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CROMATOGRAFA

INTRODUCCIN

La cromatografa de capa delgada (CCD) es uno de los mtodos ms ampliamente
utilizados para separar, identificar y, en algunos casos hacer el seguimiento de una
reaccin qumica. En principio del CCD es sencilla. se produce una capa uniforme de
adsorbente slido adecuado (fase estacionaria) sostenida sobre una placa de aluminio o
vidrio. Se coloca con un capilar en el origen de la placa una mancha de solucin de
compuesto orgnico o mezcla en estudio, se deja que un solvente adecuado (eluyente o
fase mvil) ascienda por la capa del adsorbente por capilaridad. El compuesto o
compuestos separados se localizan en la placa directamente en el caso de compuestos
coloreados, con la ayuda de un indicador, o con luz ultravioleta cuando la fase
estacionaria tiene el indicador ultravioleta (qumicamente inerte) el cual produce
fluorescencia al irradiarse con luz UV de onda corta (254 nm) u onda larga (366 nm)
dependiendo el tipo de indicador utilizado.

Los compuestos ascienden por la capa de adsorbente a diferentes velocidades con
relacin al eluyente realizndose de esta forma la separacin de los compuestos de la
mezcla. A veces es posible identificar los componentes midiendo la velocidad relativa de
cada uno con relacin a aquella del frente del solvente. Esta movilidad relativa se conoce
como el valor del Rf del compuesto y se define por:

El valor de Rf es una constante de cada compuesto bajo un conjunto de
condiciones definidas (eluyente, fase estacionaria, temperatura, espesor del absorbente y
humedad). Los valores de Rf se encuentran en el rango de 0 a 0.999%. La distancia se
mide al centro de la mancha.

La cromatografa de columna (CC) es otro de los mtodos ms efectivos utilizados para
la separacin de compuestos, especialmente cuando otros mtodos de separacin ms
comunes han resultado poco efectivos. En esta tcnica cromatogrfica las mezclas se
resuelven pasando una fase lquida mvil (eluyente) a travs de la fase estacionaria slida
empacada en una columna de vidrio. En la CC clsica el sistema ms empleado es el de
adsorcin; como las fuerzas de atraccin son diferentes para los distintos compuestos,
estos fluyen de arriba hacia abajo con velocidades diferentes, los menos atrados eluyen
primero.

El tamao de la columna depende de la cantidad de la muestra que se va a separar y el
grado de resolucin. Suelen usarse razones de 30:1 de peso adsorbente: peso muestra. En
esta prctica se desarrollar el cromatograma de una mezcla de tintes.

OBJETIVOS
Aplicar la CCD y la CC como tcnicas de separacin de una mezcla de tintes.
Comparar la eficiencia y aplicacin de la CCD y CC como ejemplos de los mtodos
cromatogrficos.

MATERIALES
EQUIPOS E IMPLEMENTOS
REACTIVOS Y SUSTANCIAS
1 Columna cromatogrfica 10 cm
Algodn
1 Gotero
Papel de filtro
1 Lpiz o pedazo de manguera
Almina
2 Beakers de 20 mL
Mezcla de tintes
2 Vidrios de reloj
Etanol
2 placas par CCD
Arena
1 Gradilla
4 tubos de ensayo pequeos

Figura . Diferentes tipos de cromatografa: a) de capa delgada o fina; b) de columna; c)
esquema de cromatografa lquida.

RECOMENDACIONES
Para golpear la columna durante su empaquetamiento utilice una varilla de vidrio
forrada en un tubo de caucho u otro material que no se rompa.
Los pares de tintes que puede utilizar para eta prctica son: fluorescena y azul de
metileno; naranja de metilo y azul de metileno; naranja de metilo y azul victoria B.)
Trabaje con un miligramo de cada tinte, disuelto en etanol de 95%.
La almina debe ser para columna y bsica.
Se recomienda utilizar lana de vidrio en lugar de algodn, debido a que algunos
componentes tien al algodn dificultando una buena separacin.

RIESGOS
En contacto permanente y a largo plazo, la lana de vidrio y la almina pueden ser
nocivas.

