La inseminacin se reconoci como un mtodo de cultivo que contribuye a la
mejora de las poblaciones de animales de granja, particularmente de ganado. La
inseminacin artificial permite un uso mximo de los criadores ms valiosos y, al mismo tiempo, para un aumento significativo de avance de cra. Por otra parte, el uso de semen de calidad probada reduce la propagacin de enfermedades de transmisin sexual. El propsito de este trabajo es presentar el proceso de recopilacin y anlisis de semen de toro en el Centro de Mazovia de Reproduccin Animal y Reproduccin en owicz, Polonia.
Inseminacin En Polonia, la inseminacin se realiza desde hace ms de 50 aos. El significado primario de este trmino en cuestin introduccin de esperma en el tracto reproductivo de la hembra con el propsito de impregnacin. Hoy en da este trmino incluye: coleccin de semen, la evaluacin del semen, la preservacin de semen, el almacenamiento de semen, la distribucin de semen, procedimiento de inseminacin. El toro se convierte en la madurez sexual a la edad de aproximadamente 9 meses, sin embargo su funcin reproductiva se inicia en la edad de aproximadamente 12 meses. El semen de ejemplares de menos de 18 meses de edad, que se utiliza en artificial inseminacin, debe contener por lo menos: - 60% de los espermatozoides con la progresin correcta - 80% de los espermatozoides sin cambios morfolgicos - 500.000 espermatozoides en 1 mm De las muestras de ms de 18 meses de edad el eyaculado aceptado debe contener un 70% de espermatozoides con correcta progresin, mientras que otras caractersticas no cambian. Muestras entre 2 y 7 aos son los ms frtiles, mientras que en los mayores se observa una disminucin en la produccin de esperma. La correcta cra de un toro permite su uso correcto. Se relaciona con su valor gentico, la calidad del esperma, la edad y la actividad sexual. De los especmenes maduros dos eyaculados de semen se recogen dos veces por semana, mientras que desde joven toros (hasta 2 aos) los eyaculados se recogen cada 5-7 das. El propsito de este trabajo fue presentar el proceso de recopilacin y anlisis de semen de toro en el Mazovian.
Evaluacin del toro Una cuidada seleccin de toros asegura muestras de alta calidad, tanto desde el punto de reproduccin y fsica vista. Esto incluye requisitos relativos a la condicin fsica, estado de los rganos genitales, el semen y sexual comportamiento. La condicin fsica de un toro se evala en la posicin de pie y en movimiento en el suelo duro, tanto en los jvenes y en el apareamiento especmenes. Especial atencin se debe prestar a la posicin de las extremidades torcicas, plvicas extremidades y la construccin del casco. Extremidades plvicas son de importancia fundamental para la eficiencia cpula porque durante el montaje que asuman el control del peso del toro. La aptitud fsica tambin es necesario evaluar. rganos genitales en los toros se pueden dividir en dos grupos bsicos: los rganos genitales internos y rganos genitales externos. Los rganos genitales internos incluyen: prueba especfica, los testculos que producen gametos masculinos - espermatozoides y tractos reproductivos evacuar espermatozoides. Los tractos reproductivos se componen de piezas situadas en el interior y fuera del testculo. Los primeros incluyen la rete testis, los conductos eferentes y los ductos epididicos. Los conductos excretores son los conductos deferentes y los conductos eyaculadores. Los rganos genitales internos incluyen tambin accesorios gnadas: la glndula alveolar, la glndula de la prstata y la glndula bulbouretrales. La genital externa rganos incluyen la copulacin de rgano - el pene - la uretra masculina y el escroto. Por lo tanto las muestras que se van a utilizar en el centro de inseminacin debe no se han utilizado previamente en el apareamiento natural. En la evaluacin del deseo sexual el tiempo de reaccin del toro para el resumen o la vaca maniqu se considera. Es descrito en una escala de seis grados como: L-5 muy fuerte - cuando se permite que el toro para entrar en la habitacin que est echando a perder para montar a caballo, el personal es incapaz de sostenerla todava. L-4 fuerte - el toro trado al reclamo o una vaca maniqu comienza a saltar sobre ella, el toro es tranquilo y el personal es capaz de controlarlo. L-3 moderada - el toro trado al bromista olfatea a su alrededor y despus de 2-3 minutos se empieza a montarlo. L-2 dbil - los olfatea toro de todo el sumario un par de veces y luego se monta en l. Antes de que transcurran 10 minutos del espcimen repeticiones de montaje durante el cual se eyacula. L-1 muy dbil - durante 10 minutos, el toro no se