MTODOS CROMATOGRFICOS MTODOS CROMATOGRFICOS

Profa. Lucia Regina R. Martins

O que Cromatografia??
O que Cromatografia??
A cromatografia um mtodo fsico-qumico de
separao dos componentes de uma mistura. separao dos componentes de uma mistura.
Est fundamentada na migra!o diferencia" dos
componentes de uma mistura# que ocorre de$ido a
diferentes intera%es# entre duas fases imisc$eis&
a fase mvel (FM) e a fase estacionria (FE).
International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC) - '(cnica
usada para a separa!o dos componentes de uma amostra# os quais
se distri)uem entre duas fases# uma estacionria e a outra m*$e"+.
Cromatografia& defini!o
FASE MVEL FASE MVEL Lquida# gasosa# f"uido supercrtico
FASE FASE ESTACIORIA ESTACIORIA ,*"ido ou "quido
Passagem da fase m*$e" componentes distri)udos e retidos
se"eti$amente pe"a fase estacionria se"eti$amente pe"a fase estacionria
MIGRA!"ES DIFERECIAIS MIGRA!"ES DIFERECIAIS
,epara!o de misturas por intera!o diferencia"&
maior intera!o com a -E . maior reten!o
menor intera!o com a -E . e#$%o mais rpida
CROMATOGRAFIA CROMATOGRAFIA Pr%&'(p%o )*s%'o
,epara!o de misturas por intera!o diferencia"&
maior intera!o com a -E . maior reten!o
menor intera!o com a -E . e#$%o mais rpida
CROMATOGRAFIA CROMATOGRAFIA Pr%&'(p%o )*s%'o
FASE MVEL FASE MVEL
FASE ESTACIONRIA FASE ESTACIONRIA
os componentes da mistura s!o separados em bandas.
AFIIDADE SEPARA!+O (,%-rao .%/ere&'%a#)
Por 0$e a Cro,a1o-ra/%a 2 %,por1a&1e3
Permite&
,EPARAR
/0E1(/-/CAR
Permite&
/0E1(/-/CAR
23A1(/-/CAR
... di$ersas espcies qumicas...
associada a outras tcnicas instrumentais de an"ise& associada a outras tcnicas instrumentais de an"ise&
E4.& espectrofotometria# espectrometria de massas#...
PRICIPAIS FATOS 4ISTRICOS
Separao de pigmentos;
proposio do termo
Primeira publicao
em fase gasosa
Mar1%& e S5&-e
6789 (Pr:,%o o)e#)
6;7<-67=>
Da?%. T@ Da5
Separao de
proposio do termo
cromatografia
M%ABae# TsCe11
67=>-67=D
67>=
E$B& e Le.erer
romatografia
romatografia em papel
IF,a%#o? e SBra%)er
67>;
67G6
Mar1%& e S5&-e
Particio em
6789 (Pr:,%o o)e#)
678;
!ola"# colunas
capilares em !
E0$%pa,e&1os CG
'o,er'%a%s
6788
Separao de
$ do
petrleo
romatografia
em coluna#
Xantofilas de gema
de ovo
Particio em
cromatografia
l%&uida; Princ%pios
de fase gasosa
capilares em !
M%ABae# Se,e&o?%'BTsCe11
nascido em Asti 5/t"ia6 a 78 de Maio de 79:;# sendo a fam"ia
PRICIPAIS FATOS 4ISTRICOS
nascido em Asti 5/t"ia6 a 78 de Maio de 79:;# sendo a fam"ia
originria da R<ssia.
= considerado o pai da
cromatografia moderna#
atra$s dos $rios tra)a">os
e4perimentais que efetuou. e4perimentais que efetuou.
M@ TSHEET 57?@A6& ,epara!o de misturas de
pigmentos $egetais em co"unas rec>eadas com
adsor$ente s*"ido 5-.E.6 e so"$ente 5-.M.6.
21er .e 21er .e
pe1rI#eo
CaCO
>
,%s1$ra .e
p%-,e&1os
p%-,e&1os
separa.os
Cro,a1o-ra/%a .
