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PROBLEMAS DE AMINOCIDOS
1. Dibuje las curvas de titulacin de los aminocidos Phe, Cys, Arg, as como las especies
inicas existentes al inicio y al final de la titulacin, en los pK
a
's y en el pI.

2. Defina los siguientes trminos:
Regulador
pH fisiolgico
Zwitterin
Enlace polar
Enlace no polar
Enlace de hidrgeno
Interaccin polar
Interaccin no polar,
Interaccin hidrofbica
Interaccin de van der Waals.
3. Indique la carga neta que tendrn los amiocidos gly, asp, lys y his a:
a) pH 1.0
b) pH 2.1
c) pH 4.0
d) pH 10.0
Asimismo indique hacia que polo migrarn en cada caso al ser sometidos a electroforesis.
4. Calcule el volumen de NaOH 0.1M que se requiere para titular completamente:
a) 450 ml de clorhidrato de ala 0.25M
b) 200 ml de ser isoelctrica 0.1M
c) 400 ml de glu 0.15M, pH 11.2
5. A una resina de intercambio aninico se le aade una mezcla de lys, his y glu. Prediga el
orden de salida cuando se utilizan secuencialmente los siguientes reguladores:
a) Regulador Tris 0.1M, pH 8.3
b) Regulador de fosfatos 0.1M, pH 7.6
c) Regulador de citratos 0.2M, pH 3.5
PROBLEMAS DE PROTENAS
1. Se tiene el siguiente pptido: arg-glu-ala-ile-lys-asp
Despus de someterlo a una hidrlisis cida, se hace pasar por una columna de intercambio
catinico (Dowex-50), utilizando secuencialmente las siguientes soluciones amortiguadoras:
a) Regulador de citratos 0.25M. pH 5.0
b) Regulador de fosfatos 0.1M. pH 7.4
c) Regulador Tris 0.1M, pH 8.3
Establezca el orden de la salida de los aminocidos.
2. Explique la serie de experimentos que debern realizar para determinar la composicin de
aminocidos de una protena monomrica y de una polimrica.
3. Se purifican las protenas -amilasas de diferentes organismos para verificar cual es la ms
til en la industria. La primera -amilasa se purific a partir de Bacillus subtilis (I), la segunda de
B. amyloliquefaciens (II) y la tercera del pltano (III). Despus de un proceso de purificacin para
verificar su pureza y determinar el peso molecular de cada una se sometieron a una electroforesis
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en gel de poliacrilamida con SDS (PAGE-SDS), junto con un marcador de peso molecular. El gel
resultante de la electroforesis fue el siguiente:












a. Cul es el peso molecular de cada una?
b. Por qu esta electroforesis determina que la electroforesis se ha purificado efectivamente?
4. Se somete a electroforesis en gel a una mezcla de cinco pptidos cuyos valores de PI son:
A) 5.5
B) 10.2
C) 8.2
D) 9.0
E) 7.2
La mezcla se aplica en el centro del gel, se emplea un regulador de fosfatos de pH 7.0 y se aplica
corriente. Marque las bandas que corresponden a cada uno en el siguiente esquema.




Origen
Suponga un PM cercano a 1200 para todos
5. Se realizo la elusin de un conjunto de protenas de peso molecular conocido en Sephadex
G-200 para elaborar una grfica de calibracin de Peso Molecular (PM) cuyos resultados fueron:
Protena PM Volumen de elusin (mL)
-globulina 158 000 58
Transferrina 88 000 69
Seroalbmina 67 000 72
Quimotripsingeno 25 000 92
Mioglobina 16 900 98
Para determinar el P. M. de la albmina de huevo se eluy la muestra pura en la misma columna,
dando un volumen de elusin de 81 ml cual es el PM de la protena? Dibuje el perfil de elusin
de las protenas patrn.



