Horizontes de La Proteomica en El Diagnóstico y TX de La Enfermedad Cardivascular

164 Clin Invest Arterioscl.
2008;20(4):164-72
La protemica es una nueva tecnologa, incluso
algunos la llegan a considerar como una nueva
ciencia, que permite analizar la expresin de
mltiples protenas a la vez en una nica muestra.
La protemica puede facilitarnos identificar
nuevos biomarcadores tiles para el pronstico y el
diagnstico de las enfermedades cardiovasculares.
El anlisis protemico est comenzando a dar
resultados en el conocimiento de la aterosclerosis,
isquemia miocrdica o hipertrofia ventricular,
entre otras enfermedades cardiovasculares. Una
importante aplicacin de la protemica es la
farmacoprotemica, que trata de identificar
biomarcadores que permitan predecir la respuesta
farmacolgica de un paciente. Adems, mediante
la farmacoprotemica tambin podemos
identificar las variaciones en la expresin proteica
asociada a un tratamiento farmacolgico
especfico, lo que facilitar conocer los efectos
clase y pleiotrpicos de los frmacos.
Palabras clave:
Protenica. Enfermedad cardiovascular. Biomarcadores.
PROTEOMIC HORIZONS IN THE DIAGNOSIS
AND TREATMENT OF CARDIOVASCULAR
DISEASE
Proteomics is a new technology, even being
considered as a new science that can analyse the
expression of many proteins at the same time in a
single sample. Proteomics may help us to identify
new biomarkers for use in the diagnosis and
prognosis of cardiovascular diseases. Proteomic
analysis is starting to produce results in the
knowledge of cardiovascular diseases including,
atherosclerosis, myocardial ischaemia and
ventricular hypertrophy. One important application
of proteomics is pharmacoproteomics, which
attempts to identify biomarkers that may be able to
predict the pharmacological response of a patient.
Furthermore, we may be able to use
pharmacoproteomics to identify variations in
protein expression associated to a specific
pharmacological treatment, which will help in
understanding the class and pleiotropic action of
drugs.
Key words:
Proteomics. Cardiovascular disease. Biomarkers.
El coste econmico, social y humano debido a la
alta incidencia de las enfermedades cardiovascula-
res contina aumentando. La inversin realizada
en investigacin en esta rea es una de las ms al-
tas, junto con la de las enfermedades oncolgicas.
Sin embargo, a pesar del aparente avance en el co-
nocimiento de las enfermedades cardiovasculares,
el nmero de dianas teraputicas y de tratamientos
realmente efectivos contina siendo sorprendente-
mente limitado. Adems, el nmero de biomarca-
dores cardiovasculares tiles es muy pequeo.
Este trabajo se ha realizado con la colaboracin de la Red
HERACLES (RD 06/009).
Correspondencia: Dr. A. Lpez Farr.
Unidad de Investigacin Cardiovascular. Servicio de Cardiologa.
Instituto Cardiovascular. Hospital Clnico San Carlos.
Prof. Martn Lagos, s/n. 28040 Madrid. Espaa.
Correo electrnico: lcarinv.hcsc@salud.madrid.org
Recibido el 18 de enero de 2008 y aceptado el 6 de marzo de
2008.
Horizontes de la protemica en el diagnstico
y el tratamiento de la enfermedad cardiovascular
Antonio Lpez Farr
a
, Juan Gonzlez Armengol
b
, Petra J. Mateos-Cceres
a
y Carlos Macaya
a
a
Unidad de Investigacin Cardiovascular. Servicio de Cardiologa. Instituto Cardiovascular. Hospital Clnico San Carlos.
Madrid. Espaa.
b
Servicio de Urgencias. Hospital Clnico San Carlos. Madrid. Espaa.
Revisin
06 REVISION 1165 (164-172).qxp 23/7/08 10:38 Pgina 164
Documento descargado de http://http://zl.elsevier.es el 07/11/2013. Copia para uso personal, se prohbe la transmisin de este documento por cualquier medio o formato.
LPEZ FARR A ET AL. HORIZONTES DE LA PROTEMICA EN EL DIAGNSTICO Y EL TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD CARDIOVASCULAR
El objetivo ltimo de la medicina moderna es
poder alcanzar un tratamiento individualizado del
paciente. Conocer la etiologa de la enfermedad en
cada paciente, la respuesta de cada paciente a los
factores de riesgo, los factores que facilitan la pro-
gresin de la enfermedad, qu factores genticos
van a hacer al paciente susceptible a esta enferme-
dad, cul es el perfil metablico del paciente y cu-
les son las protenas que expresa el paciente que
ms nos ayuden a identificar el pronstico de ste,
as como su susceptibilidad al tratamiento, son en
el momento actual centro de investigacin. Para
conseguir todos estos objetivos, debemos utilizar
nuevas tecnologas que van desde el conocimiento
de los genes contenidos en las clulas de los indivi-
duos (genoma), cules de ellos se expresan (trans-
criptmica), cul es la funcionalidad de sus prote-
nas (metabolmica) y cul es su perfil de expresin
proteica (protemica). Todas estas tecnologas se
conocen ahora con el nombre de nuevas ciencias,
las cuales pueden favorecer la transicin desde la
investigacin bsica a la prctica clnica, con el fin
ltimo de alcanzar el desarrollo de la medicina per-
sonalizada.
La secuenciacin del genoma humano ha sido
sin duda uno de los mayores avances de las cien-
cias biomdicas de los ltimos aos. Una de las en-
seanzas que nos ha proporcionado la secuencia-
cin del genoma humano es que hay menos genes
(alrededor de 30.000) de los que se esperaba. Esto
ha llevado a dar una relevancia mayor a la diversi-
dad de protenas que se forman a partir de estos
genes.
