PRCTICA 4

COLORIMETRA. LEY DE LAMBERT-BEER

OBJETIVOS
Adquirir los conocimientos bsicos sobre espectrofotometra de absorcin visible,
incluyendo la Ley de Lambert-Beer y sus aplicaciones en Qumica. Para ello se
realiar un e!perimento en el laboratorio que muestre cmo utiliar un
espectrofotmetro para llevar a cabo la determinacin cuantitativa de un
compuesto.
FUNDAMENTO TERICO
Espectrofotometra ultravioleta visible. Ley de Lambert-Beer.
Los m"todos espectroscpicos de anlisis estn basados en la medida de la radiacin
electroma#n"tica que es absorbida o emitida por una sustancia. $n funcin de ello se
clasifican fundamentalmente en%
Mtodos de absorcin% &e basan en la disminucin de la potencia de un 'a de
radiacin electroma#n"tica al interaccionar con una sustancia.
Mtodos de emisin% &e basan en la radiacin que emite una sustancia cuando es
e!citada previamente por medio de otro tipo de ener#a (t"rmica, el"ctrica)*.
Mtodos de fluorescencia% &e basan en la radiacin que emite la sustancia cuando
es e!citada previamente por un 'a de radiacin electroma#n"tica.
+tras clasificaciones de los m"todos espectroscpicos se establecen en funcin de la
re#in del espectro electroma#n"tico que interviene en la t"cnica. As, pueden utiliarse
re#iones como rayos ,, ultravioleta, visible, infrarro-o, microondas, etc. $n la .i#ura /
pueden verse las re#iones del espectro electroma#n"tico, en funcin de los valores de la
lon#itud de onda (0* de cada radiacin%
Lon#itud de onda (nm*
.recuencia (1*
/2
-3
/2
-/
/2 /2
3
/2
4
/2
5
/2
6
/2
//
/2
/3
/2
72
/2
/8
/2
/9
/2
/:
/2
/7
/2
/2
/2
8
/2
9
/2
:
;ipo de radiacin
<ayos
<ayos ,
=ltravioleta >nfrarro-o
?icroondas
+ndas de radio
@isible
:22 nm 522 nm
.i#ura /
$n esta fi#ura puede tambi"n observarse como la lu visible para el o-o 'umano
constituye Anicamente una pequeBa parte del espectro electroma#n"tico.
Cado que los primeros m"todos espectroscpicos desarrollados corresponden a la re#in
del visible recibieron la denominacin de m"todos pticos, la cual se utilia todava con
frecuencia. A continuacin, se ofrece una breve informacin sobre la ley de Lambert-Beer y
la espectrofotometra de absorcin en la re#in visible del espectro.
&i se considera que se dispone de una fuente de radiacin que 'ace lle#ar a la muestra
un 'a de radiacin, de lon#itud de onda previamente seleccionada, cuya potencia es P
2
, la
muestra de espesor b absorbe una parte de esa radiacin incidente, de forma que la
potencia del 'a disminuye despu"s de atravesar la muestra siendo su nueva potencia P. $l
cociente entre la potencia de la radiacin que sale de la muestra y la de la que incidi sobre
ella, se define como transmitancia%
;DPEP
2
.
La transmitancia tambi"n puede e!presarse en tanto por ciento, multiplicando el cociente
anterior por /22. $s ms frecuente utiliar el concepto de absorba!"a, o #$s"#a# %&'"!a,
que se define como el lo#aritmo de la transmitancia cambiado de si#no%
A D lo# (P
2
EP* D - lo# ;
Ce acuerdo con estas e!presiones, si la muestra no absorbe radiacin, P y P
2
coinciden,
por lo tanto AD2, y se transmite toda la radiacin ;D/ (/22F de transmitancia*. &i, en otro
caso, se transmite solo un /F de radiacin (;D2.2/*, PDP
2
E/22, la absorcin de radiacin
que 'a tenido lu#ar corresponde a AD7.
