UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHOMANN

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL DE ENFERMERA
I UNIDAD
LABORATORIO NRO. 13
DETERMINACION DE GLUCOSA EN SUERO
Objetivos:
Determinar la concentracin de la glucosa en una muestra de suero , utilizando un kit
comercial basado en el mtodo GOD-POD.
Base terica:
La glucosa es el glcido principal del cuerpo y todos los otros glcidos se convierten
en glucosa despus de su digestin y absorcin. Los niveles de glucosa en sangre se
mantienen entre unos lmites muy estrechos y constantes gracias a la accin de dos
hormonas: insulina y glucagn. En general, dichos valores nunca deben sobrepasar
los 200 mg/dl. , por grande que sea la ingestin de hidratos de carbono, ni descender
por debajo de 50 mg/dl en condiciones fisiolgicas interpretacin de los datos de
laboratorio.
Hiperglucemia: entre las alteriones que cursan con hiperglucemia podemos
citar:
Diabetes mellitus: sndrome caracterizado por un aumento en los niveles
fisiolgicos de la glucosa y que cursa de manera caracterstica con polifagia,
poliuria y polidipsia.
Disminucin de la tolerancia a la glucosa: glucemias basal inferior a 140 mg/dl
y, a las dos horas de sobrecarga oral de glucosa, valores intermedios entre los
fisiolgicos y los tpicos de la diabetes.
hipoglucemias: hablamos de hipoglucemia cuando los niveles de glucosa en
sangre se sitan entre 40 y 45 mg/dl. La hipoglucemia puede presentarse en
ayunas, o bien ser reactiva a la ingestin de alimentos o a la toma de
medicamentos.
Materiales- Reactivos:
Reactivo 1
Solucin tampn

Reactivo2
Standard 100 mmol/ul
Glucosa
TRIS pH 7.5 92 mmol/L
Fenol 0,3 mmol/L

Glucosa oxidasa 18000 U/L
Peroxidasa 1000 U/L
4- Aminofenazona 2.5 mmol/L


ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS
Disolver las enzimas del R2 en el contenido R1
Esta solucin mono reactiva es estable 1 mes a 2,8 C o 7 dias a temperatura
ambiente, al abrigo de la luz
Preparacin del reactivo:
Disolver los enzimas del R2 en el contenido R1
Esta solucin mono reactiva es estable 1 es a 2,8 C o 7 das a temperatura ambiente,
al abrigo de la luz.
Tcnica
Blanco Standard Muestra
Standard
Muestra
Reactivo
--
--
2.00 ml
20 ul/L
--
2.00 ml/L
--
20 ul/L
2.00 ml/L
Mezclar e incubar 10 min. A 37 C o 30 min. a temperatura ambiente.
Lectura a 505 nm. (490-550), frente a blanco de reactivo coloracin estable 30 minutos
a temperatura ambiente.
Calculo:
D. Op Muestra
Mg/ dl glucosa = __________________ x conc. Standard
D. Op Standard
mg/ dl x 0.0555 = mmol/L
Linealidad
El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dl si la concentracin de glucosa es
superior a 500 mg/dl. Diluir la muestra a 1;2 con solucin salina y multiplicar el
resultado por 2 calores normales de 55 a 110 mg/dl (3.05 6.11 mol/L)
Conclusin
No se ha observado interferencias por hemoglobina (4g/L), bilirrubina (20 mg/L),
creatinina (100mg/L), galactosa (1g/L) y EDTA (2 g/L)

III. CUESTIONARIO:
1. Si la concentracin de glucosa hubiera sido superior a 500 mg/dL.
Cmo habra actuado?
Desde el lmite de deteccin de 0,04 mg/dL hasta el lmite de linealidad de
500 mg/dL. Sila concentracin es superior al lmite de linealidad, diluir la
muestra 1:2 con NaCl 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2

Sensibilidad analtica: 1mg/dL = 0,0036 A
Exactitud:
Los reactivos de SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemticas
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).Los
resultados obtenidos con 50 muestras fueron las siguientes:
Coeficiente de correlacin (r):0,99.
Ecuacin de la recta de regresin: y = 1,0x + 0,12.
Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado
Interferencias: No se han observado interferencias con: hemoglobina hasta 4 g/L,
bilirrubina hasta 20 mg /L, creatinina hasta100 mg /L, galactosa hasta 1 g /L. Se han
descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinacin de la
glucosa.
2. Para la determinacin ha utilizado un mtodo enzimtico. Se trata
de un mtodo cintico? Justifique su respuesta

S; El centro activo est formado por un grupo de funciones de
contacto establece las funciones de la enzima y el sustrato.la
actividad cataltica de las enzimas se encuentra sometida a
diversos tipos de regulacin; casi todas las enzimas inhiben sus
productos a altas catalizaciones algunas se sintetizan en forma de
precursores inactivos y se activan despus generalmente por
protelisis.

Cintica enzimtica

Es una parte de la bioqumica encargada de estudiar las
velocidades de reaccin de las enzimas que son catalizadores por
las enzimas, la cintica enzimtica es una de las tcnicas ms
viejas para entender los mecanismos enzimticos.
Mecanismos enzimticos
Los mecanismos enzimticos pueden ser divididos en mecanismo
de nico sustrato o mecanismo de mltiples sustratos. Los
estudios cinticos llevados a cabo en enzimas que solo unen un
sustrato, como la triosafosfato ismerasas, pretenden medir la
afinidad con la que se une el sustrato y la velocidad con la que lo
transforma en producto. Por otro lado, al estudiar una enzima que
une varios sustratos, como la dihidrofolato reductasa, la cintica
enzimtica puede mostrar tambin el orden en el que se unen los
sustratos y el orden en el que los productos son liberados.
No obstante, no todas las catlisis son llevadas a cabo por
enzimas proteicas. Existen molculas catalticas basadas en el
ARN, como las ribosomas y los ribosomas, esenciales para el
splicing alternativo y la traduccin del ARNm, respectivamente. La
principal diferencia entre las ribozimas y los ribosomas radica en el
limitado nmero de reacciones que pueden llevar a cabo las
primeras, aunque sus mecanismos de reaccin y sus cinticas
pueden ser estudiados y clasificados por los mismos mtodos.