Las protenas son las encargadas directas de las
funciones biolgicas. Se considera que en el ser hu-
mano hay entre 6 y 7 veces ms protenas que genes
(entre 200.000 y 250.000 protenas). Las protenas,
a diferencia de los genes, tienen una complejidad y
variabilidad mayores. Mientras que el genoma es
relativamente constante (incluso podra considerar-
se como un componente esttico de la clula), el
proteoma est continuamente cambiando, muchas
veces simplemente por la interaccin entre el geno-
ma y el entorno, lo que confiere al proteoma la ca-
pacidad de ser dinmico. En este sentido, hay que
recordar tambin que, una vez expresadas las prote-
nas, stas estn sujetas a modificaciones postrans-
lacionales, entre las que se encuentran la proteli-
Clin Invest Arterioscl. 2008;20(4):164-72 165
Separacin por carga
p.I
PM
S
e
p
a
r
a
c
i
n

p
o
r

P
M
Homogeneizacin de la muestra
Electroforesis bidimensional
Tincin del gel
Anlisis de imagen
Espectrometra de masas
Figura 1. Esquema representativo de los diferentes pasos necesarios para desarrollar un estudio protemico desde la homoge-
neizacin de la muestra, la separacin de las protenas que contiene y su identificacin mediante espectrometra de masas.
PM: peso molecular.
sis, la oxidacin de grupos sulfhidrilo, la formacin
de puentes de disulfuro, las fosforilaciones, las glu-
cosilaciones, las S-nitrosilaciones, la acilacin gra-
sa, la oxidacin, etc. Estas modificaciones bioqu-
micas producen diferentes isoformas de una misma
protena, que posiblemente tengan incluso propie-
dades funcionales diferentes a las de la protena ori-
ginal.
En qu consiste un estudio protemico?
Para realizar un estudio protemico, se necesita
integrar una serie de tecnologas. Un estudio prote-
mico conlleva la realizacin de electroforesis bidi-
mensional, anlisis de imagen, espectrometra de
masas y bioinformtica, lo que conlleva a contar
con expertos en biologa, biologa molecular, espec-
trometra de masas y bioinformtica (fig. 1).
Adems de posibilitar la identificacin de mlti-
ples protenas a la vez, una caracterstica de la pro-
temica, en comparacin con otras tcnicas con-
vencionales de identificacin de protenas, es que
la protemica no slo permite detectar y cuantifi-
car el total en la expresin de una protena, sino
tambin permite detectar y cuantificar la expresin
de distintas isoformas de una misma protena, algo
que hasta el momento no era posible con el resto
de tcnicas empleadas para el anlisis e identifica-
cin de protenas, como el Western blot, el enzi-
moinmunoanlisis, la citometra de flujo u otras.
La electroforesis bidimensional es la base funda-
mental utilizada para desarrollar los mapas de ex-
presin proteica o proteomas. La electroforesis bi-
dimensional nos permite separar las protenas en
2 dimensiones: el peso molecular y el punto isoe-
lctrico. Esta separacin bidimensional de las pro-
tenas dar lugar a un mapa de expresin proteica
en el que cada protena y sus isoformas estarn dis-
tribuidas en la coordenada formada por el peso
molecular y el punto isoelctrico. Esta coordenada,
en principio, ser nica para cada protena; en tr-
minos sencillos, es como el documento de identi-
dad de la protena.
La primera dimensin se realiza mediante el em-
pleo de geles de poliacrilamida con un gradiente de
pH inmovilizado, que garantiza la reproducibilidad
entre geles. Estos geles estn desarrollados sobre
unas tiras denominadas IPG (Isoelectric Phocusing
Gradient), y en el mercado hay tiras de IPG con
distintos rangos de pH. La utilizacin de un rango
amplio de pH (3-10), o uno ms estrecho (4-7), de-
pender de las caractersticas de pH de las prote-
nas contenidas en la muestra que queremos anali-
zar, o incluso en el inters de amplificar la zona de
estudio. Lgicamente, un rango de pH ms estre-
cho resolver ms protenas contenidas en ese ran-
go, lo que en muchas ocasiones facilita su identifi-
cacin y cuantificacin.
El fundamento de esta primera separacin de
las protenas segn el punto isoelctrico es que las
protenas presentes en el extracto a analizar mi-
gren a lo largo de la tira IPG al aplicar una corrien-
te elctrica y se distribuyan por toda su longitud
hasta alcanzar cada protena su punto isoelctrico,
es decir, el punto donde su carga neta es cero, y en
ese momento se detienen. Por lo tanto, en la prime-
ra dimensin, las protenas se separan en funcin
de su carga. La segunda dimensin se realiza en
geles SDS-PAGE, con lo que se logra la separacin
de las protenas segn su peso molecular. Una vez
realizada la segunda dimensin, las protenas pre-
sentes en el gel deben visualizarse para que poda-
mos cuantificarlas y analizarlas. Hay distintos ti-
pos de tincin del gel que, fundamentalmente, se
diferencian segn la sensibilidad a la hora de de-
tectar protenas. Destacan la tincin con azul de
Coomassie, tincin radiactiva, tincin fluorescente
y la tincin con plata.
Los mtodos de tincin ms empleados son, sin
duda alguna, la tincin con plata y la tincin con
azul de Coomassie. La tincin con plata es una de
las tinciones ms sensibles, perdura en el tiempo y
se obtiene una muy buena calidad de la imagen.
Adems, este tipo de tincin puede ser compatible
con el anlisis por espectrometra de masas. Sin
embargo, el mtodo ms recomendado de tincin
para realizar la identificacin de las protenas me-
diante espectrometra de masas es el azul de Coo-
massie.
Una vez obtenido el gel bidimensional o el mapa
de expresin proteico, el siguiente paso es el anli-
sis de la imagen. Hoy da hay diversas herramien-
tas informticas (PD-QUEST, MELANIE, etc.) que
facilitan mucho el estudio de este tipo de im-
genes.