PROCEDIMIENTOS
Parte A: Cromatografa de columna.
1. Se introduce en la columna un copito de algodn, luego 2.0 g de almina, usando
para esto el mismo papel donde se pes. Se coloca una capita fina de arena y/o
algodn. Se golpe suavemente la columna para que la fase estacionaria se acomode,
sin dejar espacios vacos.
2. Se ajusta la altura para que debajo se pueda alinear una serie de 4 tubitos de ensayo
colocados en la gradilla. Estos servirn
para recoger las fracciones. Se rotulan
#1, #2, #3 y #4. Se aade, con un
gotero, suficiente etanol para que se
humedezca toda la columna. Se golpea
otra vez para lograr que se eliminen
burbujas de aire y quede bien compacta
la fase estacionaria. Se permite que
empiece un goteo moderado de solvente
y se recoge ste en el tubo de ensayo
#1. Durante este proceso, se sigue
aadiendo solvente para que la
columna no se seque.
3. Cuando el solvente se encuentre 2-3 cm
por encima de la fase estacionaria, se
aaden 3 gotas de la mezcla de tintes,
se adiciona etanol poco a poco hasta
que la mezcla se introduzca en la fase
estacionaria, luego se agrega etanol
hasta casi llenar la columna de vidrio,
se recoge la primera fraccin en el tubo
#2 hasta que el solvente sea incoloro
(par notar esto mejor, se coloca un
papel blanco detrs de las gotas que
van cayendo).
4. Se cambia al tubo de ensayo #3 y el
solvente a agua sin dejar secar la
columna. Se aade suficiente agua para
obtener una fraccin de color claro
hasta que nuevamente empiece a
recoger gotas incoloras. Se cambia
ahora al tubo #4 y se recoge la fraccin
del ltimo tinte.
5. Mida el volumen de cada fraccin y
anote su color


Parte B: Cromatografa de capa delgada.
1. Se toman dos beakers de 20 mL con dos vidrios de reloj como tapas) como cmaras
para desarrollar el cromatograma. Se rotulan #1 y #2. Los solventes de elucin
(etanol-agua) en cada uno sern como sigue: beaker 1 (10:1) y beaker 2 (1:10)
2. Se coloca en los beakers alrededor por la parte interna, una tira de papel de filtro y
una cantidad de la mezcla de solventes para la elucin, suficiente para que al
introducir la placa, se humedezca completamente el borde inferior de sta (el nivel del
solvente debe quedar por debajo de las manchas aplicadas).
3. Reciba de su profesor 2 placas para cromatografa de capa fina. Se coloca en cada una
un punto de la mezcla de tintes y un punto de la solucin de tinta puro soluble en
etanol (que tambin le entregar el instructor), a aproximadamente 1 cm del borde.
Para esto, se sumerge un capilar bien fino en la mezcla de tintes y se toca levemente
la superficie de la placa para transferir una cantidad bien pequea de mezcla. La
mancha que se forma no debe ser ms grane que la cabeza de un alfiler. Con capilares
diferentes haga lo mismo con las soluciones de los tubos #2 y #4.
4. Se coloca la placa en el beaker #1 hasta que llegue el solvente a 0.6 cm del borde
superior de la placa. Note el tipo de separacin que se obtiene. Se saca la placa y
antes de que se evapore el solvente, marque con un lpiz hasta donde lleg ste.
5. Se repite el proceso con otra placa, pero se desarrolla este cromatograma en el beaker
#2.
6. Se calcula Rf para cada mancha en las dos placas. Cul sistema de solventes es
mejor para separar la mezcla de tintes?

GUA DE CONSULTA:

1. Consulte los fundamentos fsicos y qumicos de los procesos cromatogrficos.
2. Cules son algunos criterios que deben tenerse en cuenta en la eleccin de
adsorbente en una separacin cromatogrfica determinada?
3. Descrbanse dos procedimientos hmedos y uno seco para el relleno de una columna
cromatogrfica.
4. Cules son algunos de los mtodos que se pueden emplear para la localizacin de las
bandas de adsorcin cuando una mezcla de compuestos incoloros se somete a una
cromatografa de este tipo?
5. Explique por qu y cmo se separan los compuestos de la mezcla de tintes.
6. Qu es la cromatografa de columna seca? Cmo se desarrolla?
7. Cul es el desarrollo mltiple y el desarrollo bidimensional de CCD?
8. En qu consiste la cromatografa de CCD preparativa?
9. Qu es una resina de intercambio aninica y una resina catinica?
10. Indique algunas de las aplicaciones de la cromatografa de adsorcin en columna.
11. Usted tiene un compuesto impuro y quisiera saber cuntas sustancias estn
contaminando su compuesto. Explique cmo lo hara utilizando cromatografa de capa
delgada o de papel.
12. Si una mezcla de naftaceno, antraceno y naftaleno se cromatografa sobre almina,
cul de los tres hidrocarburos se eluir primero y cul el ltimo?

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