Naturales Escuela de Qumica Laboratorio de Bioqumica Nombre: Lauren Campos Campos Pro!: "na #alindo Bernab$u %ema: Extracci&n del "'N del ()ado de pollo Fec*a: +,- .unio- /0+, 1 2emestre3 /0+, Extraccin de ADN del hgado de pollo Objetivo Extraer ADN de clulas animales, observando su estructura fibrilar y el grado de enrollamiento de la cadena. Marco terico El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y muy replegado, unido a protenas para formar la cromatina. As, para extraerlo ser necesario omogenei!ar el te"ido y romper las clulas para separar el ncleo, romper tambin la envoltura nuclear para liberar su contenido, luego separar el ADN de las protenas #ue lo protegen y, por ltimo, precipitarlo para extraerlo de la soluci$n. %na ve! reali!ado esto, el ADN aparecer como un agregado de fibras blan#uecinas #ue se adieren a la varilla de vidrio. &or ltimo, se puede situar sobre un porta, te'irlo con un colorante bsico y observarlo al microscopio. El ADN es un polmero de nucle$tido. %n polmero es un compuesto formado por mucas unidades simples conectadas entre s. En el ADN, esta conectados por varios nucle$tidos, y cada nucle$tido, a su ve!, est formado por un a!car (la desoxirribosa), una base nitrogenada (#ue puede ser adenina A, timina, citosina o guanina) y un grupo fosfato #ue acta como engance de cada vag$n (*cribd +,--). .o #ue distingue a cada nucle$tido de otro es su base nitrogenada, y por ello la secuencia del ADN se especifica nombrando s$lo la secuencia de sus bases. En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucle$tidos, en la #ue las dos ebras estn unidas entre s por unas conexiones denominadas puentes de idrogeno (/ortes +,--). Existen dos tipos de cidos nucleicos los cuales son el cido desoxirribonucleico (ADN) y el cido ribonucleico (A0N). El ADN contiene la informaci$n gentica de un organismo y controla el crecimiento y divisi$n de las clulas y a su ve! el A0N encargado de transferir la informaci$n vital durante la sntesis de protenas (1ruice +,,2) Es posible extraer el ADN de las clulas por medio de las propiedades fisico#umicas de dicos compuestos, las cuales son3 PROPIEDADES DEL ADN 4 5nsoluble en soluciones diluidas de Na/l, 4 *oluble en soluciones concentradas de Na/l. 4 5nsoluble en alcool. 4 &uede ser disociado de la protena por tratamiento con un detergente o un fenol Materiale 6e"ido animal (7gado de pollo) &apel filtro. Detergente l#uido. Alcool 89: 1atidora *oluci$n de Na/l. Embudo ;ugo de papaya. <aso de precipitado Procedi!iento -. 6riturar en fro la muestra de =,, g gado de pollo y a'adir unos >,, ml de agua destilada o, en su defecto, agua mineral, agregar media cucaradita de sal, esto tiene varios efectos. En primer lugar provoca un co#ue osm$tico #ue es capa! de romper algunas membranas no afectadas por el tratamiento anterior. Adems, las cargas positivas de los iones Na ? atraern luego las cargas negativas del ADN mantenindolo en la disoluci$n. +. /olocar en una batidora para omogenei!ar el te"ido. Este procedimiento tambin rompe mucas clulas liberando su contenido. &arecer ser ms efica! el empleo de una batidora, con la #ue se obtiene una me!cla ms omognea y fcil de filtrar despus. @. Ailtrar varias veces el resultado de la me!cla. Este filtrado es lento y difcil, pero se retendr el s$lido. >. A'adir aora >, ml de detergente l#uido y remover suavemente, me!clando bien pero evitando #ue se forme espuma. El detergente completa la rotura de las membranas plasmtica y nuclear al disolver y separar los lpidos de las mismas. 6ambin interviene en la separaci$n de las protenas #ue rodean al ADN. *i es posible volver a filtrar, se obtendr una soluci$n ms limpia de restos. 5. Agregar @ cucaradas de "ugo de papaya, #ue contienen un en!ima, la papana, #ue contribuye a eliminar las protenas #ue puedan contaminar el ADN. 9. Aora se a'aden unos =, ml de alcool !"# $ro, teniendo cuidado de acerlo ladeando el tubo o vaso de precipitados y de"ando resbalar muy lentamente el alcool por la pared de a#uel para formar una capa sobre la soluci$n anterior. Es muy importante evitar #ue se me!clen ambas soluciones, pues ser en la interfase donde precipitar el ADN.
2. El ADN ir apareciendo poco a poco en la interfase aguaBalcool en forma de grumos blancos. *e favorece la precipitaci$n y recolecci$n si se va recogiendo mediante la varilla de vidrio, u otro instrumento similar, introducindola ligeramente ba"o la interfase y acindola girar suavemente mientras se extrae. As se irn pegando en la varilla unas ebras blancas #ue corresponden a miles de fibras de ADN. Re$erencia ;os A. /ortes +,--. Extracci$n casera de ADN CEn lneaD Ettp3FFGGG."oseacortes.comFpracticasFextraccionADN.tmH C;unio +,--D. .earn Ienetics +,--. /JKL EM60AE0 ADN DE /%A.N%5E0 /L*A <5<5EN6E CEn lneaD Ettp3FFlearn.genetics.uta.eduFesFunitsFactivitiesFextractionFH C;unio +,--D. *cribd. +,--. Extracci$n de DNA CEn lneaD Ettp3FFes.scribd.comFdocF+8O+-2O=FExtraccionBdeBDNAH C;unio +,--D. 4 1ruice, &. +,,2. Aundamentos de Numica Lrgnica. Kxico. Editorial &EA0*LN. =+,B=+- pp.