Universidad Michoacana de

San Nicols de Hidalgo

FACULTAD DE BIOLOGA


Evaluacin del crecimiento y floracin de tulipn
(Tulipa gesneriana L. Var. Ile de France) como
respuesta a diferentes inculos microbianos

TESI S
Que para obtener el ttulo de

BILOGO
PRESENTA:
ROSARIO YADIRA AVALOS BARAJAS

DIRECTOR DE TESIS:

M.C. HUGO ALEJANDRO FARIAS CHAGOYA


MORELIA, MICHOACN, NOVIEMBRE DE 2008


AUTOMAT
IZACION
Firmado digitalmente por
AUTOMATIZACION
Nombre de reconocimiento (DN):
cn=AUTOMATIZACION, o=UMSNH,
ou=DGB, email=soporte@biblioteca.
dgb.umich.mx, c=MX
Fecha: 2009.07.15 12:39:51 -05'00'





El presente trabajo se realiz en el J ardn Botnico Melchor
Ocampo de la Facultad de Biologa de la Universidad
Michoacana, bajo la asesora del M.C. HUGO ALEJ ANDRO
FARIAS CHAGOYA, con el apoyo de la administracin de la
Facultad de Biologa

















2

DEDICATORIA

A DIOS
Por darme una familia maravillosa y al oportunidad de vivir y
amar intensamente.

A MIS PADRES
RAMON AVALOS y TERESA BARAJAS: Por el incondicional Amor
que me han brindado a lo largo de mi vida, por su comprensin, por
alentarme a seguir en los momentos de flaqueza de mi carrera y de
mi vida, por darme siempre todo lo necesario para no desistir LOS
QUIERO.

A MI GRAN AMOR
Mi esposo
GAMA: Te doy las gracias y mi Amor por ser el compaero de mi
vida mi confidente y amigo porque sin ti mi vida no seria llena de
alegra. Por ayudarme a que este proyecto fuese posible, por darme
tu amor y apoyo cuado ms lo necesite. TE AMO.

A MI PEQUEO POLIPO Mi hijo
DAVID: Por traer a mi vida luz, esperanza y tanta ternura, por ser
un aliciente a seguir adelante y darme tanto Amor que Dios te
bendiga. Te amo.

A MIS HERMANOS
JUAN RAMON, CARLOS Y ANGEL: Porque me han enseado a ser
una mejor persona y por ser un ejemplo en mi vida por su gran
cario y por compartir tantos buenos y malos momentos. Los Quiero.

A MIS ABUELOS MATERNOS
CHANO Y ELENA: Gracias por el gran cario que me han
demostrado y por ensearme que siempre se debe trabajar para
lograr las metas y que la familia es importante para ello.

A MI ABUELO PATERNO.
ANDRES AVALOS: Por ensearme el respeto a Dios y por su gran
amor al trabajo y a la vida.

3

AGRADECIMIENTOS

A mi asesor M.C. Hugo Farias por su ayuda para la realizacin de mi
tesis, por compartir sus conocimientos y por su amistad.

Un agradecimiento especial a mi mesa de sinodales M.C. Lourdes
Ballesteros Almanza, M.C. Jos Luis Abrego Aranda, y al Q.F.B. Jaime
Chvez Torres. Gracia por sus aportaciones a mi tesis.

A la directora de la Facultad de Biologa M.C. Tohtli Zubieta por sus
mltiples apoyos y por aportar a mi vida conocimiento. Al Q.F.B. Jaime
Chvez por su apoy para la realizacin de mi tesis y su amistad. A la
M.C. Lulu por su amistad y por sus conocimientos aportados para la
realizacin de mi tesis. As mismo a todos mis profesores de la Facultad de
Biologa que de alguna forma u otra aportaron conocimiento y
preparacin a mi vida.

A VERITO. Por ser una gran amiga, compaera de tantos momentos
felices y amargos gracias por apoyarme siempre y por ayudarme a salir
adelante. Gracias hermanita. T.Q.M.

ANA M. . Gracias por compartir conmigo tantos momentos y por ser
parte de mi experiencia en esta vida, ahora estas con Dios pero yo te
recuero con un gran cario, siempre sers mi amiga y estars en mi
corazn.

LUCI: Gracias por ensearme que en la vida la amistad es lo mas valioso,
por ser la amiga tan especial que eres para mi y gracias por abrirme las
puertas e tu casa. TQM.

CITLALLI: Gracias por ensearme tantas cosas, te admiro, te respeto y
llevo en mi corazn.

CRISTI; Gracia por ser mi amiga y ensearme que la y la paciencia es
virtud de los fuertes, te quiero.

JANNETE: Gracias por ensearme que en la vida se requiere de
responsabilidad y esfuerzo para lograr lo que se quiere.

CHAYITO: Te admiro sinceramente por tu fortaleza y eres una gran
amiga.


4

CONTENIDO

Pgina
NDICE DE TABLAS Y FIGURAS 8

RESUMEN 9

I. INTRODUCCIN 10
1.1 El Tulipn 10
1.2 Taxonoma y Morfologa del Tulipn 11
1.3 Ciclo de vida del Tulipn 12
1.4 Particularidades del cultivo de tulipn 16
1.4.1 Clima 16
1.4.2 Suelo 16
1.4.3 Plantacin 16
1.4.4 Riego 17

II. ANTECEDENTES 18
2.1 Reportes sobre el cultivo de Tulipn 18
2.2 Microorganismos empleados en la agricultura 20
2.2.1 Micorrizas 20
2.2.2 Rizobacterias. 22
2.2.3 Hongos biocontroladores. 23
2.2.4 Interacciones benficas entre microorganismos 25

III. OBJETIVOS 28
3.1. OBJ ETIVO GENERAL 28
3.2. OBJ ETIVOS ESPECFICOS 28




5

IV. MATERIALES Y MTODOS 29
4.1 MATERIALES 29
4.1.1 Material biolgico. 29
4.1.2 Acondicionamiento del local cerrado para cultivo 30
4.1.3 Preparacin de sustrato 30
4.2 METODOLOGA 31
4.2.1 Siembra de bulbos 31
4.2.2 Tratamientos 31
4.2.3 Inoculacin 32
4.2.4 Sistema de riego 33
4.2.5 Obtencin de datos 33
4.2.6 Determinacin del porcentaje de micorrrizacin en races 35
4.2.6.1 Tincin de races por el mtodo modificado de Philips y
Hayman (1970) 35
4.2.6.2 Determinacin del porcentaje de colonizacin micorrzica
en races. 36
4.2.7 Anlisis de los datos obtenidos 36

V. RESULTADOS 38
5.1 Porcentaje de brotacin de bulbos de tulipn Tulipa gesneriana
var. Ile de France. 38
5.2 Altura de las plantas a los 15 das. 39
5.3 Dimetro de la base del tallo. 39
5.4 Longitud de la hoja. 39
5.5 Altura de las plantas a los 30 das. 40
5.6 Longitud del tpalo 40
5.7 Tratamientos que resultaron con diferencias significativas con
respecto al control en los diferentes parmetros que se midieron. 41
5.8 Porcentaje de micorrizacin de los tratamientos inoculados con
HMA. 41

6

5.9 Temperaturas registradas durante el da en el local y en el
invernadero. 41
5.10 Comparacin de los promedios de los parmetros de las plantas
del local y las del invernadero 42
5.11 Comparacin de la plantas del local y del invernadero a los
15, 30 y 35 das. 42

