Esteban Osorio Cadavid, PhD.

Gentica General

LIGAMIENTO: Cuando dos o ms genes se encuentran en el mismo cromosoma (autosoma o alosoma) se dice que estn ligados.

1.

Los genes que estn en diferentes cromosomas, se distribuyen en los gametos de manera independiente uno del otro (Ley de distribucin independiente de Mendel).

Retrocruce de prueba: Proporcin 1:1:1:1

AaBb Ab, AB, aB, ab aabb ab

Progenitores Gametos F1

1/4 AaBb, 1/4 Aabb, 1/4 aaBb, 1/4 aabb

2. Los genes que estn en el mismo cromosoma, tienden a permanecer juntos durante la formacin de los gametos. 3. Los resultados de los cruces de prueba de individuos dihbridos producen resultados diferentes, dependiendo de si los genes se encuentran ligados o en cromosomas diferentes

En la progenie de un retrocruce dihbrido, las desviaciones importantes de una proporcin 1:1:1:1 deben considerarse como evidencia de ligamiento.

ENTRECRUZAMIENTO: durante la meiosis, cada cromosoma se replica y forma dos cromtidas hermanas idnticas, los cromosomas homlogos se aparean (sinapsis) durante la Profase I y se produce el entrecruzamiento entre las cromtidas no hermanas.

Entrecruzamiento visto mediante microscopa electrnica

Entrecruzamiento visto mediante microscopa electrnica

El entrecruzamiento incluye la ruptura y unin de slo dos de las cuatro cromtidas, en cualquier punto dado de los cromosomas.

Dos productos meiticos (AB y ab) tienen los genes ligados, en la misma forma en que estuvieron en los cromosomas parentales. Se originan de cromtidas que, no participaron en el entrecruzamiento y son denominadas: No recombinantes o tipo parental. Dos productos meiticos (Ab y aB) resultan del entrecruzamiento, recombinando las relaciones de ligamiento originales de los progenitores en las nuevas formas llamadas: Recombinantes o tipo recombinante.

Fase de Acoplamiento: si los dos alelos dominantes (o de tipo silvestre) estn en un cromosoma y los dos recesivos (o mutantes) estn en el otro cromosoma homlogo. (AB/ab) (posicin cis)

Fase de repulsin: Cuando el alelo dominante de un locus y el recesivo del otro ocupan el mismo cromosoma (Ab/aB) (posicin trans)

Progenitor en Acoplamiento: AB/ab

Gametos: Parentales: AB, ab Recombinantes Ab, aB Progenitor en Repulsin: Ab/aB

Gametos: Parentales: Ab, Ab Recombinantes AB, ab

Un par de cromosomas homlogos en sinapsis (por lo que son Bivalentes) consiste de cuatro cromtidas y se llama al conjunto como una ttrada. Cada ttrada, experimenta al menos un quiasma en algn punto de su longitud. A mayor longitud de un cromosoma, mayor ser el nmero de quiasmas que potencialmente, se pueden llegar a formar

Cada tipo de cromosoma, dentro de una especie, tiene un nmero caracterstico o promedio de quiasmas. La frecuencia con la que se produce un quiasma entre dos loci genticos, tiene una probabilidad caracterstica o promedio.

Mientras ms alejados se encuentren dos genes en un cromosoma, mayor es la probabilidad que se produzca un quiasma entre ellos.

Las probabilidades de quiasmas, son tiles en la prediccin de las proporciones de gametos parentales y recombinantes, que se espera se formen a partir de un genotipo dado. El porcentaje de gametos con genes entrecruzados (Recombinantes), formados a partir de un genotipo dado, es un reflejo directo de la frecuencia con la cual se forman quiasmas, entre los genes en cuestin. Solo, cuando se forma entrecruzamiento entre los loci genticos bajo consideracin, se podr detectar la recombinacin.

Cuando se forma un quiasma, entre dos loci gnicos, solo la mitad de los productos meiticos, ser de tipo recombinante.

