1.1.

DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO (DBO5) EN AGUAS

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El documento que se presenta a continuacin, est basado en el original del IDEAM citado en la bibliografa y es una gua general para la determinacin de la demanda bioqumica de oxgeno, utilizando lectura electromtrica del oxgeno inicial y final con incubacin a 20 C, durante cinco das, se modific el documento basado en el Estndar Mtodos en la parte introductoria, interferencias, resultados de la estandarizacin del mtodo y clculo de resultados

1.1.1.1

Introduccin

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La estimacin de la contaminacin orgnica es un problema complejo y delicado debido a su naturaleza muy diversa y a los diferentes estados de degradacin de la misma, no es posible considerar un nico mtodo o un solo test que pueda permitir hacerse cargo del conjunto del problema. La oxidacin de la materia orgnica y la de los compuestos minerales del nitrgeno para dar anhdrido carbnico y agua conducen a un consumo de oxgeno del agua, renovado por el oxgeno del aire. En principio, la materia carbonada se utiliza como nutriente de las bacteria aerobias; el nitrgeno oxidado (nitritos, nitratos, amoniaco) sirve a las nitro bacterias y nitrosomonas. Estas diferentes reacciones pueden conducir, en un medio muy pobre de oxgeno como en las alcantarillas o las aguas estancadas, a la necesidad por parte de las bacterias a consumir el oxgeno a expensas no solamente de los nitratos y nitritos sino tambin a partir de los sulfatos con desprendimiento de sulfuro de hidrgeno. Estos fenmenos de oxidacin que pueden tener lugar en la naturaleza, son ms difciles de reproducir en el laboratorio y de obtener la degradacin ltima de la materia orgnica. Sin embargo ciertas pruebas como la DBO5 permiten una apreciacin de los fenmenos por va biolgica con sus inherentes dificultades de reproducibilidad. Uno de los ensayos ms importantes para determinar la concentracin de la materia orgnica de aguas residuales es el ensayo de DBO a cinco das. Esencialmente, la DBO es una medida de la cantidad de oxigeno utilizado por los microorganismos en la estabilizacin de la materia orgnica biodegradable, en condiciones aerbicas, en un periodo de cinco das a 20 C. En aguas residuales domsticas, el valor de la DBO a cinco das representa en promedio un 65 a 70% del total de la materia orgnica oxidable. La DBO5, como todo ensayo biolgico, requiere cuidado especial en su realizacin, as como conocimiento de las caractersticas esenciales que deben cumplirse, con el fin de obtener valores representativos confiables. El ensayo supone la medida de la cantidad de oxigeno consumido por organismos vivos en la utilizacin de la materia orgnica presente en un residuo; por tanto, es necesario garantizar que durante todo el periodo de ensayo exista suficiente oxigeno disuelto para ser utilizado por los organismos. Adems, debe garantizarse que se suministran las condiciones ambientales adecuadas para el desarrollo y trabajo de los microorganismos, as que hay que proporcionar los nutrientes necesarios para el desarrollo bacterial, tales como N y P y eliminar cualquier sustancia toxica de la muestra. Es tambin necesario que exista una poblacin de