'roma BcorC D grap( Bescre$erC 5Erego6
CLASSIFICA!+O DAS CLASSIFICA!+O DAS
TCICAS
CROMATOGRFICAS
CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA,
Cromatografia
Critrios& suporte fsico# estado fsico das fases m*$eis e estacionrias
P"anar Em Co"una
Cromatografia
S$por1e
Es Lquido Lquido
-"uido
,upercrticoI
Fase ,I?e#
I-"uido ,upercrtico& $apor pressuriJado# em temperatura e press!o acima de seu ponto crtico
CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA,
Lquido
P"anar
T2'&%'a
Fase ,I?e#
Lquido
Fase ,I?e#
(FM)
Fase es1a'%o&*r%a
(FE)
Lquido
-ase
"igada
-ase
"igada
,*"ido
T%po .e
Cro,a1o-ra/%a
CP
CC0
CC0
CP . cromatografia em pape"
CC0 . cromatografia em camada de"gada
Cro,a1o-ra/%a e, pape#
Cro,a1o-ra/%a e, 'a,a.a .e#-a.a
CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA,
Cromatografia
Critrios& suporte fsico# estado fsico das fases m*$eis e estacionrias
P"anar Em Co"una
Cromatografia
S$por1e
Es Lquido Lquido
-"uido
,upercrticoI
Fase ,I?e#
I-"uido ,upercrtico& $apor pressuriJado# em temperatura e press!o acima de seu ponto crtico
CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA,
G*s
F#$%.o L(0$%.o
(cnica
-M
Em Co"una
CEL
Lquido
CE,
,*"ido
CE-L
-ase
Ligada
G*s
C,,
,*"ido
C,-L
-ase
Ligada
F#$%.o
S$per'r(1%'o
CLL
Lquido
CL,
CE
,*"ido
-ase
Ligada
L(0$%.o
-M
-E
(C
CL-L C(/ CK
CLL . cromatografia "quido-"quido
CL, . cromatografia "quido-s*"ido
CE . cromatografia por e4c"us!o
CL-L . cromatografia "quida com fase quimicamente "igada
C(/ . cromatografia por troca iLnica
CK . cromatografia por )ioafinidade
CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA,
Cromatografia em co"una&
de acordo com o diMmetro interno e o)Neti$o da separa!o&
- preparati$a 5A-O@ mm6 - preparati$a 5A-O@ mm6
- ana"tica 5;-A mm6
- microdiMmetro 57-; mm6
- capi"ar 5P7 mm6
Press!o&
- c"ssica 5so) press!o atmosfrica# co"unas de $idro6 - c"ssica 5so) press!o atmosfrica# co"unas de $idro6
- mdia press!o
- a"ta press!o
... > outros critrios
Cro,a1o-ra/%a e, 'o#$&a - CL
Co"una a)erta
CLAE - QPLC
Cro,a1o-ra/%a e, 'o#$&a - CG
- Colunas empacotadas ou recheadas: preenchida com partculas de
suporte que contm a FE
- Colunas tubulares abertas (tpicas de CGAR): FE colocada
diretamente sobre a parede interior da coluna.
Tipos bsicos de colunas:
diretamente sobre a parede interior da coluna.
CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA,
Critrio& po"aridade re"ati$a das fases
- em gasosa& fase m*$e" inerte 5'gs de arraste+6
- em "quida& -ase 1orma" 5-E R -M6 - em "quida& -ase 1orma" 5-E R -M6
-ase Re$ersa 5-M R -E6
Critrio& mecanismo de separa!o
processos& - qumicos 5troca iLnica# quira"# afinidade6#
- fsicos 5sor!o S adsor!o ou - fsicos 5sor!o S adsor!o ou
a)sor!oTparti!o6 ou
- mecMnicos 5e4c"us!o por taman>o
mo"ecu"ar6
MECAISMOS DE SEPARA!+O
Me'a&%s,os .e separao
6@ Pro'essos /(s%'os& foras de atra%es dipo"ares# forma!o de
"iga!o de Q.