El empleo de este tipo de programas (software)
va a permitir realizar un anlisis completo de los
mapas de expresin proteico, que permite incluso
la comparacin entre distintos grupos de mapas
proteicos. Adems, estas herramientas normalmen-
te permiten la comparacin visual con mapas pro-
temicos existentes en bases de datos disponibles
en la red. La base de datos suiza SWISS-PROT
(http://www.expasy.ch) es una de las ms conocidas
y empleadas.
La aplicacin de la espectrometra de masas
para identificar protenas y pptidos se considera
el avance principal en la caracterizacin e identifi-
166 Clin Invest Arterioscl. 2008;20(4):164-72
cacin de protenas separadas mediante electrofo-
resis bidimensional. En trminos sencillos, la es-
pectrometra de masas consiste en someter a una
protena a una digestin enzimtica, normalmente
con tripsina, que es capaz de romper la protena en
puntos o localizaciones especficas para obtener
una serie de fragmentos peptdicos especficos,
cuya masa va a servir para identificar la protena
de inters. En concreto, la tripsina rompe las pro-
tenas en la zona carboxlica de los residuos de lisi-
na y arginina, a menos que estn seguidos por una
prolina, lo que resulta en huellas peptdicas de pp-
tidos predecibles.
Los fragmentos peptdicos obtenidos son ioniza-
dos tras el tratamiento con un lser que les confie-
re carga. Los fragmentos peptdicos, una vez confe-
rida la carga, se separan en el espectro segn su
relacin masa/carga y, posteriormente, se analizan
con un detector, que es capaz de medir la intensi-
dad de cada fragmento (fig. 2).
Posteriormente, y mediante otras bases de datos
que normalmente son de acceso libre en internet,
las huellas peptdicas resultantes del anlisis de es-
pectrometra de masas se utilizan para encontrar la
homologa que nos ayudar a identificar la prote-
na. La eficiencia de esta tcnica es elevada, tanto
que incluso la identificacin de una secuencia de
5 residuos de aminocidos puede ser suficiente
para identificar la protena.
Aplicacin de la protemica en la investigacin
cardiovascular
En lneas generales, la aplicacin de la prote-
mica en el rea cardiovascular se ha focalizado en:
conocer mecanismos moleculares asociados a la
enfermedad, la identificacin de nuevos biomarca-
dores diagnstico, la identificacin de biomarcado-
res pronsticos y de evolucin. El estudio de fr-
macos a travs de la protemica se ha denominado
farmacoprotemica, de la cual hablaremos ms
adelante.
Identificacin de biomarcadores diagnstico
y pronstico en la enfermedad cardiovascular
En el conocimiento de las enfermedades cardio-
vasculares, han tenido y tienen un papel funda-
mental la identificacin de factores pronsticos y
diagnsticos, como la hipercolesterolemia, la hi-
pertensin o la diabetes. Desde el punto de vista de
los biomarcadores, solamente la tropomiosina
(para el sndrome coronario agudo [SCA]), o el
pptido natriurtico cerebral (para el fracaso car-
daco agudo) son actualmente utilizados para el
diagnstico y el pronstico de los pacientes. Con la
utilizacin de la protemica se pueden identificar
nuevos marcadores de utilidad clnica.
La sangre representa probablemente la fuente
ms accesible para la bsqueda de biomarcadores
diagnsticos y pronsticos. El plasma contiene un
rango de protenas en una concentracin desde
55.000.000.000 pg/ml (como la albmina) a 1 o
5 pg/ml (como las citocinas), con un gran rango de
concentraciones entre estos 2 extremos. Como
aproximacin, el nmero de protenas en la sangre
humana es superior a 10
6
molculas diferentes, que
representaran el producto de entre 25.000 a 30.000
genes
1
. Por todo ello, el potencial de la sangre en
contener biomarcadores de utilidad clnica es gran-
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e

d
e

i
n
t
e
n
s
i
d
a
d
1
7
5
.
1
2
2
3
2
4
4
.
1
1
4
3
3
2
2
.
2
2
3
5
4
3
5
.
2
4
7
3
5
4
9
.
2
9
9
6
5
3
2
.
2
3
4
7
6
4
7
.
2
6
2
6
7
7
2
.
2
6
7
1
1
0
2
8
.
6
4
5
8
1
1
5
0
.
7
4
3
8
1
2
4
9
.
8
0
0
0
1
5
5
0
.
9
4
6
4
1
8
0
7
.
9
5
9
1
1
9
2
1
.
9
3
6
8
1
9
2
4
.
4
0
8
7
908.4
69 461 853 1.245 1.637 2.029
Masa (m/z)
4700 MS/MS Precursor 1921.96 Spec#1[BP=549.3,908]
Figura 2. Ejemplo de un espectro de masas obtenido mediante el anlisis por espectrometra de masas en tndem (MS/MS). El eje
de las ordenadas viene definido por la relacin masa/carga de cada uno de los pptidos y por el porcentaje de intensidad, que indi-
ca la cantidad relativa de iones que poseen esta relacin carga/masa.
de, aunque todava no se ha analizado en su totali-
dad, probablemente debido, hasta ahora, a la falta
de tecnologa para alcanzar este fin.
Protemica y aterosclerosis
En la investigacin de los vasos, la utilizacin de
la protemica est en sus primeros pasos. Incluso,
el proteoma de los vasos normales y patolgicos no
est an definido. La dificultad principal para apli-
car el anlisis protemico en la enfermedad vascu-
lar es la heterogeneidad de la composicin celular
de la placa aterosclertica
2
. El perfil proteico de los
vasos normales est dominado por protenas de
las clulas de msculo liso vascular, pero tambin
contiene protenas de las clulas endoteliales o, in-
cluso, de otros tipos celulares, como fibroblastos,
mioblastos y clulas dendrticas. Sin embargo, la
aterosclerosis es una enfermedad inflamatoria, lo
que implica la interaccin de clulas sanguneas in-
flamatorias con la pared vascular, y que complica
an ms el componente celular y, por supuesto,
proteico de la pared vascular.
