1

INTRODUCERE



Omul triete ntr-un mediu populat de o imensitate de microorganisme, fiind el nui
purttorul multora dintre ele. Dimensiunile lor reduse au fcut ca ele s scape mult timp
observaiei, dar rezultatele activitii lor au fost sesizate din totdeauna. Ca n orice tiin,
cunotinele practice au precedat cele teoretice i omul a selectat empiric microorganisme pe
care le-a folosit n scopuri practice ca, de pild, dospirea pinii, fermentaia vinului, a berii
etc., practicnd n acelai timp, empiric, tehnici de sterilizare care i-au permis conservarea
ndelungat a alimentelor.
Rolul microorganismelor n etiologia bolilor infecioase a fost descoperit doar n a doua
jumtate a secolului XIX, n urma descoperirilor lui Pasteur, precedate de multe secole de
observaii i cercetri.
Astzi microbiologia este o tiin foarte vast, cu multe ramuri cum sunt: microbiologia
medical, microbiologia plantelor, microbiologia industrial, microbiologia solului etc. Noi
ne vom opri asupra microbiologiei medicale care studiaz microorganismele implicate n
etiologia infeciilor la om.
Noiunea de contagiune este foarte veche, referiri la contagiozitatea leprei fiind prezente n
Vechiul Testament, epidemiile, care au decimat populaia, precum i cauzele lor constituind o
permanent preocupare a medicilor i a filozofilor din cele mai vechi timpuri.
Thucidide (465-395 .e.n.) explic apariia unei epidemii datorit unui contagiu viu -
contagium animatum, iar filozoful roman Marcus Terentius Varo (116-27 .e.n.) presupunea
existena unor animale minuscule - animalia minuta - care nu pot fi vzute, dar care produc
malaria.
Hippocrate (460-377 .e.n.) a ncercat s afle elementul comun, prezent la toi bolnavii n
cursul unei epidemii, ajungnd la concluzia c singurul element comun este aerul pe care
acetia l respir. Aceast afirmaie a stat la baza teoriei miasmelor sau a aerului
otrvitcare s-a meninut n pn n secolul XIX, alturi de teoria contagiunii care i are
originea n opera lui Girolamo Fracastoro (1478-1553), De contagione et contagiosis morbis
et curatione. Teoria contagiunii sugera c rspndirea bolilor infecioase este condiionat de
trecerea, de la un individ la altul, a unor particule foarte mici, animate, seminaria morbi.
Ambele teorii au avut consecine practice, deoarece ele au stat la baza instituirii unor msuri
elementare de igien i epidemiologie ca, de pild, instaurarea carantinelor cu efect benefic n
profilaxia diferitelor boli epidemice. Dictonul a fugi repede, a ajunge ct mai departe i a te
ntoarce ct mai trziu ntr-o colectivitate cuprins de o epidemie se suprapune cu unele
practici ale epidemiologiei moderne.
Descoperirea microbilor. Microbii au fost vzui prima oar n anul 1675 de ctre Antoni van
Leeuwenhoeck (1632-1723), un postvar olandez din Delft, care este de fapt printele
microbiologiei. Cu lentile lefuite de el nui, observ n anul 1675 creaturi minuscule, n
apa de ploaie, apa din vazele de flori, urin, fecale etc., pe care le descrie minuios ntr-o serie
de scrisori trimise Societii Regale din Londra. El descrie pentru prima oar formele de baz
ale microbilor. n anul 1695 Leeuwenhoeck i public ntreaga oper ntr-o carte intitulat
Arcanae naturae microscopiorum detecta .
2

Nici Leeuwenhoeck i nici contemporanii si nu au realizat importana extraordinar a
descoperirii sale, atenia savanilor ndreptndu-se, nu spre rolul acestor vieuitoare, ci spre
originea lor. Astfel s-a adoptat teoria generaiei spontane care susinea c microorganismele
apar din nimic, acolo unde se afl material organic n putrefacie. Aceast teorie a aprut
nc din antichitate, printre adepii ei aflndu-se i Aristotel. Teoria s-a meninut pn n
secolul al XIX-lea, n ciuda ncercrilor repetate ale unor savani de a demonstra contrariul.
Astfel, Francesco Redi, care scrie o carte despre originea insectelor, arat nc din 1665 c
viermii care apar n carne sunt larvele ce se dezvolt din oule depuse de mute. Dac se
previne contactul crnii cu acestea, ei nu mai apar. Abatele Lazzaro Spallanzani (1729-1799)
arat c fierberea infuziilor i izolarea recipientului mpiedic apariia generaiei spontane.
ncepnd din secolul al XVII s-au ridicat tot mai frecvent voci care au pledat pentru rolul
microorganismelor n etiologia infeciilor, dar ele nu au fost luate n seam. Astfel, Robert
Boyle sugereaz, n 1663, c unele boli trebuie s rezulte n urma unor fermentaii.
La sfritul secolului al XVIII-lea, medicul englez Edward Jenner public rezultatele obinute
prin imunizarea artificial a oamenilor mpotriva variolei. Bazndu-se pe observaiile
populare, n legtur cu faptul c ngrijitorii de vaci care se mbolnveau de vaccina vacilor
nu mai fceau variol, el inoculeaz lichid din pustulele vaccinale de pe ugerul vacilor la om,
instituind astfel vaccinarea antivariolic.
n anul 1850 Rayer i Davaine raporteaz prezena unui bacil, cu capetele tiate drept, n
sngele animalelor ce au murit de antrax i posibilitatea transmiterii acestei infecii la alte
animale, prin inocularea sngelui n care exist aceti bacili.
nainte de enunarea teoriei microbiene a infeciilor Ignaz Semmelweis (1818-1865), reduce
mortalitatea lehuzelor ntr-una din cele dou clinici vieneze de obstetric, de la 18% la
1,27%, oblignd personalul sanitar i studenii care lucrau la disecia cadavrelor s se spele pe
mini cu clorur de var. Joseph Lister, chirurg din Edinburgh introduce n clinica sa asepsia
prin pulverizarea acidului carbolic n slile de operaie, scznd astfel drastic numrul de
infecii postoperatorii ale plgilor.
nmulirea scrierilor cu privire la rolul microbilor n etiologia bolilor infecioase, fr dovezi
certe ns, l determin pe Henle s-i premearg lui Koch n enunarea celebrelor sale
postulate i s spun, c orice microb care este socotit a fi cauza unei boli, trebuie s fie
prezent n fiecare organism infectat.
Elaborarea teoriei microbiene a bolilor infecioase este meritul lui Louis Pasteur (1822 -
1895), fondatorul microbiologiei medicale ca tiin.
Profesor de chimie, Pasteur descoper c fermentaia vinului, a berii, a oetului, precum i
fermenaia lactic este rezultatul activittii unor anumii microbi, introducnd astfel noiunea
de specificitate. Cutnd s mpiedice fermentaia, care producea mari pagube productorilor
de vinuri, el nclzete vinul la 60-70C distrugnd microorganismele responsabile i
introduce metoda de sterilizare care-i poart numele - pasteurizarea, utilizat i astzi pe scar
larg n industria alimentar.
Pasteur combate teoria generaiei spontane printr-o serie de experiene simple, artnd c
autogeneza nu este posibil i c microbii provin din mediul nconjurtor. nclzind la
fierbere bulion n baloane cu gtul neinchis dar foarte lung i ncovoiat n gt de lebd , el
constat c bulionul rmne limpede timp ndelungat. Discreditnd definitiv teoria generaiei
spontane, Pasteur a nceput s se preocupe de cauzele care determin apariia bolilor
infecioase. El descoper foarte muli microbi, n diverse produse patologice, ceea ce i
permite mpreun cu elevii si Joubert i Chamberland s prezinte n 29 aprilie 1878 celebra
comunicare La thorie des germes et ses applications a la mdicine et a la chirurgie.
Aceast teorie expune pentru prima oar ideile fundamentale ale teoriei microbiene.
3

Dup ce descoper agentul etiologic al holerei ginilor, prepar prin nvechirea culturii un
vaccin capabil s previn apariia bolii.
La solicitarea cresctorilor de vite, Pasteur cerceteaz boala numit dalac sau crbune,
care decima cirezile de vite i oi ce pteau pe punile contaminate cu spori de bacili
crbunoi. Combinnd aciunea cldurii i nvechirii, Pasteur a sczut virulena bacilului
crbunos preparnd dou vaccinuri: vaccinul Pasteur I mai puin atenuat i vaccinul Pasteur II
mai atenuat. Dup obinerea celor dou vaccinuri, efectueaz n anul 1891 celebra experien
de la Pouilly Le Fort inoculnd 24 de oi, 6 vaci i o capr, nti cu vaccin Pasteur II i dup 7
zile cu vaccin Pasteur I. Dup alte 7 zile inoculeaz att lotul vaccinat ct i un lot martor de
animale nevaccinate cu bacil crbunos virulent. Dup 24 de ore toate animalele martor,
nevaccinate, au murit de infecie crbunoas, pe cnd cele vaccinate nu au fcut boala.
Tot lui Pasteur i se datoreaz vaccinul antirabic, pe care l-a preparat fr s cunoasc natura
viral a agentului etiologic. Dup experimentarea eficient pe animale, s-a efectuat n 6 iulie
1885 prima vaccinare ncununat de succes la un copil, Joseph Meister, mucat de un cine
turbat. n urma acestei remarcabile realizri s-au strns, prin eforturi internaionale, fonduri
pentru construirea unui Institut de Cercetri la Paris care poart numele lui Pasteur.
Contemporan cu Pasteur, Robert Koch (1843-1910) i ncepe cariera ca medic de ar, prima
sa descoperire a fiind sporul bacilului crbunos, n timp se examina cultura acestui germene
pe un preparat nativ ntre lam i lamel.
El introduce n practica bacteriologic examinarea morfologic a microbilor pe frotiuri fixate
i colorate. n cultivarea microbilor folosete gelatina pentru solidificarea mediilor de cultur
i obine primele colonii izolate. Agar-agarul a fost introdus n practica de laborator de un
colaborator a lui Koch, Hesse, la sugestia soiei sale, Angelina Hesse.
Koch anun descoperirea bacilului tuberculozei n anul 1882 la edina Societii de
Ftiziologie din Berlin 1882 i formuleaz celebrele sale postulate, care, cu excepia agenilor
infecioi necultivabili, stau la baza implicrii microorganismelor n etiologia maladiilor
infecioase. Pentru a considera c un microb este agentul patogen al unei boli infecioase el
trebuie:
s se gseasc constant n organismul bolnavilor ce prezint aceleai semne de boal,
s poat fi cultivat i s dea culturi cu aceleai caractere,
cu aceste culturi s se poat reproduce boala experimental la animal, de la care s se izoleze
acelai microb.
n anul 1883 Koch i ncepe n Egipt studiile asupra holerei i le continu apoi n India. Aici
descoper vibrionul holeric i demonstreaz calea de transmitere hidric a bolii.
n anul 1884, Hans Christian Gram introduce coloraia care i poart numele i care este i
astzi cel mai frecvent utilizat coloraie n laboratorul de bacteriologie.
Dezvoltarea microbiologiei a avut un impact deosebit asupra igienei, epidemiologiei bolilor
transmisibile i chirurgiei prin generalizarea antisepsiei i asepsiei.
Daniel Elmer Salmon i Theobald Smith descoper n 1886 c pesta porcin poate fi
prevenit i prin administrarea de bacterii omorte. Aceast descoperire a fost punctul de
pornire pentru prepararea de ctre Waldemar Haffkine a unor vaccinuri din tulpini bacteriene
omorte, ca cele mpotriva holerei (1895) i ciumei (1897).
Emile Roux i Alexandre Yersin arat n 1888 c patogenitatea bacilului difteric se datoreaz
unei exotoxine. Elev a lui Robert Koch, Kitasato Shibasaburo, cultiv pentru prima oar
bacilul tetanic i mpreun cu Emil von Behring, demonstreaz posibilitatea imunizrii pasive
prin administrarea de seruri imune, preparate pe animal. Aplicaia practic a acestei
descoperiri a fost seroterapia, care s-a aplicat prima oar cu succes la un bolnav de difterie n
4

anul 1893. Gaston Ramon detoxific toxina difteric prin tratarea ei cu formol, o denumete
anatoxin i o folosete n vaccinarea antidifteric. Acela principiu st i la baza vaccinrii
antitetanice.
Savantul rus Ilia Mecinikov (1845-1916), elev a lui Pasteur, este fondatorul teoriei celulare a
imunitii. El descoper rolul fagocitozei, arat c omul i animalele dispun de mijloace
naturale de aprare, reprezentate de leucocite i celulele SRH, care au proprietatea de a
ngloba i digera unii microbi ptruni n organism.
Cercetrile lui Mecinikov au fost precedate de observaiile lui Lister cu privire la puterea
bactericid a sngelui. Hans Buchner descoper n serul proaspt un factor termolabil,
alexina, care s-a dovedit, ulterior, a fi identic cu sistemul de proteine plasmatice, foarte
important n aprarea antiinfecioas a organismului, descoperit i denumit de Paul Ehrlich,
complement. n continuare, serologia face mari progrese. Astfel, Pierre Grabar i Herbert E.
Durham descoper aglutinarea bacteriilor n prezena anticorpilor specifici, Rudolf Kraus
precipitarea, iar Jules Bordet i Octave Gengou reacia de fixare a complementului, toate trei
cu mare valoare n diagnosticul serologic al bolilor infecioase.
Ca urmare a acestor descoperiri, la sfritul secolului XIX s-au conturat 2 coli de
imunologie: cea german (umoralist), partizana teoriei imunitii umorale, exponentul ei
fiind Paul Ehrlich i cea francez (celularist), care prin Ilia Mecinikov susinea teoria
imunitii celulare.
n anul 1905, Von Pirquet, care cerceta hipersensibilitatea face afirmaia ocant pentru acea
vreme i anume, c rspunsul imun nu este ntotdeauna benefic, ci poate avea consecine
grave asupra organismului.
n anul 1892 se nate o nou tiin - virusologia - o dat cu descoperirea de ctre botanistul
rus Ivanovski a virusului mozaicului tutunului. El a artat c mozaicul tutunului este produs
de un agent care trece prin filtrele bacteriologice i care poate fi transmis de la o plant la
cealalt. n anul 1898 Beijerinck confirm descoperirea lui Ivanovski i intuiete deosebirile
dintre virusuri i bacterii.
n continuare se dezvolt metodele de cultivare i izolare a virusurilor. Astfel, Ross Granville
Harrison din SUA (1907), francezul Alexis Carrel (1909) i Montrouse Burows, tot din SUA
(1909-1910), pun bazele cultivrii virusurilor pe culturi celulare. P. Rous (1911), E.
Goodpasture i Alice Woodriff (1931), M.F. Burnet (1933) izoleaz virusurile pe ou
embrionate, tehnic ce a fost utilizat pe scar larg nainte de generalizarea cultivrii
virusurilor pe culturi celulare.
In 1931 Ernst Ruska i Max Knoll construiesc primul microscop electronic, inventatorul
microscopului fiind ns Leo Szilard.
La cunoaterea morfologiei i biologiei virusurilor au adus contribuii importante E.Roux,
J.Carrol, Fr. Loeffler, F.W. Twort, F. dHrelle, P. Leidlaw, A. Sabin, A. Isaaks, M. Burnett,
A.Lwoff etc.
n eforturile de a gsi mijloace terapeutice eficiente n tratamentul bolilor infecioase se
nscriu cercetrile lui Paul Ehrlich, creatorul teoriei moderne a dezinfeciei i chimioterapiei
selective.
Cutnd glontele magic care s omoare microbii dar s nu lezeze organismul, sintetizeaz
peste 600 de produi arsenicali. Al 606-lea preparat - salvarsanul - se dovedete activ asupra
spirochetelor i este introdus n anul 1911 n tratamentul sifilisului i al unor boli produse de
protozare.
Studiind fagocitoza n infecia streptococic la oareci, Domagk descoper n 1932
sulfamidele.
5