organismos suficiente en cantidad y en variedad de especies, llamada Cepa, durante la realizacin del ensayo. La nitrificacin es otro de los factores que deben tenerse en cuenta al interpretar resultados de DBO5. En aguas residuales domesticas, en condiciones normales, la nitrificacin no es un problema, pues se presenta despus del quinto da de incubacin, sin embargo, en efluentes de plantas de tratamiento biolgico que contienen una alta poblacin de bacterias nitrificantes, estas crean una demanda adicional de oxigeno a causa de la nitrificacin u oxidacin de cualquier compuesto de nitrgeno no oxidado previamente. En aguas con alto contenido de algas, la muestra debe incubarse en la oscuridad y tener en cuenta que los valores obtenidos son mayores que los que ocurrirn realmente en la fuente receptora. La razn para hacer esto es evitar el aumento de la concentracin de OD que puede presentarse en la botella de DBO5 cuando la concentracin de algas es alta y se permite la presencia de luz. La temperatura escogida para determinar el valor de DBO5 es 20 C, la cual se debe mantener constante durante el tiempo del ensayo; la velocidad de reaccin durante el ensayo se ver afectada si se modifica la temperatura, por lo que los resultados obtenidos no seran los correspondientes al procedimiento estndar y en consecuencia no seran comparables. Aunque no existen normas para las aguas potables, es evidente que stas no deben tener una DBO significativa. Las aguas superficiales destinadas al consumo no deberan tener una DBO 5 superior de 4 mg/l. La DBO5 Es un parmetro necesario en la evaluacin de aguas residuales, de los procesos de tratamiento y de los efectos de contaminacin. No se usa como parmetro de control de aguas potables. El mtodo aqu descrito se aplica en aguas naturales superficiales, algunas subterrneas de acuferos libres con vulnerabilidad de contaminacin, residuales industriales, evaluacin de la eficiencia de tratamientos aplicados a las mismas y para la evaluacin de la afectacin de la calidad del cuerpo de agua. Es empleado para el intervalo de 2 a 105.000 mg/l. Es un mtodo electromtrico, en el que se determina el oxgeno disuelto consumido en la degradacin de la materia orgnica, incubando la muestra en la oscuridad a 20 1C, durante cinco das. El anlisis de DBO5 se aplica a las aguas para los modelos de calidad (Dec 1594/84), para el cobro de tasas retributivas como parmetro bsico en Kg. de carga contaminante (Resolucin 273/97 del MVDT y en la evaluacin de las aguas de pozo en la resolucin 250/97 del DAMA. El decreto 1594/84 establece el mtodo de incubacin y para oxgeno disuelto permite las dos opciones, el de titulacin o Winkler y el del electrodo. Este ltimo es mas funcional por cuanto utiliza las mismas botellas para la medicin de oxgeno inicial y final, mientras que el mtodo Winkler requiere de un juego adicional de botellas para la determinacin de oxgeno inicial.

1.1.1.2

Definiciones y abreviaturas

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OD = Oxgeno disuelto ODi = Oxgeno disuelto inicial

 ODr = Oxgeno disuelto residual DBO5 = Demanda Bioqumica de Oxigeno total. DBOC5 = Demanda Bioqumica de Oxgeno Carboncea V = volumen Cepa = Cultivo heterogneo de microorganismos aerbicos que transforman la materia orgnica en CO2 y H2O. 1.1.1.3 Aspectos de salud y seguridad laboral
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Utilice los implementos de seguridad, (Bata, pantaln, zapatos antideslizantes, gafas de seguridad, mscara con filtro mixto de vapores cidos y orgnicos, guantes de caucho).

1.1.1.4

Limitaciones e interferencias

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Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relacin de la materia orgnica soluble a la materia orgnica suspendida, los slidos sedimentables, los flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la presencia de compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento no existe una forma de corregir o ajustar los efectos de estos factores. DBO carboncea contra nitrogencea. La oxidacin de las formas reducidas del nitrgeno como amoniaco y nitrgeno orgnico, mediada por los microorganismos, ejercen una demanda nitrogencea, que ha sido considerada como una interferencia en la prueba; sin embargo, esta puede ser eliminada con la adicin de inhibidores qumicos. Cuando se inhiba la demanda nitrogencea de oxgeno, reporte los resultados como demanda bioqumica de oxgeno carboncea (DBOC5); cuando no se inhiba, reporte los resultados como DBO5. ste ltimo es el valor comparable con la legislacin actual, esta se refiere siempre a DBO 5 Requerimientos de dilucin. Si el agua de dilucin es de baja calidad, su DBO aparecer como DBO de la muestra, efecto que ser amplificado por el factor de dilucin, y el resultado tendr una desviacin positiva. El mtodo de anlisis debe incluir agua de dilucin de verificacin y agua de dilucin como blanco para establecer su calidad, mediante la medicin del consumo de oxgeno con una mezcla orgnica conocida, generalmente glucosa y cido glutmico. La fuente del agua de dilucin puede ser: destilada a partir del agua de grifo, o agua libre de sustancias orgnicas biodegradables o bioinhibitorias tales como cloro, in cianuro o metales pesados. El agua destilada puede contener amoniaco o compuestos orgnicos voltiles; el agua desionizada tambin puede estar contaminada con compuestos orgnicos solubles lixiviados del lecho de la resina; el uso de destiladores con conductos o accesorios de cobre en las lneas de agua destilada pueden producir agua con cantidades excesivas de cobre, que acta como biocida.