VI DISCUSIN 52

VII. CONCLUSIONES 55

VIII. BIBLIOGRAFA 56



















7

INDICE DE TABLAS Y FIGURAS

Tabla 1. Tabla de resultados de la prueba de Tukey 48
Figura 1. Clasificacin taxonmica de los tulipanes (Cronquist 1981) 12
Figura 2. Partes de la planta de tulipn. 13
Figura 3. Imagen de las partes de un bulbo. 14
Figura 4. Ciclo de vida del tulipn. 15
Figura 5. Metodologa de inoculacin 32
Figura 6. Obtencin de datos. 34
Figura 7. Tincin de races micorrizadas con el colorante Azul de
Tripano. 37
Figura 8. Porcentaje de brotacion de bulbos 38
Figura 9. Alturas promedios de los tratamientos a los 15 dias. 43
Figura 10. Prueba de Tukey aplicada a los datos de altura de las plantas
a los 15 das de los diferentes tratamientos. 43
Figura 11. Diametro de la base del tallo. 44
Figura 12. Prueba de Tukey del dimetro de la base del tallo de los
diferentes tratamientos. 44
Figura 13. Promedios de la longitud de la hoja. 45
Figura 14. Prueba de Tukey de los datos de longitud de la hoja. 45
Figura 15. Promedios de alturas de los diferentes tratamientos. 46
Figura 16. Prueba de Tukey altura de las plantas de los tratamientos. 46
Figura 17. Longitud promedio del tpalo de los tratamientos. 47
Figura 18. Prueba de Tukey para longitud del tpalo. 47
Figura 19. Porcentaje de Micorrizacin. 49
Figura 20. Races colonizadas por HMA de plantas de Tulipn (30 das). 49
Figura 21. Temperaturas durante el da en el invernadero y en el local
cerrado. 50
Figura 22. Comparacin de los promedios de los parmetros de las
plantas del local y las del invernadero. 50
Figura 23. Comparacion de los tulipanes cultivados en invernadero y
en el local. 51
8

RESUMEN
En la actualidad el uso de biofertilizantes estan teniendo un auge, debido a que se
sabe que se obtienen beneficios sustentables en la agricultura, mantienen el
equilibrio ecologico y no contaminan. La utilizacin de micorrizas, bacterias
fijadoras de nitrogeno y hongos biocontroladores son algunos de los
microoorganismos que se han utilizado para sustituir el uso de fertilizantes
sinteticos. Los tulipanes son la tercera flor ms solicitada por los consumidores en
pases desarrollados con un gasto aproximado de 100 dlares/ao/ persona
(Francescangeli 2005a).
En el presente trabajo se probaron diferentes inculos microbianos para evaluar
su efecto sobre el crecimiento y floracion del tulipn. Los inculos de Azospirillum
sp, Trichoderma sp y HMA fueron agregados al momento de la siembra, se
hicieron mediciones a los 15 y 30 das, de: altura total, diametro del tallo y la
longitud de la hoja y el tamao del tpalo se midio a los 35 das. Se probaron dos
condicionnes edafoclimaticas en un local cerrado y en un invernadero. El
porcentaje de colonizacin micorrzica se calcul mediante el metodo de Phillips
y Hayman (1970). La brotacin de bulbos al tercer da fue del 100%. Los inculos
de HMA-Trichoderma sp-Azospirillum sp y Azospirillum sp-Trichoderma sp)
favorecieron la altura de la planta y el tamao del tpalo. Los resultados de
micorrizacin fueron de ms de el 80% a los 30 das. Respecto a las
conparaciones del invernadero y el local se tuvieron mejores resultados en local el
cual present una temperatura de entre 10 a 20C aunado a un suelo frtil, se
obtuvieron plantas de floracin uniforme, una mayor altura, mayor tamao de flor y
menor proliferacin de hijuelos en comparacin con las del invernadero.







9

I INTRODUCCIN

1.1 El Tul i pn.

Las plantas con flores vistosas siempre han llamado la atencin del hombre
desde que existe como tal. El origen del tulipn se localiza principalmente en el
rea mediterrnea y el noreste asitico, aunque la mayora de las variedades
cultivadas actualmente proceden de las regiones montaosas de Asia Menor,
Persia, el Cucaso y Turdestn. En el siglo XV aparecen las primeras
descripciones de tulipanes cultivados en los jardines de los nobles turcos. Cuando
estos florecan, en Constantinopla, se utilizaban en la organizacin de fiestas,
celebracin de bodas y para galardonar a los guerreros victoriosos. Las primeras
semillas de tulipn llegaron a Europa a finales del siglo XVI procedentes de
Turqua. El nombre "tulipn" proviene de la palabra "dulban", que significa en turco
turbante, haciendo referencia a la similitud entre la flor y la prenda usada por los
turcos para cubrirse la cabeza. (Ban Arias et al., 1993).

La propagacin comercial de tulipn en el mundo, est fundamentalmente en
manos de los productores holandeses, debido por un lado a un elevado grado de
tecnificacin y por otro lado al tener las condiciones medioambientales adecuadas.
En Holanda, cada ao se producen alrededor de 3.000 millones de bulbos en
10.800 has. Se exportan 2000 millones a EEUU, J apn, Alemania y Gran
Bretaa. Los tulipanes son la tercera flor ms solicitada por los consumidores en
pases desarrollados con un gasto aproximado de 100 dlares/ao/ persona.
(Francescangeli 2005a).






10

1.2 Taxonoma y Morfologa del Tulipn.

Tulipn, nombre comn de las plantas de un gnero de herbceas
bulbosas. Es de la familia de las Liliceas (Figura 1). La planta entera;
tallo, hojas y flores estn comprimidos y encerrados dentro del bulbo
(Figura 3). El bulbo de tulipn necesita un perodo de bajas temperaturas
que le aseguren un desarrollo de largo de tallo adecuado para luego
florecer. En aquellas zonas en que las temperaturas en el invierno son
suficientemente bajas, los bulbos de tulipn plantados en parques o
jardines acumularn las horas de fro necesarias en forma natural, lo que
har que florezcan en la primavera (IFBC, 2006).

Son plantas herbceas, bulbosas. Los bulbos son truncados basalmente y
elongados hacia el pice, cubiertos por una tnica usualmente pilosa por
dentro (Figura 3). El tallo es simple (ocasionalmente ramificado) y
subterrneo en su porcin basal. Las hojas son basales y caulinares,
espaciadas o ms o menos arrosetadas, lineales, aovadas o lanceoladas.
Las flores son actinomorfas y hermafroditas, erguidas o, ms raramente,
pndulas; y se hallan dispuestas en nmero de 1 a 3 en la extremidad de
los tallos florferos. El perigonio es anchamente infundibuliforme o
acampanado, compuesto de tpalos libres, subiguales, generalmente
anchos e imbricados, coloreados, frecuentemente con un diminuto
mechn de pelos blancos en el pice. El androceo est formado por 6
estambres, inclusos, con los filamentos aplanados y las anteras oblongas.
El ovario es spero, trilocular, pluriovulado. El estilo es columnar o muy
corto, el estigmas es trilobado. El fruto es una cpsula loculicida,
pluriseminada. Las semillas son usualmente planas, subdeltoideas. En
general todas las especies y cultivares de Tulipa son diploides con
2n=2x=24 cromosomas (Dimitri, M. 1987). (Figura 2).


11

1.3 Ciclo de vida del Tulipn.

a) Fase vegetativa: crecimiento de los bulbos hasta llegar al tamao adecuado
para florecer.
b) Fase reproductiva: esta fase comprende: induccin floral, diferenciacin de las
partes florales, alargamiento del tallo floral y floracin. (figura 4).


Reino: Plantae
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Liliopsida
Subclase: Liliidae
Orden: Liliales
Familia: Liliaceae
Gnero: Tulipa
Especie: Tulipa gesneriana L.
Figura 1. Clasificacin taxonmica de los tulipanes (Cronquist 1981).









12








Figura 2. Partes de la planta de tulipn. Se muestran las diferentes partes de la
planta de tulipn.











13







Figura 3. Imagen de las partes de un bulbo. A) dibujo de un brote con hojas. B)
Bulbo visto mediante Resonancia Magntica. A. tnica, B. yema floral, C escamas,
D. entrenudos y E. disco basal. Tomada de Van Kilsdonk et al 2002.










14





Figura 4. Ciclo de vida del tulipn. El ciclo de vida del tulipn dura alrededor de
tres meses o menos. A. Bulbo, B. Planta con flor, C. Senescencia, D. Formacin
de bulbos hijos.









