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Laboratorio de Qumica Orgnica I

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Experimento #7
Cromatografa en capa fina y en papel
La cromatografa es quizs la tcnica ms importante usada en qumica orgnica para
separar componentes de una mezcla. Esta tcnica involucra la distribucin entre dos fases,
de los diferentes compuestos o iones en la mezcla. Una de ellas es la fase estacionaria y la
otra la fase mvil. La cromatografa se basa en el mismo principio que la extraccin con
disolventes. En la extraccin, los componentes de una mezcla se distribuyen entre los dos
disolventes de acuerdo a sus solubilidades relativas en ambos. El proceso de separacin en
cromatografa depende de que tan fuertemente son adsorbidos los componentes de la
mezcla en la fase estacionaria y que tan solubles son en la fase mvil. Estas diferencias
dependen de las polaridades relativas de los componentes de la mezcla.
Esquema de la cromatografa en capa fina:
solve el por recorrida Distancia
muestra la por recorrida Distancia
Rf
Distancia
recorrida por
la muestra
Distancia
recorrida por
el disolvente
Centro de masa
Rastro
Figura 2
Lmite del solvente
Placa inicial
Lnea a lpiz
Aplicacin de muestra
Placa dentro de la cmara de
desarrollo
Nivel del disolvente
A medida que el disolvente se
desplaza, hace que la muestra
aplicada se mueva tambin
Un buen disolvente
causa una buena
separacin de los
componentes de la
mezcla
a b c
Figura 1
d
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PARTE A SEPARACIN DE COLORANTES DE ALIMENTOS POR CROMATOGRAFA
EN PAPEL
Procedimiento.
1. Prepare varias micropipetas (tubos capilares)
2. Corte una pieza rectangular de papel Whatman No. 1 para cromatografa 6,5 x 4 cm
3. Dibuje una lnea con lpiz, aproximadamente a 1,0 cm del lado mas angosto (ver figura 1-
a)
4. Haga cuatro marcas con lpiz en la lnea, a intervalos equidistantes e identifique cada
marca con la inicial del colorante. (previo a la aplicacin de muestra)
5. Diluya en agua un poco de colorante para alimentos de cada uno de los cuatro colores a
trabajar
6. Usando micropipetas o capilares por separado para cada muestra, coloque una gota de
cada color en cada marca y deje secar. (figura 1-a, aplicacin de la muestra)
7. Diluya 5 ml de alcohol isoproplico con 2.5 ml de agua en un matraz Erlenmeyer pequeo
y transfiera esta solucin a un vaso de precipitados (150 ml), evitando salpicar las
paredes. Asegrese que el nivel del solvente quede abajo de la muestra aplicada. (figura
1-b)
8. Coloque el papel dentro del vaso de precipitados (cmara de desarrollo) y tpelo con
papel aluminio o un vidrio de reloj y permita que el disolvente eluya durante 30-40 min, o
hasta que el disolvente llegue a aprox. 0.5 cm del borde superior. (ver figura 1-d)
9. Saque el cromatograma y djelo secar.
10. Calcule los factores de reparto (Rf) dividiendo la distancia que recorri cada muestra
entre la distancia que recorri el solvente para cada colorante. (Figura 2)
PARTE B PREPARACION DE CROMATOPLACAS PARA CROMATOGRAFA EN
CAPA FINA (CCF) Y SELECCIN DEL SOLVENTE DE DESARROLLO
Procedimiento.
1. Limpie y seque varios (2 o 3) portaobjetos.
2. En un matraz Erlenmeyer pese el adsorbente y adicione agua. El adsorbente usado en
este experimento es slica gel, la relacin de gel: agua es de 1: 2. Pese 2.5 g de slica gel
HF - 254 y mzclelos con 5 g de agua destilada, agitando durante un minuto hasta que
todo el polvo este mojado y proceda a la aplicacin, este material debe usarse
rpidamente porque el gypsum* presente hace endurecer la mezcla.
*Los materiales adsorbentes ms comnmente utilizados en CCF son el oxido de
aluminio (alumnina G) y gel de slice G (cido silcico). La G indica la presencia de
gypsum (sulfato de calcio). El gypsum hmedo se vuelve una masa rgida (CaSO
4
.2H
2
O)
IMPORTATE: NO MUEVA LA
CAMARA DE DESARROLLO NI
CROMATOPLACA MIENTRAS
REALICE LA ELUCION!