monta el sumario, slo huele alrededor. Cuando el reclamo es cambiado los eyaculados de toros. L-0 Ninguno - falta de inters, y el toro no olfatear alrededor y no intenta montar. Para el centro de inseminacin slo las muestras que demuestran el deseo sexual muy fuerte, fuerte o moderada son til. La evaluacin debe hacerse en varias ocasiones con el fin de excluir la indisposicin temporal del toro (14). La fertilidad de los toros se determina de acuerdo con los siguientes ndices l ndice de retorno distinto (NR) determina en porcentaje del nmero de animales inseminadas por primera vez, que no se han presentado a otra inseminacin en un momento dado, - El ndice de la inseminacin determina la eficiencia de la inseminacin sobre la base de la relacin de la inseminacin procedimientos a la concepcin confirmada, - ndice de parto determina en porcentaje el nmero de hembras que tena terneros dentro del ao en comparacin con todas las hembras inseminadas en este perodo, - La tasa de concepcin determina el porcentaje de hembras impregnadas despus de la primera inseminacin o el apareamiento. Tambin hay que sealar que una actividad sexual ptima en el periodo de reproduccin se garantiza por bien equilibrada la nutricin tanto desde el punto de vista de la energa y protena. Gordura excesiva del animal afecta negativamente a la vivacidad de los espermatozoides pero la deficiencia de protena disminuye la actividad sexual y la calidad de los espermatozoides. Trastornos en reproduccin masculina tambin puede ser causada por la deficiencia de vitaminas (A, E, vitaminas del grupo B) y la falta de microelementos (zinc, selenio, manganeso, yodo) (11). 3. La recoleccin de semen Por la maana, antes de la recogida de esperma, el toro no recibir comida porque un animal completo tiene sexo menor conducir. La coleccin de semen se realiza en un lugar especialmente preparado llamado el "picadero". El mosto habitacin cumplir con las condiciones sanitarias y de salud adecuados, ya que se considera un ambiente de laboratorio. El suelo tiene que ser flexible y antideslizante. En la primera etapa de la preparacin del toro hace un par de rondas en el "picadero" y es permiti olfatear alrededor y saltar otros toros y realizar saltos vacas en una vaca maniqu. Un pozo despertado macho con impulsos sexuales distintivas es trado a la vaca maniqu o el resumen a fin de producir semen (Fig. 1). El semen se recoge en una vagina artificial compuesto por (3, 9): 1 - un recipiente de vidrio para el semen con una camisa de agua y una escala de volumen, 2 - una funda de ltex delgado y flexible, 3 - un cono de ltex que une el extremo de la vagina con el tubo de recogida, 4 - una carcasa cilndrica de goma con una vlvula para verter el agua y el aire que sopla, 5 - una bolsa - un protector trmico y un recipiente mecnica (fig. 2). Cuando se instala la vagina artificial se tiene que pagar esa atencin: - Cada eyaculado se recoge en una vagina separada, - El manguito de ltex tiene que ser instalado de tal manera que no hay pliegues interior de la carcasa, - La funda se debe estirar moderadamente con el fin de verter agua y soplar el aire, - La temperatura del agua en la vagina debe ser de 40-42C, - La temperatura del recipiente debe variar entre 35-37C, - La entrada a la vagina se debe LUBRICAT tales como vaselina. Al recoger la atencin de semen debe ser pagado que el toro no toca la grupa del bromista con su pene. La persona encargada de tomar el semen debe tener el pene del toro por el prepucio y dirigirla a la entrada de la la vagina. La vagina artificial nunca debe ser puesto sobre el pene. Es caracterstico de su especie, el toro realiza una sola cpula empujn. A continuacin, se evala el esperma recogido. 4. Anlisis de semen fresco El semen est compuesto de espermatozoides y una parte lquida llamada plasma seminal. La composicin final de la semen depende del nivel de desarrollo de las glndulas reproductivas accesorias, la participacin de las secreciones de los rganos reproductores y el volumen de los espermatozoides en total. En el toro estas secreciones son las siguientes: 50% la secrecin de las glndulas alveolares, 25% la secrecin de las glndulas bulbouretrales, 7% la secrecin desde el epiddimo, 5% la secrecin de la glndula de la prstata, 14% de espermatozoides. La estructura qumica del plasma seminal: - 90 g de agua / 100 ml, - 6,8 g de protena / 100 ml, - Fructosa 460 a 600 mg%, - Sorbitol 10 a 140mg%, - cido ctrico 620 a 800 mg%, - 350mg glicerofosfocolina%, - Inositol 60 mg%. Las propiedades de los semen fresco de toro son los siguientes (Fig. 3): - Volumen de la eyaculacin 2 a 8 