1.1.1.5

Resultados de la estandarizacin del mtodo

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Los resultados de estandarizacin del mtodo, corresponden a los determinados en cada laboratorio, con los reactivos, condiciones ambientales, analistas, equipos y tcnica utilizada. La

tabla que se presenta a continuacin es un modelo que contiene el resumen de los resultados de la estandarizacin.

TABLA ERROR! NO TEXT OF SPECIFIED STYLE IN DOCUMENT..1 RESUMEN DE LOS RESULTADOS DE LA ESTANDARIZACIN DE DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO (DBO5) EN AGUAS
NOMBRE DEL MTODO: CDIGO DEL PROCEDIMIENTO: FECHA DEL INFORME DE ESTANDARIZACIN: PARMETRO VALOR UNIDADES LIMITE DE CUANTIFICACIN PRECISIN EN TRMINOS DE % COEFICIENTE DE VARIACIN EXACTITUD EXPRESADO COMO % DE ERROR RELATIVO INTERVALO DE TRABAJO (Lectura Directa) INTERVALO DE APLICACIN DEL MTODO RECUPERACIN EXPRESADO COMO %
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OBSERVACIN Nivel inferior registrable a los largo de la rutina del laboratorio Nivel de Concentracin bajo Nivel de Concentracin alto Nivel de Concentracin bajo Nivel de Concentracin alto Sin dilucin de la muestra Con la mayor dilucin posible o aceptable.(100 veces) Nivel de Concentracin bajo
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1.1.1.6

Toma y preservacin de la muestra

Siga los lineamientos recomendados por el documento gua de muestreo, tome la muestra de tal manera que sea representativa del vertimiento en estudio. Utilice frascos plsticos de polipropileno de 2000 ml de capacidad. Refrigere la muestra a 4C hasta el momento del anlisis. Lleve las muestras a temperatura ambiente. Efecte el anlisis dentro de las 24 horas siguientes a la toma de la muestra.

1.1.1.7 Equipos

Equipos, reactivos y materiales

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Medidor de oxgeno YSI 52 Electrodo de membrana sensible a gas oxgeno. Balanza analtica de cuatro cifras decimales (Mettler Toledo AG 204) Incubadora (Sargent - Welch. Frigidaire). Reactivos
Agua desionizada y destilada. Solucin tampn de fosfato: Disuelva 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g de Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g de NH4Cl en aproximadamente 500 ml
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de agua ultrapura y diluya a 1 l. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descarte este reactivo. Solucin de sulfato de magnesio: Disuelva 22,5 g de MgSO4.7H2O en agua ultrapura y diluya a 1 l. Si se presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descarte este reactivo. Solucin de cloruro de calcio: Disuelva 27,5 g de CaCl2 en agua ultrapura y diluya a 1l. Si se presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descarte este reactivo. Solucin de cloruro de hierro (III): Disuelva 0,25g de FeCl3.6H2O en agua ultrapura, diluya a 1l.Si se presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descarte este reactivo. Acido Sulfrico 1 M. En un vaso de precipitados coloque alrededor de 300 ml de agua ultrapura y agregue muy lentamente y mientras agita, 28 ml de cido sulfrico concentrado; diluya a 1 l. Hidrxido de Sodio 1M. Disuelva 40 g de hidrxido de sodio en agua ultrapura y diluya a 1 l. Inhibidor de nitrificacin: 2 - cloro - 6 - (triclorometil) piridina. Compuesto cancergeno, usar respirador para vapores orgnicos. Solucin de glucosa - cido glutmico: Seque a 103C por 1 h glucosa (grado analtico) y cido glutmico (grado analtico). Disuelva 150 mg de glucosa y 150 mg de cido glutmico en agua desionizada y diluya a 1 l. Prepare inmediatamente antes de su uso. Cepa: Agua superficial contaminada, se toma los martes y los viernes y se alimenta en la tarde despus de haber realizado los anlisis del da porque de lo contrario queda muy concentrada. Se agita y se cambia el 75% del contenido del erlenmeyer. Agitar, para homogenizar su contenido en el erlenmeyer que se encuentra en un rea aislada, en aireacin continua, transferir a un vaso de precipitados el volumen suficiente de acuerdo al nmero de muestras, dejar decantar en el vaso y tomar el sobrenadante y adicionar 2 ml a cada botella Winkler. NOTA: Los reactivos a los cuales no se les especfica su calidad, son de grado reactivo.