15

1.4 Particularidades del cultivo de tulipn.

1.4.1 Clima

Temperaturas ptimas de establecimiento 9 a 13 C. Con temperaturas
menores el crecimiento es ms lento. Temperaturas ptimas de crecimiento entre
los 13 a 16 C. Temperaturas superiores a 17C por perodo prolongado puede
retardar la floracin, producir aborto floral o reducir rendimiento. Humedad relativa
menor a 80%. Sobre 80% puede causar trastornos de crecimiento como
doblamiento del tallo, hojas y ptalo y favorece el crecimiento del hongo Botrytis.
No requiere una alta intensidad lumnica para su desarrollo y floracin. Mejor
poca de plantacin, durante otoo-invierno. Floracin a finales de invierno.
(Toledo 2005)

1.4.2 Suelo

El cultivo de tulipn requiere de suelos sueltos, con buen drenaje,
permeables, ricos en materia orgnica y pH de 6 a 7 (Toledo 2005).

1.4.3 Plantacin.

Primero se recomienda desinfectar los bulbos en una solucin de Benomilo
y Captan, para prevenir el ataque de Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani,
Botrytis tulipae y Phytium sp; adems de realizar una esterilizacin de suelo. El
cultivo se debe iniciar con la importacin de los bulbos, normalmente con un
tamao 10/12 cm, con una combinacin de colores y precocidad. (Toledo 2005).
Para la siembra de los bulbos se pueden elaborar mesas de 25 cm de altura de
un metro de ancho, con pasillos de 40-50 cm. La densidad de plantacin
aproximada es de 100 bulbos/m2, aunque depende del cultivar, calibre y poca de
plantacin.

16

Marco de plantacin: los bulbos se plantan a 8 cm sobre la hilera y a 12.5 cm entre
hileras, enterrndolos a unos 10 cm de profundidad, apretando bien la tierra para
que no se formen bolsas de aire alrededor.
poca de plantacin: debido a las tcnicas de preparacin y conservacin de
bulbos, la plantacin de los bulbos de tulipn puede realizarse en diferentes
momentos, dependiendo fundamentalmente de las condiciones climticas del
lugar.

1.4.4 Riego.

Se riegan frecuentemente hasta la floracin; a partir de ese momento el riego
debe ser moderado. Se recomienda el riego localizado con 3 o 4 lneas
portagoteros por mesa de plantacin con emisores de 2 l/h, separados 30- 40 cm
entre s. La cantidad de agua aportada puede reducirse una vez que se hayan
formado las races. Se debe tener cuidado con el riego ya que el dficit hdrico
puede originar que se formen las hojas antes que las races, lo cual favorece al
aborto de los botones florales.














17

II ANTECEDENTES

2.1 Reportes sobre el cultivo de Tulipn

En el cultivo de tulipn (Tulipa gesneriana L.) muchos estudios tratan sobre las
temperaturas y la produccin de bulbos (De Hertogh, 1974; Buschman, 1984;
Rietveld et al., 2000), pocos sobre su influencia en la produccin de flores (Ban
et al., 1993; van Doorn y van Meeteren, 2003), y menos an sobre la adaptacin
del cultivo a inviernos templados (Dossier y Larson, 1981; Nard et al., 1997).
Se tiene bien documentado que el almacenamiento de bulbos en fro produce
cambios esenciales en los bulbos como aumento de la sensibilidad a las auxinas y
a sus interacciones con el cido giberlico (Banasik, 1979; Ban et al., 1993;
Rebers, 1994; Rietveld et al., 2000), de los que resulta la elongacin del tallo
(Okubo y Uemoto, 1985). Existen antecedentes que indican que tanto la
temperatura como la duracin del tratamiento de fro determinan el tamao de la
flor (Lambrechts ., 1992).

Cuando los bulbos que tienen una diferenciacin completa de la yema floral son
sometidos a perodos crecientes de bajas temperaturas, cumplen sus ciclos ms
rpido, luego de ser plantados a 14-16 C (Le Nard y Hertogh, 1993).

En tulipn (Tulipa gesneriana L.), los principales factores que afectan la altura de
la planta son las caractersticas genticas y la duracin del perodo de fro a que
se someten los bulbos luego de la diferenciacin floral en su interior (mayor altura
a mayor nmero de horas de fro) (Miller, 2004). De Hertogh (1996) sugiri que
una altura ptima para tulipanes en maceta no debera superar los 25 cm en el
momento de la venta, pero muchos cultivares de gran inters comercial presentan
un alargamiento del tallo por encima de estos valores.

Las temperaturas ptimas para la produccin de flores de tulipn provenientes de
bulbos de 5 C de almacenamiento se definen entre 13 y 20 C para la mayora de
18

los cultivares (Nard et al., 1997). El almacenamiento en fro de los bulbos
determina la elongacin del tallo, por lo que variaciones en su duracin pueden
modificar la altura de la planta. (Francescangeli 2007).

En la mayora de los pases el mercado de flor de tulipn es muy reducido y su
destino principal es el corte, por lo que la produccin de bulbos nacionales se
concentra en cultivares de tallo largo (Romagnoli et al 2002). Aunque actualmente
se dispone de una veintena de materiales de tallo corto; la mayora ha sido
seleccionada como flores de corte: hasta 2005, haba ms de 800 cultivares en
Holanda con diversos grados de oferta (Koopman, 2005). Se ha demostrado, de
manera preliminar, que en la zona norte de la provincia de Buenos Aires es
posible producir flores de tulipn de Ile de France y Yokohama dentro del rango
trmico 13-18C. (Francescangeli 2005 b).

Para un normal desarrollo y para alcanzar una longitud de tallo adecuada, las
plantas de esta especie requieren una exposicin durante un cierto tiempo a bajas
temperaturas. El fro tambin acelera y uniformiza la floracin. En lugares donde
las temperaturas bajas se mantienen durante un perodo prolongado en los meses
invernales, los requerimientos de fro se cumplen de forma natural. Las bajas
temperaturas pueden proveerse en cmara, ya sea a los bulbos secos o en
macetas, cuando la flor est totalmente preformada dentro del mismo (estado G)
(Hartman y Kester 1998).

Para el cultivar Ile de France, el atraso en la implantacin redujo el periodo
vegetativo de 43 a 30 das, y de la floracin de 23 a 16 das; y un alargamiento del
tallo de 46 a 54 cm. (Francescangeli et al, 2005a) La produccin en maceta, logra
una mejor rentabilidad y uniformidad de precio que la destinada a flor de corte.
Adems al no ser tan exigente en el largo del tallo, se puede modificar el tiempo
de forzado en cmara y normalmente tiene menor nmero de descarte o plantas
no comercializables. (Frangi 2005).

19

2.1 Microorganismos empleados en la agricultura para incrementar la
produccin

Los suelos agrcolas reciben elevadas dosis de fertilizantes nitrogenados,
esta accin favorece la actividad de las bacterias desnitrificantes empobreciendo
de esta manera los suelos, adems se sabe que solo el 37% de la urea aplicada
es aprovechada por las plantas (Gouzou et al 1994). Debido a los problemas que
han generados los productos agroqumicos para la fertilizacin y el control de
plagas, se ha puesto especial inters a la actividad simbitica de microorganismos
del suelo, por su capacidad de promover el crecimiento y la produccin de los
cultivos, como agentes de fertilizacin biolgica.
Una alternativa para sustituir los agroqumicos, es la utilizacin de
microorganismos benficos que se encuentran de manera natural en el suelo
como los hongos micorrzicos arbusculares, rizobacterias y biocontroladores de
plagas como Trichoderma.

2.2.1 Micorrizas

Se conoce con el nombre de micorriza (del griego mykes-hongo, rhiza-raz)
a la asociacin mutualista existente entre algunos hongos del suelo y las races de
la mayora de las plantas. Los registros fsiles ms antiguos indican que dicha
asociacin tiene unos 400 millones de aos, lo que ha llevado a considerar la
compleja coevolucin entre las plantas y sus hongos asociados, que se manifiesta
en la amplia distribucin del fenmeno (se ha estimado que el 90% de las plantas
terrestres estn micorrizadas) y en la diversidad de mecanismos morfolgicos,
fisiolgicos y ecolgicos implicados (Simon et al., 1993).