n anul 1928 Alexander Fleming observ c culturile de stafilococi sunt inhibate de o
substan, secretat de un mucegai, Penicillium notatum pe care a denumit-o penicilin.
Pencilina este introdus n practica medical doar n anul 1941 dup purificarea i stabilizarea
ei de cte doi chimiti de la Oxford, Florey i Chain. Descoperirea antibioticelor a deschis o
er nou n medicin, producnd o adevrat revoluie n terapia bolilor infecioase,
modificnd profilaxia i evoluia acestora. Din pcate, ns, rezistena la chimioterapice
antiinfecioase nu a ntrziat s apar, i st n centrul ateniei cercettorilor n domeniu,
deoarece s-au descris tulpini microbiene rezistente la toate chimioterapicele ce se utilizeaz n
prezent.
Progresele eseniale n microbiologie s-au obinut prin dezvoltarea microscopiei electronice
care a relevat date de importan fundamental privind morfologia i structura agenilor
infecioi i prin genetica molecular, ale crei metode a descifrat genomul multor specii
bacteriene. In acest context se intensific cercetrile privind patogenitatea
microorganismelor, respectiv a mecanismelor prin care acestea sunt capabile s produc
infeciile.
Dezvoltarea tuturor tiinelor biologice dup anul 1950 este tributar microbiologiei care a
furnizat geneticii un model experimental unic, reprezentat de Escherichia coli, ca prototip al
organizrii structurale i funcionale a celor mai simple sisteme biologice. Astfel, s-a
descoperit codul genetic, biosinteza proteinelor, mecanismele reglrii genetice, mecanismele
variabilittii la bacterii etc. Prin tehnici de inginerie genetic s-a realizat clonarea DNA,
procedeu care permite studiul structurii i funcionalitii genelor.
Prin aceleai tehnici s-au implantat unor bacterii ca, de exemplu, bacilului coli, gene care
codific sinteza de interferoni, a unor hormoni (insulina, somatotropin) sau a altor substane
care ar fi greu sau imposibil de obinut prin metode chimice.
Enumerm doare cteva din descoperirile majore ale ultimilor 60 de ani care au influenat
dezvoltarea microbiologiei.

1944 - Avery, McLeod, i McMarty dovedesc ca DNA este materialul genetic al celulei
1946 - Lederberg i Tatum desscoper conjugarea
1953 - Watson and Crick si Wilkins descoper structura DNA
1971 - Nathans, Smith i Arber descoper enzimele de restricie
1973 - Ralph Marvin Steinman redescoper celula dendritic
1973 - Berg, Boyer, Cohen dezvolt metode de inginerie genetic
1982 - Stanley B. Pruissner descoper o nou categorie de ageni infecioi, prionii
1983 - Kary Mullis introduce Polymerase Chain Reaction
1983 - Montaigner i Gallo descoper virusul HIV
1975 - Dulbecco, Temin i Baltimore descoper revertranscriptaza
1978 - Arber, Smith i Nathans descoper endonucleazele de restricie
1985 - Christiane Volhart Nuesslein descoperir Toll receptorii la Drosophyla
1992 - se introduce antisense therapy
1995 - Descifrarea genomului Haemofilus Influenzae (azi se cunosc genomurile majoritii
bacteriilor)
2011 - Ralf M. Steinman demonstreaz rolul central al celulelelor dendritice n aprarea
antiinfecioas
De asemenea a fost introdus genoterapia, care const n adugarea, modificarea sau
ndeprtarea unei gene la nivel celular n vederea corectrii unor deficiene metabolice
6

precum i n tratarea unor infecii (AIDS) sau maladii proliferative. Aceast posibilitate
ultramodern de tratament este la nceput dar perspectivele sunt extraordinar de promittoare.
n prezent dezvoltarea microbiologiei este tributar matematicii, informaticii, fizicii i
chimiei, iar microbiologia la rndul ei a ptruns n diverse domenii ca: industria chimic,
alimentar, petrolier, farmaceutic etc., fiind o tiin indispensabil secolului XX.
Microbiologia romneasc. Microbiologia romneasc se prezint cu descoperiri importante
i cu o pleiad de savani care au adus contribuii valoroase att n patologia infecioas ct i
n imunologie.
Victor Babe (1854-1926) este ntemeietorul microbiologiei romneti. El i-a fcut studiile
la Budapesta i Viena, lucrnd apoi la Berlin, Paris alturi de Virchov, Koch i Pasteur. Vine
ca profesor de bacteriologie i anatomie patologic la Bucureti preocupndu-se de cele mai
variate probleme de bacteriologie, anatomie patologic, igien, parazitologie. Cercetrile sale
sunt cuprinse n 1005 lucrri. n anul 1885 public la Paris, mpreun cu Victor Cornil,
primul tratat de bacteriologie din lume intitulat Les bactries et leur rle dans ltiologie,
lanatomie et lhistologie pathologique des maladies infectieuses. Dintre descoperirile sale
menionm: granulele metacromatice la bacilul difteric (corpusculii Babe-Ernst), peste 40 de
specii microbiene i dou specii de protozoare din genul Babesiella. El a fost preocupat de
studiul turbrii, leprei, tuberculozei, pelagrei etc. i a introdus la noi n ar vaccinarea
antirabic, seroterpia antirabic i antidifteric. De asemenea organizeaz primul institut de
cercetri medicale din Romnia, Institutul Victor Babe i primele laboratoare de igien i
bacteriologie din ar.
Ion Cantacuzino (1863-1934) a studiat la Paris filozofia, tiinele naturale i medicina. n anul
1901 devine profesor la catedra de medicin experimental din Bucureti. Opera sa tiinific
cuprinde studii n domeniul holerei, artnd rolul imunitii celulare i umorale. n anul 1913
aplic n armata romna, aflat n plin epidemie de holer, vaccinarea antiholeric cu vaccin
omort. n anul 1906 introduce n ar, imediat dup Frana, vaccinarea antituberculoas cu
BCG. Fiind ministrul sntii, nfiineaz prin legea sanitar din 1910 primele sanatorii de
tuberculoz, primele spitale de boli infecioase iar n 1921 la Bucureti Institutul de Seruri i
Vaccinuri I. Cantacuzino, care a devenit cea mai important coal de microbiologie
romneasc.
Constantin Levaditi (1874 - 1953), elev a lui Victor Babe, a fost profesor la Institutul
Pasteur din Paris. Personalitate deosebit, are studii de valoare n imunologie, virusologie,
bacteriologie, parazitologie i chimioterapie. mpreun cu elevul su St. Nicolau pune
bazele nvtmntului virusologic n ara noastr. Activitatea Institutului de Virusologie
t.S. Nicolau a fost continuat de Prof.Dr. Nicolae Cajal.
Ca personaliti marcante ale microbiologiei romneti i amintim pe C. Ionescu Mihieti,
M. Ciuc, D. Combiescu, G. Zotta, M.Nasta, A. Ciuc, P. Condrea, Cornelia Combiescu, G.
i Alice Magheru, M. Marbe, Aristia Dmboviceanu, Lidia i I.Mesrobeanu, Eugenia Soru,
Olga Bonciu, N. Nestorescu, Gh.Istrati, M. Georgescu, Eugenia i M.Duca, i muli alii.
7

LOCUL AGENILOR INFECIOI N SISTEMATICA
MICROORGANISMELOR

nainte i mult timp dup descoperirea microorganismelor, organismele vii au fost mprite
n dou regnuri, animal i vegetal, nebnuindu-se posibilitatea existenei unor alte forme de
via.
n secolul trecut s-a observat, ns, c microorganismele prezint nu numai asemnri dar i
diferene fa de celulele de tip animal i vegetal. Sesiznd aceste diferene, Haeckel propune
n 1866 reunirea microorganismelor cunoscute ntr-un regn aparte, PROTISTA, care s
cuprind algele, protozoarele, fungii i bacteriile.
n secolul trecut, prin dezvoltarea mijloacelor de cercetare, s-a demonstrat c
microorganismele, ncadrate iniial n acest regn, difer n mod fundamental unele de
celelalte. Astfel, celulele bacteriene au o structur mult mai simpl, fiind desemnate ca celule
de tip procariot, iar algele, protozoarele i fungii au o structur complex de tip eucariot. Ca
urmare, termenul de Protista s-a restrns asupra organismelor unicelulare de tip eucariot,
bacteriile fiind trecute ntr-un regn aparte PROCARIOTE
PROTISTE
Algele sunt microorganisme eucariote, acvatice, fotosintetizante, care formeaz un grup
heterogen, de la dimensiuni microscopice pna la forme gigante, pluricelulare, filamentoase.
Se cunosc 16.000 de specii dar nu prezint interes medical (cu excepia agar-agarului din care
se obine agarul, ce servete la prepararea mediilor de cultur solide).
Mycetele sau ciupercile microscopice sunt celule eucariote grupate n 4 clase. Exist n jur de
12.000 de specii, din care doar 100 sunt de interes medical.
Protozoarele sunt microorganisme unicelulare eucariote foarte evoluate structural i n
general mobile, asemnnndu-se cu celulele animale. Cele de interes medical se ncadreaz n
4 clase: flagelata, rhizopoda, sporozoa i ciliata.
Tabelul 2.1. - Caracterele difereniale dintre celulele procariote i eucariote

CARACTER PROCARIOTE EUCARIOTE
Nucleul este un nucleoid sau echivalent
nuclear reprezentat de o molecul
circular de ADN;
nu are membran nuclear;
nucleu adevrat cu
nucleoli i nvelit de
membrana nuclear;
are nucleoli, fiind un
nucleu adevrat;
Citoplasma lipsit de mitocondrii i reticul
endoplasmatic;
ribozomi: 70S;
mitocondrii i reticul
endoplasmatic prezent;
ribozomi: 80 S;
Perete celular rigid, prezent la toate procariotele cu
excepia clasei Mollicutes;
prezent numai la ciuperci
Dimensiune bacterii 1 - 5 ;
chlamydii 0,2 - 0,5 ;
rickettsii 0,3 - 0,5 ;
protozoare 1 - 150
levuri 5 - 10
mucegaiuri - nedefinit
8

nmulire asexuat prin diviziune binar asexuat i sexuat

PROCARIOTE
Archaebacteriile sunt lipsite de interes pentru medicin. Ele sunt bacterii termofile,
productoare de metan.
Eubacteriile cuprind un numr foarte mare de bacterii, dintre care cele de interes medical
sunt:
bacteriile clasice - cu forme variate i cu perete celular,
chlamydiile - bacterii cu parazitism intracelular obligatoriu i care prezint un
mecanism de multiplicare unic n lumea bacteriilor,
rickettsiile - bacterii cu habitat intracelular (cu o excepie), dar cu diviziune direct,
ntlnit la majoritatea bacteriilor,
micoplasmele - bacterii crora le lipsete n mod natural peretele celular.
n prezent sunt incluse n Eubacterii i Cyanobacteriile sau algele albastre, care sunt
microorganisme acvatice. Ele prezint interes medical numai pentru c pot ajunge
ntmpltor n soluiile perfuzabile, producnd accidente grave prin substanele pirogene pe
care le conin.
VIRUSURI, VIROIZI I PRIONI
Virusurile sunt entiti infecioase, care se deosebesc fundamental de formele celulare de
via. Ele sunt formate dintr-un singur acid nucleic (ADN sau ARN), nvelit de o capsid
proteic i sunt parazite obligatoriu intracelulare. Virusurile sunt particule inerte n stare
extracelular dar, dup ce ptrund ntr-o celul vie, deviaz metabolismul acesteia n scopul
propriei replicri.




