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UNIO EDUCACIONAL DO PLANALTO CENTRAL

FACULDADES INTEGRADAS DA UNIO EDUCACIONAL DO PLANALTO


CENTRAL
Aprovadas pela Portaria SESu/MEC N 368/2008 de 19/05/2008 (DOU
20/05/2008)



















Relatrio de Aula Prtica N 02: EXTRAO E ANLISE DE CLULAS DA
MEDULA SSEA DE CAMUNDONGO
















GAMA
MAIO, 2013








UNIO EDUCACIONAL DO PLANALTO CENTRAL
FACULDADES INTEGRADAS DA UNIO EDUCACIONAL DO PLANALTO
CENTRAL
Aprovadas pela Portaria SESu/MEC N 368/2008 de 19/05/2008 (DOU
20/05/2008)



















Relatrio de Aula Prtica N 02: EXTRAO E ANLISE DE CLULAS DA
MEDULA SSEA DE CAMUNDONGO


















Relatrio apresentado a
Prof MS.c. Ana Elizabeth
para obteno de nota na
disciplina de Gentica
Humana.


Adriana Gomes
Girlene Oliveira
Juliana Porto
Saulo Arajo





Sumrio


1. Introduo
2. Objetivos
3. Materiais e Mtodo
4. Resultados
5. Discusso
6. Concluso
7. Referncias Bibliogrficas





































INTRODUO

A medula ssea um tecido encontrado dentro dos ossos, como o esterno, as
costelas, a coluna vertebral, a pelve e as partes proximais do fmur e do
mero. Uma rede fibrosa suporta as clulas tronco, que se diferenciam para
formar clulas do sangue: leuccitos, hemcias e plaquetas. Qualquer doena
ou anormalidade que afete a produo de clulas do sangue ou de seus
precursores pode causar um distrbio da medula ssea. Estes podem ser
classificados em: produo excessiva de um tipo de clula, que pode afetar a
produo de outros tipos; produo de clulas com maturao ou funo
anormal; crescimento excessivo da matriz fibrosa, prejudicando a formao de
clulas; predomnio de um tipo de clula porque tem vida prolongada;
diminuio da produo de clulas, ou diminuio de seu tempo de vida;
deficincia de fatores nutricionais prejudicando a formao e a maturao das
clulas; e invaso da medula ssea por neoplasias ou infeces de outros
rgos.
Aps a retirada e anlise das clulas da medula ssea podem-se observar, por
meio de colorao especfica, clulas normocromticas, descritas como clulas
velhas por que contm pouco ribossomo e pouca colorao. As clulas novas,
chamadas de policromticas, contm muito ribossomo e colorao.
A medula ssea o tecido encontrado no interior dos ossos, tambm
conhecido popularmente por "tutano", que tem a funo de produzir as clulas
sanguneas: glbulos brancos, glbulos vermelhos e plaquetas.
A medula ssea se localiza na parte esponjosa dos ossos chatos (por exemplo,
a bacia), onde o desenvolvimento das clulas do sangue acontece.
A clula que origina as clulas sanguneas chamada de clula progenitora ou
clula-me, estas clulas existem em pequeno nmero no sangue e em maior
quantidade na medula ssea. As clulas- me se auto renovam ou se
diferenciam e passam por diversos estgios de maturao, antes de passarem
para o sangue. O processo de formao das clulas sanguneas chamado de
hematopoeise.
A clula progenitora mielide d origem aos eritrcitos, plaquetas, glbulos
brancos granulcitos (neutrfilos, eosinfilos, basfilos), mastcitos e aos
moncitos. O progenitor linfide da origem a linfcitos T e B e clulas NK
(natural killer).
Estima-se que em um adulto mdio, com aproximadamente 5 litros de sangue,
existam em cada centmetro cbico de sangue, cerca de 4,5 milhes de
glbulos vermelhos, seis mil glbulos brancos e 300 mil plaquetas. Isso
significa um total aproximado de 22,5 bilhes de glbulos vermelhos, 30
milhes de glbulos brancos e 1,5 bilhes de plaquetas.

As clulas sangneas tem vida curta:

*os glbulos vermelhos tem uma vida mdia de 120 dias,
*os glbulos brancos vivem em mdia uma semana,
*as plaquetas nove dias.
H, portanto permanentemente clulas morrendo, sendo destrudas ou
eliminadas e substitudas por novas clulas normais.





