Materiales Botellas de Polipropileno de 2000 ml. Botellas Winkler de aproximadamente 300 ml de capacidad Garrafa con llave de 20 l de capacidad y con dispensador o mangueras. Microesptula metlica. Baln aforado de 1l Clase A Balones aforados de 100 ml Clase A o Clase B Pipetas graduadas de 10 ml. Clase B Pipetas graduadas de 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 50, 100 ml.

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1.1.1.8

Procedimiento de limpieza de vidriera

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Use el material disponible, con control de calidad, que ha sido lavado con detergente biodegradable (material sumergido durante 30 min.), abundante agua de la llave y agua destilada, respectivamente. La garrafa donde se prepara el agua de dilucin debe lavarse antes de su uso con agua caliente, varias veces y enjuagar varias veces con agua destilada, recoger el agua para el anlisis. No aplicar jabn para el lavado.

1.1.1.9

Procedimiento de preparacin de estndares

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Para mejores resultados seque una pequea cantidad de los reactivos cada vez que se va a preparar esta solucin, alrededor de 0.200, deseche el resto. En un vaso de precipitados coloque 0.2000 g de cido glutmico y en otro 0.2000 g de glucosa y squelo a 102 - 104 C durante una hora. Deje enfriar dentro del desecador, hasta temperatura ambiente. En un vaso de precipitados peso 0,1500 gramos de cido glutmico y 0,1500 gramos de glucosa en otro. Coloque 200 ml de agua desionizada en un baln aforado de 1 litro, transfiera cuantitativamente los 0,1500 g de cido glutmico mediante enjuague de 8 veces mnimo el vaso que lo contiene, agite hasta disolucin completa. Transfiera cuantitativamente los 0,1500 g, de glucosa mediante enjuague de 8 veces mnimo el vaso que lo contiene, agite hasta disolucin completa. Homogenice complete a volumen y nuevamente homogenice invirtiendo el baln varias veces.

1.1.1.10 Procedimiento de anlisis Preparacin del agua de dilucin

Llene la garrafa con agua destilada, la necesaria para el anlisis, teniendo en cuenta que el gasto aproximado es de 300 ml por botella y 1,5 L adicionales. Cuando se tiene una alta demanda de agua destilada, reserve el volumen establecido desde el da anterior. Agregue 1 ml de cada una de las siguientes soluciones, por cada litro de agua de dilucin a preparar: Solucin tampn de fosfatos, Solucin de sulfato de magnesio, Solucin de cloruro de calcio, Solucin de cloruro de hierro (III). Verifique que la temperatura del agua es de 20 10C. Si la temperatura es muy alta, (aprox. 23 C) guarde el agua en el cuarto fro y contine con la aireacin. Controle la temperatura, midiendo la temperatura con el oxmetro, a una muestra que se toma en una botella Winkler, repita el proceso hasta llegar a 19 C

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Airee el agua por una hora, mnimo, utilizando la bomba de los acuarios, que se encuentra disponible en el lugar de trabajo.