9

Figura 2.1. Dimensiunile bacteriilor n comparaie cu ali ageni infecioi. (modificat dup
Roitt, 1994)

Tabelul 2.2. - Caractere difereniale ntre bacterii i virusuri

CARACTER BACTERII VIRUSURI
Dimensiuni 1 - 10 20 - 300 nm
Structur celular subcelular
Coninutul n acizi nucleici ADN i ARN ARN sau ADN
Multiplicarea pe medii inerte replicate de ctre celula
gazd
Prezena enzimelor metabolice DA NU
Sensibilitate la antibioticele
uzuale
DA NU

Viroizii au o structur i mai simpl, fiind alctuii doar dintr-un acid nucleic cu GM mic.
Unii dintre ei produc boli transmisibile la plante. Virusurile i viroizii alctuiesc mpreun
regnul VIRA.
Prionii. Sunt ageni infecioi de natur proteic, cauza unor boli degenerative ale sistemului
nervos cum sunt encefalopatia spongiform a bovideelor, boala Kuru (n Guatemala),
insomnia familial letal, boala Creutzfeldt-Jakob, etc. Se presupune, de asemenea, c boala
Alzheimer este de natur prionic. Prionii sunt proteine a cror structur primar este aceea a
proteinelor normale din celula nervoas, dar a cror structur teriar i cuaternar se abate de
la cea a proteinelor normale. Termenul de prioni a fost introdus de Stanley B. Prusiner n
1982.
La agenii infecioi microscopici se adaug paraziii multicelulari cum sunt helminii i
artropodele, cu structur complex i cu studiul crora se ocup parazitologia.
Microbiologia medical studiaz urmtoarele aspecte legate de agenii infecioi:
biologia agenilor infecioi,
relaia dintre agenii infecioi i organismul uman,
patogenia agenilor infecioi,
aprarea antiinfecioas natural i dobndit,
bazele profilaxiei bolilor infecioase,
bazele terapiei antiinfecioase,
diagnosticul etiologic al infeciilor.
10

MORFOLOGIA I STRUCTURA BACTERIILOR
Morfologia bacteriilor
Dimensiuni
Lumea bacterian este populat de entiti microscopice ce nu pot fi vzute cu ochiul liber.
Dimensiunile sunt att de reduse, nct un volum de 1cm3 poate cuprinde 1012 bacterii cu o
greutate de aproximativ 1g, iar ntr-un mediu lichid limpede sunt necesare cel puin 1-10
milioane de bacterii pentru a produce o turbiditate sesizabil macroscopic. n intestinul nostru
sunt prezente n jur de 10-100 de trilioane de bacterii, numrul lor depind cu mult cel al
celulelor noastre.
Dimensiunea bacteriilor se exprim n micrometri (1=10-3 mm), variaiile fiind n funcie de
specie, form, mediu i vrsta culturii. n general, este cuprins ntre 1-10.
Form
n raport cu forma lor deosebim 4 categorii de bacterii: rotunde (cocii), alungite (bacili),
ncurbate (spirili, spirochete, vibrioni) i filamentoase (actinomycetele).
cocii sunt bacterii rotunde (genul Staphylococcus), ovalare (genul Streptococcus),
lanceolate (Streptococcus pneumoniae), reniforme (genul Neisseria) cu de 0,8 - 1;
bacilii sunt bacterii cu form alungit de bastona cu dimensiuni ntre 1,5 - 10. La
bacili este important examinarea extremitilor, aspectul acestora avnd rol n identificarea
lor. Astfel, bacilii pot prezenta capetele rotunjite (familia Enterobacteriaceae), tiate drept
(Bacillus anthracis - bacilul crbunos), mciucate (Corynebacterium diphteriae - bacilul
difteric), n form de suveic (Fusobacterium);
cocobacilii sunt bacterii uor alungite, fiind forme intermediare ntre coci i bacili
(Yersinia pestis, Bordetella pertussis, Haemophilus influenzae);
vibrionii sunt bacterii ncurbate n form de virgul (Vibrio cholerae);
spirilii sunt bacterii spiralate avnd 1-2 spire rigide (Spirillum volutans);
spirochetele sunt bacterii spiralate cu corpul flexibil avnd 12-20 de spire (Treponema
pallidum), foarte multe spire strnse (Leptospira) sau 2-3 spire (Borrelia):
actinomicetele sunt bacterii foarte asemntoare fungilor i formeaz filamente sau
hife lungi i ramificate care se rup, rezultnd forme bacilare (Actinomyces).
11


Figura 3.1. Morfologie bacterian. (modificat dup A. Ferron, 1979)
Aezare
Bacteriile sunt organisme unicelulare care se multiplic prin diviziune binar. La unele specii,
dup diviziune urmeaz separarea complet a celulelor fiice, rezultnd bacterii izolate. La alte
specii, dup diviziune, celulele fiice rmn legate ntre ele, grupndu-se n mod caracteristic
datorit unei substane vscoase dispus fie pericelular, fie localizat n anumite regiuni
determinnd diferite tipuri de aezare a celulelor.
Aezarea bacteriilor permite uneori recunoaterea genului, sau chiar a speciei, prin
examinarea la microscopul optic a preparatelor colorate efectuate din culturi, sau direct din
produsul recoltat de la pacient.
Cocii se aaz:
n grmezi sau asemntor unei ciorchini de struguri ca, de exemplu, germenii din
genul Staphylococcus;
n tetrade la genul Micrococcus;
n baloturi de cte 8 coci orientai n cele 3 direcii ale spaiului la genul Sarcina;
n lanuri la genul Streptococcus;
n diplo, ca dou flcri de lumnare care se unesc prin bazele lor, la specia
Streptococcus pneumoniae;
n diplo, ca dou boabe de cafea care se privesc fa n fa prin concavitile lor ca,
de pild, la Neisseria gonorrhoeae (gonococ) i Neisseria meningitidis (meningococ);
izolai, care nu sunt de interes medical.
12

Bacilii se aaz:
cel mai ades izolai i n poziii ntmpltoare unul fa de cellalt ca, de exemplu,
majoritatea bacililor gram-negativi;
grupai cte doi (diplobacili) sau n lanuri scurte ca, de exemplu, genul Klebsiella;
dispui n lanuri ca bacilii din genul Bacillus (bacilul crbunos);
dispui n mod caracteristic sub forma unor majuscule sau litere chinezeti cum sunt
bacilii difterici (Corynebacterium diphteriae);
n palisad, ca scndurile unui gard (bacilii difterimorfi).
STRUCTURA CELULEI BACTERIENE
Unitatea morfofuncional a bacteriilor este celula, un complex autoorganizat de molecule
organice care schimb energie cu mediul nconjurtor i este capabil s-i regleze n mod
autonom funciile vitale.
Bacteriile au o structur foarte complex, fiind alctuite din componente obligatorii, prezente
la toate speciile bacteriene (nucleu, citoplasm, membran citoplasmatic, mezozomi, perete
celular) i componente facultative ce se gsesc doar la unele specii (capsul, flageli, fimbrii,
spor).

Figura 3.2. Structura celulei bacteriene.
Componentele obligatorii
Nucleul bacterian
Este un nucleoid sau echivalent nuclear, cu o structur primitiv n comparaie cu nucleul
celulelor eucariote i reprezint 2% din greutatea uscat a bacteriei. Nucleoidul este format
dintr-o molecul circular de ADN, organizat sub forma unui cromozom haploid care este n
contact direct cu citoplasma datorit lipsei membrane nucleare. Molecula de ADN dublu
spiralat este la rndul ei suprahelicat n jurul unui miez de ARN, dispoziie necesar
funcionalitii materialului nuclear.
n mod obinuit, nucleoidul este situat n centrul celulei bacteriene i poate fi legat de
membrana citoplasmatic prin intermediul mezozomilor.
Funcia nucleului bacterian const n depozitarea informaiei genetice necesar autoreplicrii,
organizrii structurale i funcionale a celulei bacteriene, deci a caracterelor ce definesc
specia..
13

Citoplasma
Situat ntre materialul nuclear i faa intern a membranei citoplasmatice, citoplasma este un
sistem coloidal alctuit din 80% ap, n care se gsete o cantitate mare de molecule organice,
ioni anorganici, enzime, ARN (de transport, mesager i ribozomial), vacuole i incluzii. Este
lipsit de organitele celulare prezente la celulele eucariote cum sunt reticulul endoplasmatic,
aparatul Golgi, mitocondriile, centrul celular, ergastoplasma.
La microscopul optic citoplasma apare omogen, amorf, iar la cel electronic fin granulat
datorit unui numr mare de ribozomi. Se apreciaz c o celul bacterian are 20.000 de
ribozomi ce conin 80-90% din ARN-ul citoplasmatic.
Ribozomii sunt structuri sferice cu diametru de aproximativ 180nm i constanta de
sedimentare de 70S. Din punct de vedere chimic sunt alctuii din 65-70% ARN i 30-35%
proteine. O parte din ribozomi se asociaz formnd polizomi (mai ales n timpul sintezelor
proteice), alii sunt liberi, iar o a treia categorie se ataeaz mezozomilor sau membranei
citoplasmatice. Ribozomii reprezint sediul sintezelor proteice din celul.
Incluziile citoplasmatice, descrise la unele specii bacteriene, sunt formaiuni structurale
inerte, temporare, de diferite dimensiuni, variind n funcie de specia bacterian i condiiile
de mediu. Compoziia lor chimic este diferit, ele putnd fi de glicogen sau amidon (la unii
bacilii aerobi sporulai), lipide (la genul Bacillus), polimetafosfai (sau incluziile de volutin
descrise de Babe i Ernst la bacilii difterici) etc. Incluziile sunt structuri legate de activitatea
metabolic a celulei bacteriene i reprezint un material de rezerv care poate fi folosit ca
surs de energie.
Membrana citoplasmatic
Este o membran fin (6,5-7nm), elastic, lipsit de rezisten mecanic ce mrginete la
exterior citoplasma bacteriilor i o separ de peretele celular. Pe seciune apare trilaminat,
fiind alctuit din dou straturi fosfolipidice dispuse cu prile hidrofobe fa n fa. Printre
moleculele fosfolipidice se gsesc molecule proteice, situate fie la nivelul unuia dintre cele
dou straturi fosfolipidice, fie le traverseaz fiind expuse la ambele fee ale membranei.
Aceast structur dinamic, fluid, temporar i reversibil n funcie de factorii de mediu
este o structur n mozaic, modelul ei fiind descris n 1972 de Singer i Nicholson.

Figura 3.3. Structura membranei citoplasmatice.

Funciile membranei citoplasmatice:
este o membran cu permeabilitate selectiv, ndeplinind funcia de barier osmotic
ce regleaz schimburile celulei bacteriene, n ambele sensuri cu mediul nconjurtor.
Permeabilitatea selectiv a membranei citoplasmatice permite realizarea n interiorul celulei,
pentru unele substane, concentraii de 105 ori mai mari dect n afara celulei,
14

secret numeroase enzime hidrolitice ce se elibereaz n mediul nconjurtor unde
scindeaz substratul nutritiv n uniti absorbabile,
unele proteine legate de membrana citoplasmatic joac rolul de chemoreceptori,
ndeplinete rolul mitocondriilor de la celulele eucariote, fiind sediul enzimelor
lanului respirator i al fosforilrii oxidative, deci centrul energogenezei celulare,
este sediul sintezei acizilor grai, a fosfolipidelor,
este implicat n sinteza peretelui celular, al polizaharidelor capsulare, participnd
activ la creterea i diviziunea celulei bacteriene, la formarea sporului bacterian,
constituie o posibil int pentru aciunea unor chimioterapice ca, de pild,
polimixinele.
Mezozomii
Sunt structuri membranare care se formeaz prin invaginarea membranei citoplasmatice sub
form de buzunar sau n deget de mnu, prezente la bacteriile gram - pozitive i ocazional
la cele gram - negative. Ei nu formeaz n citoplasm caviti inerte, ci deschise spre spaiul
periplasmic (spaiul dintre membrana citoplasmatic i peretele celular) i sunt n contact
direct cu materialul nuclear.
Dup morfologia lor, mezozomii sunt lamelari, veziculari i tubulari, iar dispoziia lor n
celula bacterian poate fi septal, periferic i nuclear.
Funciile mezozomilor:
particip la replicarea cromozomului bacterian i diviziunea celular,
particip la reaciile de fosforilare oxidativ i oxidoreducere, dar n msur mai mic
dect membrana celular,
sediul unor enzime hidrolitice care ndeplinesc rolul enzimelor lizozomale de la
celulele eucariote,
sinteza i secreia unor exoenzime, ca de exemplu penicilinaza sau cefalosporinaza,
sinteza peretelui celular i formarea sporului bacterian.
Peretele celular
Component celular obligatorie care nconjoar membrana citoplasmatic, peretele celular
este o structur rigid, specific bacteriilor. El este format dintr-un strat bazal, asemntor la
toate bacteriile i un strat al structurilor superficiale, foarte difereniat, n funcie de care
bacteriile manifest caractere tinctoriale diferite: bacterii gram - pozitive, gram- negative i
acido-alcoolorezistente.
Structura stratului bazal. Peptidoglicanul sau mureina este structura chimic responsabil de
rigiditatea peretelui celular i care asigur forma i rezistena mecanic a bacteriei. Prezent la
toate bacteriile, el const dintr-un schelet, format din molecule lungi paralele polizaharidice
de N-acetil-glucozamin i acid N-acetil-muramic. Moleculele de acid N-acetil-muramic din
lanurile vecine sunt legate ntre ele prin puni polipeptidice, transversale, a cror structur
difer la bacteriile gram- pozitive de cele gram-negative i chiar de la specie la specie. Astfel,
de fiecare molecul de acid N-acetil-muramic se leag un tetrapeptid ce conine D i L
aminoacizi. De exemplu, tetrapeptidul la Staphylococcus aureus este format din L-alanin -
D-glutamin - L-lizin - D -alanin, iar la bacteriile gram negative conine acid
diaminopimelic.
La bacteriile gram - pozitive dou tetrapeptide de pe 2 lanuri paralele nvecinate sunt legate
printr-un pentapeptid. La bacteriile gram - negative, tetrapeptidele se leag ntre ele printr-o
15

simpl legtur peptidic. Menionm c acidul diaminopimelic i acidul N-acetil-muramic
sunt componente care nu au fost gsite n natur dect la bacterii.
Structura stratului structurilor speciale. Deosebim 3 tipuri de structuri speciale: gram-
pozitiv, gram-negativ i acido-alcoolorezistent.
La bacteriile gram - pozitive, peptidoglicanul reprezint 50-90% din greutatea uscat a
peretelui celular, are o grosime de 15-30 nm i conine pn la 200 de lanuri paralele de
murein.
Stratul structurilor speciale este redus i alctuit din polimeri hidrosolubili care sunt acizii
theicoici: acidul ribitoltheicoic i gliceroltheicoic. Acetia pot ptrunde pn la membrana
citoplasmatic legndu-se covalent de aceast - acizii theicoici de membran sau numai pn
la perete - acizi theicoici de perete. Ei reprezint antigenele de supafa ale bacteriilor gram-
pozitive.

Figura 3.4. Structura peptidoglicanului.