Al incidir radiacin electroma#n"tica visible sobre la materia puede ser totalmente
absorbida o totalmente refle-ada. $n el primer caso el ob-eto aparecer de color ne#ro y en
el se#undo de color blanco. Puesto que nosotros percibimos los ob-etos por medio de la lu
refle-ada, si 'acemos incidir un 'a de lu blanca (que contiene todas las lon#itudes de
onda* sobre un ob-eto, "ste absorber ciertas lon#itudes de onda y refle-ar otras, siendo
"stas Altimas las responsables del color. &e dice que este color (observado* es
complementario del que se percibira si la lu absorbida se pudiera detectar. Cado que en la
parte e!perimental de esta prctica las medidas van a realiarse con espectrofotometra
visible, es conveniente conocer para qu" lon#itud de onda tiene cada color su m!ima
absorcin, lo que se muestra en la tabla si#uiente%
Golor es de la lu visible
Lon#itud de onda de
m!ima absorcin(nm*
Golor absorbido Golor observado
382-:72 @ioleta Amarillo-verde
:72-::2 Aul-violeta Amarillo
::2-:52 Aul Anaran-ado
:52-422 @erde-aul <o-o
422-472 @erde PArpura
472-454 Amarillo-verde @ioleta
Para medir los valores de absorbancia y transmitancia de una disolucin se utilian
espectrofotmetros UV-Vis, que, como puede verse en la .i#ura 7, se componen de cinco
elementos principales%
H =na fuente de radiacin que suele ser una lmpara de filamento de Iolframio
H =n monocromador que permite seleccionar una lon#itud de onda determinada
ori#inando un 'a monocromtico.
H =n recipiente para contener la muestra denominado cubeta fabricado con un material
que permite el paso de la radiacin en la re#in del espectro de inter"s. &uelen ser de
vidrio, plstico o cuaro. $l espesor de la cubeta ms 'abitual es / cm.
H =n detector que convierte la ener#a radiante en una seBal el"ctrica.
H =na pantalla de visualiacin
Moo!ro(a#or
D$'$!'or
F)$'$ #$
ra#"a!"%
M)$s'ra
F"*)ra +
Pa'a,,a
La absorbancia est relacionada con la concentracin de la sustancia, !, por la ley de
La(b$r'-B$$r, que se resume con la ecuacin% A - . b ! , donde ! se e!presa en molEL, b
es la lon#itud del camino ptico (anc'ura de la c"lula que contiene la disolucin de la
sustancia* y se e!presa en cm, y . es la absortividad molar, propiedad caracterstica de cada
sustancia correspondiente a la cantidad de radiacin que absorbe a una lon#itud de onda
determinada por unidad de concentracin, siendo sus unidades L mol
-/
cm
-/
cuenta que la absorbancia no tiene unidades*.
(t"n#ase en
Para poder aplicar la ley de Lambert-Beer es necesario seleccionar previamente una
lon#itud de onda puesto que tanto A como . varan con ella. Para ello se obtiene
previamente el $s&$!'ro #$ absor!"% de la sustancia, que consiste en una representacin
de los valores de absorbancia frente a la lon#itud de onda e!presada en nanometros (nm*.
Cel espectro de absorcin puede seleccionarse el valor de lon#itud de onda para el cual la
absorbancia es m!ima. La .i#ura 3 muestra dos e-emplos de espectro de absorcin.
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
!
y
0
7
0
/
Lon#itud de onda
F"*)ra /
&i bien la ley de Lambert-Beer indica que a una representacin #rfica de la absorbancia
frente a la concentracin le correspondera una lnea recta, esto slo tiene lu#ar para
disoluciones diluidas, por ello, no es conveniente utiliar la e!presin matemtica
directamente, sino construir en cada caso la recta de calibrado que confirme que la ecuacin
de Lambert-Beer se cumple en el intervalo de concentraciones en el que se traba-a. $sta
recta se construye midiendo la absorbancia de una serie de disoluciones de concentracin
perfectamente conocida.
$n la prctica que realiaremos a continuacin se determinar la concentracin de cobre
presente en una determinada muestra por espectrofotometra. Para ello se formar
previamente el comple-o con amoniaco, es decir, Gu(J1
3
*
:
7K
. Por otro lado, se medir la
absorbancia de una serie de disoluciones cuya concentracin de Gu(J1
3
*
:
7K
es
perfectamente conocida, representndose el valor de absorbancia obtenida frente a la
concentracin (recta de calibrado*. Por Altimo, a partir del valor de absorbancia medido para
la disolucin problema y utiliando la recta de calibrado se determinar la cantidad de cobre
presente en la muestra problema.
$l compuesto formado Gu(J1
3
*
:
7K
presenta color aul. Gomo ya se 'a mencionado
anteriormente para que una sustancia sea coloreada debe absorber lu visible,
provocndose como consecuencia trnsitos electrnicos. $n el caso del comple-o amoniacal
de cobre, la presencia de los li#andos (J1
3
* alrededor del ion Gu
7K
provoca que los orbitales
3d del Gu
7K
se diferencien ener#"ticamente, posibilitando la absorcin de un fotn de
ener#a adecuada que provoca un trnsito electrnico, como puede verse en la fi#ura :.