% Quiasmas = 2 (% de entrecruzamiento)
% Entrecruzamiento = (% de Quiasmas)

Si se forma un quiasma entre los loci de los genes A y B, en el 30% de las ttradas, de un individuo con genotipo AB/ab. Entonces: El 15% de los gametos formados ser de tipo recombinante (Ab/aB) y el 85% de los gametos que se producen, sern de tipo parental (AB/ab).

La progenie de un retrocruce de prueba (Ab/aB) x ab/ab se encuentra en las siguientes proporciones: 40% Ab/ab 10% AB/ab 40% aB/ab 10% ab/ab

Los genotipos AB/ab y ab/ab fueron producto de la unin de gametos recombinantes. El 20% de todos los gametos formados por el progenitor dihbrido, eran de tipo recombinante. Y, se ha producido un quiasma entre estos dos loci, en un 40% de todas las ttradas formadas durante la fase de Profase I de la meiosis.

Cuando se presentan entrecruzamientos dobles, entre dos marcadores genticos, los productos meiticos (gametos) cuando se detectan, a travs de los fenotipos de la progenie, son solo de tipo parental.

Para detectar estos entrecruzamientos dobles, debe usarse un tercer locus, por ejemplo el locus (C), localizado entre los marcadores A y B.

Si existe la probabilidad de que se forme un entrecruzamiento entre los loci A y C, y otra probabilidad independiente de que se genere un entrecruzamiento entre los loci C y B, entonces la probabilidad de un entrecruzamiento doble, entre lo genes A y C es el producto de las dos probabilidades independientes.

Si ocurre un entrecruzamiento entre A y C en el 20% de las ttradas, y entre los loci C y B en el 10% de las ttradas, de un individuo de genotipo ACB/acb, entonces se esperar que: Solamente el 2% (0,2 x 0,1=0.02) de los gametos formados, sean recombinantes dobles AcB/aCb.

Si dos loci gnicos se encuentran tan separados en el cromosoma que, la probabilidad de que se forme un quiasma entre ellos es el 100%, entonces el 50% de los gametos ser de tipo parental (No recombinante) y el otro 50% de los gametos producidos, ser de tipo recombinante (Recombinante).

Cuando a estos individuos dihbridos se les realiza un retrocruce de prueba, se espera que produzcan progenie en una proporcin 1:1:1:1 (Como se esperara para los genes que estn en cromosomas diferentes). (Cruce dihbrido de la gentica mendeliana) La recombinacin entre dos genes ligados no puede exceder al 50% an cuando se presenten entrecruzamientos mltiples entre ellos.

1.

Los lugares donde se encuentran los genes en los cromosomas (loci), estn colocados en orden lineal. Hay dos aspectos principales que son el objetivo fundamental para el mapeo gentico:
1. La determinacin del orden lineal en el cual estn arregladas las unidades genticas, unas respecto a otras (orden de los genes). y 2. La determinacin de las distancias relativas entre las unidades genticas (distancia de los genes).

2.

La unidad de distancia de mapa (Centimorgan) equivale a 1% de entrecruzamiento

Si un individuo con el genotipo Ab/aB , produce 8% de cada uno de los gametos recombinantes (AB y ab), entonces se estima que, la distancia entre los genes A y B en el cromosoma, es de 16 unidades de mapa.

Si la distancia de mapa entre los loci B y C es de 12 unidades de mapa, entonces se esperara que, el 12% de los gametos producidos en un individuo con genotipo BC/bc, sean de tipo recombinante: 6% Bc y 6% bC.

Retrocruzamiento de prueba:
Genotipos P Gametos P F1 AA BB aa bb

AB
Aa Bb Gametos AB Ab aB ab

ab
X aa bb
Retrocruza miento de prueba

ab
Aa Bb Aa bb aa Bb aa bb Genotipos A- BA- bb aa Baa bb Fenotipos

AC/ac 37% AaCc AC/ac Aacc aC/ac aaCc 37% aacc

aacc 13% Aacc 13% aaCc

Se produjeron por gametos recombinantes del progenitor dihbrido

El 26 % de todos los gametos (13 + 13) son de tipo recombinante y la distancia entre los loci A y C se estima en 26 unidades de mapa