ml, - Color: blanco con un tono crema caracterstico, - Textura: lechoso, leche con crema, cremoso, - Olor similar a la leche de vaca, - La concentracin de espermatozoides 0,6 a 1,5 x 10 6 en mm3 -PH 6.2 a 6.8 (4). En la evaluacin del volumen, se debe prestar atencin a la edad del hombre, porque la cantidad de la recogido semen de toros en crecimiento aumenta con la edad. Disminucin de la cantidad de la eyaculacin tambin puede sugerir falta de preparacin del toro o los errores cometidos durante la recogida. Un cambio en los parmetros de la descripcin suele ser el resultado de enfermedades del sistema urogenital. Por lo general, se refiere a un cambio en el color. Colores patolgicos son el siguiente: - De color rosa o rojo - indican la presencia de sangre (que aparece como resultado de la abrasin del pene, las fstulas de cavernosa cuerpos, clculos urinarios), - Verde - lo que sugiere la presencia de pus, - Amarillo - lo que sugiere la presencia de orina, - Blanco aguado - sugiriendo menor cantidad de espermatozoides o agua que tiene que el semen cuando se cobran a partir de la vagina artificial. Debido a la presencia de moco resultante de inflamaciones del sistema urogenital, la textura puede ser ms viscoso. Todas las impurezas (de piel, de fertilizantes, de tierra) son inaceptables. En el semen correctas no hay depsitos. Si aparece algn depsito justo despus de la coleccin, puede significar que un nmero significativo de espermatozoides muertos o clulas inflamatorias estn presentes (14). 4.1 La prueba espectrofotomtrica La primera parte de la evaluacin de semen fresco es el anlisis espectrofotomtrico (espectrofotmetro - IMV Fotmetro) (fig. 4). Una muestra de semen (0,02 ml) se diluye 1:200 con solucin fisiolgica (Natrium Chloratum 0,9%) y se coloca en una macro-cubeta. El resultado del anlisis es en forma de una impresin con la siguiente informacin: fecha de anlisis, nmero de muestra, la concentracin de espermatozoides, volumen de la eyaculacin, concentracin de espermatozoides en una paja, la cantidad del extensor necesario, nmero de pajitas recibida de la el semen. 4.2 El examen microscpico La segunda parte del anlisis de semen fresco es un examen microscpico (microscopio Nikon Eclipse E200 con contraste de fase y una mesa de estiramiento climatizada). Las muestras de semen se colocan sobre la mesa calienta a 37 C y cubierto con una hoja de cubierta. En el primer examen microscpico se analiza la evolucin de la masa espermatozoide (Llamado "agitando") con 50x de zoom y con zoom 200x - el porcentaje de espermatozoides de progresin general as como el nivel de aglutinacin de los semen diluido (Fig. 5). La progresin de la masa espermatozoide es llamado agitando porque es inducida por la progresin de los espermatozoides separados. La densidad del semen afecta la intensidad de esta progresin. Se describe en una escala de seis grados como: 5 - muy fuerte (+ + + +) 4 - fuerte (+ + +) 3 - moderada (+ +) 2 - dbil (+) 1 - muy dbil (+ \ -) 0 - Ninguno (-) El semen utilizado en inseminacin artificial deben caracterizarse por lo menos progresin agitando moderada (7, 14). En el anlisis de semen fresco, el nivel de aglutinacin de los espermatozoides se evala en una escala de tres niveles: A - dbil aglutinacin AA - moderada aglutinacin AAA - fuerte aglutinacin Si se forman numerosos grupos de espermatozoides aglutinados, la capacidad reproductiva del semen es limitado (Fig. 6). Los espermatozoides observado en frotis tienen una forma, definida como correcta, en particular para una especie especfica (Fig. 7). Aparte de ellos tambin se cambian los espermatozoides con la descalificacin de los defectos que se llaman formas incorrectas (10, 13). En la evaluacin morfolgica de la eyaculacin el tipo y nmero de espermatozoides correctos se determinan en comparacin con el nmero total de espermatozoides. La evaluacin tambin determina la presencia de otras clulas tales como: leucocitos, eritrocitos, clulas epiteliales, etc Debido al lugar de formacin de defectos, dos grupos son distinguen: I - cambios primarios formados durante la espermatognesis y ser el resultado de procesos patolgicos en los testculos, II - cambios secundarios que aparecen despus de que el espermatozoide finalmente se form y se ha dejado a los testculos (5, 8) 14. En la clasificacin utilizada hasta ahora las formas patolgicas incluyen (fig. 8): Defectos principales: Espermatozoide discapacitados Doble espermatozoide Espermatozoide Nodular Espermatozoide sin cabeza Cabeza del espermatozoide con un halo Espermatozoide en forma de pera Espermatozoide con la base de la cabeza reducido