:s 3d
Gu
7K
(LD76* MArN MArN 3d
6
F"*)ra 4
MATERIAL Y REACTIVOS
Material
=n vaso de precipitados de 42 mL
: matraces aforados de 42 mL
=na pipeta #raduada de 4 mL
=na pipeta #raduada de /2 mL
/2 frascos de polipropileno
=n frasco lavador
=n espectrofotmetro
Gubetas espectrofotom"tricas.
Reactivos
&ulfato de cobre 2./222 ? Amoniaco (Cispensador /2 mL*
PROCEDIMIENTO E0PERIMENTAL.
$n el manejo del espectrofotmetro 'an de observarse una serie de precauciones%
H Jo de-ar 'uellas en las paredes de la cubeta espectrofotom"trica.
H $n-ua#ar cuidadosamente la cubeta espectrofotom"trica con la disolucin que va a ser
medida, antes de llenarla definitivamente.
H <ealiar las medidas empeando por la disolucin ms diluida y acabando por la ms
concentrada.
onstruccin de la recta de calibrado
/. Go#er 42 mL de una disolucin patrn 2./222 ? de sulfato de cobre.
7. A partir de la disolucin anterior y de una disolucin de amoniaco preparar varias
disoluciones del comple-o Gu(J1
3
*
:
7K
de concentracin conocida. $n concreto, estas
disoluciones se prepararn meclando 4.2 mL de amoniaco con /.2, 7.4, 3.4, 4.2, 9.2, 5.4,
8.4 y /2.2 mL respectivamente de la disolucin patrn de sulfato de cobre y enrasando en
un matra aforado de 42 mL con a#ua destilada. Las disoluciones se #uardarn en frascos
de polipropileno y se etiquetarn 'asta el momento de medir la absorbancia.
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
3. Preparar la disolucin que ser utiliada como blanco. Para ello se pondrn 4.2 mL de
amoniaco en un matra aforado de 42 mL y se enrasar con a#ua destilada.
:. $le#ir la lon#itud de onda a la cual se realiar posteriormente la medida de la
absorbancia. $sa lon#itud de onda es la correspondiente al m!imo de absorcin, pues es
a' donde la sensibilidad es m!ima. Adems, las medidas de absorbancia en esa ona
implican un menor error frente a pequeBas variaciones en la lon#itud de onda que las
realiadas en cualquier otra ona de la banda de absorcin. Para ele#ir la lon#itud de onda
de medida se 'a obtenido el espectro de absorbancia de una de las disoluciones preparadas
anteriormente (la obtenida meclando 4.2 mL de amoniaco y 8.4 mL de disolucin patrn de
cobre* entre 442 y 942 nm. Cic'o espectro se muestra a continuacin%
/.2
2.8
2.9
2.:
2.7
2.2
:22 422 922 522 822
/ nm
4. ?edir la absorbancia de cada una de las disoluciones preparadas (a la lon#itud de onda
determinada en el apartado anterior*.
9. <epresentar la recta de calibrado.
!eterminacin de la cantidad de cobre en una muestra problema.
/. ?edir la absorbancia (a la lon#itud de onda de m!ima absorcin* de una muestra
problema que contiene cobre. Cic'a muestra es suministrada por el profesor y 'a sido
preparada meclando una cantidad desconocida de disolucin patrn de cobre con 4.2 mL
de amoniaco. $sta determinacin se realiar por duplicado.
RESULTADOS Y CUESTIONES
/. Gomentar el espectro de absorcin del comple-o amoniacal y e!plicar cul 'a sido la
lon#itud de onda ele#ida para medir la absorbancia.
7. Galcular la concentracin e!acta de la disolucin patrn de Gu&+
:
preparada a partir de
la masa pesada. OGon qu" instrumento se reali la pesadaP O&e enras en probeta o en
matra aforadoP OPor qu"P
3. Gompletar la si#uiente tabla%
D"so,)!"% V
a(o"a!o
1(L2
V C)SO
4
1(L2
C)1N3
/
2
4
+4
1M2
Absorba!"a
($#"#a
PATRN 5
PATRN +
PATRN /
PATRN 4
PATRN 6
PATRN 7
PATRN 8
PATRN 9
PATRN :
PROBLEMA
:. <epresentar #rficamente la absorbancia frente a la concentracin.
4. 1allar la concentracin (molEL* de la disolucin problema a partir de la recta de calibrado.
9. 1allar la concentracin de la disolucin problema a partir de la e!presin al#ebraica de la
ley de Lambert-Beer. Para ello, es necesario obtener previamente el valor del coeficiente de
absorcin molar a partir de la pendiente de la recta de calibrado.
BIBLIO;RAFA
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