El primer intento de analizar la lesin ateroscle-
rtica humana mediante electroforesis bidimensio-
nal se realiz hace ahora algo ms de 20 aos.
Stastny et al
3
compararon la composicin proteica
de la lesin fibrograsa humana con la ntima sana.
La comparacin se realiz de forma visual, ya que
en esos aos todava no haba programas inform-
ticos para el anlisis bioinformtico de los geles,
por lo que slo se identificaron los cambios ms
evidentes. En este trabajo se observ que en la arte-
ria aterosclertica haba un aumento de albmina,
fibringeno, inmunoglobulina G, -1 antitripsina,
transferrina, haptoglobina, apolipoprotena AI y
apolipoprotena AII
3
. En un estudio ms recien-
te, You et al
4
analizaron arterias coronarias de pa-
cientes con enfermedad de arteria coronaria y los
compararon con individuos sanos. El estudio por
electroforesis bidimensional revel un aumento
significativo en la expresin de la cadena ligera de
ferritina
4
. Estos resultados estaran relacionados
con la hiptesis del hierro, que propone que el al-
macn de hierro contribuira a la formacin y la
progresin de la placa de ateroma mediante la mo-
dulacin de la oxidacin lipdica. Sin embargo, en
este estudio se encontraron muy pocas variaciones
entre la arteria sana y enferma, probablemente de-
bido a la gran variabilidad entre los resultados, lo
que puede enmascarar las diferencias. Tambin la
heterogeneicidad en la composicin de la placa
aterosclertica complica la interpretacin de los re-
sultados. El aumento en la expresin de la cadena
ligera de ferritina podra ser tambin consecuencia
de una infiltracin mayor de monocitos en la arte-
ria enferma. En otro trabajo reciente, de Donners
et al
5
, se analiz la lesin avanzada estable con pla-
cas conteniendo trombos. Mediante espectrome-
tra de masas identificaron la vinexina-, una pro-
tena que une vinculina, y
1
-antitripsina, cuya
expresin estaba limitada en las placas de lesiones
temporales comenzando con una mayor expresin
en placas con lesiones tempranas comparada con
la mayor expresin en placas con lesiones ms
avanzadas. En las placas avanzadas se identifica-
ron 6 isoformas de
1
-antitripsina, una de las cua-
les slo se observ en placas que contenan trom-
bo
5
. Posiblemente, en la placa de ateroma, la
1
-antitripsina tenga un efecto protector, e impida
la invasin por clulas inflamatorias. Hay que re-
cordar que la
1
-antitripsina tiene actividad anties-
clertica y la prdida de esta actividad antiescler-
tica podra favorecer la adhesin y la acumulacin
de clulas inflamatorias, lo cual hace la placa ms
vulnerable a la rotura.
Se pueden hacer mltiples aproximaciones para
el estudio de la placa de ateroma mediante la utili-
zacin de la protemica. Por ejemplo, en medio li-
bre de protenas se han cultivado muestras de en-
darterectoma de cartida y se han analizado las
protenas liberadas en el medio de cultivo
6
. Se en-
contraron protenas en el medio solamente en las
incubaciones de arterias con placas, pero no en
las arterias normales. Entre las protenas identifi-
cadas se encontraron protenas implicadas en el
transporte reverso del colesterol (apolipoprotena
B-100; apolipoprotena AI), protenas asociadas a
apoptosis, protenas relacionadas con la degrada-
cin de protenas y protenas antioxidantes
6
. Cuan-
to ms complicada era la lesin aterosclertica,
mayor era el nmero de protenas liberadas
6
.
La protemica aplicada a la isquemia miocrdica
La estratificacin rpida y eficaz del paciente
que llega al servicio de urgencias con un dolor to-
rcico es importante porque ofrece ventajas para el
inicio temprano del tratamiento, lo que claramente
favorecer el pronstico de los pacientes que pre-
sentan un SCA. Actualmente, la estratificacin de
los pacientes con sospecha de tener un SCA co-
mienza con la realizacin de un electrocardiogra-
ma y un examen fsico e histrico, en el que se in-
cluyen los antecedentes familiares y los factores de
riesgo cardiovascular que presenta el paciente. En
el SCA sin elevacin del segmento ST, el diagnsti-
co del infarto de miocardio est principalmente ba-
sado en la deteccin de biomarcadores de necrosis
miocrdica. En la actualidad, el biomarcador ms
utilizado para detectar necrosis miocrdica es la
troponina
7
. La troponina tambin se utiliza como
biomarcador de riesgo de episodio cardaco, inclui-
das muerte e isquemia recurrente
8
. No obstante,
tanto la troponina como otros biomarcadores me-
nos especficos se utilizan para detectar necrosis
miocrdica, como puede ser la mioglobina o la
fraccin de mioglobina de la creatincinasa (CK-
MB). En este sentido, la mioglobina tiene una utili-
dad limitada, ya que no es poco especfica, funda-
mentalmente cuando coexiste un dao del msculo
esqueltico y un fallo renal. La CK-MB tiene una
sensibilidad similar a la mioglobina, aunque pre-
senta una mayor especificidad, a pesar de que hay
algunos autores que describen que no tiene especi-
ficidad absoluta. La troponina es muy sensible y
ms especfica para detectar dao miocrdico. No
obstante, es importante identificar el SCA antes de
que ocurra una necrosis miocrdica. Para intentar
identificar mediante la protemica nuevos biomar-
cadores tiles para el diagnstico de SCA, los in-
vestigadores han comenzado por conocer cules
son los cambios en el proteoma del miocardio is-
qumico. Para ello, se han utilizado fundamental-
mente modelos animales.