ABC/abc
36% ABC/abc 9% Abc/abc

abc/abc
4% Abc/abc 1% AbC/abc

36% abc/abc
72% Tipo parental

9% aBC/abc 18% Tipo Recombinantes sencillos entre A y B (Regin I)

4% abC/abc

1% aBc/abc

8% Tipo 2% Recombinantes Recombinantes sencillos entre B dobles y C (Regin II)

Distancia A-B = 18% + 2% = 20% = 20 Unidades de mapa

Distancia B-C = 8% + 2% = 10% = 10 Unidades de mapa Distancia A-C = 30 Unidades de mapa (Cuando se detectan los entrecruzamientos dobles). 26 Unidades de mapa (cuando no se detectan los entrecruzamientos dobles).

La suma de las distancias de mapa, permite ubicar a los genes, en su orden lineal correcto. Si los entrecruzamientos dobles no se presentan, las distancias de mapa pueden ser tratadas como unidades completamente aditivas.

Cuando conocemos las distancias: A-B = 12, B-C = 7, y A-C= 5, Cul es el orden correcto de lo genes en el cromosoma?

1.

Las Relaciones de ligamiento en un retrocruce de prueba de dos puntos, nos permite saber si los genes que estamos estudiando se encuentran en Fase de acoplamiento o en Fase de Repulsin. Debemos tener en cuenta que:

1. Las combinaciones de tipo parental tendern a permanecer juntas en la mayora de la progenie. 2. Las de tipos de recombinantes sern siempre las clases menos frecuentes.

Progenitor dihbrido Aa, Bb

Progenitor recesivo ab/ab (Relaciones de ligamiento desconocidas) Tipos parentales

F1 42% AaBb 42% aabb

8% Aabb 8% aaBb

Tipos recombinantes

A y B deben de haber estado en un cromosoma del progenitor dihbrido, y a y b en el otro cromosoma. Por lo tanto, los dos genes se ubican en los cromosomas homlogos en fase de acoplamiento (AB/ab).

Progenitor dihbrido

Aa, Bb (Relaciones de ligamiento desconocidas) F1 42% Aabb 42% aaBb Tipos parentales 8% AaBb 8% aabb

Progenitor del retrocruce ab/ab

Tipos recombinantes

A y b deben de haber estado en un cromosoma del progenitor dihbrido, y a y B en el otro cromosoma, en fase de repulsin (Ab/aB).

b. Relaciones de ligamiento en un retrocruce de prueba de tres puntos. En un retrocruce de prueba que incluye 3 genes ligados, se espera que:
1. 2. 3.

Los gametos de tipo parental, sean los ms frecuentes Los recombinantes dobles, los menos frecuentes El orden de los genes se determina manipulando las combinaciones parentales, para que queden en el orden adecuado, para producir los recombinantes dobles.

Progenitor trihbrido Aa, Bb, Cc

Progenitor del retrocruce abc/abc

Relaciones de ligamiento desconocidas

36% Aabbcc
36% aaBbCc 72%

9% aabbCc
9% AaBbcc 18%

4% AabbCc
4% aaBbcc 8%

1% AaBbCc
1% aabbcc 2%

El grupo del 72% se compone de los gametos de tipo parental debido a que los no recombinantes Frecuencia ms alta.

El progenitor trihbrido debi tener:

A, b, c en un cromosoma, y a, B, C en el otro cromosoma No conocemos el orden

Cul es el locus intermedio?

CASO 1: Pueden producirse los gametos recombinantes dobles, menos frecuentes (2% de la F1), si el locus B es el intermedio? Nota: Existe un error en esta figura, el gen C est equivocado
x abc/abc = ABc/abc

abC/abC

No son gametos recombinantes dobles. B No es intermedio

CASO 2: Pueden producirse los gametos recombinantes dobles, menos frecuentes (2% de la F1), si el locus C es el intermedio?

x acb/acb = ACb/acb acB/aCb

No son gametos recombinantes dobles. C No est en el medio

CASO 3: Pueden producirse los gametos recombinantes dobles menos frecuentes (2% de la F1) si el locus A es el intermedio?

x bac/bac = bac/bac BAC/bac

Como estos si son los gametos recombinantes dobles, entonces el Locus A est en el medio

Ahora que se conoce el orden de los genes y las relaciones de ligamiento parentales, entonces, puede deducirse los recombinantes sencillos; se designa a la distancia B-A como la regin I y a la distancia A-C como la regin II.

x bac/bac = baC/bac

BAc/bac

x bac/bac = bAC/bac Bac/bac

1.