En el caso de la micorriza arbuscular, los hongos responsables de su gnesis
pertenecen a la Clase de los Zygomicetes y al Orden de los Glomales, distribuidos
en seis gneros (Glomus sp, Sclerocystis sp, Acaulospora sp, Entrophospora sp,
20

Gigaspora sp y Scutellispora sp) con un nmero no mayor de 250 especies en
total (Walker, 1992).

Durante la simbiosis, la planta hospedera recibe nutrientes minerales del suelo
tomados por el hongo (principalmente fsforo), mientras que ste obtiene
compuestos de carbono derivados de la fotosntesis. Los hongos formadores de
micorrizas arbusculares (HMA) constituyen micorrizas que colonizan el tejido
intrarradical de la planta hospedera, donde desarrollan estructuras caractersticas
de la simbiosis (arbsculos y vesculas), as como micelio extrarradical, el cul
interacta con el ecosistema de la rizsfera y es el encargado de la toma de
nutrientes del suelo. (Brundrett et al., 1996).

Es importante tener en cuenta que las micorrizas constituyen una asociacin
multifuncional con las plantas, cuyos beneficios van ms all de los aspectos
nutricionales. Los HMA son considerados como un recurso biolgico
multipropsito cuyo manejo, adems de los efectos sobre la productividad vegetal,
genera beneficios ambientales al mejorar las condiciones fsico-qumicas y
biolgicas del suelo (Guerrero et al., 1996).

El manejo o establecimiento de la biotecnologa que representan los hongos
micorrzicos arbusculares, se debe realizar en las primeras fases del crecimiento
y/o establecimiento de las plantas, de modo que reciban el mayor beneficio.

Existen muchos reportes de la utilizacin de las micorrizas en plantas de inters
comercial con buenos resultados y en los ltimos aos se han empleado con
mayor frecuencia en la floricultura por ejemplo Khalil (2001) reporta que la
utilizacin de micorriza arbuscular, de Glomus sp. favorece el control biolgico del
dao ocasionado por Fusarium oxysporum sp. gladioli cuando se produce gladiola
en suelos contaminados por este fitopatgeno, que causa daos, tanto en la
produccin de flor como en la obtencin de bulbo.

21

2.2.2 Rizobacterias

En particular con la inoculacin de la rizobacteria Azospirillum brasilense,
una de las mas estudiadas, se han reportado incrementos significativos de
rendimiento en plantas de importancia agrcola, en Tulipn ( Tulipa sp.) no existen
precedentes de la utilizacin de microorganismos para aumentar la produccin de
flores o combatir plagas.

La asociacin de Azospirillum sp. con las races de las plantas se desarrolla en
dos etapas completamente independientes (Michiels et al 1991). La primera
consiste en una adsorcin rpida, dbil y reversible, la cual es dependiente de
protenas de la superficie bacteriana del tipo de las adhesinas en conjunto con la
participacin del flagelo polar (Croes, et al 1993). La segunda fase consiste de un
anclaje lento pero firme e irreversible que alcanza su mximo nivel 16 h despus
de la inoculacin, el cual parece ser dependiente de un polisacrido extracelular
de Azospirillum sp (Michiels et al 1991).

El efecto benfico de Azospirilum sp. en las plantas se atribuye a la fijacin de N2,
producir fitohormonas y siderfos, solubilizacin del P y promover la sntesis de
enzimas que modifican los niveles de fitohormonas (Laredo et al 2004).

Ha sido hecha mucha investigacin sobre el efecto de la inoculacin de las plantas
con Azospirillum sp. y la posibilidad de su uso comercial para incrementar la
productividad de los cultivos. Sin embargo, los resultados han sido errticos;
mientras algunos investigadores no tienen resultados positivos, otros grupos han
sido capaces de obtener resultados positivos consistentes en el campo bajo
condiciones agronmicas bien definidas. (Dutto et al 2000).




22

2.2.3 Hongos biocontroladores.

Baker y Cook (1974) definen el Control Biolgico como la reduccin de la
densidad del inculo o de las actividades de un patgeno que produce una
enfermedad, por uno o ms organismos, en forma natural o travs de la
manipulacin del medio ambiente, hospedero o antagonista, o por la introduccin
de una poblacin de uno o ms antagonistas. Arcia (1995) seala que esta
definicin refleja que el manejo integral de poblaciones, es ms que una accin
especfica dirigida a un slo patgeno, como podra ser en el uso de productos
qumicos. El control biolgico de patgenos del suelo, a travs de la adicin de
microorganismos antagonistas, es un medio no qumico (no contaminante)
potencial para el control de enfermedades de plantas (Elad et al 1980).

Cozzi (1995), indica que aunque se conocen las interrelaciones de organismos
biocontroladores con diferentes hospedantes y patgenos, su aplicacin como
biofungicidas es reciente y an no completamente implementada debido en parte
a que se requiere la seleccin de un aislamiento intrnsicamente antagnico; as
como de su produccin y formulacin en grandes cantidades y abajo costo que
garantice su supervivencia en el suelo o en la semilla Sin embargo, debido a
varios factores ambientales, la mayora de los hongos antagonistas no muestran
efectos consistentes de biocontrol, por lo tanto es necesario reducir la variabilidad
y garantizar su persistencia en el campo para convertir a los hongos
biocontroladores en una alternativa atractiva al uso de pesticidas qumicos
(Thrane et al 1995).

El caso de Trichoderma sp: es un hongo imperfecto, Consume a otros hongos,
materia orgnica y nutrientes secretados por las races (Background on
Trichoderma). Los cultivos en placas toman un color verde brillante debido a
los conglomerados de conidios que se forman en las puntas de las hifas, sin
embargo, se ha sealado que tambin pueden ser de color blanco o amarillo
(Velzquez y Pineda 1995). Su estructura de esporulacin son conidios, y su
23

estructura de resistencia, clamidosporas; stas son similares a las de otros hongos
formadores de clamidosporas, son de 5 a 10 veces ms grandes que los conidios,
por sus grandes reservas de lpidos (Cohen, 1983.); son intercalares o terminales,
de forma cilndricas a globosa; por su naturaleza, representan la forma de
propagacin ms efectiva (Bautista 1993).

Trichoderma sp es un hongo con una alta capacidad de tolerar un amplio rango de
temperaturas que comprende desde los 4 C hasta los 33 C. (Hernndez 1999).
Los mecanismos de biocontrol referidos para Trichoderma son: Micoparasitismo,
Competencia por los nutrientes en el exudado de las semillas y/o Antibiosis (Lifshits
1986). Harman et al. (1981) sugieren que el micoparasitismo es el principal
mecanismo de accin de Trichoderm sp. Este agente biocontrolador envuelve el
hongo a atacar y penetra sus clulas causndole un dao extensivo (Elad 1983),
tales como:

a) Alteracin de la pared celular, incluyendo la degradacin de sta.
b) Retraccin de la membrana plasmtica de la pared.
c) Desorganizacin del citoplasma.

Callon et al. (1997), sealaron que la eficacia de un biocontrolador puede ser
afectada tanto por condiciones ambientales, como por la densidad de inculo
empleada. Desafortunadamente, son ms abundantes los estudios sobre la
cantidad de inculo de un patgeno, que puede causar enfermedad en un cultivo,
que las investigaciones que determinan los niveles necesarios de inculo para que
un biocontrolador sea efectivo.

Para la agricultura actual es de gran importancia la preparacin de biopreparados
conjuntos, de HMA, rizobacterias y hongos biocontroladores que tengan una
accin eficaz sobre las plantas y el agroecosistema, siendo adems un
mecanismo ms viable desde el punto de vista econmico.

24

2.2.4 Interacciones benficas entre microorganismos

Los beneficios de los HMA desde el punto de vista biolgico, se derivan de
su interaccin con los diversos grupos de macro y microorganismos de la
rizsfera. Tal es el caso de aquellos que estn implicados en el ciclaje de
nutrientes como las bacterias fijadoras de nitrgeno y los microorganismos
solubilizadores de fosfato (Azcn y Barea, 1996; Kim et al 1998; Hodge, 2002). As
mismo, dichos hongos interactan con microorganismos implicados en el control
biolgico de patgenos presentes en el suelo, demostrando que existen diferentes
tipos de interaccin con HMA. Algunos estudios sugieren que determinadas
especies empleadas en el control biolgico pueden ser compatibles con las
micorrizas y en consecuencia pueden ser aplicadas conjuntamente en el mismo
inculo, con la finalidad de incrementar el crecimiento vegetal en trminos de
rendimiento y sanidad.