OBJETIVOS


Aprender a retirar clulas da medula ssea de camundongo;
Identificar as clulas normocromticas e policromticas;
Identificar as fases de maturao da medula ssea;










































MATERIAIS E MTODOS


Um bquer pequeno com 50 ml de NaCl
(uma) Agulha e seringa de insulina;
(um) Tubo de ensaio;
Corante Pantico para clula sangunea;
Seis Lminas de ponta fosca;
1 Pina, 1 bisturi e tesoura cirrgica
Luvas
1 camundongo para extrao da medula ssea

Pegou-se um camundongo e foi feito o abate do mesmo puxando-o pelo rabo,
firmando seu pescoo com uma pina, fez o deslocamento cervical
imobilizando-o do pescoo para baixo.
Com o auxilio de um bisturi retirou-se o fmur do camundongo.
Foram cortadas as extremidades superiores e inferiores do fmur do
camundongo, com uma tesoura cirrgica.
Com uma seringa e agulha de insulina, pegou-se aproximadamente 100 u (1
ml) de NaCl
Introduziu-se a agulha da seringa na extremidade superior do fmur injetando o
NaCl dentro do fmur para retirada de medula ssea, o mesmo processo se
repetiu na extremidade inferior sendo depositado em um tubo de ensaio.
Pingou-se uma gota do NaCl com medula ssea em uma lmina, com o auxilio
de outra lmina, fez-se um esfregao deixando secar em temperatura
ambiente.
Aps a secagem da lmina, foi realizada a sua colorao com o corante
Pantico, onde foi submergida no corante um e dois por aproximadamente 10
segundos, e corante trs por um minuto.
Deixou a lmina na vertical para escorrer e secar totalmente.
Com a lmina totalmente seca, foi realizado o exame de microscopia ptica,
onde se observaram na objetiva de 40x as clulas normocromticas e
policromticas.































RESULTADOS



Eritrcito policromtico: eritrcito imaturo, numa fase de desenvolvimento
intermediria, que ainda contm ribossomos e pode, por conseguinte,
distinguir-se dos eritrcitos normocromticos maturos por colorao seletiva
dos ribossomos.
Clula mais jovem com maior quantidade de RNA no citoplasma, e
apresentando colorao roxa.

Lmina com clula policromtica, microscopia ptica observada na objetiva de
40x


POLICROMTICOS
Estes eritrcitos policromticos so clulas jovens liberadas pela medula e que
ainda no tomaram a forma de disco bicncavo, por isso no tm a rea central
clara.












Eritrcito normocromtico: eritrcito maduro a que faltam ribossomos e que
pode, por conseguinte, distinguir-se dos eritrcitos policromticos imaturos por
colorao seletiva dos ribossomos.
Clula mais antiga que j perdeu o RNA do citoplasma e apresenta colorao
laranja.
Lmina com clula normocromtica, microscopia ptica observada na objetiva
de 40x.


NORMOCROMTICOS
So eritrcitos com contedo normal de hemoglobina, tm um centro claro que
ocupa 1/3 do dimetro da clula. No esfregao pode observar discreta variao
na intensidade no seu halo claro central, que varia entre as diferentes partes de
um esfregao.





















DISCUSSO


As clulas do sangue, os glbulos vermelhos, glbulos brancos leuccitos e
as plaquetas so diariamente renovados. A medula ssea tutano do osso
possui clulas totipotentes as chamadas clulas mes as quais, atendendo
a estmulos especficos, produzem essas clulas. Possuem, ainda, essas
clulas mes a capacidade de se auto renovarem, ou seja, quando uma delas
se divide em duas uma dar origem s mencionadas clulas do sangue e
outra guarda todo o potencial para a renovao do sangue. Teste do
microncleo in vivo, um mtodo citogentico relativamente simples e rpido
de avaliao de mutagenicidade induzida, que visa deteco de pequenos
ncleos que se formam durante a eritropoiese na medula ssea de mamferos,
como conseqncia de quebras cromossmicas, cromatdicas ou ainda de
problemas na disjuno cromossmica. Uma vez que a verificao de sua
presena feita em clulas da linhagem eritroctica, eles podem ser
encontrados tanto em clulas jovens (eritrcitos policromticos-PCE) ou em
clulas maduras (eritrcitos normocromticos - NCE).























CONCLUSO

Contam-se ao microscpio o nmero de microncleos presentes nos eritrcitos
policromticos e estabelece-se uma relao entre os eritrcitos policromticos
e normocromticos.
A freqncia de eritrcitos policromticos micronucleados apresentou valores
mais altos que os eritrcitos normocromticos, o que indica um quadro normal
na linhagem de clulas da medula ssea, no apresentando toxicidade em
relao ao numero de clulas antigas.














































REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS



bdjur.almedina.net/item.php

http://www.hemonline.com.br/medula.htm


ALBERTS, B.; BRAY, D.; LEWIS, J.; RAFF, M.; ROBERTS, K. E WATSON, J. D. Biologia
molecular da clula. 3a edio. Rio Grande do Sul: Artes Mdicas. 1997.

JUNQUEIRA, L.C. Biologia celular e molecular; Rio de Janeiro, Guanabara-Koogan, 2005.

POLIZELI, M. L. T. Manual prtico de biologia celular. Ribeiro preto - So Paulo: Holos
Editora, 1999