Criterios para determinar la dilucin aproximada de la muestra

Existe una relacin emprica que indica que diluciones deben tomarse: % dilucin = 500 / DQO
TABLA ERROR! NO TEXT OF SPECIFIED STYLE IN DOCUMENT..2 DILUCIN APROXIMADA DE LA MUESTRA

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Tipo de muestra Residuales domsticas crudas fuertes Residuales domesticas crudas normales Residuales domesticas(estructuras intermedias) Residuales domesticas tratadas (funcionamiento regular) Residuales domesticas tratadas (funcionamiento normal) Residuales domesticas tratadas (excelente funcionamiento) Residuales lcteas, licores, cerveceras, gaseosas. Aguas superficiales parcialmente contaminadas Aguas superficiales no contaminadas

% Dilucin 0,3 0,6 1,0 0,5 1,0 1,5 1,0 2,0 3,0 2,0 5,0 10 5 10 20 10 20 50 Aplicar la frmula 5,0 .......50 50 70 90

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Alistamiento general
Aliste 3 botellas por cada muestra, blanco, blanco con cepa y estndar a procesar. Diligencie el formato y registre los volmenes que se encuentran grabados en cada botella, registre tambin el volumen de la alcuota que se tomar de la muestra y la dilucin previa realizada en baln aforado si esta fuera necesaria de acuerdo a los criterios dados en 10.2. Adicione 2 ml de la Cepa tomando las precauciones citadas en el numeral 7.2 Reactivos. Cepa.

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Lectura de Blanco
Aliste tres botellas Winkler Rotule las botellas como Blanco y la fecha de anlisis. Adicione agua de dilucin hasta la mitad del cuello de la botella. Calibre el equipo de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Lea el oxigeno inicial de los blancos, llene totalmente dejando el sello hidrulico (pequea pelcula de agua para impedir el intercambio de oxigeno entre la botella y el ambiente) Lea las otras dos botellas de blancos como muestras y registre los datos en el formato de captura de datos e incube a 20C por cinco das. Utilice una de las botellas del blanco para calibrar el oxmetro al quinto da y lea el Oxigeno disuelto residual de los blancos, blanco con cepa, estndares y muestras.

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Lectura de blanco con adicin de cepa

Aliste tres botellas Winkler

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Rotule las botellas como Blanco + cepa y la fecha de anlisis. Adicione 2 ml de cepa. Adicione 0.3 g de inhibidor. Adicione agua de dilucin solamente hasta la mitad del cuello de la botella., para que al introducir el electrodo no haya prdida de muestra. Lea el oxigeno inicial de los blancos con adicin de cepa, llene totalmente dejando el sello hidrulico (pequea pelcula de agua para impedir el intercambio de oxigeno entre la botella y el ambiente) Registre los datos en el formato de captura de datos e incube a 20C por cinco das. Al quinto da lea el Oxigeno disuelto residual

Lectura de estndar
Aliste seis botellas Winkler Rotule tres de las botellas como Estndar 198 mg/l y tres como Estndar 19,8 mg/l y la fecha de anlisis. Adicione 2 ml de cepa. Adicione 6 ml del estndar correspondiente. Adicione 0.3 g de inhibidor. Adicione agua de dilucin solamente hasta la mitad del cuello de la botella., para que al introducir el electrodo no haya prdida de muestra. Lea el oxigeno inicial de los estndares, llene totalmente dejando el sello hidrulico (pequea pelcula de agua para impedir el intercambio de oxigeno entre la botella y el ambiente) Registre los datos en el formato de captura de datos e incube a 20C por cinco das. Lea el Oxigeno disuelto residual a los 5 das de incubacin.

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Procesamiento de la muestra
Despus de establecer la cantidad de muestra que necesita de acuerdo a las diluciones a realizar, agite la muestra para homogenizacin completa y sirva en un vaso de precipitados la muestra, ajuste el pH de la muestra entre 6,5 y 7,5 con cido sulfrico 1 M o hidrxido de sodio 1 M, segn sea el caso, dosificando estos reactivos con una pipeta Pasteur que dosifique gotas muy pequeas. (Punta en buen estado)

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Aliste cuatro botellas Winkler Rotule las botellas con el nmero de muestra, la dilucin correspondiente y la fecha de anlisis. Para determinar la dilucin aproximada siga los criterios de dilucin de muestras. Registre en el formato de captura de datos el volumen real de la botella Winkler impreso en la botella usada. Adicione a cada botella la cantidad de muestra que se ha establecido, si se requiere hacer dilucin realcela en un baln aforado clase A B agite y sirva en la botella la cantidad requerida. Adicione 2 ml de cepa. Adicione 0.3 g de inhibidor. Adicione agua solamente hasta la mitad del cuello de la botella, para que al introducir el electrodo no haya prdida de muestra. Lea el oxigeno inicial de las cuatro botellas de muestra, llene totalmente dejando el sello hidrulico (pequea pelcula de agua para impedir el intercambio de oxigeno entre la botella y el ambiente) Si al medir el oxgeno disuelto inicial, ha descendido a menor de 6, preparar otra botella utilizando un volumen de muestra menor. Registre los datos en el formato de captura de datos e incube a 20C 1C por cinco das. Al quinto da lea el Oxigeno disuelto residual Calcule la DBO con los resultados obtenidos (ver ecuacin en el numeral 10).

