romatografa de lpidos

OBJETIVO.

Objetivo didctico. Practicar la cromatografa como mtodo para separacin de lpidos.

Objetivo experimental. Realizar la cromatografa en papel de muestras biolgicas para
separar los lpidos presentes.

INTRODUCCION.
Cromatografa.
La cromatografa es un mtodo que consiste en la separacin de una sustancia por medio de
su solubilidad en un solvente puro o mezcla de solventes, que depende de las propiedades
fisicoqumicas de las molculas involucradas.
Se pueden obtener los valores de Rf del soluto que se est desplazando, al calcular el
porcentaje de desplazamiento respecto al la distancia alcanzada por el solvente. Los valores
de Rf son especficos para cada compuesto con el mismo solvente o eluyente.


MATERIALES Y EQUIPOS.

___1 atomizador.
___1 cmara de cromatografa de 7 x 20 cm.
___1 mortero con mano.
___1 papel Whatman No. 1 para cromatografa
___5 tubos de ensayo de 10 X100.
___5 tubos capilares.

REACTIVOS Y SUSTANCIAS.

___Acetona.
___Benceno.
___Etanol.
___Solucin de benceno/etanol (2:1).
___Solucin de anilino naftaln sulfnico (ANS).
___Muestra de tejido animal o vegetal.

PROCEDIMIENTO.

Equipo de proteccin.
Ojos.
___Anteojos de policarbonato o monoggles incoloros.
___*Anteojos de policarbonato o monoggles de color mbar.

Piel.
___Guantes de nitrilo para solventes.
___Ropa de algodn.

Respiratorio.
___Respirador con filtro para solventes (Cdigo gris).
___Maneje los solventes en campana para vapores.
___No respire los vapores.

Precauciones especiales.
___Bao de ojos disponible.
___Regadera de seguridad disponible.
___Extinguidor de polvo qumico, CO2 o gas haln (Tipo ABC).
___Lave abundantemente despus de usar los reactivos.

Experimento.
___Colquese ropa de algodn para proteccin (bata).
___Revise que las llaves de gas estn cerradas.
___Revise que las llaves de agua estn cerradas.
___Revise que las llaves de aire comprimido estn cerradas.
___Revise que los contactos elctricos estn libres.
___Revise que los interruptores de luz del laboratorio estn encendidos.
___Revise que los extractores de aire estn encendidos.
Preparacin de soluciones.
___Revise que la Acetona est en la campana.
___Revise que el benceno est en la campana.
___Revise que el etanol est en la campana.
___Revise que el Agua destilada est sobre la mesa.
___Colquese los guantes de nitrilo.
___Lave el material con agua corriente y detergente.
___Enjuague el material con agua destilada.
___Seque el material con franela o con papel absorbente.
___Enjuague el material con etanol.
___Seque los guantes de neopreno con franela o con papel absorbente.
___Colquese anteojos de policarbonato o monoggles incoloros.
___Coloque un espejo de 1 cm de espesor mezcla de solventes en la cmara.
___Tape la cmara de cromatografa para que se sature.
___Coloque el papel Whatman lo sobre papel envoltura.
___Limpie la regla con que va a marcar.
___En el papel Whatman marque con lpiz una lnea a 2 cm del borde
___Marque puntos equidistantes de acuerdo con el nmero de muestras.
___Macere 1 g de tejido (vegetal o animal) con 20 ml de solvente.
___Filtre la mezcla.
___Con un capilar aplique gota a gota la solucin en el punto correspondiente
___Seque en cada aplicacin con la pistola de aire.
___Coloque la hoja dentro de la cmara.
___Tape la cmara.
___Deje correr hasta que el solvente haya ascendido unos a 1 cm del borde superior.
___Saque el papel y se deje secar al aire completamente.
___Revele las muestras a contraluz; iluminando con UV* o rociando con ANS.
___Marque con lpiz cada una de las posiciones
___Determine el Rf de cada uno.
___Identifique los componentes de las muestras.
Forma de desechar
___Deseche los residuos orgnicos(ver Forma de desechar).
___Lave y enjuague el material.
___Seque el material con papel o con franela.
___Guarde y entregue el material y los equipos.
___Revise que no haya reactivos en la campana.
___Apague la campana de extraccin.
___Revise que no haya reactivos sobre la mesa.
___Revise que la mesa est limpia y seca.
___Revise que las llaves de gas estn cerradas.
___Revise que las llaves de agua estn cerradas.
___Revise que las llaves de aire comprimido estn cerradas.
___Revise que los contactos elctricos estn libres.
___Revise que los extractores de aire estn apagados.
___Revise que los interruptores elctricos del laboratorio estn apagados.
___Retrese el equipo de proteccin personal.
___Guarde el equipo de proteccin personal.
___Revise que la luz del laboratorio est apagada.

Forma de desechar.
___Queme los residuos orgnicos en un incinerador con filtro y trampa.

OBSERVACIONES.
Mida la distancia que recorri el solvente en la cromatografa en papel y la distancia que
recorre cada muestra tomando desde el punto de aplicacin hasta el centro de la mancha.
Calcule el Rf de cada una de las manchas problema. Identifique su problema.
Clasifique a los lpidos encontrados en rden decreciente de polaridad.

REFERENCIAS.
Leray, C. 2000. CYBERLIPID CENTER. http://go.to/cyberlipid.
Plumer, D. T Introduccin a la Bioqumica Prctica. Mc Graw Hill, 1981, pg. 58-70