Peretele celular al bacteriilor gram-pozitive este sensibil la aciunea lizozimului care rupe
legturile dintre acidul N-acetil muramic i N-acetilglucozamin i a penicilinei care nhib
sinteza peptidoglicanului.
La bacteriile gram-negative, peptidoglicanul are o grosime de 4-5nm, reprezentnd numai
10% din greutatea uscat a bacteriei. Stratul superficial este ns mult mai complex dect la
bacteriile gram - pozitive fiind alctuit dintr-o membran extern, lipoproteine i
lipopolizaharidul de perete.
Membrana extern este format dintr-un strat dublu fosfolipoproteic ce cuprinde o cantitate
foarte mare de molecule proteice. Aceste proteine, bine definite la majoritatea speciilor
bacteriene, sunt denumite Omp (outer membrane proteins) sau Momp ( major outer
membrane proteins). Membrana extern se leag de protoplast prin intermediul unei
lipoproteine i a proteinei OmpA din membrana extern.


Figura 3.5. Structura lipopolizaharidului.
16

Proteinele nespecifice ale membranei externe cu funcie de porine, cum sunt trimerii OmpF i
OmpC, delimiteaz canale umplute cu ap prin intermediul crora pot difuza n spaiul
periplasmic substane hidrosolubile.
Proteinele specifice au funcii de transport pentru anumite substane, unele dintre ele fiind i
receptori pentru bacteriofagi. De exemplu, proteina LamB este responsabil pentru
transportul maltozei i receptor pentru fagul lambda al bacilului coli.
Proteinele de suprafa pot avea la unele bacterii rol n patogenitate, ca de exemplu cele 7
proteine de suprafa al shigellelor care le asigur invazivitatea.
Deasupra membranei externe a bacililor gram-negativi se afl lipopolizaharidul de perete
(LPZ) sau endotoxina bacililor gram-negativi. Aceasta este alctuit din:
lipidul A care are o structur particular, fiind format din uniti dizaharidice de
glucozamin, legate de beta-hidroxiacizi grai cu 10-16 atomi de carbon fixai direct de
membrana extern,

Figura 3.6. Peretele celular la bacteriile gram pozitive i gram negative.
(modificat dup Tortora, 1986)

miezul sau core, numit i antigen R, comun tuturor bacteriilor gram - negative i
care include 2 zaharuri caracteristice: acidul keto-deoxyoctanoic i o heptoz.
uniti monozaharidice repetitive (15-40) care sunt specifice de specie i tip i
constituie antigenul O al bacteriilor gram-negative.
LPZ este o toxin termolabil, care se elibereaz n mediul nconjurtor de ctre bacteriile
gram-negative numai dup liza lor i foarte reactiv n organismul gazd. Astfel, lipidul A
produce febr, activeaz mecanismele aprrii antiinfecioase i n exces produce ocul
endotoxic cu evoluie grav, chiar fatal.
Spaiul periplasmic. Sistemul structural dublu al peretelui celular la bacteriile gram-negative
creeaz un compartiment ce se ntinde de la membrana celular pn la membrana extern,
numit spaiu periplasmic. El conine peptidoglicanul i un gel care favorizeaz nutriia
bacteriei prin coninutul n enzime degradative ca, de pild, fosfataze, nucleaze, proteaze etc.
Tot aici sunt prezente enzimele de inactivare ale unor antibiotice cum sunt beta-lactamazele
i cefalosporinazele.
17

Bacteriile acido-alcoolorezistente de interes medical sunt bacilul tuberculos i bacilul leprei
a cror perete celular se aseamn cu cel al bacteriilor gram-pozitive. Structurile speciale
conin acid micolic i o cear ce confer acestor bacterii caractere tinctoriale deosebite i
rezisten crescut la factorii de mediu. Astfel dac, dup o nclzire de scurt durat ce
topete cerurile, un colorant ptrunde n celula bacterian, decolorarea acesteia sub aciunea
acizilor sau alcoolilor nu se mai produce ca la alte bacterii. Acest caracter se numete acido-
alcoolo-rezisten. Bacteriile acido-acoolo-rezistente se coloreaz foarte slab cu coloraia
gram, evidenierea lor fcndu-se la cald prin tehnica Ziehl-Neelsen.
Bacterii cu perete alterat sau formele L. Sunt bacterii cu stratul bazal viciat sub aciunea unor
factori din mediu ca, de exemplu, lizozimul i penicilina, care lizeaz, respectiv mpiedic
sinteza peptidoglicanului.
Bacteriile lipsite total de perete celular se numesc protoplati i provin din rndul bacteriilor
gram - pozitive, iar cele cu perete parial lezat, sferoplati din bacteriile gram-negative, care
i pierd mai greu peretele.
Formele L sunt foarte sensibile la variaiile osmotice, putnd supravieui numai n condiii
speciale de osmolaritate, dar sunt foarte rezistente la antibioticele beta-lactamice. Dac
factorii nocivi dispar din mediu, formele L se pot transforma n bacterii normale prin
resinteza peretelui celular
Funciile peretelui celular:
asigur forma, rezistena mecanic i osmotic a bacteriei;
asigur protecia membranei citoplasmatice fa de presiunea intern a celulei
bacteriene, care este foarte mare: 5-6 atm la E. coli, 20-30 atm. la S. aureus;
regleaz traficul molecular de perete n ambele sensuri, deci schimbul de substane
dintre bacterie i mediul nconjurtor, fiind permeabil pentru molecule cu o GM mai mic de
10.000 daltoni i cu un diametru mai mic de 1nm;
stocheaz unele enzime n spaiul periplasmic la bacteriile gram-negative ce vor fi
eliberate dup necesiti, spre deosebire de bacteriile gram-pozitive care i elimin enzimele
direct n mediul extern;
prezint receptori pentru bacteriofagi1;
este sediul antigenelor de suprafa, fiind deci implicat n rspunsul imun al
macroorganismului;
este sediul unor factori de patogenitate;
are rol n diviziunea bacterian i n procesul de sporulare.
Componente bacteriene neobligatorii
Capsula
Majoritatea bacteriilor patogene i comensale sunt capabile s produc in vivo un material de
nveli extracelular.
Capsula este un nveli compact, intim legat de celula bacterian, cu o lime de cel puin
0,2m. Este vizibil pe preparatele uzuale sau n coloraiile negative sub forma unui halou
clar ce nconjoar bacteria.
Din punct de vedere chimic, capsula tuturor bacteriilor de interes medical este de natur
polizaharidic (Streptococcus pneuomoniae, Klebsiella etc.) cu excepia capsulei bacilului
crbunos care este polipeptidic.
Capsula are rol n rezistena bacteriilor fa de fagocitoz, fiind astfel un factor de virulen.
Variantele necapsulate ale acelorai specii sunt nepatogene. De exemplu, Streptococcus
18

pneumonie, de tip S, capsulat, produce la oarecele alb o septicemie mortal, pe cnd varinata
necapsulat nu este patogen.
Capsula este o structur cu proprieti antigenice specifice (antigenele K) care permit
diferenierea unor serotipuri n cadrul speciei.
Bacteriile nu sintetizeaz material capsular in vitro pe mediile uzuale, coloniile rezultate fiind
rugoase, de tip R =rough. Pe medii speciale, ns, bacteriile pot crete capsulate, coloniile
fiind mucoase, de tip S =smooth.
Structura descris mai sus este capsula clasic a bacteriilor, la care ne referim atunci cnd
vorbim de bacterii capsulate. La unele bacterii s-au mai evideniat i alte structuri de nveli,
cum sunt:
Microcapsula este o structur discret cu o grosime sub 0,2m care nu se evideniaz la
microscopul optic, ci numai prin metode imunologice sau electronomicroscopice (Neisseria
gonorrhoeae). Ea constituie un factor de virulen.
Stratul mucos, glicocalixul este un strat amorf i vscos ce nvelete bacteria. El este format
din lanuri lungi de polizaharide, cum sunt levanii i dextranii, cu rol major n adezivitatea
bacteriilor de suprafee. Astfel, de pild, Streptococcus mutans produce cantiti mari de
dextran i levan prin intermediul crora se ataeaz de suprafaa diniilor contribuind la
formarea cariilor i a plcii dentare. Un alt exemplu este Pseudomonas aeruginosa, care
secret un strat mucos dens care i crete rezistena la antibiotice.
Funciile capsulei:
este un factor de aderen i colonizare a bacteriile pe suprafee;
protejeaz bacteriile de diferii ageni antibacterieni din mediu cum sunt:
bacteriofagii, colicinele, complementul, lizozimul sau alte enzime bacteriolitice;
protejeaz bacteriile de aciunea fagocitelor, fiind deci un factor de virulen;
reprezint sediul antigenelor capsulare, importante n identificarea acestor bacterii.
Cilii sau flagelii bacterieni
Sunt apendici filamentoi ai speciilor bacteriene mobile, cu originea n citoplasma bacterian,
i servesc ca organe de locomoie. Ei sunt prezeni mai ales la bacili (Enterobacteriaceae) dar
i la unii coci (enterococ). Cilii sunt structuri helicoidale, cu dimensiunea n general mai mare
dect cea a celulei bacteriene creia i aparin (2-15/2-20 nm) i se evideniaz microscopic
prin coloraii speciale.

19


Figura 3.7. Dispoziia cililor (modifcat dup Schaechter, 2012)

Dispoziia i numrul cililor sunt caracteristice speciei. S-au descris bacterii atriche (fr cili),
monotriche - cu un cil polar (Vibro cholerae), lofotriche - cu un smoc de cili situat la unul din
polii bacteriei - (Pseudomonas fluorescens), amfitriche - cu cilii situai la ambii poli ai
bacteriei (la genul Spirillum) i peritriche - cu cilii dispui pe ntreaga suprafa a bacteriei
(Salmonella, E. coli, Proteus etc.).
Structura cililor este tubular, ei fiind formai dintr-o protein contractil, flagelina, sub
form polimerizat. Cilul se ataeaz de bacterie printr-un corpuscul bazal i un crlig de
articulaie aflate n citoplasma bacteriei. Corpusculul bazal se inser prin crligul de
articulaie de membrana citoplasmatic i peretele celular.
Mobilitatea i direcia micrii cililor pot fi influenate de concentraia unor substane din
mediu (chimiotactism pozitiv sau negativ) i de temperatur. Ei sunt sediul antigenelor
flagelare (H), importante n identificarea bacteriilor.
Cilii bacterieni nu se observ dect pe preparate colorate special. n practica de rutin nu se
evideniaz flagelii, ci mobilitatea bacteriilor, fie prin examinarea lor pe un preparat nativ
ntre lam i lamel n care se urmresc micrile bacteriilor, fie prin nsmnarea tulpinii pe
un mediu semisolid prin neparea n profunzime a mediului. Dac bacteria crete nu numai
pe traseul nsmnrii i difuzeaz n mediu, ea este mobil.
Pilii bacterieni
Numeroase specii bacteriene gram-negative au pe suprafaa lor lor nite apendici filamentoi,
rigizi, mai scuri dect flagelii, n numr mare (100-500/celul) i cu dispoziie n general
peritrich. Ei se evideniaz numai prin microscopie electronic.
Din punct de vedere chimic sunt polimeri proteici de pilin, dispui helicoidal ntr-o structur
tubular. Natura proteic a pililor le confer proprieti antigenice. Din punct de vedere
funcional, pilii se mpart n:
sex pili - codificai de formaiunile genetice extracromozomiale (plasmide) i care
prezint o importan deosebit n transferul de material genetic ntre bacterii. Sunt prezeni
mai ales la bacteriile gram-negative (Enterobacteriaceae, Pseudomonas),
pili comuni sau pili de aderen (fimbrii), n numr mare, codificai cromozomial, i
care servesc bacteriilor la fixarea ferm de mediul de cultur sau de celulele pe care se afl.
20

Ei constituie, deci, un factor important de virulen (de exemplu la gonococ). n afar de
aderen, pilii comuni mai au i proprieti antifagocitare.
Ambele categorii de pili prezint antigene specifice piliare i pot fi receptori pentru
bacteriofagi.
Sporul bacterian
Unele bacterii se transform n spori, care sunt forme primitive de difereniere celular, cu
rezisten crescut la factorii de mediu i care apar endocelular n condiii nefavorabile de
via. Sporogeneza se ntlnete numai la 2 genuri de bacterii de interes medical, Clostridium
i Bacillus care sunt bacili gram pozitivi.
Sporii nu sunt forme de nmulire ale bacteriilor. Dintr-o bacterie vegetativ se formeaz un
singur spor, care n condiii favorabile de via va da natere unei singure celule bacteriene.
Forma sporului poate fi rotund sau oval. Diametrul sporilor este mai mic la bacilii sporulai
aerobi, nedepind diametrul bacteriei (genul Bacillus), pe cnd la genul anaerob
Clostridium, sporul are un diamentrul mai mare dect bacteria, producnd deformarea
acesteia. Acest caracter al sporului se numete caracter clostridial i este important n
identificarea bacililor gram-pozitiv anaerobi.
Poziia sporului bacterian constituie un caracter taxonomic. Poate fi central, ca la bacilul
crbunos (Bacillus anthracis), subterminal, ca la B.cereus, sau terminal, ca bacilul tetanic.