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lo que permite unir al adsorbente y adherirlo a las placas del vidrio. Generalmente se
adiciona en un 10-13%.
3. Extienda la mezcla usando un gotero o con una pipeta Pasteur. Primero aplquelo por las
orillas del portaobjetos dejando aproximadamente un cm para sujetarla. Inmediatamente
rellene el centro desde el fondo hacia arriba tratando de extender la mezcla. Si se
requiere adicione un poco de agua a la mezcla y revuelva bien.
4. Deje secar durante 15-30 min hasta que el agua de la superficie haya desaparecido.
Despus active la placa en una estufa a 105
o
C durante 30 min.
5. Prepare 3 soluciones de: a) benzoina, b) bencilo y c) benzoina+ bencilo al 1% en acetona.
6. Prepare 3 cromatoplacas apliando a cada una, con un capilar, tres gotas una de cada
solucin preparada anteriormente de la manera siguiente:
7. Desarrolle cada cromatoplaca con un solvente diferente, con la finalidad de elegir el
mejor. Los tres solventes son hexano (no polar), cloruro de metileno (moderadamente
polar) y acetona (polar).
8. Revele con vapores de yodo*. (Cuidado los vapores de yodo son txicos!). Mida los Rf
para cada compuesto, comprelos y elija el mejor solvente de desarrollo.
PARTE C ANLISIS DE ANALGSICOS MEDIANTE CCF. USO DE
CROMATOPLACAS COMERCIALES
1. Recorte una pieza rectangular de aprox. 6.5 x 4 cm (Cuidado de no maltratar las orillas!),
o bien a un tamao que ajuste al tamao del vaso de precipitados que vaya a usar como
cmara reveladora.
* Coloque algunos cristales de yodo en un frasco con tapa, coloque la placa dentro, tape
y espere unos minutos hasta que las manchas reaccionen con el Iodo y se observen a
simple vista. La mayora de los compuestos orgnicos reaccionan con el Iodo dando
compuestos con diferentes tonalidades entre los colores amarillo-naranja-caf.
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9. Tome dos tabletas de un medicamento desconocido (el compuesto ser proporcionado
por el maestro), pesan aproximadamente 1 g, pulvercelas en un mortero. Transfiera el
polvo a un tubo de ensaye y aada 5 ml de cloruro de metileno y etanol (1:1). Agite y
deje precipitar el excipiente. Mrquelo como MEZCLA DESCONOCIDA (este paso lo
realiza slo un equipo para todo el grupo)
10. Prepare las disoluciones estndar patrn de cafena, cido acetilsaliclico,
acetaminofn e ibuprofeno a una concentracin de 1g / 5 ml de una mezcla de cloruro de
metileno y etanol (1:1). Si no se encuentran las soluciones patrn entonces use tabletas
de los medicamentos que contengan estos analgsicos. (Cada equipo preparar un
estndar diferente)
11. Aplique con un capilar o micropipeta una gota de cada solucin patrn y una gota de la
mezcla problema a 1.0 cm del borde de la placa, a una distancia de separacin
razonable. Anote en su bitcora el orden en que haga las aplicaciones. (figura 1-a)
12. Prepare el disolvente de desarrollo o de elusin, cido actico glacial 0.5 % en acetato de
etilo. Transfiera una pequea cantidad (hasta que el volumen llegue aproximadamente a
medio centmetro de alto en la cmara). Sumerja la placa en la cmara cromatogrfica
(vaso de precipitados de 50 ml), tape lo ms hermticamente posible y permita que el
disolvente eluya hasta un nivel entre 0.5 y 1 cm antes de alcanzar el borde superior
(observar si se la velocidad, si la elucin se detiene retrela). Marque la distancia
recorrida por el solvente.
13. Saque la placa y djela secar al aire. Ilumine la placa con luz UV, marque las manchas
que observe y mida la distancia recorrida. Enseguida revele tambin con Iodo.
14. Calcule los Rf para cada una de las manchas.
11. Determine por comparacin de los Rf de cada estndar y por las caractersticas
observadas al revelar con UV y Iodo, los componentes de la MEZCLA DESCONOCIDA.