Por ejemplo, no se han encontrado efectos negativos de Gliocladium virens sp
sobre HMA, a pesar del notable efecto deletreo que ste ejerce sobre hongos
fitopatgenos (Paulitz y Linderman, 1991). Para el caso de Trichoderma sp., se ha
demostrado que diferentes especies pueden mejorar el desarrollo del simbionte
micorrzico y que esta interaccin tiene influencia sobre el crecimiento de la planta
hospedera (Calvet et al 1993; Godeas et al 1999). Otros investigadores (Green et
al., 1999) realizaron un acercamiento a la interaccin Trichoderma sp.-HMA en
sistemas de suelo libres de races diseados con el nimo de minimizar el efecto
de la presencia de los tejidos radicales de la planta hospedera, observando que la
presencia de micelio externo de G. intraradices sp suprimi el desarrollo de la
poblacin de T. harzianum sp, debido posiblemente a la competencia por
nutrientes.



25

Por otro lado, Azcn y Barea (1996) plantean que la interaccin entre
Rizobacterias y micorrizas puede ser selectiva y dependiente de la bacteria y el
hongo implicado. Estos autores mencionan una estimulacin notable del
crecimiento de una poblacin de Pseudomonas fluorescens sp. en la superficie del
micelio extra radical del hongo. En este mismo sentido, Gianinazzi-Pearson (1982)
determin que las bacterias de vida libre como Azotobacter sp y Azospirillum sp,
aumentaron su poblacin en la rizosfera de la planta hospedera al estar
micorrizadas las races. Tambin Barea y Azcn-Aguilar (1982), en trabajos de
inoculaciones conjuntas de microorganismos, encontraron que la infeccin
micorrzica se increment con la presencia de Azotobacter sp. Por su parte,
Cuervo y Rivas (1997), demostraron que la inoculacin de Pseudomonas
fluorescens sp. en tomate, estimula la colonizacin micorrzica en la raz e
incrementa la produccin del cultivo. Hernndez (2000) y Pulido (2002), trabajando
en tomate, encontraron una mayor colonizacin rizosfrica en los tratamientos
inoculados con micorrizas y rizobacterias.

La cohabitacin de los HMA y los hongos biocontroladores esta reportado, por
ejemplo, el filtrado de un cultivo de Phialophora radicicola sp, hongo usado como
agente de biocontrol, promueve el crecimiento de A. lipoferum sp y A. brasilense
sp (Flouri, 1995). De manera similar, la interaccin entre A. brasilense sp. y
Azotobacter chrococcum o Streptomyces mutabilis conduce a incrementos de
sus respectivas poblaciones en la rizosfera de trigo (Elshanshoury, 1995).
El tulipn es de importancia en el mercado de plantas ornamentales, ya que es
propagado mediante bulbos, ciclo de cultivo corto, alta densidad de plantacin
variedad de tipos y colores de flor, posibilidad de produccin invernal y bajo
requerimiento de insumos (Romagnoli 2002; Francescangeli 2005).
El presente trabajo tiene como objetivo, evaluar la efectividad agrobiolgica de la
inoculacin con micorrizas, rizobacterias y hongos biocontroladores y sus
interacciones, sobre el crecimiento y rendimiento del tamao de la flor en el
Tulipn, como posibles sustitutos parciales de la fertilizacin artificial.

26

En la bibliografa revisada no se encontr un reporte sobre la utilizacin de
microorganismos que eleven la produccin de flor en tulipanes, por lo cual es de
importancia el hacer ensayos sobre las nuevas formas de fertilizacin y control
biolgico en la floricultura, para remplazar la utilizacin de fertilizantes y
plaguicidas sintticos agresivos al medio ambiente por tecnologas menos
contaminantes y mas baratas.

Tambin se prueban dos condiciones una en un invernadero y otra en un local
cerrado para registrar como afecta la temperatura y fertilidad del suelo al
crecimiento del tulipn.





















27

III OBJETIVOS

3.1 Objetivo general

Evaluar el crecimiento y floracin de plantas de Tulipn como respuesta a
diferentes inculos microbianos

3.2 Objetivos especficos

a) Evaluar el efecto de los diferentes inculos sobre el crecimiento y floracin
del Tulipn.


b) Obtener plantas de tulipn micorrizadas y determinar el porcentaje de
Micorrizacin.

c) Establecer los requerimientos edafoclimticos mnimos para el cultivo de
Tulipn tanto en condiciones de invernadero y en un local cerrado para
fines comerciales.
















28

IV MATERIALES Y METODOS

1.4 Materiales.

4.1.1 Material Biolgico

El inculo se entiende como un producto biolgico que facilita la introduccin
de microorganismos con diversa actividad fisiolgica que favorece el crecimiento y
desarrollo de las plantas. Este inoculante puede presentar diferentes aspectos
fsicos, ya sean lquidos o slidos.

a) Bulbos. Los bulbos de tulipn de la variedad Ile de France que se
utilizaron en el presente trabajo, fueron importados de Holanda, los
cuales cumplen con las normas fitosanitarias vigentes en Mxico. Los
bulbos estn previamente tratados en fro y listos para su siembra
inmediata.

b) Inculos. Se utilizaron los siguientes inculos comerciales.

Azospirillum brasilensis sp. Se utiliz el producto Barfirizhocrecim
(BARFI) el cual contiene la bacteria impulsora del crecimiento y
fijadora de nitrgeno atmosfrico asimilable para la planta.
Aplicacin: En cultivos establecidos usar en agua (200 a 400 litros)
necesaria para asperjar la planta directamente.
HMA. Se utiliz el producto Micorrizas (BARFI) Contiene 20 000
esporas/ kg de suelo estril de hongos endomicorrizicos.
Cepas: Glomus sp. Acauloespora sp. Scutelloespora sp. y
Entrophospora sp. Hongos simbiticos de la raz que ayudan a la
nutricin de la planta.
Caractersticas Fsicas: Densidad aparente aprox: 1.25 g/ml. Y pH de
6.8- 7.
Aplicacin: De 4 a 5 Kgs. / Ha o ms en: frutales, florales, forrajes,
gramneas, leguminosas, hortalizas etc.
29

Trichoderma sp. Se utiliz un producto de la empresa Insumos
Orgnicos para la Agricultura (GAIGA).
Coadyuvante en el tratamiento natural de enfermedades fngicas
provocadas por: Phytosphora sp., Armillaria sp., Verticillium sp.
Fusarium sp. entre otras. Concentracin: 1.2 X 10 UFC.

4.1.2 Acondicionamiento del local cerrado para cultivo

Se acondicion un bodega en las instalaciones del J ardn Botnico Melchor
Ocampo de la Facultad de Biologa de la Universidad Michoacana de San Nicols
de Hidalgo, se cubrieron las ventanas con plstico negro para evitar la entrada de
luz excesiva.

4.1.3 Preparacin de sustrato.

Se utiliz el sustrato Sphagnum comercial Sunshine (Sun Gro horticultores)
mezcla fina especial 3 la cual contiene 80% de turba canadiense Sfagnacea,
vermiculita, piedra caliza (para ajustar el pH), yeso agrcola y agente humectante.
Se mezcl con agrolita en proporcin 3:1.
El sustrato se coloc en bolsas de plstico negras de 30 cm de alto por 20 cm de
ancho, perforadas en la base para poder drenar el exceso de agua.