En un modelo en conejo de isquemia con reper-
cusin miocrdica, el anlisis mediante electrofo-
resis bidimensional demostr que mltiples prote-
nas conocidas y otras no conocidas cambiaban su
expresin en el corazn
9
. Entre ellas se encuentran
protenas del citoesqueleto (troponina C y cadena
ligera de la miosina), enzimas del sistema redox,
enzimas relacionadas con el metabolismo energti-
co y protenas de respuesta al estrs. En un modelo
porcino, la isquemia miocrdica tambin demostr
alteraciones en diferentes protenas sistmicas
como elevacin en las catepsinas B y D y la prote-
na Hsc73
10
. Estos cambios se asociaron con una re-
duccin de la apoptosis y se indic que estas pro-
tenas se activan para proteger el tejido miocrdico
contra la isquemia
10
.
Nuestro grupo estudi recientemente los cam-
bios en la expresin plasmtica de protenas en pa-
cientes durante la fase aguda de un SCA
11
. El estu-
dio por electroforesis bidimensional del plasma
demostr una reduccin de algunas isoformas de
la
1
-antitripsina y de la apolipoprotena AI en los
pacientes durante un infarto de miocardio o una
angina inestable respecto a los individuos control
11
.
Se encontraron tambin diferencias en la expresin
plasmtica de algunas isoformas de protenas entre
los pacientes durante un infarto de miocardio, res-
pecto a pacientes que tenan una angina inestable.
En este sentido, las isoformas de la
1
-antitripsina
5, 6 y 7 estaban ms reducidas en el plasma de los
pacientes durante el infarto de miocardio, respecto
a los de angina inestable
11
. Lo mismo ocurra con
las 5 isoformas de la apolipoprotena AI identifica-
das
11
. Probablemente, la menor expresin de estos
2 biomarcadores, cuya funcin es la proteccin
miocrdica durante el infarto de miocardio, pue-
den asociarse a un dao mayor en las clulas del
corazn. En definitiva, a travs de la protemica
podemos conocer mejor los mecanismos molecula-
res que ocurren durante el SCA, lo que adems de
facilitarnos la identificacin de biomarcadores
puede desvelarnos ms dianas teraputicas.
Hipertrofia cardaca y protemica
La hipertrofia del ventrculo izquierdo es el me-
canismo primario por el que el ventrculo izquier-
do responde a la sobrecarga de presin. Una sobre-
carga de presin prolongada produce disfuncin
miocrdica y el desarrollo del fallo cardaco con-
gestivo. Hay 2 mecanismos principales crticos en
el desarrollo de la hipertrofia hipertensiva carda-
ca: a) la elevada poscarga del ventrculo izquierdo
que induce estrs mecnico, y b) factores humora-
les/neuronales, como el sistema renina-angioten-
sina aldosterona y el sistema simptico. No obstan-
te, los mecanismos moleculares mediadores del
proceso del remodelado cardaco implicados en la
hipertrofia miocrdica no estn completamente de-
finidos
12
. En un estudio de Jin et al
13
en ratas espon-
tneamente hipertensas, los autores encontraron
que la expresin de 20 protenas estaba cambiada
en el miocardio hipertrfico. De ellas, 13 protenas
cambiaron su expresin en las primeras etapas de
la hipertensin, antes de que sta fuera sostenida, y
7 protenas cambiaron su expresin en el ventrcu-
lo izquierdo una vez que el estado hipertensivo era
sostenido
13
. Muchas de las protenas que cambia-
ron estaban relacionadas con el metabolismo ener-
gtico
13
. Es interesante sealar que en este estud-
io se identific una protena antioxidante, la gluta-
tin transferasa omega-1, que se identific slo en
el miocardio de las ratas espontneamente hiper-
tensas, y no en el de las normotensas. Esto podra
parecer paradjico, ya que otros investigadores
han demostrado valores elevados de esta protena
en el tejido miocrdico, lo que indicara que en la
hipertensin se expresa otra isoforma de esta pro-
tena que no se expresa en la normotensin
14
. To-
memos este ejemplo para comentar que, al utilizar
la protemica con frecuencia, aparecen protenas
no conocidas o cambios en la expresin de prote-
nas que hasta la fecha no se haban relacionado
con la enfermedad en estudio. Este es uno de los
mayores potenciales de los estudios protemicos y
la consecuencia primera es que abre paso al cono-
cimiento de nuevas dianas teraputicas, que hasta
entonces no se haban relacionado con la enferme-
dad. En este sentido, en un trabajo reciente de
Lindsey et al
15
se identificaron 123 protenas en el
ventrculo izquierdo hipertrofiado de ratas. De s-
tas, slo 32 se haban asociado previamente con la
hipertrofia ventricular. El 57% de las protenas
identificadas eran protenas implicadas en el meta-
bolismo y en la estructura celular, lo cual tiene sen-
tido, ya que en la hipertrofia el miocardiocito au-
menta el tamao, lo que posiblemente implicar
un aumento en su demanda metablica.
Muchos de los estudios sobre los cambios en la
expresin de protenas en el corazn hipertrfico
se han centrado en protenas estructurales y con-
trctiles. No obstante, en el corazn hipertrfico
hay una adaptacin compensatoria energtica. Pro-
bablemente, esta respuesta adaptativa o maladap-
tativa en el metabolismo puede contribuir de for-
ma negativa a la funcionalidad del miocardio
hipertrfico. En el corazn, el adenosintrifosfato
(ATP) utilizado en la contraccin se sintetiza prin-
cipalmente en la mitocondria a travs de la fosfori-
lacin oxidativa. En el corazn normal, la principal
fuente de energa es la -oxidacin de los cidos
grasos de cadena larga. Sin embargo, el corazn hi-
pertrfico tiene reducida la utilizacin de la -oxi-
dacin de los cidos grasos y estudios indirectos
han indicado que su fuente principal de produc-
cin de ATP es la gluclisis
16,17
. De hecho, hay algu-
nas teoras que intentar explicar la reduccin en la
-oxidacin de los cidos grasos en el miocardio
hipertrofiado. Por ejemplo, se ha indicado una re-
duccin en el contenido de carnitina en el miocar-
dio del corazn hipertrfico
18
. La carnitina se utili-
za para la traslocacin de los cidos grasos, a
travs de la membrana interna de la mitocondria al
sitio de la -oxidacin. No obstante, todo esto no
est totalmente establecido.