1.1.1.11 Procesamiento de datos y clculo de resultados

Efecte los clculos por medio de la ecuacin:

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DBO 5 , mg / l

(OD Consumido OD Consumocepa ) Vm

*V * FD

Donde: OD consumido: (OD i - OD r) OD consumo cepa: (OD i (agua de dilucin + cepa) - OD r (agua de dilucin +cepa)) V = Volumen de la botella Winkler Vm = Volumen de alcuota de la muestra FD = Factor de Dilucin = Volumen final /Volumen inicial. Ojo el OD, si se midi con oxmetro se toma directamente, si se midi qumicamente utilizar la seccin resaltada en amarillo para determinar el calcul del O.D. (oxgeno disuelto)

En nuestro caso no trabajamos con cepa, por lo que OD consumido cepa es cero, el volumen de muestra adicionado segn caractersticas de la muestra fue: (1, 2, 3, 5, 10)ml Entonces la ecuacin ser:
DBO5 , mg / l
Es decir:

ODConsumido * V * FD Vm

DBO5 , mg / l

(ODi ODr) * V * FD Vm

Para mtodo qumico o modificacin azida Procesamiento de datos y clculo de resultados Para titular un volumen correspondiente a 100 ml de la muestra original, calcular la correccin por la prdida de muestra desplazada por los reactivos, as: para un total de 2 ml de reactivos de MnSO4 y lcali - yoduro - azida (1 ml de cada uno) en una botella de 300 - 2) = 101 ml. mg de OD/l = Volumen de Na2S2O3 x Normalidad del Na2S2O3 x 8000 x Volumen de la botella ml de muestra valorada x (Volumen de la botella - 2) Cuando se titula 200 ml de muestra, 1 ml de Na2S2O3 0,025 M = 1 mg OD/l. Para expresar los resultados como porcentaje de saturacin a 101,3 KPa, emplear los datos de solubilidad reportados en Standard Methods, donde tambin se encuentran las ecuaciones para corregir las solubilidades a presiones baromtricas diferentes al nivel promedio del mar y para diversas salinidades. La solubilidad del OD en agua destilada a cualquier presin baromtrica, P (mm Hg), temperatura, T C, y presin de vapor saturado, u (mm Hg), para la T dada entre 0 y 30C, puede calcularse como:
NOTA: Cuando se inhiba la demanda nitrogencea de oxgeno, reporte los resultados como demanda bioqumica de oxgeno carboncea (DBOC5); cuando no se inhiba, reporte los resultados como DBO5.

1.1.1.12 Seccin de control de calidad (CC) y aseguramiento de la calidad

En forma paralela, con cada grupo o lote de muestras, es necesario procesar en un mismo da, un estndar por triplicado, agua de dilucin (blanco) por triplicado y agua de dilucin ms cepa por triplicado. Registre los resultados en la CARTA DE CONTROL (seccin 1020 control de calidad) del mtodo. Una vez hechos los clculos y registrados los resultados en el formato de captura de datos y entrguelo para su revisin. Tome en cuenta los siguientes aspectos a la hora de reportar los anlisis:

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El consumo de oxgeno en los cinco das para los blancos sin cepa debe ser < 0.2 mg/l El consumo de oxgeno para Agua de dilucin ms cepa en buenas condiciones debe estar entre 0,6 - 1,0 mg/l Para promediar el valor de la DBO de las diferentes diluciones de cada muestra debe cumplir con los siguientes criterios de verificacin: El consumo de OD de las muestras debe ser mayor o igual a 2 mg/l y el OD residual debe ser mayor o igual a 1.0 mg/l.