Figura 3.8. Poziia sporului bacterian.

n coloraiile obinuite sporul apare ca o zon incolor n corpul bacterian. El se evideniaz
ns prin coloraii speciale, la cald, care permeabilizeaz nveliurile sporale pentru colorani
(coloraia Mller). Pe preparatele native ntre lam i lamel efectuate din culturi, sporii apar
ca nite formaiuni rotunde, refringente.
Ultrastructura i compoziia chimic a sporilor asigur acestora o mare rezisten la agenii
fizici i chimici, ceea ce face ca ei s fie considerai forme de rezistena ale bacteriilor. De
importan deosebit pentru medicin este rezistena sporilor la cldur, de care trebuie s se
in cont la sterilizare.
Sporularea. Este un proces ce se declaneaz n condiii nefavorabie de via, cnd bacteriile
sunt lipsite de surse nutritive. Ea presupune formarea unor structuri noi i dispariia altor
structuri caracteristice formei vegetative ale bacteriei.
Din punct de vedere morfologic, sporularea ncepe prin condensarea la un capt al celulei a
materialului nuclear. Acesta va fi separat de un sept ce provine din invaginarea membranei
citoplasmatice. Septul crete, se desprinde de membrana citoplasmatic i formeaz n jurul
materialului nuclear o membran dubl a crei fee care se privesc sunt cele ce sintetizeaz
21

peretele bacterian. Acesta este stadiul de prespor.Cele dou lamele ale membranei presporale
vor sintetiza nveliurile sporale: peretele sporal i cortexul situate ntre cele dou lamele ale
membranei presporale i o tunic proteic i exosporiumul n afara membranei presporale.
Structura sporului variaz de la specie la specie, dar organizarea general se aseamn. De la
interior spre exterior, sporul este format din:
core sau protoplastul sporal, format din materialul nuclear inconjurat de membrana
citoplasmatic. Aici este depozitat DNA i o substan care are rol n rezistena sporului la
cldur - dipicolinatul de Ca, care nu s-a mai evideniat nicieri n natur,
cortexul intern sau peretele sporal format din peptidoglican i care este peretele celular
primordial,
membrana extern sau cortexul sporal, care este stratul cel mai gros al sporului i care
conine i el un peptidoglican, cu o structur particular, foarte sensibil la lizozim. Autoliza
acestui strat este momentul cheie n transformarea sporului n forma vegetativ,
tunica proteic este format din proteine chitinoase cu numeroase legturi disulfitice. Ea
este impermeabil, fiind responsabil de rezistena sporilor la unele dezinfectante,
exosporiumul este prezent numai la unii spori i conine lipoproteine i zaharide.


Figura 3.9. Structura sporului

Germinarea sporului. n condiii de mediu favorabile, sporul germineaz i va da natere unei
bacterii vegetative identice cu aceea n care s-a format. Germinarea are loc n 3 etape:
Activarea sporului. Se produce cnd acesta ntlnete condiii favorabile de via, dar i un
factor care s lezeze nveliul sporal (mecanic sau chimic ca, de exemplu, lizozimul, compui
cu grupri sulfhidrilice libere etc.).
Iniierea este declanat de un mediu nutritiv bogat. Pentru unii spori triggerul este L-alanina,
iar pentru altele adenozina. Acesta duce la activarea unei enzime autolitice care degradeaz
cortexul sporal. Are loc absorbia de ap, eliberarea dipicolinatului de calciu i degradarea
unor compui sporali.
Dezvoltarea sporului. Protoplastul sporal se transform n bacterie vegetativ, care trece
printr-o perioad metabolic activ de refacere a constituenilor celulari normali i a
echipamentului enzimatic complet.
STUDIUL MORFOLOGIC AL BACTERIILOR
Examinarea microscopic este frecvent primul pas n identificarea unor bacterii. Caracterele
morfologice i tinctoriale ncadreaz bacteriile ntr-unul din grupurile majore stabilind
conduita diagnosticului bacteriologic. Elementele morfologice importante n identificarea
unei bacterii sunt: dimensiunea, forma, aezarea, prezena unor structuri speciale ca, de pild,
endospori, flageli, capsul sau incluzii intracelulare.
Microscopul cu cmp luminos. Acesta are 2 sisteme de lentile care mresc imaginea
obiectului studiat: lentilele obiectivului i lentilele ocularelor. n mod obinuit se folosesc 3
obiective: un obiectiv care mrete de 10x i care se folosete pentru obinerea unei imagini
22

de ansamblu a preparatului examinat, un obiectiv ce mrete de 40x, cu care se examineaz
microorganisme mai mari ca, de pild fungi, parazii i n fine obiectivul cu imersie care
amplific imaginea de 90 sau 100x i cu care se examineaz bacteriile. Imaginea mai este
amplificat nc de 7 sau 10 ori de lentilele ocularelor. Puterea de rezoluie (distana cea mai
mic ntre 2 puncte ce poate fi perceput) a unui microscop fotonic este de 0,2. La
microscopul cu cmp luminos se examineaz preparatele colorate, dar uneori i preparate
native.
Microscopul cu fond ntunecat. Are un condensator special, cardioid, care permite
ptrunderea luminii numai de la periferia obiectivului. La acest tip de microscop se
examineaz preparatele native, ntre lam i lamel, efectuate direct dintr-un produs, n care
se caut bacterii a cror lime nu depete 0,1-0,2 (ca, de exemplu, evidenierea
treponemelor din ancrul sifilitic), sau dintr-un mediu de cultur lichid, n care se urmrete
dezvoltarea unei culturi (Leptospira etc.).
Microscopul cu contrast de faz se folosete tot la examinarea preparatelor native. El
are un sistem de filtre care permit sesizarea diferenelor de faz a luminii cnd aceasta trece
prin obiecte de densitate diferit. Microorganismele examinate la acest microscop au aspect
tridimensional.
Microscopul cu raze UV. Unii compui ca, de exemplu, fluorocromii sunt capabili s
absoarb lumina ultraviolet i s emint o energie cu lungime de und superioar.
Preparatele de examinat sunt colorate n prealabil cu un compus fluorescent ca, cum este,
izotiocianatul de fluorescein iar apoi sunt examinate. Particulele colorate vor apare
luminoase, fluorescente pe cmpul ntunecat al microscopului.


Figura 3.10. Aplicaiile microscopiei n microbiologie.

Microscopul electronic. Lumina este nlocuit cu un fascicul de electroni. n
microscopia electronic cu transmisie, electronii trec direct prin preparat, iar n microscopia
prin baleiaj ei trec dintr-un anumit unghi prin preparat, astfel nct imaginea ce apare pe ecran
este tridimensional.
Examinarea morfologiei bacteriene se efectueaz pe diverse preparate microscopice.
Efectuarea frotiurilor fixate i colorate este o metod de rutin n laboratorul de bacteriologie.
Frotiurile se pot colora simplu cu un singur colorant, elementele preparatului avnd toate
23

aceeai culoare, eventual de intensitate diferit, sau difereniat cu mai muli colorani,
bacteriile colorndu-se diferit n funcie de afinitatea lor tinctorial.
Dup efectuarea frotiurilor, acestea se usuc la temperatura camerei i se fixeaz cel mai des
prin cldur, trecnd frotiul de 2-3 ori prin flacr. n timpul fixrii, formele vegetative ale
bacteriilor sunt omorte i devin permeabile pentru colorani. Fixarea chimic (cu alcool
metilic, aceton, May-Grnwald, acid osmic etc.) se utilizeaz mai ales cnd preparatele sunt
seciuni de esuturi sau frotiuri de snge, deoarece protejeaz celulele din produs de
degradare.
Coloraiile simple folosesc soluii apoase a unui colorant bazic ca, de exemplu, albastru de
metilen, violet de metil, fuxin bazic etc. Cationii coloranilor bazici se combin cu anionii
protoplastului bacterian i cu fosfaii acizilor nucleici. Dup colorare, frotiurile se spal
pentru ndeprtarea excesului de colorant. Coloranii acizi nu coloreaz bacterii dect la un
pH foarte acid, dar pot fi folosii pentru coloraii negative. Precizm c peretele celular nu se
coloreaz n mod obinuit, structura colorat observabil la microscop fiind protoplastul
bacterian
Tabelul 3.1. Exemple de bacterii gram-pozitive de interes medical

FORMA BACTERIILOR FAMILIA/GRUPUL GENUL
Coci Micrococaceae Staphylococcus Micrococcus
Streptococcaceae Streptococcus Enterococcus
Diverse Leuconostoc
Peptostreptococcus
Bacili Sporulai Bacillus Clostridium
Actinomycetaceae Actinomyces
Diverse Proprionibacterium
Corynebacterium
Listeria

Tabelul 3.2. Exemple de bacterii gram-negative de interes medical
FORMA BACTERIILOR FAMILIA/GRUPUL GENUL
Coci Neisseriaceae Neisseria
Moraxellaceae Moraxella
Bacili Enterobacteriaceae Escherichia
Salmonella
Shigella
Klebsiella
Enterobacter
Proteus
Morganella
Yersinia
Vibrionaceae Vibrio
Spirillaceae Campylobacter
24

Helicobacter
Pseudomonas Pseudomonas
Pasteurellaceae Pasteurella
Haemophilus
Diverse Brucella
Bordetella
Legionellaceae Legionella
Bacteroides Bacteroides
Prevotella
Porphyromonas

Coloraia negativ este o metod rapid i simpl de studiu a morfologiei bacteriene.
Bacteriile se amestec cu colorantul (tu de China) i se ntind ca un film pe lam. Bacteriile
apar incolore pe fondul colorat al preparatului.
Impregnarea argentic se utilizeaz pentru colorarea spirochetelor, mai ales cnd se urmrete
evidenierea lor n esuturi. n aceast coloraie, spirochetele se coloreaz n brun-negru pe
fondul galben al preparatului.
Coloraiile difereniale sunt cele mai importante n laboratorul de bacteriologie. Cel mai des
folosit este coloraia gram, introdus de studentul danez Christian Gram la sfritul secolului
XIX. Dup cum apar bacteriile n aceast coloraie ele se mpart n gram pozitive i gram
negative.
Coloraia gram const n colorarea iniial a bacteriilor cu cristal-violet sau violet de
geniana. Mordansarea se face cu lugol. Urmeaz decolorarea n urma creia unele bacterii,
cele gram pozitive, pstreaz colorantul violet, iar altele, cele gram-negative, vor fi
decolorate cu un amestec de alcool-aceton. Acestea din urm se vor recolora cu fuxin
bazic. Bacteriile gram-pozitive vor aprea, deci, de culoare violet iar cele gram negative
roii. Proprietatea bacteriilor de a se colora diferit prin aceast coloraie exprim diferene de
structur a peretelui celular. Mecanismul care st la baza acestei coloraii nu este nc
elucidat..
Tabelul 3.3. Bacterii de interes medical ce nu se coloreaz gram

FAMILIA / ORDINUL GENUL COLORAII
Spirochaetales Treponema
Borrelia
Leptospira
Impregnare argentic
Giemsa,
Imunofluorescen,
Chlamydiaceae Chlamydia Coloraie cu iod Giemsa,
Imunofluorescen,
Mycopasmataceae Mycoplasma
Ureaplasma

Rickettsiaceae Rickettsia
Coxiella
Giemsa, gimenez,
Albastru de Victoria

25

Tabelul 3.4. Bacterii acidoalcoolorezistente de interes medical

FAMILIA GENUL SPECIA
Mycobacteriaceae Mycobacterium M. tuberculosis
M. leprae

26

FIZIOLGIA BACTERIAN
COMPOZIIA CHIMIC A BACTERIILOR
Compoziia chimic a bacteriilor este asemntoare tuturor organismelor vii. Ea cuprinde n
jur de 20 de elemente ale sistemului periodic, care se pot mpri n trei grupe:
elementele de baz, H, C, N, O, P i Sulf, care intr n compoziia substanelor cu rol
primordial structural i energetic a oricrei celule vii (proteine, lipide i zaharide),

Tabelul 4.1. Compoziia molecular medie a unei celule bacteriene
Substane % din
greutatea
total
% din greutatea
uscat
greutatea
molecular
numrul de
molecule la o
celul
Mas total
(5x10-13g)
100 - - -
Ap 80 0 101 1 1010
Substane
anorganice
1,3 6,5 101 - 102 108
Substane organice
cu molecul mic
1,3 6,5 102 - 103 107
Lipide 2 10 103 108
Polizaharide 2 10 104 - 106 107
Proteine 10 50 104 - 106 106 - 107
ARN 3 15 104 - 106 107
ADN 0,4 2 109 - 1010 101

elemente n concentraie sub 1% i mai ales sub forma ionizat cum sunt K+, Na+, Mg2+,
Cl-, Ca2+ etc. cu rol funcional n procesele de activare a unor enzime (Mg), n
permeabilitatea sistemului membranar al celulei bacteriene (Ca), n vscozitatea citoplasmei
etc.
oligoelementele, cum sunt Mn2+, Fe2+, Fe3+, Co2+, Cu2+, MoO42+, SeO32-, WO42- etc.,
ce se gsesc n celula bacterian n cantiti foarte reduse, sub 0,001%, i care intr n
structura unor coenzime absolut necesare desfurrii metabolismului,
coninutul n ap al bacteriilor se situeaz n medie la 85% din masa celular. Apa este faza
n care se solubilizeaz, sunt transportai electroliii i substanele neelectrolitice i mediul n
care se petrec toate reaciile metabolice. Ea particip la multe din aceste reacii (hidroliz,
reacii anabolice etc.) i formeaz mpreun cu substanele anorganice i macormoleculele
organice coninute o unitate fizico-chimic i biologic.
NUTRIIA BACTERIAN
Nutriia bacterian reprezint totalitatea proceselor prin care bacteriile i procur din mediul
nconjurtor substanele necesare supravieuirii, creterii i nmulirii , iar respiraia
bacterian modalitatea de a-i produce energia necesar activitii metabolice.
Sursa de energie. n funcie de sursa de energie pe care o folosesc, bacteriile se mpart n:
27