Genes ligados en etapa de acoplamiento en la P1 y en la F1

P
F1

(AB) (AB)
(AB) (ab) (AB) (ab) (AB) (ab ) 40% (Ab) (ab ) 10% x

(ab) (ab)

Retrocruce

(ab) (ab ) (aB) (ab ) 10% (ab) (ab ) 40%

2. Genes ligados en etapa de repulsin en la P1 y en la F1

P F1 Retrocruce (Ab) (aB) (AB) (ab ) 10% (Ab) (ab ) 40% (Ab) (aB) X (Ab) (aB) x (ab) (ab ) (ab) (ab ) 10% (aB) (Ab)

(aB) (ab ) 40%

Cuando hay segregacin independiente de genes debemos esperar iguales proporciones de cada uno de los fenotipos producidos por el dihbrido en retrocruce de prueba.
Fenotipos parentales y fenotipos recombinantes estn en proporcin 1:1

Se cruz un toro Angus negro acrneo (NNCC) con una manada de vacas Angus rojas con cuernos (nncc). De la F1 de este cruce se tom un Toro negro Acorneo y se retrocruz con una manada de vacas rojas con cuernos (NnCn x nncc) y se obtuvo:

Negras Acrneas

NnCc

24

Parental

Negras Con Cuernos Rojas Acrneas

Roja con Cuernos

Nncc nnCc
nncc

27 Recombinantes 22
Parental 25

Una prueba chi cuadrada nos indica que los genes para el color del pelaje y la presencia o ausencia de cuernos se segregarn independientemente.
Combinaciones parentales (24 + 25) = 49 Combinaciones recombinantes (27 + 22) = 49
(1:1)

La proporcin o porcentaje de intercambio de genes se mantiene ms o menos constante para distintos grupos de genes ligados. La proporcin o porcentaje de intercambio de genes, permite al genetista estimar la distancia que hay entre esos genes en el cromosoma.

Valor Prctico seleccin mejoramiento La cantidad del intercambio de genes nunca sucede en ms del 50% de los gametos, la incidencia de ligamiento siempre exceder del 50% % de intercambio = 0 - 50% % de ligamiento = 50 - 100% Macho de Drosophila y hembra de Bombix mori

En tomates, las plantas son altas (T_) o enanas (tt); los tomates tienen la piel lisa (L_) o aterciopelada (ll). Los genes T y L estn ligados con cierto grado de intercambio.

El retrocruce (TLtl x tltl) produce los siguientes fenotipos:

Planta alta, Tomate piel lisa (TL)(tl) 194 parental 9 7 190 parental 400 Intercambio

Planta alta, Tomate piel aterciopelada (Tl)(tl) Planta enana, Tomate piel lisa Planta enana, Tomate piel aterciopelado (tl)(tl) Total individuos observados =

(tL)(tl)

97 % de intercambio = x100 4% 400

% de ligamiento = 100% - 4% = 96%

De acuerdo con Morgan, la cantidad de intercambio entre dos pares de alelos establece la distancia entre ellos medida en unidades de mapa. Una unidad de mapa = 1 centimorgan = 1% de entrecruzamiento Una vez determinada la distancia entre dos genes ligado, esta se puede usar como un punto de partida para determinar la localizacin de otros genes en el cromosoma.

Un retrocruce de prueba revel que los genes A y B estn ligados con un 5% de intercambio. Otro retrocruce revela que los genes A y C estn ligados con un 7% de intercambio. Podemos concluir que los 3 genes estn en el mismo cromosoma en orden lineal, En qu orden?

1.

A B C

2.