A travs de la protemica podemos conocer cu-
les son los cambios que ocurren en el corazn hi-
pertrofiado en los ensayos que reflejan el metabo-
lismo energtico. Algunos resultados preliminares
de nuestro grupo parecen indicar que la expresin
tanto de protenas relacionadas con la -oxidacin,
como con la gluclisis, est reducida en el ven-
trculo izquierdo hipertrofiado de ratas espontne-
amente hipertensas
19
.
Una de las estructuras celulares que cambian en
el corazn hipertrfico es la mitocondria del car-
diomiocito. El papel principal de la mitocondria es
la produccin de ATP, aunque tambin est impli-
cada en la homeostasis inica, la apoptosis, la oxi-
dacin de hidratos de carbono y de cidos grasos,
as como en gran diversidad de procesos catabli-
cos y anablicos. Como consecuencia de esta di-
versidad funcional, la disfuncin mitocondrial se
asocia a diferentes enfermedades, incluidas las en-
fermedades del corazn. Por lo tanto, el estudio
del proteoma mitocondrial comienza tambin a
ser foco de atencin.
En forma de prediccin, se calcula que el prote-
oma mitocondrial incluye ms de 1.500 protenas
diferentes. En este sentido, hay ms protenas mi-
tocondriales de carcter bsico comparadas con las
citoslicas. Las protenas mitocondriales son ge-
neralmente pequeas (< 10 kDa) y estn poco des-
critas en las bases de datos. No obstante, todo ello
dificulta su estudio e identificacin mediante pro-
temica. Hay todava muy pocos estudios realiza-
dos sobre el proteoma mitocondrial respecto a la
enfermedad cardiovascular. Quizs el ms referido
sea el realizado por Lin et al
20
, en el que los autores
descubrieron el proteoma de la mitocondria del
cardiomiocito en un modelo de estrs crnico en el
que se induce disfuncin cardaca. Encontraron
que haba 11 protenas mitocondriales que tenan
alterada su expresin, respecto a mitocondrias ob-
tenidas de cardiomiocitos de animales control. Es-
tas protenas estaban implicadas en el ciclo de
Krebs y en el metabolismo lipdico, y su expresin
estaba disminuida en los animales con disfuncin
miocrdica. Estas protenas se identificaron como
carnitina palmitoil/transferasa 2, acil CoA-tioes-
terasa mitocondrial, isocitrato deshidrogenada 3
(NAD
+
), -fumarato hidratasa-1 y piruvato deshi-
drogenasa .
Farmacoprotemica y enfermedad
cardiovascular
La medicina personalizada se basa en las dife-
rencias existentes entre individuos y, por lo tanto,
aspira a dar a cada paciente el tratamiento ms
adecuado de forma personalizada. La farmacopro-
temica se puede definir como el estudio de la res-
puesta farmacolgica de un paciente en funcin de
las protenas que expresa.
En el rea cardiovascular, la farmacoprotemica
es una rama de reciente utilizacin y que, entre
otras aplicaciones, nos puede ayudar a desvelar el
siempre debatido aspecto de la identificacin de
efectos clase y efectos pleiotrpicos de los frma-
cos cardiovasculares.
Todava no hay muchos estudios que analicen los
efectos de frmacos en el proteoma de los pacientes
cardiovasculares. Para las estatinas, se realiz un es-
tudio en ratas en el que se analizaron las modifica-
ciones en las protenas del hgado despus de ad-
ministrar lovastatina y fluvastatina
21,22
. En estos es-
tudios se describieron, a partir de electroforesis
bidimensional y espectrometra de masas, modifica-
ciones en el metabolismo de los hidratos de carbo-
no, en protenas de estrs, en protenas relacionadas
con la homeostasis del calcio y con la actividad de
las proteasas. En relacin con estos efectos pleiotr-
picos de las estatinas, un estudio reciente publicado
por nuestro grupo
23
analiz las modificaciones en el
proteoma plasmtico de pacientes moderadamente
hipercolesterolmicos tras el tratamiento durante 12
semanas con simvastatina. En este estudio, se obser-
v que los pacientes con hipercolesterolemia mode-
rada tenan aumentado en el plasma la expresin de
la isoforma 1 de la cadena gamma del fibringeno y
3 isoformas de haptoglobina
23
. Tras el tratamiento
con simvastatina, la isoforma 1 del fibringeno dis-
minuy su expresin en plasma; sin embargo, la iso-
forma 2 de haptoglobina, protena reactante de fase
aguda, aument. La haptoglobina es una protena
que une hemoglobina libre, lo que le confiere pro-
piedades antioxidantes. Por lo tanto, como hipte-
sis, el aumento de esa isoforma de haptoglobina, ob-
servado tras el tratamiento con simvastatina, podra
indicar un aumento en la respuesta antioxidante.
Tambin se examinaron cambios en la expresin de
la apolipoprotena AIV. Como es bien conocido, la
apolipoprotena AIV no slo desempea un papel
importante en el transporte reverso del colesterol,
sino que tambin es una protena asociada a protec-
cin vascular. El tratamiento con simvastatina au-
ment los valores plasmticos de la apolipoprotena
AIV
23
. De todos los cambios descritos anteriormente,
los cambios en apolipoprotena AIV y haptoglobina
isoforma 2 no se correlacionaron con los valores de
colesterol total
23
. Este tipo de estudios puede ayudar
a conocer con ms profundidad los mecanismos de
accin de las estatinas y, sobre todo, pueden facilitar
la identificacin de mecanismos pleiotrpicos que
nos ayudarn a conocer mejor los beneficios mole-
culares y celulares de unas estatinas respecto a
otras.