fotosintetizante, care utilizeaz energia luminoas pentru sinteza compuilor proprii i
chimiosintetizante, care si procur energia prin reacii de oxido-reducere a unor
substane. Bacteriile care oxideaz substanele anorganice se numesc lithotrofe, iar cele care
oxideaz substane organice chemoorganotrofe.
Sursa de carbon. Dup sursa de carbon, bacteriile se clasific n:
autotrofe, care sintetizeaz compui organici pornind de la substane anorganice, sursa
de carbon fiind CO2,
mixotrofe, care folosesc ca surs de carbon att substane organice ct i CO2,
heterotrofe, care utilizeaz ca surs de carbon numai substane organice.
Sursa de azot a bacteriilor de interes medical o constituie n general aminoacizii, dar unele
bacterii utilizeaz i srurile de amoniu (Escherichia coli, Salmonella etc.).
Necesarul de oxigen pentru dezvoltarea bacteriilor este variabil i va fi discutat n cadrul
reaciilor de energogenez.
Necesitile nutritive ale bacteriilor de interes medical
Bacteriile de interes medical sunt, cu foarte puine excepii, chimiosintetizante heterotrofe.
Ele au nevoie pentru multiplicare de substane organice, diveri ioni, oligoelemente i factori
de cretere (vitaminele B1, B2, acid pantotenic, biotin, lactoflavin acid folic etc.).
Necesarul de substane organice este foarte diferit de la o specie bacterian la alta. Astfel, de
pild, Escherichia coli cultiv foarte bine pe medii care au n compoziie o singur surs
organic de carbon (glucoz, acetat sau succinat), o surs de azot [(NH4)2SO4)], ioni
eseniali dezvoltrii (K+, Mg2+ etc.) i oligoelemente (Cl-, Co, Cu, Mo, Ni, Se, Zn etc.). Alte
bacterii au nevoie de substane organice ca aminoacizi, purine, pirimidine, vitamine, factori
de cretere etc. pe care nu le pot sintetiza, deoarece sunt adaptate la habitatul lor natural
(organismul uman sau animal), care le asigur aceste substane.
Cu ct necesitile nutritive bacteriilor sunt mai mari cu att dependena lor fa de o gazd
natural crete. Astfel, o categorie aparte n cadrul bacteriilor heterotrofe sunt bacteriile
paratrofe. Ele sunt lipsite de unele enzime (genul Rickettsia) sau nu sunt capabile de
energogenez (genul Chlamydia) i nu se pot nmuli dect n celule vii, avnd deci un habitat
natural obligator intracelular.
Necesitile nutritive difer chiar i n cadrul aceleiai specii. Astfel, prin mutaii sau alte
mecansime ale variabilitii genetice, unele tulpini pierd proprietatea de a sintetiza un compus
necesar dezvoltrii, nmulirea depinznd de prezena acestuia n mediu. Astfel de tulpini se
numesc auxotrofe, iar tulpinile originale din care au provenit se numesc prototrofe.
METABOLISMUL BACTERIAN
Metabolismul bacterian cuprinde totalitatea reaciilor biochimice care au loc n celula
bacterian, precum i cele care sunt determinate de microorganism n mediul nconjurtor.
Ele au ca scop final creterea i multiplicarea bacteriei i se mpart n:
reacii catabolice, prin care se fragmenteaz substratul nutritiv n uniti componente
cu eliberare de energie,
reacii metabolice intermediare, prin care energia rezultat din primele reacii este
nmagazinat n compui macroergici i
reaciile anabolice, prin care celula bacterian i sintetizez substanele propri, cu
consum energetic.
28

Toate aceste reacii sunt catalizate de enzime a cror activitate este controlat genetic astfel
nct intensitatea lor s fie ct mai eficient adaptat condiiilor n care bacteria crete i se
nmulete.
Reaciile catabolice
Bacteriile heterotrofe catabolizeaz substane organice din mediul nconjurtor printr-o
succesiune de reacii enzimatice, care parcurg n principiu 4 faze:
descompunerea extracelular a substanelor organice n uniti mai mici sub aciunea unor
exoenzime. La bacteriile care au ca habitat omul, macromoleculele din mediul ambiant sunt
reprezentate de proteine, acizi nucleici, colagen, mucopolizaharide, lipide etc. Pentru
scindarea acestor substane bacteriile invazive secret exoenzime hidrolitice, care pot fi n
acelai timp i factori de patogenitate.
absorbia substanelor din mediul extern se face prin 3 mecanisme:
- pasiv n funcie de diferena de concentraie a unei substane n interiorul i exteriorul
celulei ca, de exemplu, n cazul glicerolului;
- activ prin fosforilarea, cu consum energetic, a substanei ce urmeaz a fi absorbit ca,
de pild, glucoza care se absoarbe numai sub form de glucozo-6-fosfat;
- activ cu consum energetic prin legarea substanelor de proteinele de transport numite
permeaze. Printr-un astfel de mecanism se absorb substanele pe care celula bacterian le
depoziteaz n concentraii foarte mari fa de concentraia din mediu. Astfel dac celula
bacterian este lipsit de permeaza pentru lactoz, aceasta nu poate fi absorbit nici dac
bacteria, complet lipsit de lactoz, se afl ntr-o soluie cu coninut foarte mare de lactoz.

Figura 4.1. Schema general a metabolismului bacterian.
O meniune special o merit transportul transmembranar de fier, necesar bacteriilor n
multiplicare. n esuturile organismului fierul nu se gsete n stare liber ci legat de proteine,
cum sunt transferina i siderofilina. Bacteriile au dezvoltat mecanisme ingenioase de
absorbie a fierului prin secreia sideroforilor, substane chelatoare de fier care scot fierul din
combinaiile sale fcndu-l absorbabil.
29

pregtirea substanelor pentru oxidare prin reacii de decarboxilare, dezaminare, fosforilare
etc. i
oxidarea substanelor cu eliberare de energie sau respiraia bacterian. Oxidarea se definete
ca o pierdere de electroni sau de ioni de hidrogen. Substana care se va oxida este donorul, iar
cea care se reduce, acceptorul de hidrogen. Deci, n urma oxidrii va rezulta o substan
oxidat, o substan redus i o anumit cantitate de energie liber. Substana energogenetic
de baz este la multe bacterii glucoza, monozaharid ce poate fi metabolizat pe mai multe ci
n funcie de performanele oxidative ale bacteriilor.
La bacterii deosebim n funcie de acceptorul final de hidrogen, 3 tipuri de oxidaie:
respiraia, n care acceptorul final de hidrogen este oxigenul atmosferic, fermentaia, n care
acceptorul final de hidrogen este o substan organic, i respiraia anaerob, n care
acceptorul final de hidrogen este oxigenul prezent ntr-o sare anorganic (nitrat sau sulfat)
care se va reduce. Subliniem c termenul de respiraie anaerob pe care l folosim, noi
bacteriologii, pentru a desemna bacteriile strict anaerobe se refer de fapt la fermentaie n
absena oxigenului.
Respiraia este legat de sistemul membranar al bacteriilor (membrana citoplasmatic,
mezozomi). Cantitatea de energie eliberat prin respiraie este mai mare dect cea eliberat
prin fermentaie, deoarece oxidrii de substrat i urmeaz oxidaia de transfer, n care
electronii sunt transportai pe lanul respirator (citocromi, flavoproteine, ubichinone) pn la
acceptorul final de hidrogen (oxigenul atmosferic) i fosforilarea oxidativ. Astfel, la
degradarea complet a unei molecule de glucoz bacteriile obin 38 de molecule de ATP.
Exist i posibilitatea degradrii incomplete datorit lipsei unor enzime oxidative, cantitatea
de energie fiind mai mic.
Fermentaia folosete compui organici ca donori i acceptori de electroni i se produce pe
urmtoarele ci metabolice:
glicoliza pe calea Emden Meyerhof care transform o molecul de glucoz n 2 molecule de
acid piruvic, energia rezultat fiind nmagazinat n 2 molecule de ATP,
fermentaia secundar a piruvatului care poate fi lactic, alcoolic, propionic, butiric,
mixt (lactic, formic) n funcie de produii de metabolism rezultai,
ci alternative de metabolizare a glucozei cum sunt untul fosfailor i calea Entner-
Doudoroff, aceasta din urm specific genului Pseudomonas.
Din punct de vedere practic, bacteriile se mpart, dup necesarul de oxigen, n:
bacterii strict aerobe, care se dezvolt numai n prezena oxigenului atmosferic, folosind
exclusiv respiraia aerob i deci oxigenul ca acceptor final de hidrogen. Astfel de bacterii
sunt, de exemplu, Pseudomonas aeruginosa, Corynebacterium diphteriae, Mycobacterium
tuberculosis etc.
bacterii strict anaerobe, care nu se dezvolt dect n absena oxigenului, prezena lui fiind
foarte toxic culturii chiar la o presiune de numai 10-5 atm. Aceste bacterii folosesc ca reacie
energogenetic exclusiv fermentaia, n condiii anaerobe, deci oxidaia de substrat. Dac
fermentaia se produce n prezena oxigenului, se formeaz radicali de superoxid (O2-) foarte
toxici. Bacteriile strict anaerobe, spre deosebire de cele aerobe, sunt lipsite de
superoxiddismutaz care transform radicalul superoxid n ap oxigenat i catalaz care
descompune apa oxigenat. Exemple de bacterii strict anaerobe sunt cele din genul
Clostridium, Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium etc.
bacterii facultativ anaerobe, care se pot dezvolta att n prezena ct i n absena oxigenului
atmosferic. Ele utilizeaz ca reacii energogenetice respiraia aerob, fermentaia iar unele
chiar i respiraia anaerob. Majoritatea speciilor de interes medical sunt facultativ anaerobe
(de pild, enterobacteriile).
30

bacterii anaerobe aerotolerante folosesc numai fermentaia n prezena aerului atmosferic,
fr participarea oxigenului la reaciile energogenetice. Ele tolereaz oxigenul n mediu fie
pentru c au n echipamentul enzimatic superoxiddismutaz i catalaz, fie c enzimele exist
n mediul de cultur. Astfel, bacteriile din genul Streptococcus sunt lipsite de catalaz, dar
pot fi cultivate n condiii de aerobioz pe medii cu snge, care suplinete catalaza.
bacterii microaerofile folosesc respiraia i fermentaia, dar necesit o concentraie mai mare
de bioxid de carbon dect cea din atmosfer pentru reacii de carboxilare. Astfel, unele specii,
ca cele din genurile Neisseria, Brucella, Campylobacter, necesit concentraii de bioxid de
carbon de 6-10%.
Reaciile energogenetice ale bacteriilor sunt n principiu aceleai ca i la celulele eucariote, i
anume: glicoliza pe calea Embden-Mayerhoff (n condiii de aerobioz sau anaerobioz),
calea pentozofosfailor, (n care se produce NADPH2 important donor de ioni de H pentru
reaciile anabolice), beta-oxidaia acizilor grai, ciclul acizilor tricarboxilici, dezaminarea
oxidativ i transaminarea aminoacizilor, oxidarea de substrat, fosforilarea oxidativ.
Liniile metabolice folosite de diferitele specii bacteriene variaz foarte mult, n funcie de
substratul care este prezent n mediul n care bacteria se nmulete i de dotarea genetic a
bacteriei. Astfel, specia Bacteroides fastidiosus poate cataboliza doar un singur substrat -
acidul uric, sau produii de degradare ai acestuia pe cnd Pseudomonas multivorans poate
folosi peste 100 de substraturi drept surs de carbon.
Cunoaterea preteniilor nutritive ale bacteriilor este esenial pentru prepararea unor medii
corespunztoare cultivrii lor, iar cunoaterea performanelor metabolice ale
microorganismelor este important prin faptul c, alturi de morfologie, constituie criteriile
de baz n identificarea lor.
Reacii intermediare
Energia rezultat n urma oxidrii va fi transformat n energie chimic, fie sub forma unor
tioesteri, ca de exemplu Acetyl~SCoA, fie sub form de ATP. Energia astfel stocat va fi
eliberat la nevoie pentru amorsarea unor reacii catabolice sau pentru sinteza unor molecule
cu rol structural sau funcional. Unii din produii intermediari rezultai pe parcursul reaciilor
de oxidare pot fi utilizai de bacterie la sinteza unor substane proprii.
Reacii anabolice
Sunt reacii prin care celula bacterian i sintetizeaz din compui simpli, rezultai n timpul
reaciilor catabolice sau intermediare i cu consum energetic substane cu rol structural
(macromolecule) i funcional (enzime). La acestea se adaug sinteza unor substane cu rol de
rezerv energetic (incluzii de polizaharide i lipide).
Din punct de vedere al biosintezelor, bacteriile au posibliti practic nelimitate. Este suficient
s ne gndim la complexitatea structurilor membranare ale bacteriilor i la structura peretelui
celular, componente pe care celula bacterian i le sintetizeaz, uneori, numai dintr-un singur
compus organic prezent n mediu.
Posibilitatea reaciilor de biosintez difer de la specie la specie. Astfel, unele bacterii sunt
capabile s sintetizeze toi aminoacizii, nucleotidele, monozaharidele i coenzimele din
substane simple, rezultate n cursul reaciilor catabolice i intermediare ale metabolismului.
Alte bacterii ns sunt lipsite de unele linii anabolice, fiind dependente de aportul din exterior
al substanelor ce se sintetizeaza pe aceste ci. Bacteriile de interes medical se situeaz ntre
cele dou extreme.
Performanele biosintetice ale microorganismelor sunt exploatate n diferitele ramuri ale
industriei, n care obinerea pe calea sintezei chimice a unor produi ar fi imposibil sau
nerentabil. Astfel, industria farmaceutic obine antibioticele, unii aminoacizi i vitamine
31

prin activitatea dirijat a microorganismelor, industria alimentar brnzeturile i buturile
alcoolice etc. Unele bacterii sunt capabile s metabolizeze hidrocarburi alifatice, ele fiind
sperana decontaminrii apelor poluate cu iei.
Reglarea metabolismului are ca scop adaptarea economic a reaciilor i a intensitii lor la
substratul nutritiv existent n mediul n care triete bacteria, astfel nct ele s asigure
creterea i nmulirea acesteia. Reglarea se efectueaz prin modularea activitii enzimelor
bacteriene, a cror structur alosteric favorizeaz inactivarea lor de ctre produsul final a
crui formare au catalizat-o.
CRETEREA I NMULIREA BACTERIILOR
Creterea i nmulirea bacteriilor este rezultatul nutriiei i al metabolismului bacterian.
Viteza de multiplicare a bacteriilor este foarte mare. S-a fcut un calcul ipotetic din care
rezult c, dac la fiecare 20' are loc o diviziune, dintr-o celul bacterian cultivat ntr-un
mediu nelimitat ar lua natere ntr-o zi 1x1021 celule, ceea ce ar corespunde unei mase de
4.000 de tone. n realitate, o asemenea rat de nmulire a bacteriilor nu este posibil, fiind
mpiedicat de epuizarea substanelor nutritive i a factorilor de cretere, pe de o parte, i de
acumularea metaboliilor toxici, pe de alt parte.
Bacteriile se divid n marea lor majoritate prin diviziune binar, cu excepia chlamydiilor,
care au un ciclu de dezvoltare unic n lumea bacterian. Diviziunea este precedat de
creterea n volum a celulei bacteriene, dedublarea materialului nuclear i a componentelor
citoplasmatice, ceea ce duce la un dezacord ntre masa i volumul celulei bacteriene. Cnd
acest dezacord atinge un punct critic se produce diviziunea celulei parentale n dou celule
fiice, identice cu celula din care au provenit.
La bacili diviziunea se face ntotdeauna dup un plan perpendicular pe lungimea bacteriilor,
n timp ce la coci planurile de diviziune sunt variate. Celulele fiice se pot separa imediat dup
diviziune sau pot rmne legate una de cealalt, rezultnd o aezare caracteristic, util n
recunoaterea bacteriilor ca, de exemplu, a celor din genul Staphylococcus, Streptococcus,
Neisseria etc.
Diviziunea bacteriilor gram pozitive are loc prin formarea unui sept ntre cele dou celule
fiice, pe cnd bacteriile gram negative se divid prin strangulare direct.
Curba de cretere i nmulire a bacteriilor ntr-un mediu limitat
Dac se introduce un inocul (un numr redus) de celule bacteriene dintr-o cultur pur ntr-un
mediu de cultur proaspt i se incubeaz ntr-o atmosfer prielnic speciei respective,
bacteriile vor crete i se vor nmuli, iar timpul care trece de la o diviziune celular la
urmtoarea se numete timp de generaie. Dac se apreciaz numrul de celule bacteriene la
intervale diferite de timp de la momentul inoculrii i reprezentm grafic raportul care se
stabilete ntre acest numr i timpul care s-a scurs, vom obine dou curbe caracteristice n
funcie de celulele bacteriene luate n calcul.