5%
7%

B A C

5%

7%

Para determinar el orden correcto hay que determinar el porcentaje de intercambio entre B y C mediante otro retrocruce de prueba.
12% de intercambio entre B y C Orden B A C

1.

2.

2% de intercambio entre B y C Orden A B C

El retrocruce trihbrido nos permite determinar en un solo experimento la localizacin de tres genes ligados. Ejemplo: En la Universidad de Cornell, un grupo de investigadores, estudiando ligamiento autonmico en el maz, obtuvo informacin de un retrocruce entre un trihbrido normal y el triplemente homocigoto para los siguientes recesivos

V_ verde Normal
v Verde Plido

M_ Verde mate E_ Fecundidad normal

m_ brillante e_ esterilidad variable

V y M simbolizan el color verde natural mate en plantas de maz, E fecundidad.

Fenotipos
Mate, Verdes, Fecundas Brillosas, verdes estriles Mate, verdes, estriles Mate, verde plido, estriles Brillosa, verde plido, estriles Brillosas, verdes, fecundas

Genotipos
(MVE) (mve) (mVe) (mve) (MVe) (mve) (Mve) (mve) (mve) (mve) (mVE) (mve)

Cantidad
235 62 40 4 270 7

Brillosas, verde plido, fecundas (mvE) (mve) Mate, verde plido, fecundas (MvE)(mve)
Totales

48 60
726

Para poder determinar los porcentajes de intercambio y, por ende, la localizacin de estos tres genes en el cromosoma, debemos:

1. Determinar la cantidad de plantas producto del retrocruce que tienen los dos fenotipos parentales (MVE)(mve) (mve)(mve) 235 = 270
505 plantas tienen las combinaciones parentales de genes

2.

Determinar la cantidad de plantas cuyo fenotipo se debe al doble intercambio de segmentos correspondientes entre cromtidas de cromosomas homlogos.

(Mve)(mve) (mVE)(mve)

4 7

= 11 plantas tienen el fenotipo

de doble recombinante

3. Determinar el orden de estos 3 genes en el par de cromosomas bivalentes

Asumimos que el doble intercambio debe afectar el par de alelos que queda localizado en medio de los otros dos pares de alelos en los Bivalentes.

Si se traslada el gen m, en la cromtida 1, al lugar del gen M, en la cromtida 2, los genes quedan ordenados en la misma secuencia que en las cromtidas parentales. El gen M queda en el medio.

4. Cmo el gen M est localizado en el medio, determinamos que el orden de los genes en el pedazo del cromosoma donde se localizan es:

5. Podemos ahora reescribir de nuevo la tabla para determinar el porcentaje de intercambio simple y entre que genes es que ocurre.
Genotipos (VME) (mve) (vme) (mve) (Vme) (mve) (vME) (mve) (VMe) (mve) (vmE) (mve) (VmE) (mve) (vMe) (mve) Cantidad Porcentaje 235 270 62 60 40 48 7 4 726 100% 1,52 intercambio doble V-M y M-E 12,12 Intercambio simple M-E 16,8 Intercambio simple V-M 69,56 Tipos parentales

6. para Determinar el porcentaje de intercambio entre dos pares de genes se calcula as:
% de fenotipos con intercambio simple + % de fenotipos con intercambio doble % de intercambio = total entre dos pares de alelos

16.80 % + 1.52 % = 18.32% = Intercambio total entre los genes V y M 12.12 % + 1.52 % = 13.64% = Intercambio total entre los genes M y E

7. Ahora podemos construir el mapa de la porcin del cromosoma donde se encuentran estos 3 genes, as:

8.

El porcentaje de intercambio entre los dos genes ms distantes se obtiene sumando los porcentajes de intercambio simple entre los genes contiguos.

% de intercambio entre V y E = 16.80 (Intercambio simple entre V y M) + 12.12 (Intercambio simple entre M y E) = 28.92%
Distancia de Mapa entre V y M= 16.80 + 12.12 = 28.92 Uma

Por lo tanto, el mapa del pedazo de cromosoma donde estn localizados esos 3 genes lo complementamos como sigue: