CURSO: Estructura, Funcin Celular y Tisular II DOCENTES : Dr.

, VIOLETA MORIN

TEMA: Soluciones buffer

INTEGRANTE DEL GRUPO: MANCHAY SI !A, Milton D.

FECHA DE EJECUCIN: Martes, "# $e Mayo FECHA DE ENTREGA: Martes, %& $e Mayo

2009

SOLUCIONES BUFFER. I. OBJETIVOS.

El ob'eti(o $e esta )r*ctica es se+alar al estu$iante una $e las t,cnicas ele-entales utili.a$as en el laboratorio bio/u0-ico y cl0nico, )ara $eter-inacin $el -etabolis-o 10$rico y -inerales.

II.

MARCO TERICO.

Soluciones ta-)n o buffer El buen funciona-iento $e los siste-as biol2icos re/uiere $e un control estricto $el )H /ue ro$ea a estos siste-as ya /ue los )rocesos -etablicos son inacti(os fuera $e ciertos l0-ites $e aci$e. o alcalini$a$. El saber )re)arar un buffer es i-)ortante $ebi$o a /ue su )ro)ie$a$ $e -antener casi in(ariable el )H $e una solucin los 1ace i-)rescin$ibles en el estu$io $e reacciones en.i-*ticas 3in (itro3. Se )resu-e /ue la teor0a es conoci$a )or el estu$iante 1abien$o si$o re(isa$a en el curso $e f0sica o /u0-ica. En 2eneral 1asta la ecuacin $e Hen$erson Hasselbac1.

pH = pk a + lo2

sal cido

Esta ecuacin )er-ite calcular la relacin -olar entre la sal 4ace)tor $e )rotones5 y el *ci$o 4$ona$or $e )rotones5 )ara un )H y )6 $eter-ina$os.

SOLUCIONES AMORTIGUADORAS Soluciones amortiguadoras son a/uellas soluciones cuya concentracin $e 1i$ro2eniones (ar0a -uy )oco al a+a$irles *ci$os o bases fuertes. El ob'eto $e su e-)leo, tanto en t,cnicas $e laboratorio co-o en la finali$a$ funcional $el )las-a, es )recisa-ente i-)e$ir o a-orti2uar las (ariaciones $e )H y, )or eso, suele $ecirse /ue sir(en )ara -antener constante el )H. os -as sencillos est*n for-a$os )or -e.clas binarias $e un *ci$o $,bil y una sal $el -is-o *ci$o con base fuerte, )or e'e-)lo, una -e.cla $e *ci$o ac,tico y acetato $e so$io7 o bien una base $,bil y la sal $e esta base con un *ci$o fuerte, )or e'e-)lo, a-on0aco y cloruro $e a-onio.

III. 1.-

8eali.acin $e la )r*ctica. a5 9re)arar :; -l. De una solucin ;.;%M $e buffer fosfato )H <.: a )artir $e: =na solucin ;."M. $e Na%H9>? 4fosfato $is$ico5 =na solucin $e ;.;:M. $e NaH%H9>? 4fosfato -onos$ico5 b5 Me$ir el )H. c5 A+a$ir "-l. HCl 4;.;:N5, -e$ir el )H nue(a-ente. $5 Me$ir el )H $e :; -l. $e H%> $estila$a. e5 A+a$ir "-l. HCl 4;.;:N5. f5 Me$ir el )H nue(a-ente

2.a5 9re)arar :;-l. De una solucin "@:;M $e buffer fosfato )H <.: a )artir $e: =na solucin ;." M. $e NaH%H9>? 4fosfato -onos$ico5 =na solucin ;." N $e Na 4>H5 b5 Me$ir el )H. c5 A+a$ir "-l. HCl 4;.;:N5, -e$ir el )H nue(a-ente. $5 Me$ir el )H $e :; -l. De H%> $estila$a. e5 A+a$ir "-l. HCl 4;.;:N5. a5 Me$ir el )H nue(a-ente 3. a5 9re)arar :; -l. $e una solucin ;.;%M. $e buffer fosfato )H <.: a )artir $e: =na solucin ;."M. $e Na%H9>? 4fosfato $is$ico5 =na solucin ;.;:N $e HCl b5 Me$ir el )H. c5 A+a$ir "-l. Na 4;H5, -e$ir el )H nue(a-ente. $5 Me$ir el )H $e :; -l. De H%> $estila$a. e5 A+a$ir "-l. $e Na 4>H5 ;."N. f5 Me$ir el )H nue(a-ente

CUESTIONARIO 1.

a) Las relaciones involucradas en c/ experimento.

En 0 ML. DE UNA SOLUCIN 0.02 M. BUFFER FOSFATO PH !. : CONCENTRACIN DE LA AL B C D.A: B"; E? M BCD.A: -l. 4canti$a$ $e sal a colocar5

CONCENTRACIN DE !CIDO
B C".&: B ";? M BC A.A -l 4canti$a$ $e *ci$o a colocar5 D.A: -l $e sal -l $e *ci$o AD.A: -l $e a2ua $estila$a

En 0 ML DE UNA SOLUCIN 0.02 M DE BUFFER FOSFATO PH !.

CONCENTRACIN DE Na"O#) B C D.A: B"; E? M BCD.A: -l4canti$a$ $e Na4>H5 a colocar5 D.A: -l $e Na 4>H5 "; -l $e *ci$o A".&: -l $e a2ua $estila$a En 0 ML DE UNA SOLUCIN 0.02 DE BUFFER FOSFATO PH "; -l $e sal -l $e HC

A&.< $e a2ua $estila$a

$) Los c%lculos e&ectuados para la determinaci'n de las cantidades di&erentes soluciones a emplearse a cada caso.
En 0 ML. DE UNA SOLUCIN 0.02 M. BUFFER FOSFATO PH !. :

pH = pk a + lo2

sal cido

PKa = 6.8

7.5 = 6.8 + Log sal cido

Log Sal = 0.7 cido

Log

a 0.2 a a

= 0.7

= 5.01187

0.02 a

a = 0.016667

Concentracin de la sal

;.;"&&&< FFFFFFFFFF B FFFFFFFFFF

";;;-l :; -l

;."M

FFFFFFFFFF

";;;-l B

D.A:G ";?M FFFFFFFFFFFF

B C D.A: B"; E? M "#$.3 %& 'C(n)*+(+ +, -(& ( ./&/.(01

Canti$a$ -olarF Canti$a$ salC canti$a$ *ci$o

;,;% E a C canti$a$ $e *ci$o

;,;% F;,;"&<C canti$a$ $e aci$o

020033# .(n)*+(+ +, 3.*+/

;.;;AAM HHHHHH. ";;; -l B HHHH.. :; -l

;.;:M ".&: B ";?M

HHHH.. HHHH..

";;;-l B

B C".&: B ";? M

"# 3.3 %& '.(n)*+(+ +, (.*+/ ( ./&/.(01

En 0 ML DE UNA SOLUCIN 0.02 M DE BUFFER FOSFATO PH !. 0.02M---------------X --------1000ml 50 ml 0.1M 0.001M -----1000ml

-------------- X

X = 0.001 ml

X =10 ml (Cantidad de acido a colocar)

&

7.5= 6.8 + Log sal cido

Log sal cido

0.7

Log

a 0.02 - a

0.7

a 0.02-

= 5.01187

a = 0.01667 M

./n.,n)0(.*4n +, &( -(&

0.016667 ----------- 1000ml X ---------- 50 ml

0.1M ------------8.!5" 10#M

1000ml

---------- B

B C D.A: B"; E? M

"#$.3 %& ' C(n)*+(+ +, N('OH1 ( ./&/.(01

En 0 ML DE UNA SOLUCIN 0.02 DE BUFFER FOSFATO PH

;.;%M B

FFFFFFF

";;;-l

;."M ;.;;"M

FFFFFFFFFFF FFFFFFFFFFFFF

";;;-l B

FFFFFFFFFFFFFF :; -l

<

X = 0.001 ml

( ) *+ ml "cantidad de sal a usar)

<.: C &.D I o2 Sal Jci$o

o2 Sal C ;.< Jci$o

o2

a ;.;%Fa

C ;.<

a ;.;%Fa

C :.;""D<

a C ;.;"&&< M

./n.,n)0(.*4n +, &( -(&

;.;% F aC;.;;AA M

./n.,n)0(.*4n 3.*+/

;.;;AA M FFFFFFFFFFFFF ";;;-l B FFFFFFFFFFF :; -l

;."M

FFFFFFFFFFFFFFFF ";;;-l

;.;;"M FFFFFFFFFFFF B

B C ".&: G ";? M

" # 3.3 %& '.(n)*+(+ +, HC& ( ./&/.(01

c) Las lecturas o$tenidas en el potenci'metro.

EL 5H +,& HO -* 50,-,n)/ .(%6*/- 6(-)(n), n/)/0*/- -,78n &( ,-.(&( +, 5H 9 ,-)(%/- :-(n+/: D

8o'o Naran'a A-arillo !er$e A.ul Kn$i2o !ioleta

? : & < D # ";

Al inicio el H> )resentaba una tonali$a$ -e$ia a-arilla / se acercaba al e/uilibrio, )ero cuan$o se 1an i$o a2re2an$o Na 4>H5 o HCl res)ecti(a-ente a 1abi$o una (ariacin notoria y )or consi2uiente un ca-bio $e )H.

H> y su )H nor-al

H> y el ca-bio $e )H al a2re2ar HCl se aci$ifica.

d) como reaccionaron las soluciones el - cam$i' el p#.

H> y el ca-bio $e )H al a2re2ar Na>H, alcalini.a. $u&&er al se a,adir sales

Na"O#) o #

Se2Ln lo obser(a$o en la )r*ctica $e laboratorio, al co-)arar co-o reaccionaban $os soluciones una $e las cuales era un buffer, -ientras /ue la otra no lo era lue2o $e a2re2arles: (1. A& AGREGARLES N('OH1: a solucin buffer no (ariar* su 91 o lo 1ace $e una -anera -uy li2era -antenien$o su color (er$e 4neutro5, -ientras /ue la se2un$a solucin en lo referente a su 91 se tornar* -*s b*sica. 61. A& AGREGARLES HC&: a solucin buffer no (ariar* su 91 o lo 1ar* )ero $e una -anera -uy li2era -antenien$o su color (er$e 4neutro5, -ientras /ue la se2un$a solucin en lo referente a su 91 se tornar* -*s *ci$a ca-bian$o )ro2resi(a-ente $e color (er$e a a.ul.

$C%&'

($)L$ &* +, #

1cido 2os23rico

C'-.($-(* &* %'-%/$C%0-. ,1=1.1" 10-2 ,2=2.2"10-7 ,!=!.6"10-1!

+ract. 1.46 6.00 12.##

CUESTIONARIO 2

*./ e,ale sustancias de uso cl0nico 1ue se usan como sustancia 2idroelectrol0ticas.
Fosfato Dis$ico Fosfato Monos$ico Fosfato Mono)ot*sico Citrato $e so$io DeGtrosa cloruro $e )otasio L567idos orales L8tren /7mo de naran9a /7mo de man:ana ";

;atorade *lectroligt< =r7ti2le"

3./ -4u5 es una soluci'n tamp'n o $u&&er. -C'mo se re6ula el p#.

=n M=FFE8 es un siste-a for-a$o )or un *ci$o $,bil y una sal fuerte $e $ic1o *ci$o, /ue funciona co-o base. En los l0/ui$os cor)orales, tanto eGtra co-o intracelulares, eGisten buffers cuya -isin es a-orti2uar, es $ecir, $is-inuir los ca-bios $e aci$e. $e una solucin cuan$o a ,sta se le a+a$e un *ci$o o un *lcali y conse2uir, )or lo tanto, /ue el )H $e la solucin ca-bie lo -enos )osible7 su efecto es )r*ctica-ente in-e$iato. o i$eal es /ue un buffer ten2a la -is-a canti$a$ $e sus $os co-)onentes 4*ci$o y base5, )ara a-orti2uar tanto un *ci$o co-o una base. La regulacin del ph consiste en lograr la desaparicin de los H + sobrantes o reponer los faltantes amortiguadores !buffer". #dems de este sistema de amortiguadores se reali$a el intercambio inico los mecanismos respiratorios renales %ue son los responsables de los a&ustes necesarios para la regulacin del ph. para estos fines se cuenta con el sistema de

7./ -4u5 sustancias de uso cl0nico se usan como indicadores del p#.
La &enol&tale0na es un co-)onente frecuente $e los -e$ica-entos utili.a$os co-o laGantes, aun/ue se tien$e a restrin2ir su uso )or sus )osibles efectos cancer02enos. Se utili.a en in(esti2aciones forenses, )ara $etectar -anc1as $e san2re, $e cual/uier es)ecie7 si-)le-ente, se reco2e la -uestra con un 1iso)o ba+a$o $e solucin salina, se a2re2an % 2otas $e fenolftale0na y )osterior-ente a2ua oGi2ena$a, si el color se torn $e rosa a (ioleta, 1ay tra.as $e san2re.

Ro8o de metilo El ro'o $e -etilo es un in$ica$or $e )H. ActLa entre )H ?,% y &,A (arian$o $es$e ro'o 4)H ?,%5 a a-arillo 4)H &,A5. 9or lo tanto, )er-ite $eter-inar la for-acin $e *ci$os /ue se )ro$ucen $urante la fer-entacin $e un carbo1i$rato. El ro'o $e -etilo se )re)ara con ;," 2 $e este reacti(o en A;; -l $e alco1ol et0lico y se $iluye en :;; -l $e a2ua. >tras sustancias son: A-arillo $e -etilo, Ti-olftale0na, Tintura $e tornasol a.ul, Tintura $e tornasol ro'a, -etil (ioleta, A.ul $e Ti-ol, Naran'a $e Metilo, !er$e $e Mro-ocresol, Clorofenol, A.ul $e Mro-oti-ol, 8o'o Fenol, 9Lr)ura $e Cresol, A-arillo $e Ali.arina, Car-0n Kn$i2o.
""

9./ -4u5 ocurre en los procesos de Alcalosis o Acidosis. ":eta$'lico ; Respiratorio)

ACIDO I : 9roceso /ue tien$e a $is-inuir el )H 4)or incre-ento $e la concentracin $e HI5, in$uci$a )or una $is-inucin en la concentracin $e Micarbonato o )or un au-ento en la )C>%. a aci$osis es un t,r-ino cl0nico /ue in$ica un trastorno /ue )ue$e con$ucir a academia, )ue$e ser -etablica o res)iratoria. a aci$e-ia es un )1 inferior al nor-al en la san2re 4)1N<,A:5. L( (.*+/-*- %,)(64&*.( Es un trastorno $el e/uilibrio *ci$oFb*sico esencial cor)oral en el /ue se )ro$uce aci$e. eGcesi(a en la san2re. Es $ebi$a al au-ento $e 1i$ro2eniones /ue su)era las )osibili$a$es $e ta)ona-iento )or el or2anis-o, /ue )ro$uce una retira$a $e bicarbonato $e los l0/ui$os. a aci$osis -etablica se )ro$uce co-o resulta$o $e un au-ento -arca$o en la )ro$uccin en$2ena $e *ci$os L( (.*+/-*- 0,-5*0()/0*( es $ebi$a a au-ento $el *ci$o carbnico circulante, al no )ro$ucirse una eli-inacin nor-al $el $iGi$o $e carbono )or (0a res)iratoria co-o resulta$o $e una 1i)o(entilacin al(eolar )or insuficiencia res)iratoria. os s0nto-as $e la aci$osis res)iratoria son $isnea, tos y en casos se(eros confusin, irritabili$a$, letar2o, co-a y -uerte )or )ara$a car$iores)iratoria. ALCALO I < 9roceso /ue tien$e a incre-entar el )H 4)or re$uccin $e la concentracin $e HI5, in$uci$a )or una ele(acin en la concentracin $e Micarbonato o )or una $is-inucin en la )C>%. a Aci$osis es una alteracin /ue tien$e a )ro$ucir un )H *ci$o al -enos /ue 1aya una alcalosis o)onente $o-inante. a Alcalosis es lo o)uesto y tien$e a )ro$ucir un )H alcalino al -enos /ue eGista una aci$osis o)onente $o-inante. Es una con$icin )ro(oca$a )or el eGceso $e base 4*lcali5 en los l0/ui$os $el cuer)o. L( (&.(&/-*- 0,-5*0()/0*( Es ocasiona$a )or los ni(eles ba'os $e $iGi$o $e carbono. a 1i)er(entilacin 4au-ento en la frecuencia res)iratoria5 1ace /ue el cuer)o )ier$a $iGi$o $e carbono. a altitu$ o una enfer-e$a$ /ue )ro$u.ca una re$uccin $e oG02eno en la san2re obli2an al in$i(i$uo a res)irar -*s r*)i$o, re$ucien$o los ni(eles $e $iGi$o $e carbono, lo /ue ocasiona una alcalosis res)iratoria. L( (&.(&/-*- %,)(64&*.( es ocasiona$a )or un eGceso $e bicarbonato en la san2re os t,r-inos -etablicos o res)iratorios se refieren se2Ln se -o$ifi/uen res)ecti(a-ente la concentracin $e bicarbonato o la )C>%.

=./ -C'mo in&lu;e la concentraci'n molar de un $u&&er ; la distri$uci'n de la concentraci'n de la sal ; del %cido.
"%

Influye el la $eter-inacin $e la ca)aci$a$ o efecti(i$a$ $e la solucin a-orti2ua$ora 4buffer5 ya /ue la solucin -*s efecti(a ser* la /ue ten2a la -is-a concentracin $e *ci$o y base. a concentracin -olar $ar* -ayor fuer.a al buffer.

>./ Cuales son los $u&&ers or6%nicos e inor6%nicos en el or6anismo ; de 1ue dependen
B:;;,0- /07(n*./-: <,%/7&/6*n(2 50/),=n(- > (%*n/(.*+/#E:O?LO@INA./ as caracter0sticas $e la 1e-o2lobina 4Hb5 co-o a-orti2ua$or est*n 0nti-a-ente (incula$as a la ca)aci$a$ $e $isociacin $el 70:5/ *%*+(?4&*./ $el AA 1isti$ina uni$o al 1ierro. El )6 $e este 2ru)o funcional, /ue es a)roGi-a$a-ente <, tiene la es)ecial )ro)ie$a$ $e -o$ificarse en funcin $e /ue la -ol,cula $e Hb est, oGi2ena$a 4Hb>%5 o re$uci$a 4Hb5. a oGi1e-o2lo1ina 4Hb>%5 es un *ci$o -*s fuerte /ue la Hb re$uci$a 4Su )6 es -enor5. En efecto:

Esta )ro)ie$a$ le confiere una eficacia a-orti2ua$ora eGce)cional, /ue se (e fa(oreci$a )or el 1ec1o $e /ue la Hb es una )rote0na -uy abun$ante en la san2re 4el ":O $el total $e )rote0na5. A:INO!CIDO ./ a caracter0stica -*s lla-ati(a $e los a-ino*ci$os 4AA5 es la eGistencia en una -is-a -ol,cula $e 2ru)os *ci$os 4ca)aces $e ce$er HI5 y 2ru)os b*sicos 4ca)aces $e ca)tar HI5. 9or lo tanto, en -e$io *ci$o se co-)ortan co-o bases, y en -e$io b*sico se co-)ortan co-o *ci$os. as -ol,culas /ue )resentan esta caracter0stica se $ice /ue son (n;4),0/- / (n;/&*)/-. os 2ru)os *ci$os y b*sicos )ue$en neutrali.arse -utua-ente, constituyen$o una sal interna for-a$a )or un in 10bri$o 4car2a )ositi(a y car2a ne2ati(a5, /ue se lla-a ?@*)),0*/n. B:;;,0- *n/073n*./-: 6*.(06/n()/A(n<=+0*+/ .(06/n*./2 (.*+/ ;/-;/0*./ @ICAR@ONATO/AN#ADRIDO CAR@ONICO./ El siste-a bicarbonato@an10$ri$o carbnico es uno $e los a-orti2ua$ores san2u0neos )rinci)ales. El *ci$o carbnico se ioni.a co-o un *ci$o $i)rtico $,bil t0)ico. Sin e-bar2o, la -ayor0a $el *ci$o con'u2a$o $isuelto en la san2re y en el cito)las-a est* co-o an10$ri$o carbnico y no co-o *ci$o carbnico. El an10$ri$o carbnico $isuelto est* en e/uilibrio con el an10$ri$o carbnico 2aseoso relaciona$os $e acuer$o a a ey $e Henry. En el )las-a san2u0neo la eta)a $e ioni.acin $e inter,s biol2ico es la se2un$a cuyo )6% C &.", y )ara un )H san2u0neo $e <.? la relacin concentracin $e bicarbonato @ concentracin $e an10$ri$o carbnico es $e %;@". To$o ca-bio en esta relacin si2nifica, co-o es e(i$ente, (ariacin $e )H. =n au-ento $e ella corres)on$e al trastorno $eno-ina$o alcalosis y si $is-inuye se lla-a aci$osis.