Espermatozoide con un (borrosa) contorno correctos Espermatozoide con una cabeza pequea y correctos Cabeza del espermatozoide suelto y correctos Espermatozoide con una parte del sacacorchos Espermatozoide con otros defectos de insercin (insercin mun) Espermatozoide con un (proximal) gota protoplasmtica en la insercin Espermatozoide con un pseudo-gota de protoplasma en la insercin Espermatozoide con anomalas graves de la cola (Daga defecto) Defectos secundarios: Espermatozoide con la cabeza alargada Espermatozoide con un pequeo pero la cabeza normal Espermatozoide con una cabeza ancha y enorme Cabeza Pero lo normal Espermatozoide con una membrana acrosmica separados Espermatozoide con una posicin abaxial de la cabeza Espermatozoide con un (distal) gota protoplasmtica en la insercin Espermatozoide con un solo lazo de la cola Espermatozoide con un lazo en el extremo de la cola Nmero de espermatozoides morfolgicamente alterado en los machos frtiles no debe superar el 15%. 5. La preservacin de semen fresco Con el fin de unificar todos los eyaculados recogidos, una pre-dilucin con BIOXcell IMV se realiza hasta 18 ml. La siguiente proceso se est enfriando el eyaculado de pre-diluido en un bao de agua (WSL Polonia LWC). Inicialmente el agua temperatura es 27C y ms tarde es 20C (fig. 9). A continuacin, la cantidad del extensor (BIOXcell IMV) a 20 C es medido a cabo basndose en el clculo del anlisis espectrofotomtrico. A continuacin, se aade el extensor para la semen para diluir correctamente. En el segundo examen microscpico de zoom 200x, la evaluacin se concentra en el porcentaje de espermatozoides con la progresin correcta y en su morfologa en el semen fresco diluido. La evaluacin considera slo aquellos espermatozoides que ofrecen una rpida progresin y hacia adelante. Otras formas de progresin (circulante, al revs, oscilacin) se asumen como incorrecta. La escala de evaluacin del avance la progresin de los espermatozoides es el siguiente: 5 - casi todos los espermatozoides se mueven (80-100%), 4 - la progresin hacia delante (60-80%), 3 - la progresin hacia delante (40-60%), 2 - la progresin hacia delante (20-40%), 1 - la progresin hacia delante mostrada por pocos espermatozoides (1-20%), 0 - todos los espermatozoides son todava (N) (7, 14). La siguiente etapa es a la porcin a cabo el semen a mini-pajitas utilizando un dispositivo para el llenado y marcado de las muestras (IS4 IMV) (fig. 10). La etiqueta de cada paja incluye: smbolo de la raza, el nombre del toro y el nmero, veterinaria nmero del nmero del centro, fecha de recogida y eyacular. Despus de llenar se controlan las pajas. La cantidad, la descripcin y el llenado de las pajuelas son verificados. Las pajillas que no cumplen con los requisitos son dispuestos. La siguiente etapa de la preservacin es el equilibrio de semen del toro. Las pajas, poner en cuadros, son se coloca en un refrigerador durante 3,5 a 4 horas a la temperatura de 4C. Luego, se colocan en un congelador (IMV), donde, durante 7 minutos, se congelan a la temperatura de - 140 C de acuerdo con una curva programada de congelacin (Fig. 11). Las pajas congelados se almacenan en contenedores de nitrgeno lquido a la temperatura de - 196C (fig. 12). 6. El control de semen congelado La primera prueba de control de los semen congelado se realiza en 1 a 3 das despus de la congelacin. 2 o 3 pajas son al azar elegido de un lote dado de esperma. El semen tiene que fluir de forma automtica, por lo tanto, la paja se corte a lo largo de la sellar y luego se coloca en un tubo de ensayo se calienta a aprox. 37C. En un examen microscpico estndar del porcentaje de espermatozoides con progresin hacia delante y su morfologa son evaluados. Despus de la descongelacin, el semen del toro previamente congelado en un mismo vial debe contener como mnimo: - 50% de los espermatozoides de la progresin correcta, - 6 millones de espermatozoides de la progresin correcta, - 80% de los espermatozoides sin cambios morfolgicos (12). Otro control microscpico del semen se realiza despus de 30 das de almacenamiento. Cuando recibe el semen notas positivas, que se transporta en contenedores a un banco de semen de la cual se distribuye a la inseminacin de animales centros. 7. Los resultados de la inseminacin artificial en el Centro de Mazovia de Reproduccin Animal y Reproduccin en owicz Tabele 1 presenta la calidad de la inseminacin artificial realizada en el Centro de Mazovia de Reproduccin Animal y Reproduccin en owicz en 2006-2010 y su eficiencia. Durante el perodo de 5 aos del total de 2,4 milln espcimen si inseminadas y la eficiencia media ascendi a 28,9%