de los laterales se encuentra un nonius que permite fijar las coordenadas de cualquier campo ptico.

Figura 2. La platina y las partes que la integran

Sirve como soporte para las preparaciones microscpicas, o lminas delgadas, (1) que van a ser estudiadas. Est dotada de un carro para sujetar las lminas y frecuentemente dispone de unos tornillos (T) para desplazarlas gradualmente. Mediante unos anillos se puede subir y bajar para buscar el foco (en los microscopios antiguos la platina permanece fija, siendo los objetivos los que se desplazan).

Figura 3. La platina como soporte de las preparaciones microscpicas, o lminas delgadas para ser observadas.

Tornillos macro y micromtricos:

El micrmetro, que tambin es denominado tornillo de Palmer, calibre Palmer o simplemente palmer, es un instrumento de medicin cuyo nombre deriva etimolgicamente de las palabras griegas (micros, pequeo) y o (metrn, medicin); su funcionamiento se basa en un tornillo micromtrico que sirve para valorar el tamao de un objeto con gran precisin, en un rango del orden de centsimas o de milsimas de milmetro, 0,01 mm 0,001 mm (micra) respectivamente. Para proceder con la medicin posee dos extremos que son aproximados mutuamente merced a un tornillo de rosca fina que dispone en su contorno de una escala grabada, la cual puede incorporar un nonio. La longitud mxima mensurable con el micrmetro de exteriores es de 25 mm normalmente. Adems, suele tener un sistema para limitar la torsin mxima del tornillo, necesario pues al ser muy fina la rosca no resulta fcil detectar un exceso de fuerza que pudiera ser causante de una disminucin en la precisin. El tornillo macro mtrico se utiliza para hacer un enfoque grueso rpido de la muestra. Su mecanismo de enfoque tiene un margen de desplazamiento superior a 20 mm. Sirve para enfocar. Y el tornillo micromtrico enfoca la muestra de forma ms precisa y define la imagen.

OTROS TORNILLOS:

Tornillos del Carro: tornillos que engranan con dos cremalleras en un sistema integrado a la platina que permite colocar la preparacin y moverla de acuerdo con las necesidades de estudio. Le dan movimiento hacia delante y hacia atrs, hacia la izquierda y hacia la derecha. Sirve para colocar con precisin el campo visual.

Tornillo de la caja de prismas: se puede aflojar y con esto se consigue que la misma se pueda girar, con la finalidad de permitir a otras personas observar sin mover el microscopio. No se debe arrastrar o golpear el microscopio a la hora de movilizarlo, pues estos prismas de pueden mover se su posicin, la cual es la que permite el enfoque. El tornillo se debe aflojar suavemente, nunca hay que girarlo demasiado pues se puede soltar, basta girarlo un cuarto de vuelta. Siempre es importante que este tornillo quede ajustado cada vez que se mueve la caja de prismas, pues la misma se puede caer. Igualmente, luego de utilizarlo hay que cerciorarse de que el mismo quede ajustado, para evitar que esta parte del microscopio se mueva y se produzca un accidente.

PARTES OPTICAS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

EL OCULAR

Figura 4 . imagen del microscopio binocular

Aumento El poder de aumento de una lente est determinado por el grado de curvatura de su superficie y la distancia focal. En las lentes convexas mientras mayor sea la curvatura, menor ser la distancia focal y mayor ser el aumento. Se ha enunciado anteriormente que el microscopio compuesto aumenta en dos etapas y puesto que una sola lente no es suficiente se deben colocar varias lentes una detrs de la otra, potenciando de esta manera el poder de aumento. El primer juego de lentes, cercano al objeto en estudio, se denomina objetivo y el segundo juego, cercano al ojo del observador se denomina ocular (11). Cada sistema de lentes es capaz de

producir una imagen aumentada cuyo valor se enuncia con la letra x, as que 10x significa que la imagen est aumentada 10 veces. Para conocer en el microscopio compuesto el aumento definitivo de una imagen se aplica la siguiente frmula: AUMENTO TOTAL: Aumento del objetivo x Aumento del ocular

Aunque esta frmula bsica permite obtener el aumento total de una imagen, con las tcnicas de fotografa clsica o fotografa digital y el uso de software de procesamiento de imgenes es posible lograr un aumento suplementario. Para obtener el aumento definitivo habra que considerar los factores de ampliacin que se realizan en la pantalla del computador (para luego imprimirla) o al copiar la foto a papel mediante la tcnica de fotografa clsica. El poder de aumento de un sistema ptico tiene sus lmites y el aumentar las imgenes acarrea prdida de informacin o detalles del objeto estudiado. Esto puede ser resuelto mediante otro principio: La resolucin. Con el microscopio compuesto clsico es posible alcanzar un aumento mximo de 1000x. Esta limitacin ha sido resuelta empleando un haz de electrones en lugar de un rayo de luz visible, y se abri as una nueva era con la microscopa electrnica aplicada al estudio morfolgico. Localizacin y funcin: son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del observador se encuentra situado en la parte superior del tubo. Lleva marcado el nmero de aumentos que posee, su nombre se debe a la cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la imagen formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de aumento van desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y otros que poseen una escala micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad de medir el tamao del objeto observado. Otras caractersticas: Son cilindros huecos provistos de lentes convergentes cuyo aumento se resea en la parte superior de los mismos (normalmente 10X en los microscopios que se utilizarn en esta prctica). Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono o binoculares.Est formado por un sistema de lentes convergentes. Ocular significa que est conectado con

10

los ojos o la visin, y un lente es una pieza de vidrio con lados curvos que concentran los rayos de luz y magnifican imgenes. Por lo tanto, el lente ocular simplemente es por donde ves. Provoca que el contenido de una imagen aparezca magnificada. El lente ocular, tambin conocido como ocular, es parte de un microscopio compuesto por donde un usuario mira para ver una imagen magnificada. Los oculares generalmente ms utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos. Formas Los lentes toma una gran variedad de formas, por ejemplo, hay lentes acsticas y de microondas; algunas de las ltimas se hacen de vidrio o ser en formas fcilmente reconocibles mientras que en otras son bastante ms sutiles en apariencia. En el sentido tradicional, una lente es un sistema ptico formado por dos o ms interfaces refractoras donde al menos una de estas est curvada. Cuando una lente est formada por un elemento, es decir, cuando tiene slo dos superficies refractoras, es una lente simple. La presencia de ms elementos la hace una lente compuesta. Una lente se puede clasificar tambin en delgada o gruesa, bien sea que su grueso efectivo sea despreciable o no. Las lentes que se conocen como convexas, convergentes o positivas, son ms gruesas en el centro y as tienden a disminuir el radio de curvatura de los frentes de onda, es decir, la onda se hace ms convergente conforme atraviesa la lente. Esto es, por supuesto, suponiendo que el ndice de la lente es mayor que el del medio en que est sumergida. Por otro lado, las lentes cncavas, divergentes o negativa!, son ms delgadas en el centro y tienden a avanzar esa porcin del frente de onda hacindola ms divergente de lo que era al entrar

OBJETIVOS

Los objetivos estn considerados los elementos ms importantes en la formacin de la imagen microscpica, ya que estos sistemas de lentes establecen la calidad de la imagen en cuanto a su nitidez y la capacidad que tiene para captar los detalles de la misma (poder de resolucin). Estn constituidos tambin por un juego de lentes, en este caso, convergente y divergente, para eliminar, en la

11

medida de lo posible, una serie de aberraciones que afectaran la calidad de las imgenes formadas. Las lentes se disponen dentro de un soporte o camiseta de metal, en cuyo exterior estn inscritas una serie de anotaciones numricas que indican: el aumento propio del objetivo, la apertura numrica, el tipo de material con que estn tallados las lentes (de fluorita o semiapocromticos) o la calidad que tendrn las imgenes, al anularse en la construccin de los objetivos, algunas aberraciones de las lentes (acromticos, apocromticos, aplanticos etc.) o si se debe usar alguna sustancia de inmersin. Los objetivos se fabrican para ampliar las imgenes de los objetos observados en diversos aumentos; as se tienen objetivos con aumentos propios de 3.5 x, 4x, 10x, 25x, 40x, 65x y 100x. Algunos objetivos tienen alrededor de ellos una lnea coloreada que indica a simple vista el aumento propio.