Otra de las aplicaciones de la farmacoprotemica
es la identificacin de biomarcadores de respuesta
farmacolgica. Es decir, conocer si los cambios en
la expresin de una protena o grupo de protenas
puede asociarse a una respuesta mayor o menor del
paciente al frmaco. Un ejemplo reciente de esta
posible aplicacin de la protemica es la bsqueda
de biomarcadores que nos ayuden a definir a pa-
cientes cuyas plaquetas respondan peor al trata-
miento con aspirina.
Se han descrito diferentes mecanismos por los
que la aspirina ejerce su efecto antitrombtico; sin
embargo, su efecto antitrombtico principal es me-
diante la inhibicin de la actividad de la ciclooxige-
nasa plaquetaria, lo que bloquea la sntesis de
tromboxano A
2
(TxA
2
) por las plaquetas
24,25
. A pesar
de tomar aspirina, algunos pacientes tienen episo-
dios vasculares recurrentes, lo que ha indicado que
estos pacientes son aparentemente resistentes a la
aspirina, un fenmeno que se ha llamado resisten-
cia a la aspirina
26,27
. En este sentido, en alrededor
del 20% de los pacientes que toman de forma habi-
tual aspirina, el frmaco no inhibe sus plaquetas y
este porcentaje aumenta hasta un 40% si los pa-
cientes son diabticos. En el momento actual, hay
diferentes hiptesis que intentan explicar el fen-
meno de la resistencia a la aspirina, aunque ningu-
na de ellas por s misma ha podido justificar la
existencia de esta variabilidad en la respuesta pla-
quetaria
28-31
. El estudio protemico del plasma en
pacientes resistentes a la aspirina ha demostrado la
existencia de un aumento en la expresin de 3 iso-
formas de la protena de unin a vitamina D
(DBP), comparndo con la expresin de estas isofor-
mas observada en el plasma de pacientes cuyas
plaquetas son sensibles a la accin de la aspirina
31
.
La funcin principal de la DBP es unir y trans-
portar anlogos de la vitamina D. Tambin se ha
descrito a esta protena como activadora de leucoci-
tos
32
. Ya que los pacientes resistentes a la aspirina
tenan elevada la expresin de 3 isoformas de DBP
en el plasma, se analiz si haba alguna relacin en-
tre la DBP y la capacidad de la aspirina para inhibir
la ciclooxigenasa 1 plaquetaria. En experimentos in
vitro se observ que la presencia de DBP redujo la
capacidad de la aspirina de bloquear la produccin
de TxA
2
por las plaquetas
31
. Estos resultados po-
dran indicar que, de alguna manera, la DBP impi-
de la accin de la aspirina en la ciclooxigenasa 1
plaquetaria. Por ello, los pacientes con DBP elevada
tienen, a pesar del tratamiento con aspirina, una
capacidad mayor de producir TxA
2
y, por lo tanto,
unas plaquetas potencialmente ms activas con ca-
pacidad de formar trombos en el vaso.
En resumen, la protemica y la farmacoprote-
mica pueden ser herramientas muy tiles para de-
sarrollar nuevos frmacos para la bsqueda de bio-
marcadores pronstico y de evolucin de los
pacientes con enfermedades cardiovasculares, e in-
cluso pueden ayudarnos a controlar mejor las inte-
racciones farmacolgicas, sobre todo en el mbito
molecular. No obstante, para alcanzar un uso ms
especfico de estas nuevas ciencias, necesitamos
primero conocer el proteoma de los rganos impli-
cados: corazn, vasos, clulas de la sangre, plasma,
etc., no ya en condiciones patolgicas, sino tam-
bin en las fisiolgicas, lo que an no se ha realiza-
do en su totalidad.
Agradecimientos
Los autores agradecen a Begoa Larrea su labor editorial.
Bibliografa
1. Diamandis EP. Point: Proteomic patterns in biological fluids: do
they represent the future of cancer diagnostics? Clinical Che-
mistry. 2003;49:1272-5.
2. Stary HC, Chandler AB, Glagov S, Guyton JR, Insull W Jr, Rosen-
feld ME, et al. A definition of initial, fatty streak, and intermediate
lesions of atherosclerosis. A report from the Committee on Vascu-
lar Lesions of the Council on Arteriosclerosis, American Heart As-
sociation. Circulation. 1994;89:2462-78.
3. Stastny J, Fosslien E, Robertson AL Jr. Human aortic intima pro-
tein composition during initial stages of atherogenesis. Atheros-
clerosis. 1986;60:131-9.
4. You SA, Archacki SR, Angheloiu G, Moravec CS, Rao S, Kinter M,
et al. Proteomic approach to coronary atherosclerosis shows ferri-
tin light chain as a significant marker: evidence consistent with
iron hypothesis in atherosclerosis. Physiology and Genomics.
2003;13:25-30.
5. Donners MM, Verluyten MJ, Bouwman FG, Mariman EC, Devree-
se B, Vanrobaeys F, et al. Proteomic analysis of differential pro-
tein expression in human atherosclerotic plaque progression. J
Pathol. 2005;206:39-45.
6. Duran MC, Mas S, Martin-Ventura JL, Meilhac O, Michel JB, Ga-
llego-Delgado J, et al. Proteomic analysis of human vessels: appli-
cation to atherosclerotic plaques. Proteomics. 2003;3:973-8.
7. Myocardial infarction redefined--a consensus document of The
Joint European Society of Cardiology/American College of Cardio-
logy Committee for the redefinition of myocardial infarction. Eur
Heart J. 2000;21:1492-3.
8. Braunwald E, Antman EM, Beasley JW, Califf RM, Cheitlin MD,
Hochman JS, et al. ACC/AHA guidelines for the management of
patients with unstable angina and non-ST-segment elevation myo-
cardial infarction: executive summary and recommendations. A
report of the American College of Cardiology/American Herat As-
sociation task force on practice guidelines (committee on the ma-
nagement of patients with unstable angina). Circulation.
2000;102:1193-209.
