TRANSFORMAES BIOQUMICAS

Prof. Rodrigo L. O. R. Cunha

Prova 2 17/10/2013

CRITRIOS E RESPOSTAS

Orientaes:
- coloque nome e RA na folha de prova e na folha de respostas;
- tempo de durao da prova: 100 minutos;
- a resposta deve ser em caneta azul ou preta;

Questes:
1) Uma mistura de protenas foi separada
utilizando cromatografia lquida em
coluna e foram obtidas duas fraes
denominadas 1 e 2. As fraes foram
submetidas separao por
eletroforese em gel de poliacrilamida
(SDS-PAGE) e, aps etapas de colorao
e descolorao, o resultado obtido
pode ser visualizado na figura ao lado.
Analise a figura e responda:
(a) Quais as massas moleculares aproximadas das amostras 1 e 2 analisadas? (5%)
As protenas 1 e 2 tem massas moleculares de cerca 38kDa e 97kDa, respectivamente.
(b) Que concluses podem ser tiradas deste resultado com relao estrutura das protenas das amostras 1 e 2, considerando
tambm o tratamento com o -mercaptoetanol? (7,5%)
Como o -mercaptoetanol um agente redutor capaz de reduzir ligaes de dissulfeto, protenas
compostas por mais de uma cadeia polipeptdica unidas por pontes de dissulfeto, so separadas pelo
agente redutor. Assim, a protena 1 composta por duas cadeias: uma de cerca de 17 kDa e a outra
com cerca de 21kDa, a protena 2, por sua vez, composta por uma nica cadeia.

2) Uma limitao experimental que sempre deve ser considerada para o estudo de proteases (ou peptidases) se deve ao
fenmeno de autlise, resultado de sua especificidade por substratos peptdicos e atividade cataltica. A investigao de
serina proteases pancreticas apresenta esta limitao. Este problema menos crtico, entretanto, para solues de
quimotripsina do que para solues de tripsina ou elastase. Explique. (dica: Considere a especificidade primria destas
enzimas). (10%)

A autlise observada por proteases causa uma variao na [E] pois a protease
substrato dela mesma. Se considerar a especificidade primria destas trs serina
proteases, isto , a preferncia de hidrlise da cadeia peptdica que oriunda da
interao da cadeia lateral do resduo de aminocido que sofrer a hidrlise com
a poro do stio ativo das enzimas (Figura ao lado).
possvel notar que a quimotripsina se diferencia da tripsina e da elastase por
ter afinidade por resduos bsicos e carregados positivamente ou pequenos,
respectivamente, enquanto a quimotripsina por grupos aromticos, mais
volumosos e hidrofbicos.
Pulo do gato: Se a quimotripsina menos suscetvel a autlise que a tripsina e a elastase, isto deve
ser reflexo da disponibilidade das cadeias de aminocidos que estariam disponveis para interagir
com o stio ativo, ou seja, na superfcie da protena, ou nas pores carbxi ou amino-terminais;
nestes casos h ampla interao das cadeias laterais destes resduos com o solvente, a gua. Como
grupos apolares/hidrofbicos volumosos tendem a se encontrar voltados para o interior da protena
enovelada, estes grupos tem alta afinidade pelo stio ativo da quimotripsina, as ligaes peptdicas
destes resduos no estariam disponveis para interao com o stio ativo desta enzima e serem
hidrolisados. Em contraste, os grupos funcionais bsicos ou pouco volumosos, mais frequentes na
superfcie da protena (pois interagem mais favoravelmente com gua) estariam mais disponveis
para interao com os stios ativos da tripsina e elastase, respectivamente, justificando a maios
susceptibilidade autlise destas ltimas em relao primeira.

3) Tofu (em japons: , tfu) um produto derivado de soja rico em protenas, muito consumido por asiticos,
preparado de forma que o inibidor de tripsina presente nos gros de soja seja removido. Explique a razo deste
tratamento. (15%)

Como a tripsina uma enzima importante no processo de digesto de protenas/peptdeos, ingerir
um inibidor desta enzima interfere neste processo prejudicando a absoro de peptdeos pequenos e
aminocidos. Alm disso, pode acarretar no funcionamento normal do pncreas. Portanto, este
tratamento seria, assim, justificado para evitar m digesto.

4) A partir da estrutura aliftica da D-glicose ao lado, represente sua estrutura nas formas de -piranose e -
piranose e tambm a estrutura qumica do dissacardeo -D-glicopiranosil (11) -D-glicopiranose. (7,5%)

Projeo de Haworth para a -D-glicopiranose:
Projeo de Haworth para a -D-glicopiranose:
Projeo de Haworth para o dissacardeo -D-glicopiranosil (11) -D-glicopiranose:


5) Qual a razo do processo de formao de micelas ser termodinamicamente favorecido? O mesmo se aplica para a gnese
de vesculas? (15%)

A formao de monocamadas e micelas termodinamicamente favorecida em funo da
contribuio entrpica da gua que para conter a molcula anfiflica inteira em si, deve ser
estruturar formando gaiolas, neste processo o S
gua
negativo. Por sua vez, o S
surfactante
tambm o
. Estes processos so resultado de um balano delicado entre foras de atrao e repulso entre os
componentes da molcula anfiflica e as do solvente - estes parmetros afetam principalmente H.
Ao contrrio de micelas, que so monocamadas fechadas em si, as vesculas so bicamadas fechadas
em si. Os mesmos processos ocorrem para a estabilizao das bicamadas ocorrem para as vesculas
entretanto h, ainda, foras mecnicas oriundas de possveis diferenas entre os potenciais qumicos
interno e externo refletidos na presso osmtica, por exemplo; este parmetro mais crtico,
entretanto, se a bicamada no for permevel.

6) A membrana plasmtica um sistema multicomponente dinmico e funcional. Com base nesta afirmao geral, explique a
vantagem que um sistema celular adquire com a compartimentalizao de ambientes distintos em seu interior. (15%)

A vantagem da compartimentalizao permite que ambientes com caractersticas qumicas
distintas sejam possveis no interior da clula, para a realizao de processos que demandem
condies especficas. Considerando -se que sistemas de transporte funcionais atuam para
possibilitar diferentes concentraes de solutos entre os meios exterior e interior de compartimentos,
h gasto de energia para vencer a presso osmtica, pode-se assim conseguir ambientes cidos,
bsicos ou com concentraes de ons metlicos (Ca
2+
, por exemplo) em compartimentos isolados do
citosol. Estes compartimentos possuem funcionalidades diferentes e so chamados de organonelas.

7) Discorra sobre como se ocorre o fluxo da informao contida no genoma de seres vivos. Embora a sua dissertao deva ser
breve, ela deve contemplar, necessariamente, os seguintes termos: DNA, RNA, zimognio, protena ativa, metablitos e
controle de expresso gnica. (25%)
Respostas variadas so possveis, desde que se considere corretamente o fluxo ilustrado em
OU






ALM DISSO, os metablitos so produto da ao de enzimas.