FIGURA 5. Objetivos de diferentes aumentos (4x, 10x, 40x, y 100x)

Los objetivos estn sostenidos por el REVOLVER, el cual es un componente que gira alrededor de un eje con la finalidad que los objetivos que sostiene coincidan de manera perpendicular con la perforacin central de la platina. En su superficie inferior posee varios agujeros donde se atornillan los objetivos. Entre los ms comunes se encuentran: 1.- La lupa (4 X) que sirve para hacer observaciones a bajo aumento. 2.- El objetivo seco dbil (10 X) que se utiliza para localizar la imagen que se va a observar. 3.- El objetivo seco fuerte (40 X) aumenta la imagen anterior, para poder observar se necesita primero acercar el objetivo al portaobjetos y posteriormente, enfocar el objetivo hasta que aparezca la imagen. 4.- El objetivo de inmersin (100 X) es un lente especial para observar imgenes tan pequeas como las bacterias. Y se requiere del aceite de inmersin para lograr una buena observacin
12

La parte ptica del microscopio es la que determina el nmero de aumentos que presenta la imagen observada .El aumento total que permite un microscopio ptico se calcula multiplicando la magnificacin que producen el objetivo por la que producen los oculares. Num. del objetivo X nm. de ocular = nm. de aumentos

Ejemplo, si estamos usando un objetivo de 40x (aumenta 40 veces) y un ocular de 10x (aumenta 10 veces), el resultado final ser de 400x, es decir, vemos la muestra aumentada 400 veces. Seco fuerte (40 x) x ocular (10 x) = 400 aumentos Usando microscopios pticos avanzados se consiguen unos 1000-1500 aumentos (objetivo de 100x ms oculares de 10x o 15x). Algunos microscopios pticos tienen lentes internas que producen aumentos adicionales que hay que tener en cuenta para calcular la magnificacin de la imagen que se observa. Los objetivos estn sostenidos por el REVOLVER, el cual es un componente que gira alrededor de un eje con la finalidad que los objetivos que sostiene coincidan de manera perpendicular con la perforacin central de la platina. En su superficie inferior posee varios agujeros donde se atornillan los objetivo Caractreristicas tcnicas: La capacidad que tienen los objetivos de formar imgenes en donde se distingan ms detalles del objeto examinado depende de una serie de factores como los que se mencionan a continuacin: ndice de refraccin: Se denomina as a la relacin existente entre la velocidad de la luz en el aire y su velocidad en el medio transparente utilizado. IR= Velocidad de luz en el aire/Velocidad de la luz en el medio ndices de refraccin de una serie de sustancias transparentes que se emplean en microscopa para construir lentes o como sustancias de inmersin: Aire: 1 Agua = 1.3300 Aceite de inmersin = 1.5150 Fluorita = 1.4340 Vidrio (crown) = 1.5200

13

Flint: 1.6600 Angulo de apertura: Es la capacidad de un objetivo de captar los rayos luminosos refractados cuando stos atraviesan un medio transparente. Cuanto mayor sea este ngulo, la lente frontal del objetivo aceptar una mayor cantidad de ellos. Dependiendo del ndice de refraccin del material transparente que forma la lente del condensador, o la interfase (aire o sustancia de inmersin) que exista entre el objeto y la lente frontal del objetivo, el ngulo de apertura ser mayor o menor.

Figura 6. Angulo de apertura

A la mitad del ngulo de apertura se le denomina alfa (), por ejemplo si el ngulo de apertura de un objetivo es de 50, su valor alfa ser de 25. Este valor es importante pues permitir calcular un factor que tiene que ver directamente con la capacidad del objetivo para formar imgenes que muestren ms detalles, es decir mejor resueltas.

Apertura numrica (AN): Es una medida que indica la capacidad del objetivo de poder captar los rayos refractados por las estructuras finas de las cuales est constituido el objeto que se observa. Esta capacidad se traduce en el poder del microscopio de formar imgenes que muestren al observador una serie de detalles del objeto que se est examinando. Cuanto mayor sea la apertura numrica de un objetivo, ste tendr una mayor capacidad de mostrar detalles finos en la imagen que forma. La apertura numrica de un objetivo se calcula empleando la

14

frmula matemtica siguiente: NA = n x sen Donde n representa el ndice de refraccin de la interfase que separa el cubre objeto de la muestra examinada y la lente frontal del objetivo y es la mitad del ngulo de apertura. Por ejemplo en la relacin de objetivos que se muestran se puede comprobar lo afirmado referente al aumento del microscopio: Aumento del objetivo 4x 10x 40x 100x Apertura numerica 0.10 0.22 0.65 1.25 oil