30

4.2 Metodologa

4.2.1 Siembra de bulbos.

Antes de sembrarlos los bulbos se sometieron a un tratamiento con el
Fungicida Captan a una concentracin de 10 g/litro durante 30 minutos. Los
bulbos se sembraron en bolsas de plstico con sustrato, enterrndolos
superficialmente, apretando bien la tierra, luego de plantados los bulbos se cubri
con una capa de 3 cm de arena para prevenir que los bulbos salgan del medio de
enraizamiento durante su desarrollo, causando la cada de las plantas y mantener
ms baja la temperatura del suelo. Se hicieron observaciones peridicas para
detectar plagas y enfermedades en las plantas. Se sembraron en un invernadero
un lote de 50 plantas teniendo como sustrato tierra comn mezclada con aserrn
(para dar porosidad al suelo) en relacin 2:1

4.2.2 Tratamientos

A partir de un lote de 500 bulbos de la variedad Ile de France se
seleccionaron 120 bulbos del mismo tamao, los cuales se sembraron en bolsas
con sustrato y una vez sembrados se seleccionaron 15 macetas al azar para cada
uno de los tratamientos.
Los tratamientos que se emplearon en este estudio son los siguientes.
Grupo control: 15 plantas sin inoculo.
Tratamiento 1: 15 plantas con inculo de HMA.
Tratamiento 2: 15 plantas con inculo de Azospirillum sp
Tratamiento 3: 15 plantas con inculo de Trichoderma sp
Tratamiento 4: 15 plantas con inculo de Azospirillum sp y Trichoderma sp.
Tratamiento 5: 15 plantas con inculo de HMA y Trichoderma sp
Tratamiento 6: 15 plantas con inculo de HMA y Azospirillum sp
Tratamiento 7: 15 plantas con inculo de Azospirillum sp, Trichoderma sp y
HMA.
31

4.2.3 Inoculacin.

HMA: La concentracin del producto es 20 000 esporas por kg, se utilizaron
7.5 gramos por planta equivalente a 150 esporas, segn lo recomendado por el
fabricante.
Azospirilum sp: La concentracin del producto es de 10 x 10
7
UFC /ml. se
utilizaron 2 ml por maceta de acuerdo a la recomendacin del fabricante.
Trichoderma sp: La concentracin a la que viene el producto es de 1.2 X 10
UFC, utilizamos 0.035 gramos disueltos en 15 ml y se agreg 1 ml a cada planta,
de acuerdo a la recomendacin del fabricante. (Figura 5).



Figura 5. Metodologa de inoculacin. A y B. el sustrato con las micorrizas fue
esparcido en la base del bulbo el resto se deposit en el fondo de un pozo en la
bolsa donde se coloc el bulbo 150 esporas/planta. C. del sustrato de Trichoderma
sp se utilizaron 0.035 gramos disueltos en 15 ml y se agreg 1 ml a cada planta.
D. De Azospirilum sp se utilizaron 2 ml por maceta.
32

4.2.4 Sistema de riego

Se regaron las plantas del local cerrado con la cantidad de agua apropiada
cada cinco das de tal manera que no se rebasara la capacidad de campo. Las
plantas del invernadero se regaron mediante el sistema de riego por aspersin, se
regaron cada tercer da.

4.2.5 Obtencin de datos.

Se midieron los siguientes parmetros (figura 7):

Porcentaje de bulbos que brotaron exitosamente.
Altura total a los 15 das despus de la siembra
Diametro del tallo a los 30 das.
Longitud de la hoja a los 30 das.
Altura total a los 30 das despus de la siembra.
Tamao del tpalo a los 35 das. (Figura 6).


33




Figura 6. Obtencin de datos. Se tomaron los datos correspondientes en el
tiempo establecido. A) Altura a los 15 das, B) longitud de la hoja a los 30 das, C)
La altura total a los 30 das, D) El grosor del tallo con un vernier a los 30 das, E) el
tpalo de plantas se midi con una regla metlica de 30 cm, a los 35 das.
















34

4.2.6 Determinacin del porcentaje de micorrizacin en races.

4.2.6.1. Tincin de races por el mtodo modificado de Philips y
Hayman (1970)

La tincin de races es una tcnica utilizada para la evaluacin del xito de
la colonizacin el porcentaje de races colonizadas, y tambin permite la
identificacin de estructuras presentes para determinar el estado de la
colonizacin. El mtodo ms comn para llevarla acabo esta tincin es el descrito
por Philips y Hayman (1970) que ha sido modificado por diferentes autores, el cual
emplea la tincin de races micorrizadas con el colorante Azul de Tripano.

Dicha tcnica se ilustra en la figura 7 y a continuacin se describe:
A) Obtener plantas con sus races lo mas completas posibles.
B) Lavar perfectamente las races con agua corriente y eliminar el resto de la
planta.
C) Cortar las races en segmentos de 2 cm.
D) Para aclarar las races colocar los segmentos en tubos de ensaye o en
vidrios de reloj y cubrirlos con una solucin de KOH al 10%, calentar entre
65C y 80C en bao mara sin llegar a ebullicin durante 10 minutos.
E) Lavar la muestra con agua destilada para eliminar los pigmentos de la raz.
F) Cubrir las races con HCl al 10% durante 4 minutos. Este paso neutraliza al
KOH y acidifica la muestra para una mejor tincin.
G) Para la tincin cubrir las races con una solucin de azul de tripano al 0.05%
(la solucin de azul de tripano se puede prepara en lactoglicerol o acido
actico) calentar entre 65C y 80C en bao mara sin llegar a ebullicin
durante 10 minutos.
H) Decante el exceso de colorante por un minuto.
I) Adicionar suficiente lactoglicerol para cubrir completamente las races.
J ) Tomar algunos fragmentos de raz y colocarlas sobre un porta objetos
cubrirlos con un cubre objetos y observar al microscopio.
35

4.2.6.2 Determinacin del porcentaje de colonizacin micorrzica en
races.

Esta tcnica a continuacin se describe:
A) Colocar las races clareadas y teidas en cajas de petri con suficiente
lactoglicerol.
B) En 3 portaobjetos colocar cuidadosamente 10 segmentos de un cm de
longitud en cada uno.
C) Adicionar sobre las races gotas de lactoglicerol y colocar el
cubreobjetos cuidadosamente para no provocar burbujeo en la muestra.
D) Para realizar la evaluacin, revisar cuidosamente cada fragmento;
anotar 1 si se observan hifas, vesculas o arbusculos y anotar 0 sino se
observa ninguna de estas estructuras en el fragmento.
E) Al final se cuentan los fragmentos que si estn micorrzados y los que
no lo estn. (figura 7)

Para determinar el porcentaje de micorrizacin total se aplica la siguiente frmula
de (Phillips y Hayman 1970) a los datos obtenidos:







Nmero de segmentos colonizados

Nmero de segmentos observados
Porcentaje de micorrizain total = X 100

4.2.7 Anlisis de los datos obtenidos.

Las medias de los diferentes tratamientos se graficaron en Microsoft Excel
2007. Los datos de los diferentes tratamientos se analizaron con el paquete
estadstico J MP versin 6 de SAS Institute, Inc. (SAS, 2005) para la prueba de
Tukey.

36




Figura 7. Tincin de races micorrizadas con el colorante Azul de Tripano.
Los bulbos fueron extrados del suelo y fueron lavados con agua de la lleve (A), en
seguida fueron cortadas y puestas en tubos de ensaye (B). Clareo con KOH al
10% (C). Tincin con azul de Tripano al 0.05% en lactoglicerol (D). Montaje de los
segmentos en un portaobjetos para su observacin en el microscopio.








37

V RESULTADOS


5.1 Porcentaje de brotacin de bulbos de tulipn Tulipa gesneriana var.
Ile de France.

La brotacin de los bulbos de tulipn Tulipa gesneriana var. Ile France se
registr a las 24 hr. con una brotacin del 20% lo que es igual a 24 bulbos, otro
registro se dio a las 48 hr. con una brotacin de un 60% lo que es igual a 72
bulbos y a las 72 hr. Se dio una brotacin del 20%, igual a 24 bulbos (Figura 8).
Por lo anterior podemos concluir que los bulbos de tulipn de la variedad Ile de
France que se importaron de Holanda tienen una alta tasa de viabilidad a pesar de
que las condiciones del lugar de procedencia son muy distintas a las de Morelia
Michoacn. Los bulbos trados de Holanda se encuentran en condiciones
favorables para su siembra y reproduccin.





Figura 8. Porcentaje de brotacion de bulbos. Los bulbos se sembraron y se
observ a las 24, 48 y 72 horas el porcentaje de brotacion de bulbos. Al tercer da
brotaron el 100% de dos bulbos.