32


Figura 4.2. Reprezentarea grafic a nmulirii celulelor bacteriene.

o numrtoare total a germenilor ce cuprinde toate celulele bacteriene care au luat natere,
att cele vii ct i cele moarte, sau
o numrtoare a germenilor viabili, cu o deosebit importan practic i care apreciaz
numrul de microbi capabili s se nmuleasc n continuare.
Curba de multiplicare a bacteriilor n mediu limitat cuprinde urmtoarele faze:
Faza de lag. n aceast perioad nu se remarc o cretere a numrului de celule, cu toate c
ele cresc n volum i dovedesc o activitate metabolic intens. Durata acestei faze variaz n
funcie de specie, condiiile de mediu, de numrul de celule din inocul i este intervalul de
timp n care celulele se adapteaz noilor condiii de mediu. Astfel, dac mediul n care sunt
inoculate celulele bacteriene difer de mediul din care au provenit, ele vor trebui s-i
readapteze echipamentul enzimatic noilor condiii, renunnd la secreia unor enzime pe care
le vor nlocui cu altele. n aceast faz se pot induce mutaii sau se produce selecia unor
mutante capabile s creasc sau s se nmuleasc pe noul mediu. Sensibilitatea bacteriilor
fa de chimioterapice este crescut. La majoritatea bacteriilor de interes medical, durata ei
este n jur de 1/2 de or, iar la formele sporulate 3-4 ore.


Figura 4.3. Curba de multiplicare a bacteriilor ntr-un mediu limitat.

Faza exponenial sau logaritmic este precedat de o faz de accelerare n care celulele
bacteriene ncep s se nmuleasc din ce n ce mai repede. Celulele se divid constant prin
33

fisiune binar, deci n progresie logaritmic, raportul dintre numrul bacteriilor i timp fiind
liniar. Aceast rat intens de multiplicare este posibil doar in vitro, in vivo ea fiind mult
frnat de mecanismele aprrii antiinfecioase. Durata acestei perioade este dependent de
aceleai condiii de mediu ca i faza precedent dar i de specie. Astfel E.coli are un timp de
generaie de aproximativ 10 minute iar Mycobacterium tuberculosis peste 25 ore.
Sensibilitatea la antibiotice a microbilor rmne crescut. Compoziia mediului de cultur se
modific pn la sfritul acestei faze pe de o parte datorit consumului principiilor nutritivi
iar pe de alt parte, acumulrii de metabolii. Faza de nmulire logaritmic este urmat de o
perioad de ncetinire dup care se instaleaz.
Faza staionar. Multiplicarea bacteriilor n progresie logaritmic nu mai este posibil, rata
de nmulire scade treptat pn cnd bacteriile trec n faza staionar. Numrul bacteriilor
rmne constant, de unde s-ar putea deduce c numrul bacteriilor care se nasc este egal cu
cel al bacteriilor care mor. n realitate, ns, numrul bacteriilor rmne constant deoarece ele
nici nu se nmulesc i nici nu mor. n aceast faz, celulele nu mai cresc, ci are loc o
activitate metabolic endogen, prin care celula i sintetizeaz rezerve de energie i produi
intermediari necesari meninerii n viaa n noile condiii. ncetarea multiplicrii n faza
staionar se datoreaz n principal epuizrii unui factor nutritiv esenial din mediu, numit
factor limitant i acumulrii unor produi toxici cum sunt, de pild, acizii organici care, prin
scderea pH-ul mediului, limiteaz multiplicarea bacteriilor. n acest faz scade
sensibilitatea tulpinilor la chimioterapice.
Dat fiind schimbarea condiiilor de via ale bacteriilor, acestea vor prezenta modificri ale
morfologiei i fiziologiei lor, att unele fa de celelalte, ct i comparativ cu faza
exponenial. Astfel, bacteriile gram-pozitive nu mai rein cristalul violet i apar gram-
negative pe frotiurile colorate.
n faza staionar celulele conin cantiti mari de polizaharide i lipide, substane pe care nu
le gsim n faza de multiplicare exponenial. La nceputul fazei staionare, unele specii
bacteriene produc anumii metabolii secundari cu distribuie taxonomic foarte riguroas.
Acet metabolii includ antibiotice, colicine i exotoxine.
Iniierea sporogenezei la bacteriile sporulate se petrece la sfritul fazei exponeniale sau la
nceputul fazei staionare. Durata fazei staionare este n general de cteva ore.
Faza de declin care dureaz mai multe zile se caracterizeaz prin scderea numrului de
bacterii, remarcndu-se o divergen ntre curba care ilustreaz numrul total de bacterii i
cea care reprezint bacteriile vii. Ea se datoreaz scderii substanelor nutritive i acumulrii
de substane toxice pentru bacterii. La aceti factori se adaug la unele specii bacteriene
proprietatea de autoliz cu eliberarea coninutului citoplasmatic n mediu. Modificrile
morfologice sunt pregnante att n ceea ce privete forma, dimensiunile ct i caracterele
tinctoriale. n timp mor toate bacteriile, cu excepia celor sporulate, i cultura se
autosterilizeaz.
Cultivarea bacteriilor n mediu limitat este utilizat n laboratoarele de bacteriologie
medical, pentru stabilirea diagnosticului unei infecii bacteriene, caracterele culturale sunt
deosebit de importante n identificarea bacteriilor.
Curba de cretere i nmulire a bacteriilor n culturi continui
Cnd se urmrete obinerea unei mase mari microbiene sau a unor produi bacterieni pentru
cercetare, preparare de vaccinuri, diversele industrii (farmaceutic, alimentar etc.),
cultivarea bacteriilor se face n sisteme deschise, n care mediul de cultur este permanent
nlocuit cu mediu proaspt, ndeprtndu-se n acelai timp masa nou format de bacterii.
Bacteriile vor fi mereu n faz logaritmic, curba de nmulire avnd un aspect liniar. n acest
34

fel se obin culturile continui, pentru realizarea crora este necesar un chimiostat sau un
turbidistat.
nmulirea bacteriilor n organism
Urmrind curba de multiplicare a bacteriilor ntr-un mediu limitat, putem deduce c dup
ptrunderea n organism a unui numr mic de microbi, se poate produce o infecie. Un astfel
de exemplu este meningita, n care meningococul se nmulete foarte rapid punnd viaa
pacientului n pericol dac nu se intervine cu un tratament antiinfecios.

Tabelul 4.2. Timpul de generaie a unor bacterii in vivo i in vitro

Microorganism in vitro in vivo
E. coli i Staphylococcus 20-30 minute 4-6 ore
Salmonella typhimurium 30 minute 5-12 ore
Mycobacterium
tuberculosis
24 ore cteva zile
Mycobacterium leprae nu se cultiv 2 sptmni
Treponema pallidum nu se cultiv 30 de ore


Pe de alt parte, ns, nu toate bacteriile se divid repede. Baciul tuberculos, de pild, a crui
timp de generaie este de 24 de ore, se va nmuli lent i va produce o infecie cu evoluie
insidioas, cronic.
n organism, creterea i multiplicarea bacteriilor este diferit de multiplicarea in vitro, fiind
stresat de necesiti nutritive (prin competiie cu flora normal) i prin mecanismele de
aprare antiinfecioas. Condiiile pe care microorganismele le ntlnesc n organism le
selecteaz pe acelea care cresc n anumite limite de temperatur, osmolaritate i pH.
Agenii infecioi pe care i gsim numai n organismele infectate vor supravieui in vitro
numai n condiiile de temperatur, osmolaritate i pH apropiate organismului nostru.
Microorganismele care au i alt habitat dect omul cresc n limite mai largi, necesitile
nutritive ale unui microb reflectnd, n general, habitatul lui. Astfel, goncocii, care triesc
aproape numai n organismul uman, au pretenii nutritive mai mari necesitnd pentru
cultivarea in vitro medii speciale, pe cnd E. coli, Pseudomonas aeruginosa i alte specii,
care supravieuiesc frecvent n mediul nconjurtor, numai medii minimale.
La aspectele menionate se adaug habitatul n organism al agenilor infecioi. Astfel,
bacteriile cu habitat extracelular sunt expuse aciunii anticorpilor, complementului,
fagocitozei, spre deosebire de bacteriile ce se nmulesc intracelular i care sunt protejate de
aciunea acestor factorii i scap uneori supravegherii imunologice.
Bacteriile dezvolt mecanisme adaptative care s ocoleasc barierele ce se opun nmulirii
lor. Precizm c i n condiiile n care multiplicarea bacteriilor este oprit, simpla lor
prezen n organism poate constitui un permanent stimul imunologic cu urmri benefice sau
dimpotriv, duntoare.
INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU ASUPRA NMULIRII BACTERIILOR
Unii parametri fizici ai mediului nconjurtor influeneaz n mod hotrtor creterea i
multiplicarea microorganismelor.
35

Temperatura
Temperarura optim de dezvoltare a bacteriilor este cea a habitatului lor natural. n funcie de
aceast temperatur, bacteriile se mpart n psihrofile, care se nmulesc optim la 20C dar i
sub aceast temperatur, mezofile, cu temperatura optim cuprins ntre 20-40C i termofile,
care se nmulesc optim la peste 45C. Bacteriile mezofile sunt cele patogene deoarece se
nmulesc la temperatura organismului, fiind denumite i bacterii homeoterme.
Limitele de temperatur n care aceste bacterii pot s creasc sunt ns mai mari i variaz de
la specie la specie. Astfel, gonococul i meningococul nu suport variaii mai mari de 1-2C
fa de temperatura optim, spre deosebire de enterobacterii, care cresc n limite foarte largi.

Tabelul 4.3. Temperatura optim de multiplicare a bacteriilor
Bacterii Temperatura
minim C
Temperatura
optim C
Temperatura
maxim C
psihrofile 0 15-20 30
mesofile 2-25 18-45 30-50
termofile 25-45 peste 55 60 > 100

Microorganismele sunt sensibile la temperaturile ridicate, aplicaia practic a acestui aspect
fiind sterilizarea.
Temperaturile moderat sczute, ca, de pild, cea de +4oC din frigidere, nu distrug bacteriile,
dar opresc n general nmulirea lor prelungindu-le viabilitatea. Din acest motiv, majoritatea
produselor biologice sau patologice destinate examenului bacteriologic se pstreaz n aceste
condiii. Totui, exist tulpini microbiene care se nmulesc i la temperatura frigiderului ca,
de exemplu, tulpinile criogene de Pseudomonas aeruginosa, ce se nmulesc la 0oC i tulpini
din familia Enterobacteriaceae (E.coli) care se n nmulesc la +5oC. Acest aspect trebuie luat
n calcul de ctre medicul bacteriolog, mai ales acolo unde implicaia etiologic a unui
germene ntr-o infecie se bazeaz pe criteriul numeric.
Congelarea. Dac o suspensie bacterian este supus ngheului la temperaturi nu prea mici
fa de 0oC, cristalizarea apei determin formarea unor spaii ce conin soluii concentrate de
sruri care nu cristalizeaz dect la temperaturi mult mai joase (-20C pentru NaCl de
exemplu), cnd soluiile devin saturate i pot cristaliza. Aceste concentraii ridicate de sruri
minerale, la care se adaug cristalele de ap, vor leza structurile bacteriene. Prin ngheare nu
vor fi omorte toate celulele unei suspensii, dar ngheul i dezgheul repetat scad foarte mult
numrul de bacterii viabile.
Conservarea prin congelare. Temperatura congelatoarelor casnice (-10C) nu este destul de
sczut pentru a permite conservarea bacteriilor. Temperatura optim este cea realizat de
CO2 (-78C) sau de azotul lichid (-180C). Conservarea bacteriilor, a virusurilor prin
congelare este favorizat de adaosul de glicerol sau dimethilsulfoxid. Aceti ageni chimici
induc o solidificare amorf, vitroas care nlocuiete solicificarea prin cristalizare.
pH-ul
Bacteriile se pot dezvolta n limite largi de pH, cele patogene pentru om dezvoltndu-se
optim la un pH de 7,2-7,4. Exist i excepii ca, de pild, bacteriile din genul Brucella care
cresc la un pH de 6,0 i vibrionul holeric la pH de 9,0. Lactobacilii, prezeni n flora vaginal
normal se dezvolt chiar i la un pH de 3,9.
36