El aumento total ms idneo debe estar comprendido entre 500 (A.N.) y 1000 (A.N.) veces la apertura numrica del objetivo. Oculares de gran potencia favorecen el aumento pero disminuyen la luminosidad, nitidez y las dimensiones del campo visual. Por eso es aconsejable situar el aumento total entre 500 y 1000 veces el valor de A.N. Esta regla est basada en las relaciones entre los poderes separadores del ojo y del microscopio. Aumento de un objetivo. Es la capacidad que posee un objetivo de ampliar la imagen del objeto observado. Se define como la relacin entre el tamao de la imagen y el objeto, en valores lineales (largo y ancho).En la relacin anterior, un objetivo que tiene grabado en la camiseta la cifra 10x aumentar 10 veces el tamao de la imagen del objeto examinado. Poder de resolucin. Se define as la capacidad de un objetivo de poder distinguir la distancia mnima que debe existir entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados. La calidad de una imagen, en la que se observe la claridad, nitidez y la riqueza de detalles, depende del poder de resolucin del objetivo. El poder de resolucin (PR) de un objetivo depende de la longitud de onda ( ) del rayo luminoso utilizado y la apertura numrica del sistema ptico del objetivo. El PR (d) se expresa mediante la frmula de Abbe: a) d = (1.22x ) / 2(NA) b) d = (1.11x ) / 2(NA objetivo +NA condensador)

15

c) d = (0.61x ) / NA condensador)

c) d = (0.61x ) / (NA objetivo + NA

La cifra 1.22/2 0.61 es la constante de Abbe. Esto significa que si empleamos un objetivo de AN = 1.25 con una longitud de onda de 560nm, el poder de resolucin ser de 273nm, la cifra obtenida nos indica que el objetivo ser capaz de distinguir o resolver la imagen de dos puntos que en el objeto estn separados entre s por 273nm. Si la separacin de ellos es menor a esta cifra el objetivo no podr distinguirlos como dos puntos separados. La cifra resultante de aplicar la frmula se denomina lmite de resolucin. Un clculo ms exacto del poder de resolucin se obtiene cuando en la frmula se aade la apertura numrica del condensador, tal como se observa en la frmula (b). Cuando se efecta correctamente la iluminacin del objeto utilizando (adecuar la distancia apropiada del condensador y la regulacin de captacin de la luz abriendo o cerrando el diafragma iris del mismo) la apertura numrica del condensador, la imagen que forma el objetivo logra mostrar el mximo poder de resolucin. Por ejemplo si se emplea el mismo objetivo del caso anterior (de AN = 1.25), el mismo tipo de luz ( = 560nm) y se ilumina la muestra con un condensador de AN = 80 es posible comprobar lo mencionado anteriormente .Al realizar los clculos correspondientes resulta que el poder de resolucin del objetivo, sin tomar en cuenta la AN del condensador, es de 273nm. En cambio cuando se incluye la apertura numrica del condensador el resultado es de 166nm. Estas cifras nos demuestran que cuando se realiza la iluminacin del objeto mediante el uso adecuado del condensador, la capacidad del objetivo de resolver detalles mejora casi en un 60% ms. El mximo poder de resolucin que se puede obtener es de 0.2 m aproximadamente, para lo cual se requiere que el microscopio proporcione una imagen de un aumento total de 1000x a 1400x. DISTANCIA DE TRBAJO EN EL MICROSCOPIO: La distancia de trabajo define la distancia mxima en la cual el objetivo es capaz de enfocar y se mide desde el cubre objetos/interfase del espcimen al lente frontal del objetivo en el caso de los objetivos con correccin de cubre objetos o medido desde la superficie frontal del objetivo en otros tipos.

16

La distancia de trabajo (D. T.) de un objetivo est grabada en el barril del objetivo junto con otras especificaciones. En general, la distancia de trabajo se hace ms pequea conforme la A. N. incrementa. La distancia de trabajo tambin se hace ms pequea con el poder de aumento del objetivo. Objetivo (distancia focal en mm) 50 25 16 8 4 2 Aumento Objetivo (para L=16 cm) 3,2 6,4 10 20 40 80 Aumento total Ocular x5 16 32 50 100 200 400 Ocular x10 32 64 100 200 400 800 Ocular x15 48 96 150 300 600 1200 Distancia de trabajo (mm) 30 14 8 2 0,5 0,2

17

5. CONCLUSION Con la prctica y entrega de informe aprendimos acerca de las partes y funciones el microscopio ptico compuesto y su respectivo mantenimiento lo que nos facilitara realizar nuestros trabajos en el laboratorio.

18

WEBGRAFIA

Disponible en internet en: http://www.mitecnologico.com/Main/TornilloMicrometrico http://micropartes.blogspot.com/ ww.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal%20de%20Recursos%20en%20Li nea/Apuntes/2_microscopia.pdf

http://www.ehowenespanol.com/lente-ocular-microscopio-sobre_116876/ http://micropartes.blogspot.com/ http://www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal%20de%20Recursos%20en%20Linea/Ap untes/2_microscopia.pdf

19