38

5.2 Altura de las plantas a los 15 das.

A los 15 das despus de sembrado los bulbos, se midi la altura de los brotes,
la mayor altura la presentan los tratamientos Azospirilum sp, HMA-Azospirilum sp-
Trichoderma sp, Azospirilum sp-Trichoderma sp. Los resultados presentan en la
figura 9. Los datos fueron analizados mediante el paquete estadstico J MP y se les
aplic la prueba de Tukey con un alfa de 0.05 encontrando que no hay diferencias
significativas entre las alturas de los tratamientos (figura 10) debido posiblemente
a que a transcurrido poco tiempo despus de la inoculacin y la colonizacin no
esta bien establecida o aun es muy baja.

5.3 Dimetro de la base del tallo.

El tallo de las plantas se midi en la base ya que de este depende el soporte
de toda la planta. Las medias fueron graficadas y se presentan en la figura 11. Las
medias mas altas fueron las inoculadas con HMA, Azospirilum sp, HMA-
Azospirilum sp -Trichoderma sp, Azospirilum sp Trichoderma sp. Los datos de los
tratamientos fueron sometidos a la prueba de Tukey con un alfa de 0.05
encontrando que si existen diferencias significativas entre Azospirilum sp, HMA-
Azospirilum sp-Trichoderma sp, Azospirilum sp Trichoderma sp y el grupo control
(figura 12).

5.4 Longitud de la hoja.

Los promedios de la longitud de la hoja fueron graficados encontrando que los
tratamientos que presentan las mayores longitudes de la hoja son: Trichoderma
sp, HMA-Azospirilum sp-Trichoderma sp, Azospirilum sp-Trichoderm sp (figura
13). Al someter los datos a la prueba de Tukey con un alfa de 0.05 los
tratamientos no mostraron diferencias significativas con respecto al control (figura
14).

39

5.5 Altura de las plantas a los 30 das.

Los promedios de la longitud de la parte area de las plantas fueron graficados
y los tratamientos tuvieron una media de entre 57 y 66 cm mientras que el control
apenas alcanz los 45 cm en promedio (figura 15). Al aplicar la prueba de Tukey
con un alfa de 0.05 todos los tratamientos fueron estadsticamente diferentes con
respecto al control (figura 16). Esto indica que la inoculacin con HMA,
Trichoderma sp o Azospirilum sp tienen un efecto en la altura de la planta lo que
refuerza la hiptesis de que la relacin de las plantas con ciertos organismos en
la rizosfera ayuda al crecimiento eficiente de las mismas.

5.6 Longitud del tpalo

Se midi la longitud del tpalo debido a que la flor es lo ms importante del
tulipn para su comercializacin. Graficando los promedios se encontr que la
mayor longitud del tpalo lo registr el tratamiento de HMA-Azospirilum sp-
Trichoderm sp (Figura 17). Al aplicarle la prueba de Tukey se encontr que los
tratamientos: Azospirilum sp-Trichoderma sp, HMA-Azospirilum sp-Trichoderma sp
y HMA-Trichoderma sp presentas diferencias significativas con respecto al control
y los dems tratamientos no presentan diferencias respecto al control (Figura 18).











40

5.7 Tratamientos que resultaron con diferencias significativas con
respecto al control en los diferentes parmetros que se midieron
(Tabla 1).

En la tabla se puede apreciar que la altura total de los tratamientos con
respecto al control fue mayor y por lo tanto podemos decir que los inculos si
tuvieron un efecto significativo con respecto al control.

Tambin encontramos que en el dimetro del tallo hubo una diferencia significativa
departe de los inculos de Azospirilum sp, HMA-Azospirilum sp-Trichoderma sp y
Azospirilum sp-Trichoderma sp con respecto al control y a los dems tratamientos.

En la longitud del Tpalo tambin encontramos una diferencia significaba con
respecto al control y a los dems tratamientos departe de los inculos de HMA-
Trichoderma sp, HMA Azospirilum sp-Trichoderma sp y de Azospirilum sp-
Trichoderma sp.

5.8 Porcentaje de micorrizacin de los tratamientos inoculados con HMA.

El porcentaje de micorrizacin para los tratamientos HMA, HMA-Azospirilum,
HMA-Trichoderma sp y HMA-Azospirilum sp-Trichoderma sp fue mayor del 80%
en todos los casos lo que demuestra que el inculo de HMA fue efectivo pues
lleg a colonizar mucho en tan poco tiempo (30 das) (figura 19 y 20).

5.9 Temperaturas registradas durante el da en el local y en el
invernadero.

El rango en el local fue de entre 10 y 20C mientras que en el invernadero fue
de entre 7 y 30C (Figura 21). Cabe mencionar que la temperatura de 25C o mas
se mantuvo durante 4 horas en el invernadero y la temperatura mayor de 15C se
mantuvo durante 5 horas en el invernadero.
41

5.10 Comparacin de los promedios de los parmetros de las plantas del
local y las del invernadero

Los parmetros de longitud de la hoja, altura total y longitud del tpalo en el
local cerrado fueron mayores en comparacin con las del invernadero (Figura 22).


1.11 Comparacin de la plantas del local y del invernadero a los 15, 30 y
35 das.

En esta comparacin se puede ver que a los 15 das tenan el mismo tamao
los brotes en ambos sitios, a los 30 das se observa que empez la floracin en las
plantas del local cerrado mientras que en las del invernadero todas tienen el botn
aun cerrado y su altura es menor. A los 35 das las plantas del local tienen las
flores completamente abiertas mientras que en el invernadero los botones apenas
empiezan a abrir. Las plantas del invernadero terminaron de abrir los botones 10
das despus que las plantas del local cerrado (Figura 23).













42




Figura 9. Alturas promedios de los tratamientos a los 15 dias. No hay
diferencias significativas entre las alturas de los tratamientos al aplicar la prueba
de Tukey con un alfa del 0.05





Figura 10. Prueba de Tukey aplicada a los datos de altura de las plantas a los
15 das de los diferentes tratamientos. La prueba muestra que no existen
diferencias significativas entre los tratamientos y el control.
43





Figura 11. Diametro de la base del tallo. La grfica muestra los promedios de
los diferentes tratamientos.





0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
1.1
1.2
A A/T A/T/M M M/A M/T T C
tratamientos
All Pairs
Tukey-Kramer
0.05
Figura 12. Prueba de Tukey del dimetro de la base del tallo de los diferentes
tratamientos. Las letras de el mismo color significa que no existen diferencias
44

significativas y letras de diferente color significa que si existen diferencias
significativas entre los tratamientos.



Figura 13. Promedios de la longitud de la hoja. La grfica muestra los
promedios de cada tratamiento.



20
22
24
26
28
30
32
34
36
38
A A/T A/T/M C M M/A M/T T
tratamientos
All Pairs
Tukey-Kramer
0.05



Figura 14. Prueba de Tukey de los datos de longitud de la hoja. Los
tratamientos con letras del mismo color no presentan diferencias significativas.
45

Las letras del mismo color indican que los tratamientos no presentan diferencias
significativas entre ellos.




Figura 15. Promedios de alturas de los diferentes tratamientos. La grfica
muestra el promedio de la altura de las plantas de los tratamientos n=15.


35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
A A/T A/T/M C M M/A M/T T
tratamientos
All Pairs
Tukey-Kramer
0.05



Figura 16. Prueba de Tukey altura de las plantas de los tratamientos. Las
letras de colores distintos representan que entre los tratamientos hay diferencias
significativas.
46





Figura 17. Longitud promedio del tpalo de los tratamientos. La grfica
muestra los promedios de la longitud del tpalo de los diferentes tratamientos
n=15.





Figura 18. Prueba de Tukey para longitud del tpalo. Letras del mismo color
significan que no hay diferencias significativas entre los tratamientos. La mayor
47

longitud del ptalo lo registro el tratamiento de HMA-Azospirilum sp Trichoderma
sp.



Dimetro del
tallo
Longitud de
la hoja
Altura total Longitud de
tpalo
C
HMA X
A X X
T X
HMA /T X X
HMA /A X
HMA /A/T X X X
A/T X X X


Tabla 1. Tabla de resultados de la prueba de Tukey. Las X muestran los
tratamientos que resultaron con diferencias significativas con respecto al control
en los diferentes parmetros que se midieron.