I II III PM
100
68
43
36
29
17
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PROBLEMAS DE ENZIMAS
1. Que relacin existe entre la Km y la concentracin de sustrato cuando una reaccin
catalizada enzimticamente alcanza el 80% de la V max.?
2. La penicilina es hidrolizada y con ello inactivada por la penicinilasa, enzima presente en las
bacterias resistentes al antibitico, y en un experimento se obtienen los siguientes resultados:
[penicilina] penicilina hidrolizada
moles X l0
-5
moles X l0
-6
/min
0.1 0.11
0.3 0.25
0.5 0.34
1.0 0.45
3.0 0.58
5.0 0.61
La masa de la enzima en Staphylococcus aureus es de 29.6 kd. Para el ensayo se midi la
cantidad de penicilina hidrolizada en un 1minuto en 10 ml de solucin con 10 g de penicilinasa
pura, en funcin de la concentracin de penicilina (se supone que la concentracin de penicilina
no se modifica apreciablemente durante el ensayo).
a)Obedece la penicilinasa a una cintica de Michaelis-Menten?
b) De ser as determine el valor de Km y de la Vmax.
c) Determine el nmero de recambio de la enzima bajo estas condiciones, supngase un centro
activo por molcula de enzima.
3. El salicilato es un inhibidor de la glutmico deshidrogenasa (GDH). En un ensayo de la
actividad de la enzima se obtuvieron los siguientes datos:
[glu] mM mg de NH
4
/min
sin salicilato con salicilato
1.5 0.21 0.08
2.0 0.25 0.10
3.0 0.28 0.12
4.0 0.33 0.13
8.0 0.44 0.16
16.0 0.42 0.18
Realice la grfica de concentracin de sustrato contra actividad enzimtica. Tambin elabore la
grfica con los inversos. Determine de forma analtica como grfica el Km y Vmax para cada
caso, as como el tipo de inhibicin que presenta el salicilato y su Ki sabiendo que la
concentracin empleada de salicilato es de 5mM.
4. En presencia de una concentracin de sustrato a saturacin 1.4 mg de una enzima dan una
velocidad de 6.2 mmoles de producto formado por minuto. El P. M. de la enzima es de 52 500.
Cul es la actividad molecular de la enzima?
5. Qu concentracin de inhibidor competitivo se requiere para producir el 75% de inhibicin
a una concentracin de sustrato de 11.5 X 10-23 M, si el Km es de 2.9 X 10-4 M y el Ki es de 2 X
10-5 M.
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6. A partir de los siguientes datos, determine el tipo de inhibicin que se presenta en una
reaccin enzimtica hipttica y la Ki del inhibidor. Elabore la grfica.
[S] g/hora ,
mM sin I Con I
2.0 139 88
3.0 179 121
4.0 213 149
10.0 313 257
15.0 370 313
7. El microorganismo A produce una proteasa que cataliza la reaccin: SP. Un hongo
microscpico B cataliza la misma reaccin. Los datos cinticos que se obtienen de ambas
isoenzimas puras son los siguientes:
[S] velocidad inicial
moles/mg de protena/min M
A B
1.0 0.9 5.0
2.5 1.54 6.6
3.5 1.98 8.0
5.0 2.86 10.0
7.0 3.78 11.6
10.0 5.00 13.3
12.5 6.67 15.0
15.0 7.15 15.4
20.0 8.00 16.0
30.0 10.00 17.1
a) Se trata de dos isoenzimas de la misma enzima? ,
b) Cul seleccionara para su obtencin y utilizacin industrial? Explique (suponga que ambos
microorganismos crecen fcilmente).
8. La Vmax de una reaccin enzimtica a 21 y 37C es de 140 y 400 mmol/min
respectivamente. Calcule el Q entre 21C y 37 C.
9. Se obtienen los siguientes datos cinticos de una reaccin enzimtica:
Sustrato (moles x 10
-4
)
Velocidad moles/L/min)
6.25 1.54
12.5 5.88
25.0 20.0
50.0 50.0
100.0 80.0
200.0 94.12
400.0 98.46
800.0 99.61
Determine el tipo de cintica de la enzima.



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10. La enzima L-aspartato transcarbamilasa (ATCasa) cataliza la reaccin:
Carbamil fosfato + L-aspartato Carbamil aspartato + Pi
en la ruta de sntesis de nucletidos trifosfato pirimidinicos (CTP y UTP). Se midi la velocidad
de la reaccin de la enzima con respecto al aspartato en presencia y ausencia de ATP, dando los
siguientes datos:
[aspartato] Velocidad (moles/l/min)
mM con ATP sin ATP
1 02 0.29
2 0.2 0.6
5 0.28 1.42
10 0.58 3.7
20 2.4 4.8
25 4.8 5.44
30 5.3 5.9
35 6.1 6.2
40 6.3 6.3
45 6.3 6.3
a) Despus de elaborar las grficas correspondientes, determine el efecto del ATP sobre la
enzima.
b) Determine la Km con y sin ATP
c) Consultando la bibliografa explique el comportamiento de la enzima.