"A

ACIDO BO BRICO./ El *ci$o fosfrico es tri)rtico y, )or lo tanto, $isocia en tres eta)as. En ca$a eta)a se for-a una base con'u2a$a anftera la cual, a su (e., $isocia en la eta)a si2uiente co-o un *ci$o. a cur(a $e neutrali.acin -uestra $os )untos inter-e$ios $e e/ui(alencia, en los cuales el )H es la -e$i$a $e los (alores $e )6 a a-bos la$os $el )unto $e e/ui(alencia. os iones inter-e$ios son las es)ecies )re$o-inantes en los )untos $e e/ui(alencia inter-e$ios. El )6 $e la se2un$a $isociacin 4)6% C &.D5 es el -*s )rGi-o al )H $el -e$io interno y, )or lo tanto, esta se2un$a $isociacin es la /ue tiene lu2ar re(ersible-ente se2Ln el )H7 $e a10 la accin a-orti2ua$ora $el siste-a fosfato -onosustitui$o @ fosfato -onosustitui$o. a )ri-era y tercera $isociacin 4)6" C %7 )6A C "%5, no tienen inter,s biol2ico.

C./ -C'mo se elimina amoniaco a nivel renal ; por1ue se intercam$ia.

a eGcrecin $el a-oniaco es tar$0a y solo e-)ie.a a funcionar $es)u,s $e un la)so )rolon2a$o $e aci$osis. Co-o en los otros casos $e eli-inacin $e H I i-)lica )ri-ero la con(ersin $e H%C>A en HI y HC>A, se ace)ta ta-bi,n /ue este HI es el $e un *ci$o fi'o /ue en el )las-a 1ab0a si$o ca)ta$o )or HC> A, eGcreta$o )or el tLbulo se co-bina con el HI )resente y se con(ierte en in a-onio NH? el cual )or sostener la naturali$a$ el,ctrica 1abitual-ente se eli-ina con el anin Cl F7 la aci$e. $e la orina ba'a en estas con$iciones y el NaI /ue es el catin )resente se interca-bia con el NH ? sien$o absorbi$o el )ri-ero )or el tLbulo renal y entran$o a la circulacin )ara e/uilibrarse con el HC>FA, )ro(eniente $el H%C>A y $e esta -anera reconstruir el (alor ori2inal $e base fi'a y la reser(a alcalina $el or2anis-o. Se interca-bia )ara )er-itir la eGcrecin $e los aniones $e los *ci$os -inerales, co-o el clor10$rico y otros, /ue lle2an a estar en eGceso )or )er$i$as $e l0/ui$os alcalinos, co-o suce$e en al2unos )rocesos )atol2icos7 lo -is-o suce$e con la eli-inacin $e aniones $e *ci$os or2*nicos, co-o el MF1i$roGibutirico,el acetoaci$o,etc.ya /ue, $es)u,s $e i$entificarse la orina, es )osible /ue el anin $el *ci$o se eli-ine en for-a $e sal a-nica y se 2ane otro NaI, a )arte $el 2ana$o )or si-)le aci$ificacin

Bibliografa Le<ninger $ >)ioc<emistr8? Classtone .. 8 Le@is &. >*lementos de 25sica 8 675mica?.

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