48



Figura 19. Porcentaje de Micorrizacin. La grfica muestra el porcentaje de
micorrizacion de los tratamientos donde se inocul con HMA.





Figura 20. Races colonizadas por HMA de plantas de Tulipn (30 das). A.
Control. B. HMA/ Azospirilum sp. C y D. HMA/Trichoderma sp. E y F. HMA. G y H.
HMA/ Azospirilum sp/Trichoderma sp.
49




Figura 21. Temperaturas durante el da en el invernadero y en el local
cerrado. El rango en el local fue de entre 10 y 20C mientras que en el
invernadero fue de entre 7 y 30C. Cabe mencionar que la temperatura de 25C o
mas se mantuvo durante 4 horas en el invernadero.





Figura 22. Comparacin de los promedios de los parmetros de las plantas
del local y las del invernadero. Existen diferencias entre las longitudes de la
hoja, altura total y longitud del tpalo.
50








Figura 23. Comparacion de los tulipanes cultivados en invernadero y en el
local. A y D. Brote de 15 dias en el local y el invernadero respectivamente. B y E.
Plantas de 30 dias de haber brotado. C y F. Plantas de 35 dias.














51

VI DISCUSIN


Los bulbos de tulipn de la variedad lle de France provenientes de Holanda
presentaron un porcentaje del 100% de brotacin al tercer da lo que los hace muy
atractivos tanto para su comercializacin como para procesos de investigacin, ya
que tomando en cuenta que el problema de algunas plantas es que tienen un bajo
porcentaje de brotacin para el caso de los bulbos de tulipn de la variedad
mencionada este problema es superado.

Respecto a la medicin de los brotes que se realiz a los 15 das resulto que los
tratamientos inoculados con Azospirilum sp, HMA-Azospirilum sp-Trichoderma sp
y Azospirilum sp-Trichoderma sp presentaron las mejores alturas, sin embargo no
existieron diferencias significativas entre los tratamientos debido posiblemente a la
pobre colonizacin por el corto tiempo aunado a que en los casos en donde se
inocularon al menos 2 microorganismos hay un tiempo de algunos das de lucha
por la competencia del alimento y espacio (Green et al 1999).

Los parmetros que se midieron en los diferentes tratamientos muestran que los
tratamientos inoculados con Azospirilum sp-Trichoderma sp y HMA-Azospirilum
sp-Trichoderma sp presentan los valores mas altos en todos dando como
resultado una planta robusta y sin enfermedades adems de las caractersticas
fisiolgicas estables. Todos los dems tratamientos muestran una diferencia
significativa con el control solo en la altura. Algunos estudios sugieren que
determinadas especies empleadas en el control biolgico pueden ser compatibles
con las micorrizas y en consecuencia pueden ser aplicadas conjuntamente en el
mismo inculo, con la finalidad de incrementar el crecimiento vegetal en trminos
de rendimiento y sanidad. Por ejemplo, no se han encontrado efectos negativos de
Gliocladium virens sobre HMA, a pesar del notable efecto deletreo que ste
ejerce sobre hongos fitopatgenos (Paulitz y Linderman, 1991). Para el caso de
Trichoderma sp., se ha demostrado que diferentes especies pueden mejorar el
desarrollo del simbionte micorrzico y que esta interaccin tiene influencia sobre el
52

crecimiento de la planta hospedera (Calvet et al 1993; Godeas et al 1999). Azcn
y Barea (1996) plantean que la interaccin entre Rizobacterias y micorrizas puede
ser selectiva y dependiente de la bacteria y el hongo implicado.

De acuerdo con los estudios mencionados en el prrafo anterior se puede concluir
que en los tratamientos donde se inocularon al menos dos microorganismos
dieron mejores resultados en nuestro trabajo y no cuando se inocularon solos.
Tambin se entiende que cuando se ponen dos microorganismos en el mismo
inoculo estos compiten por alimento y espacio principalmente por lo que una
puede aumentar o disminuir la poblacin del otro, pues no solo la competencia
define esta situacin sino los exudados de los mismos microorganismos y la
planta.

Para el anlisis comparativo de la plantacin bajo dos condiciones diferentes: se
tomaron las plantas control del experimento de inoculacin las cuales se
mantuvieron en un local cerrado y otro bloque se sembr en el invernadero. Los
resultados nos muestran que las plantas del invernadero tuvieron un menor
tamao, la flor mas pequea y una floracin tarda (35 das )y mas dispersa con
respecto a las plantas cultivadas en el local, las cuales alcanzaron una mayor
altura, una flor mas grande y una floracin a los 30 das muy sincronizada.
Probablemente estos cambios se debieron a varios factores, primero la
temperatura sin duda influy pues en el local se registraron temperaturas mas
uniformes con un rango de entre 10 y 20C mientras que en el invernadero el
rango fue ms variable registrndose temperaturas desde 7C y hasta 30C. Las
temperaturas ptimas para la produccin de flores de tulipn provenientes de
bulbos de 5 C de almacenamiento se definen entre 13 y 20 C para la mayora de
los cultivares (Nard et al., 1997). Segundo la tierra donde se sembraron las
plantas del local era una tierra rica en nutrientes y con suficiente capacidad de
retencin de agua y drenado en caso de exceso, mientras que en el invernadero
las plantas fueron cultivadas en el suelo comn y aserrn en relacin 2:1 era una
tierra pobre en nutrientes y sin un buen drenaje ni retencin de agua. Un ltimo
53

aspecto que se midi, fue el fotoperodo que tambin influyo, ya que dentro del
local se tuvo una duracin de 9 hrs/luz y en el invernadero se tuvo una duracin
de 11 hrs/luz. Por lo tanto hubo una diferencia de 2 horas de luz con mayor
intensidad en el invernadero. Se observ tambin que el invernadero cerca el 50%
de las plantas presentaron hijuelos, mientras que en el local cerrado solo el 2%
presento esta caracterstica.

De lo que se explica en los prrafos anteriores podemos decir que el Tulipn
puede cultivarse en distintas condiciones aprovechando sus caractersticas
genticas lo que permite programar la floracin del tulipn para fechas
determinadas.

De manera global, podemos decir que el tulipn holands de la variedad IIe de
France, tiene la capacidad de adaptarse a diferentes condiciones ambientales las
cuales sin duda repercuten en su crecimiento y desarrollo pero que en Morelia
Michoacn es posible obtener flor con las caractersticas requeridas para la
comercializacin en condiciones no tan controladas; adems de que los inculos
con HMA, Azospirilum sp y Trichoderma sp son viables para obtener plantas de
calidad por lo tanto se puede hacer una recomendacin para personas interesadas
en el cultivo del tulipn con inculos que favorezcan sus cultivos.
















54

VII CONCLUSIONES

1. Los bulbos de Tulipn de la variedad IIe de France importados de
Holanda presentan una alta viabilidad por lo que son aptos para
utilizarlos ya sea en la investigacin o para comercializacin.

2. Los tratamientos que favorecieron la altura de la planta y el tamao del
tpalo fueron (HMA, Trichoderma sp y Azospirilum sp) y (Azospirilum
sp y Trichoderma sp)

3. Se obtuvieron plantas de Tulipn de la variedad IIe de France,
micorrizadas obteniendo ms del 80% de micorrizacin con HMA en un
periodo de 30 das.

4. Se obtuvieron plantas de Tulipn de la variedad IIe de France a partir de
bulbos en dos condiciones ambientales diferentes (7 a 30C y 10 a
20C). obteniendo los mejores resultados en el rango de 10 a 20C.

5. En el rango de 7 a 30C y aunado a un suelo pobre en nutrientes, se
obtuvieron plantas con floracin retardada y no uniforme, un menor
tamao de flor, mayor proliferacin de hijuelos y un menor altura en las
plantas.

6. En el rango de 10 a 20C aunado a un suelo frtil, se obtuvieron plantas
de floracin uniforme, una mayor altura, mayor tamao de flor y menor
proliferacin de hijuelos.








55

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