9. White MY, Cordwell SJ, McCarron HC, Prasan AM, Craft G,
Hambly BD, et al. Proteomics of ischemia/reperfusion injury in
rabbit myocardium reveals alterations to proteins of essential
functional systems. Proteomics. 2005;5:1395-410.
10. Yan L, Vatner DE, Kim SJ, Ge H, Masurekar M, Massover WH, et
al. Autophagy in chronically ischemic myocardium. Proceedings
of the National Academy of Sciences USA. 2005;102:13807-12.
11. Mateos-Cceres PJ, Garca-Mendez A, Lpez-Farr A, Macaya C,
Nuez A, Gmez J, et al. Proteomic analysis of plasma from pa-
tients during an acute coronary syndrome. J Am Coll Cardiol.
2004;44:1578-83.
12. Follath F. Nonischemic heart failure: epidemiology, pathophysio-
logy, and progression of disease. J Cardio Pharm. 1999;33:S31-5
13. Jin X, Xia L, Wang LS, Shi JZ, Zheng Y, Chen WL, et al. Differen-
tial protein expression in hypertrophic heart with and without hy-
pertension in spontaneously hypertensive rats. Proteomics.
2006;6:1948-56.
14. Board PG, Coggan M, Chelvanayagam G, Easteal S, Jermiin LS,
Schulte GK, et al. Identification, characterization, and crystal
structure of the Omega class glutathione transferases. J Biol
Chem. 2000;275:24798-806.
15. Lindsey ML, Goshorn DK, Comte-Walters S, Hendrick JW, Hapke
E, Zile MR, et al. A multidimensional proteomic approach to iden-
tify hypertrophy-associated proteins. Proteomics. 2006;6:2225-35.
16. Christe MD, Rodgers RL. Altered glucose and fatty acid oxidation
in hearts of the spontaneously hypertensive rat. Journal of Mole-
cular and Cellular Cardiology. 1994;26:1371-5.
17. Allard MF, Schnekess BO, Henning SL, English DR, Lopaschuk
GD. Contribution of oxidative metabolism and glycolysis to ATP
production in hypertrophied hearts. Am J Physiol Heart Circ Phy-
siol. 1994;267:H742-H750.
18. El Alaoui-Talibi Z, Landormy S, Loireau A, Morave J. Fatty acid
oxidation and mechanical performance of volume-overload rat he-
arts. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 1992;262:H1068-H1074.
19. Carrasco C, Miana Ortega M, De las Heras N, Sanz D, Macaya C,
Cachofeiro V, et al. Estudio protemico de protenas contrctiles y
del metabolismo energtico en el ventrculo izquierdo de ratas es-
pontneamente hipertensas. Rev Esp Cardiol. 2005;58(Supl 1):51.
20. Lin TK, Hughes G, Muratovska A, Blaikie FH, Brookes PS, Darley-
Usmar V, et al. Specific modification of mitochondrial protein
thiols in response to oxidative stress: a proteomics approach. J
Biol Chem. 2002;277:17048-56.
21. Steiner S, Gatlin CL, Lennon JJ, McGrath AM, Aponte AM, Ma-
kusky AJ, et al. Proteomics to display lovastatin-induced protein
and pathway regulation in rat liver. Electrophoresis.
2000;21:2129-37.
22. Steiner S, Gatlin CL, Lennon JJ, McGrath AM, Seonarain MD,
Makusky AJ, et al. Cholesterol biosynthesis regulation and protein
changes in rat liver following treatment with fluvastatin. Toxico-
logy Letters. 2001;120:369-77.
23. Alonso-Orgaz S, Moreno L, Macaya C, Rico L, Mateos-Cceres PJ,
Sacristn D, et al. Proteomic study of plasma from moderate hy-
percholesterolemic patients. J Proteom Research. 2006;5:2301-8.
24. Vane JR, Botting RM. The mechanism of action of aspirin. Th-
rombosis Research. 2003;110:255-8.
25. Lpez-Farr A, Caramelo C, Esteban A, Alberola ML, Montn M,
Mills I, et al. Effects of aspirin on platelet-neutrophil interac-
tions. Role of nitric oxide and endothelin-1. Circulation.
1995;91:2080-8.
26. Eikelboom JW, Hirsh J, Weitz JI, Johnston M, Yi Q, Yusuf S. Aspi-
rin-resistant thromboxane biosynthesis and the risk of myocardial
infarction, stroke, or cardiovascular death in patients at high risk
for cardiovascular events. Circulation. 2002;105:1650-5.
27. Mason PJ, Jacobs AK, Freedman JE. Aspirin resistance and athe-
rothrombotic disease. Journal of American College of Cardiology.
2005;46:986-93.
28. Patrono C. Prevention of myocardial infarction and stroke by aspi-
rin: different mechanisms? Different dosage? Thrombosis Rese-
arch. 1998;92:S7-12.
29. Patrono C, Coller B, Dalen JE, FitzGerald GA, Fuster V, Gent M, et
al. Platelet-active drugs: the relationships among dose, effective-
ness, and side effects. Chest. 2001;119:39S-63S.
30. Halushka MK, Walker LP, Halushka PV. Genetic variation in cy-
clooxygenase 1: effects on response to aspirin. Clin Pharmacol
Ther. 2003;73:122-30.
31. Lpez-Farr A, Mateos-Cceres PJ, Sacristn D, Azcona L, Bernar-
do E, Perez de Prada T, et al. Relationship between vitamin D bin-
ding protein and aspirin resistance in coronary ischaemic pa-
tients: a proteomic study. J Proteom Research. 2007;6:2481-7.
32. Gomme PT, Bertolini J. Therapeutic potential of vitamin D-bin-
ding protein. Trends in Biotechnology. 2004;22:340-5.

Horizontes de La Proteomica en El Diagnóstico y TX de La Enfermedad Cardivascular

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Horizontes de La Proteomica en El Diagnóstico y TX de La Enfermedad Cardivascular

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

164 Clin Invest Arterioscl.

Вам также может понравиться