- a.soro& -E s*"ida com grupos ati$os na superfcie 5e4.& s"ica# - a.soro& -E s*"ida com grupos ati$os na superfcie 5e4.& s"ica#
a"umina6U ocorre na interface com -MU dessor!o por $o"ati"idade
5CE6 ou so"u)i"idade na -M 5CL e C-,6U o processo mais
comum em CC0# CE,# CL,# C,,
CC0 5camada de"gada6# CE, 5gs-s*"ido6# CL, 5"quido-s*"ido6# C,, 5supercrtica com -E s*"ida6
Me'a&%s,os .e separao
- a)soro (par1%o)& -E "quida e espa">ada na
superfcie de um suporte s*"ido e inerte 5ou paredes do
6@ Pro'essos /(s%'os&
superfcie de um suporte s*"ido e inerte 5ou paredes do
tu)o cromatogrfico6U processo intrafacialU )aseia-se na
so"u)i"idade dos compostos da amostra na -EU o retorno V
-M depende da $o"ati"idade 5CE6 ou so"u)i"idade na -MU
ocorre na CP# CEL# CLL.
CP . cromatografia em pape"U CEL . cromatografia gs-"quido
CLL . cromatografia "quido-"quido
Me'a&%s,os .e separao
Com fases estacionrias quimicamente "igadas&
mistura de parti!o e adsor!o
Me'a&%s,os .e separao
9@ Pro'essos 0$(,%'osJ
- 1ro'a %K&%'a& -E contm grupos funcionais ioniJ$eis - 1ro'a %K&%'a& -E contm grupos funcionais ioniJ$eis
5trocadores de ons S catiLnico ou aniLnico6# -M consiste em
so"u!o iLnica compat$e" 5propriedades tamponantes6 que
promo$e a e"ui!o dos compostos da amostra por su)stitui!o
ou des"ocamento.
Me'a&%s,os .e separao
9@ Pro'essos 0$(,%'osJ
- a/%&%.a.e ()%oa/%&%.a.e)& -E contm grupos qumicos com - a/%&%.a.e ()%oa/%&%.a.e)& -E contm grupos qumicos com
especificidade )io"*gica quimicamente "igados ao suporte 5e4.&
antgenos# enJimas6# retiram da -M somentes as su)stMncias
comp"ementares da amostraU a e"ui!o ocorre por modifica!o
de propriedades da fase m*$e" ou por des"ocamento.
>@ Pro'esso ,e'L&%'o&
- eM'#$so por 1a,a&Bo ,o#e'$#ar& -E tem composi!o
inerte# com partcu"as de forma# taman>o e porosidade
Me'a&%s,os .e separao
inerte# com partcu"as de forma# taman>o e porosidade
uniformesU mo"cu"as grandes s!o e4c"udas dos poros e e"uem
com a -M intersticia"# mo"cu"as menores penetram faci"mente
nos poros e e"uem com $e"ocidades $ari$eis.
Acompan>amento da separa!o cromatogrfica Acompan>amento da separa!o cromatogrfica
E4emp"o de cromatografia em camada de"gada&
an"ise $isua"# "uJ 3W# re$e"adores
Wisua"iJa!o ou detec!o de )andas& manc>as na superfcie
Acompan>amento da separa!o cromatogrfica
Cromatografia em co"una& co"eta de fra%es
Cromatografia em co"una& co"eta de fra%es
Cromatografia em co"una& co"eta de fra%es
Cromatografia em co"una& uso de detectores
Cromatografia "quida em co"una& uso de detectores ALISE CROMATOGRFICA
,epara!o em co"una
A resposta do detector
traduJida em um grfico# ou traduJida em um grfico# ou
CROMA(OERAMA# que
re"aciona o seu sina" com o
tempo necessrio para a e"ui!o
de cada componente.
E#$%o 1(p%'a e, 'ro,a1o-ra/%a #(0$%.a