QUESTIONRIO DE ARTIGO

PROCEDIMENTOS ANALTICOS PARA IDENTIFICAO DE

ANTOCIANINAS PRESENTES EM EXTRATOS NATURAIS













Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
Na metodologia proposta, os autores relacionam o tempo de reteno de vrias
antocianinas com o tempo de reteno de uma antocianina que est presente na maioria das
frutas vermelhas: a cianidina-3-glucosdeo. Sugere-se que essa relao dos tempos de
reteno () seria a forma de identificar as diferentes antocianinas.
O uso de presses elevadas permite uma reduo no dimetro das partculas da fase
estacionria, localizada no interior da coluna cromatogrfica. O uso de partculas menores (na
ordem de 5,0 m) no recheio da coluna resulta em uma rea superficial, o stio de adsoro,
maior (geralmente da ordem de centenas de metros quadrados por grama de fase estacionria),
o que promove uma separao mais eficiente dos componentes da amostra. Essa
miniatuizao das partculas da coluna permite o uso de coluna menores, volumes menores
de amostras e um gasto menor de fase mvel. Assim sendo, em cromatografia lquida de alta
eficincia trabalha-se na faixa de microlitros.
O advento dessa tcnica analtica s foi possvel graas produo de cromatgrafos
lquidos totalmente automatizados (embora mesmo hoje ainda exista cromatgrafos que no
oferecem opo de injeo automtica de amostragem). Nesses cromatgrafos as bombas de
fase mvel permitem o trabalho geralmente na faixa mdia de 2500 psi. Hoje em dia so
oferecidos, tambm as mquinas da chamada CLUE Cromatografia Lquida de Ultra
Eficincia (Em ingls, UPLC), que trabalham com partculas de colunas ainda menores (at
0,01 m) e presses ultra-elevadas (da ordem de 15000 psi).
As vantagens de se utilizar essa tcnica so: menor tempo de anlise, quantificao,
detectabilidade, versatilidade, automatizao. Porm tem como desvantagens: custo, anlise
qualitativa, detector universal sensvel e treinamento.






Cromatografia em papel
usada para a separao e identificao das substncias ou componentes da mistura
migrao diferencial sobre a superfcie de um papel de filtro de qualidade especial (fase
estacionria). A fase mvel pode ser um solvente puro ou uma mistura de solventes.
Este mtodo muito til para separar substncias muito polares, como acares e
aminocidos. Possui o inconveniente de poder-se cromatografar poucas quantidades de
substncia de cada vez.
Entre as vantagens esto, velocidade de digitalizao, alta resoluo, resultados
quantitativos, sensibilidade boa, automao e amplo espectro de aplicaes.
J entre as desvantagens, incluem-se instrumentao caro, anlise qualitativa difcil,
no existe dector universal, alto custo de operao, experincia necessria, espectroscopia de
ressonncia nuclear.

Cromatografia em camada delgada
uma tcnica de cromatografia usada para separar misturas. A cromatografia em
camada delgada realizada sobre uma placa de vidro, plstico ou folha de alumnio, revestida
com uma fina camada de material adsorvente, geralmente slica-gel, xido de alumnio ou
celulose. Esta camada de adsorvente chamada de fase estacionria.
Depois que a amostra aplicada sobre a placa, um solvente ou mistura de solventes
(chamada de fase mvel) permeado pela placa atravs de ao capilar. Os diferentes
componentes da mistura percorrerem a placa de CCD de maneiras diferentes, sendo possvel a
separao.
A CCD pode ser usada para monitorar o progresso de uma reao qumica, identificar
os componentes numa mistura e determinar a pureza de uma substncia. Como exemplos
especficos podem ser citados: anlise de ceramidas e cidos graxos, a deteco de pesticidas
ou inseticidas em alimento e gua ou identificao de princpios ativos em plantas medicinais
ou medicamentos.
As vantagens so: fcil compreenso, execuo, separao em breve espao de tempo,
versatilidade, grande reprodutibilidade, baixo custo. E uma das desvantagens a baixa
preciso de quantificao.

Espectrofotmetro UV/Visvel
Para se obter informao sobre a absoro de uma amostra, ela inserida no caminho
ptico do aparelho. Ento, luz UV e/ou visvel em um certo comprimento de onda ( ou faixa
de comprimento de ondas) passada pela amostra. O espectrofotmetro mede o quanto de luz
foi absorvida pela amostra. A intensidade da luz antes de passar pela amostra simbolizada
por I
0
, e a intensidade da luz depois de passar pela amostra simbolizada por I. A
transmitncia da amostra definida pela razo (I/I
0
), a qual normalmente expressa em
porcentagem de transmitncia (%T). A partir dessa informao, a absorbncia de ambos
determinada para esse certo comprimento de onde ou como uma funo de uma faixa de
comprimentos de onda. Os espectrofotmetros mais sofisticados normalmente fazem isso
automaticamente. Existem dois tipos de espectrofotmetros: de feixe simples e feixe duplo.
Apesar de as amostras poderem ser slidas (ou mesmo gasosas), elas usualmente so
lquidas. Uma cela transparente (ou seja, que no absorve radiao na faixa de comprimentos
de onda usada), comumente chamada de cuvete, enchida com a amostra lquida e inserida no
espectrofotmetro. O caminho ptico L pela amostra ento a largura da cuvete.
Espectrofotmetros mais simples usam cuvetes com a forma cilndrica (tubos de ensaio),
porm, os mais sofisticados usam cuvetes retangulares, geralmente com uma largura de 1cm.
Para espectroscopia apenas no visvel, simples cuvetes de vidro podem ser usadas, porm a
espectroscopia no ultravioleta requer cuvetes especiais feitas de um material que (ao contrrio
do vidro) no absorva luz UV, como o quartzo.
Entra suas vantagens esto, possuir mtodos rpidos simples e econmicos,
determinao de pK e coeficiente de participao de compostos orgnicos e pode ser utilizado
para monitorar a cintica de reaes. E uma desvantagem a tcnica ser pouco seletiva, no
sendo recomendado para anlise de misturas complexas.


Espectroscopia de massas (MS)

A espectrometria de massa (EM) uma tcnica largamente utilizada pelos qumicos na
anlise de molculas de diversas massas molares (g-pg). uma tcnica destrutiva. A
espectrometria de massas mede a relao entre massa e carga, um espectrmetro de massas
engloba uma fonte de ionizao para a obteno de ons, um analisador de massas, o qual
separa os ons formados, um detector desses ons e um sistema de aquisio dos dados.
A grande sensibilidade do mtodo faz com que seja rotineiramente usada na anlise de
substncias em baixa concentrao, como no caso do doping, controle de alimentos e
medicamentos, contaminao ambiental, entre muitas outras aplicaes.
Uma das vantagens que se trata d e espectros de massas tradicionais, ou seja, pode operar
em baixa (1.000) ou alta resoluo (at 60.000), possui excelente reprodutibilidade - melhor
desempenho quantitativo entre todos os aparelhos, alta resoluo, alta sensibilidade e preciso
nas medidas de massas.
A Desvantagem que o processo inadequado para tcnicas de ionizao pulsada, os
aparelhos so muito maiores e mais custosos, os ons precisam ser acelerados com alta energia
cintica para compensar, e infelizmente as varreduras relativamente lentas.

Ressonncia magntica nuclear de prtons
uma tcnica cromatogrfica simples, sendo uma fase mvel lquida e a fase
estacionria constituda sobre um suporte celulsico (papel de cromatografia). Os
componentes da mistura lquida a separar so colocados, em pequenas pores sobre o papel
de cromatografia, a pequena distncia de um dos lados. A ponta deste lado ento
mergulhada num solvente lquido, que constitui a fase mvel. O solvente que constitui a fase
mvel vai-se deslocando de uma extremidade outra do papel de cromatografia, arrastando os
diferentes componentes da mistura a separar com velocidades distintas, consoante a sua
afinidade com a fase mvel.
Dessa forma, a identificao de antocianinas em frutas facilitada consideravelmente,
minimizando o problema da falta de padres. Em estudos, determinaram que o valor de para
40 antocianinas e antocianidinas utilizando 2 tipos de eluentes, enquanto que na maioria dos
trabalhos descritos na literatura para identificao de antocianinas cita-se apenas um tipo de
fase mvel.

Eletroforese capilar
Definida como o transporte, em soluo eletroltica, de compostos carregados
eletricamente sob a influncia de um campo eltrico, no qual a separao entre dois solutos
ocorre de acordo com diferenas entre suas mobilidades eletroforticas. Pesquisadores
apresentaram um trabalho no incio dos anos 80, mostrando a vantagem do capilar em relao
aos outros meios utilizados para eletroforese (plagas de gel, papel, etc.). O uso de capilares
com dimetros internos extremamente pequenos (na faixa de 15-100m) permite uma melhor
dissipao do calor e, assim, possvel obter uma alta eficincia de separao com tempo
reduzido de anlise.
Na eletroforese capilar possvel empregar diversos modos de separao, cada qual
com seu mecanismo e seletividade caractersticos como a eletroforese capilar de zona (CZE).
As vantagens so: segurana, pois no usa radiao ionizante, assim sendo um modo
no invasivo e no destrutivo. As imagens produzidas so de alta resoluo, pode ser utilizada
tanto em slidos quanto lquidos, rapidez na anlise (quase sempre sem a necessidade de
produtos qumicos).
Entre as desvantagens esto o elevado custo e demora na aquisio das imagens.

Extrao em fase slida (SPE)
uma tcnica bastante emprega em matrizes complexas e utiliza os mesmos materiais
adsorventes empregados em cromatografia lquida, dentre os quais se destacam os derivados
de slica C8, C18 e CN. Os mecanismos de reteno na SPE assemelham-se aqueles
envolvidos na cromatografia lquida em coluna e dependendo do adsorvente e do modo como
empregada, a SPE dividida em modo reverso, modo normal e troca inica. Nos casos das
fases reversa, a reteno do analito acontece devido, rimeiramente, s interaes de van der
Waals no polares, entre as ligaes carbono-hidrognio do analito com os grupos funcionais
da superfcie da slica. J no modo normal, as principais interaes so entre grupos polares
do analito e da fase extratora atravs de ligaes de hidrognio, interaes TT-TT e dipolo-
dipolo. Por fim, no modo de trocas inicas interaes eletrostticas so as responsveis pela
extrao seletiva do analito. A SPE conta com uma grande variedade de adsorventes
disponveis, que podem ser empregados com os mais diversos tipos de matrizes e classes de
compostos.