Unele bacterii modific ele nsi prin procesele metabolice pH-ul mediului. Aceast
modificare poate opri nmulirea lor sau chiar distruge cultura. Din acest motiv, multe medii
au n compoziia lor soluii tampon care menin pH-ul n limite convenabile.
Modificarea de ctre o bacterie a pH-lui unui mediu poate avea valoare deosebit n
identificarea unui microb i poate fi sesizat prin adaugarea n mediu a unui indicator de pH.
Foarte multe bacterii se identific biochimic prin proprietatea lor de a fermenta diferite
zaharuri. Aceast capacitate se evideniaz tocmai prin nsmnarea unei bacterii pe mai
multe medii ce conin fiecare alt zahar i un indicator de pH. n cazul fermentrii, acidifierea
va determina schimbarea culorii mediului.
Umiditatea
Apa liber este absolut necesar creterii i multiplicrii microbilor. Necesarul de ap variaz
n funcie de specie. Astfel, datorit coninutului srac n ap a unor alimente cum sunt gemul
de fructe, pinea, unele sorturi de cacaval, arahidele etc., multiplicarea bacteriilor este
practic imposibil, n timp ce mucegaiurile se pot dezvolta foarte bine chiar i n aceste
condiii.
Pentru a aprecia umiditatea, se compar coninutul n ap a vaporilor deasupra apei curate,
care se noteaz cu 1, cu coninutul n vapori deasupra mediului de cultur. Bacteriile de
interes medical au nevoie de o umiditate de 0,98, pe cnd ciupercile cresc i la o umiditate de
0,8.
Prin liofilizare (desicare brusc la -78oC), care este o metod de conservare a microbilor, se
extrage practic ntreaga ap liber din celulele bacteriene, ceea ce are ca urmare creterea
stabilitii biopolimerilor i ncetarea metabolismului. Bacteriile liofiliizate se pstreaz ani
de zile.
Concentraia de bioxid de carbon
Cu toate c bacteriile de interes medical nu pot folosi bioxidul de carbon ca surs de carbon,
acesta este absolut necesar reaciilor de carboxilare n biosinteza unor substane propri celulei
bacteriene (aminoacizi, purine, pirmidine etc.). Necesarul de bioxid de carbon al bacteriilor
este diferit. Astfel, unele specii (Neisseria meningitidis, N. gonorrhoeae) sunt dependente de
prezena lui n concentraii ridicate pn la 10% n atmosfera n care se dezvolt, pe cnd
altele ca, de exemplu, S.aureus se dezvolt la concentraia obinuit de CO
2
din atmosfer
(0,03%), dar nu i ntr-o atmosfer complet lipsit de CO
2
.
Astzi, incubarea produselor patologice din care se urmrete izolarea bacteriilor se
efectueaz n termostate cu CO
2
(6%), deoarece dezvoltarea lor este superioar celei din
termostatele obinuite.
Ultrasunetele
Ultrasunetele cu o frecven peste 20.000 de cicli/s sunt bactericide. Bacteriile i virusurile
sunt distruse de ultrasunete ntr-un interval de o or. Ultrasonarea microorganismelor se
folosete mai puin pentru sterilizare, ct pentru a obine diferite componente bacteriene sau
virale, cum sunt: enzime, perei celulari, acizi nucleici bacterieni n scopul cercetrii acestora.
Presiunea hidrostatic
Bacteriile obinuite sunt rezistente la presiunea atmosferic. Formele vegetative sufer
alterri la 300 de atm i sunt omorte la 600 de atmosfere, presiune ntlnit n oceane la o
adncime de 6000m. Cultivarea bacteriilor la presiuni mari induce creterea lor filamentoas
sczndu-le capacitatea de diviziune.
37

Presiunea osmotic
Bacteriile se nmulesc optim pe medii izotonice, rezisten lor la variaiile presiunii osmotice
fiind incomparabil mai mare dect cea a celulelor organismelor superioare. Aceast rezisten
se datoreaz peretelui celular. Bacteriile din genul Mollicutes, lipsite de aciunea protectoare
a peretelui celular, sunt foarte sensibile la variaii mici ale presiunii osmotice.
ntr-un mediu puternic hiperton, bacteriile vor pierde apa din citoplasm i vor muri. Acest
fenomen se numete de plasmoliz.
Dac presiunea osmotic a mediului este foarte sczut, apa va ptrunde n celul, care se va
umfla devenind turgescent. Moartea bacteriei se produce prin plasmoptiz.
Creterea presiunii osmotice a unui mediu prin adaus de NaCl sau zaharuri st la baza
conservrii unor alimente.
Exist ns bacterii osmofile, dintre care cele halofile sunt capabile s se nmuleasc n
soluii hipersaline (bacteriile din genul Staphylococcus i Enterococcus). Pe baza acestei
proprieti se prepar unele medii de mbogire i selective aa cum este mediul
hiperclorurat Chapmann pentru stafilococi. Acesta conine 7,5g NaCl la 100 ml de mediu,
spre deosebire de mediile obinuite care conin doar 5g/l. Dintre bacteriile osmofile
menionm i pe cele zaharofile, care sunt capabile s se nmuleasc pe medii cu coninut
mare de glucide (6g%). Acest aspect este important pentru unele medicamente, ca de pild,
siropurile care, n ciuda coninutului ridicat de zaharoz, se pot altera n urma contaminrii cu
aceste bacterii.
Electricitatea
Electricitatea sub form de cureni galvanici, cureni de joas sau nalt frecven nu
afecteaz bacteriile. Dac ns curentul electric este trecut printr-un mediu lichid, bacteriile
pot fi afectate sub aciunea unor ioni sau produi chimici rezultai n urma electrolizei.
Radiaiile
Razele neionizante
Razele ultraviolete. Puterea bactericid a razelor luminoase devine perceptibil la o lungime
de und de 330nm, crescnd pe msur scderii lungimii de und a luminii UV. Timpul
necesar distrugerii microorganismelor depinde de intensitatea luminii, distana de sursa de
emisie i mediul n care se gsesc microorganismele. Mecanismul bactericid al razelor UV
const n inducerea formrii n celula bacterian a unor dimeri de timin care interfereaz
replicarea DNA. Alterrile altor elemente structurale bacteriene sunt neglijabile.
Fotoreactivarea. Modificrile induse n celulele bacteriene prin razele UV sunt reversibile,
eficiena sterilizrii prin aceste raze nefiind prea performant. Astfel, dac se expune o
cultur bacterian care a fost iradiat cu raze UV la lumin vizibil, o parte din dimerii de
timin se vor disocia i bacteriile aparent omorte i reiau activitatea metabolic i
nmulirea. Aceasta poate depi de sute de ori activitatea iniial a culturii neiradiate.
n scop practic lmpile cu vapori de mercur se folosesc pentru a reduce numrul de bacterii
existente n aer n slile de operaie, n laboratoare, n ncperi n care sunt adpostite animale
de exprien etc.
Efectul bactericid al razelor solare se datoreaz coninutului n raze UV (300-400nm). n
condiii naturale efectul bactericid al luminii solare este mai mare n rile sudice unde
coninutul n raze UV este mare. Semple i Greig au artat n India (1909) c bacilii tifici
expui pe lenjerie alb la soare sunt distrui n dou ore, pe cnd la ntuneric i pstreaz
viabiliatea peste 6 zile.
38

S-a observat ns c expunerea la lumina puternic solar poate omor bacteriile chiar cnd
radiaiile UV sunt ecranate, datorit sensibilitii la lumin a unor substane necesare
metabolismului bacterian cum sunt riboflavina i porfiriniele. Astfel, expunerea la lumina
solar a fiolelor n care se afl BCG1 va avea ca urmare pierderea viabilitii i deci a
eficienei vaccinului.
Sensibilizarea fotodinamic. Razele luminoase vizibile au o aciune bactericid slab, care
poate ns fi crescut pn la nivelul aciunii razelor UV dac sunt trecute prin colorani
fluoresceni ca, de pild, eozina, rou bengal etc.
Radiaiile ionizante
Mecanismul bactericid al acestor raze const n formarea n celul a unor radicali cu via
scurt i protoni. Aceti produi vor altera bazele azotate i legturile dintre ele. Efectul
bactericid al razelor ionizante depinde de cantitatea de energie absorbit, temperatur,
presiuea parial a oxigenului, coninutul n substane organice, prezena unor substane
protectoare ca alcoolii alifatici sau substane bogate n grupri sulfhidrilice, specia
microorganismului i coninutul n ap. Sporii sunt n general mai rezisteni dect formele
vegetative ale bacteriilor, excepie fiind o bacterie nesporulat, Micrococcus radiodurans,
care este cel mai rezistent microorganism la radiaii. El rezist la doze de 200 de ori mai mari
dect restul bacteriilor datorit faptului c este echipat cu mecanisme deosebit de eficiente de
reparare a alterrilor acizilor nucleici.
METODE DE CULTIVARE A BACTERIILOR
Cunoaterea necesitilor nutritive ale bacteriilor este foarte important n bacteriologia
medical, deoarece st la baza preparrii mediilor de cultur destinate izolrii diverselor
specii bacteriene din produsele biologice sau patologice.
La nceputurile dezvoltrii bacteriologiei, prepararea mediilor a fost artizanal, numeroi
bacteriologi intrnd n istoria microbiologiei prin mediile pe care le-au preparat i care le
poart i astzi numele. Astfel, amintim, de exemplu, mediul Loeffler pentru cultivarea
bacilului difteric, mediul Lwenstein-Jensen pentru bacilul lui Koch, mediul selectiv Wilson-
Blair, etc.
Prin cercetarea necesitilor nutritive ale diferitelor specii s-au realizat medii adecvate pentru
aproape toate bacteriile de interes medical, speciile necultivabile fiind foarte puine, ca de
pild, Mycobacterium leprae i unele spirochete printre care Treponema pallidum.
Cultivarea bacteriilor n scop diagnostic pune n esen dou probleme:
alegerea unui mediu de cultur optim, care s permit izolarea tuturor bacteriilor care
ar putea fi prezente n produsul de examinat i
obinerea bacteriilor n culturi pure, pentru a putea fi identificate.
Condiii generale pentru cultivarea bacteriilor
Un mediu de cultur uzual trebuie s conin ap, substane organice, minerale,
oligoelemente i factori de cretere. Pentru satisfacea acestor necesiti se ultilizeaz diferite
substraturi biologice nutritive complexe care au n compoziia lor aceste ingredinente. Astfel:
peptonele, care se obin prin hidroliza enzimatic sau acid a proteinelor de origine
animal (de exemplu fin de oase). Ele nu au o compoziie chimic foarte bine
definit, iar prin coninutul n peptide i aminoacizi constituie o surs universal de
azot, pentru toate bacteriile cultivabile, fiind folosite practic n prepararea tuturor
mediilor de cultur,
39

extractul de carne, ce se obine prin deshidratarea decoctului de carne de vit. Acesta
conine cantiti importante de creatin, xantin, hipoxantin, acid uric, acid adenilic,
glicocol, uree, glutamin ca surs de azot precum i glicogen, hexozofosfai, acid
lactic etc. ca surs de carbon,
extractul de drojdie, care se obine prin cultivarea controlat a drojdiilor i care
conine numeroase vitamine, mai ales cele din grupul B,
n afar de ingredientele mai sus menionate mai amintim:
clorura de sodiu, care se adaug la mediile uzuale ntr-o concentraie de 0,9%. Pentru
cultivarea bacteriilor halofile concentraie poate crete pn la 10%,
mono sau polizaharidele, unii alcooli (glicerin, manitol) pot nmbogi mediile,
deoarece constituie surse de carbon uor accesibile multor bacterii,
Cultivarea microbilor pe medii lichide. Mediile lichide se folosesc cel mai adesea pentru
nmulirea unor microbi care se gsesc n numr mic ntr-un anumit produs. Cel mai simplu
mediu folosit n laboratorul de bacteriologie este bulionul care se prepar din decoct de carne
de vac, pepton i clorur de sodiu. Cultivarea unui produs pe medii lichide are dezavantajul
c nu permite ns obinerea unei culturi pure.
Caracterele culturale ale microbilor pe medii lichide difer. Astfel, bacteriile aparinnd
familiei Enterobacteriaceae tulbur uniform mediul, altele, ca de pild bacteriile strict aerobe
(Pseudomonas, Nocardia) formeaz pelicule la suprafaa mediului. Altele formeaz agregate
care se dezvolt sub form de grunji ce se depun pe peretele eprubetei sau la fundul mediului
(Streptococcus). Unele bacterii secret n mediu pigmeni difuzibili ca de exemplu bacilul
piocianic (Ps.aeruginosa).
Cultivarea bacteriilor pe medii solide. Introducerea mediilor de cultur solide a nsemnat un
progres uria n tehnicile de diagnostic, deoarece permite dezvoltarea distinct a microbilor,
sub form de colonii izolate. O colonie bacterian este o micropopulaie ce rezult din
nmulirea unui singur microb pe un mediu, vizibil n general cu ochiul liber.

Figura 4.4. Caractere culturale ale bacteriilor pe medii solide.

Medii uzuale. Cel mai simplu mediu solid este geloza simpl, ce se obine prin adugarea la
bulion a unei substan gelificabile, care de regul este geloza, un polizaharid obinut din alga
marin agar-agar. La aceast mediu simplu se pot aduga diferite ingrediente (snge de oaie,
ser, ascit, extract de drojdie etc.) pentru a putea cultiva bacteriile pretenioase.
40

Caracterele culturale sunt foarte importante n identificarea microbilor. Ele se apreciaz fie cu
ochiul liber, fie cu ajutorul unei lupe. Elementele ce se descriu, n general, sunt dimensiunea,
forma, pigmentul, consistena, aderena la mediu, activitatea hemolitic i unele modificari pe
care microorganismele le produc n mediul respectiv.
Coloniile cu aspect neted, cu marginile regulate i care se suspend omogen n ser fiziologic
se numesc colonii de tip S (smooth), pe cnd coloniile aceleiai specii, cu suprafaa rugoas,
relief i margini neregulate i care aglutineaz sponatan n ser fiziologic - colonii de tip R
(rough). n general, cu unele excepii, coloniile S aparin tupinilor virulente, pe cnd cele R
sunt nevirulente.
Cultivarea microbilor pe medii solide permite, de asemenea, numrtoarea de germeni ntr-un
anumit produs. Acest aspect este deosebit de important deoarece n multe infecii criteriul de
implicare etiologic este numrul bacteriilor n produsul de examinat (infecii urinare).
Medii speciale. Exist situaii n care izolarea unui microb necesit medii deosebite care s
favorizeze selectarea lui din produse intens contaminate.
Mediile de mbogire sunt medii lichide care permit nmulirea preferenial a unui microb
dintr-un amestec. Astfel sunt mediile cu coninut mare de clorur de sodiu (1-10%) n care se
pot dezvolta numai bacterii halofile ca, de exemplu, stafilococul (mediul Chapmann lichid) i
enterococul. Unele medii de mbogire au ca factor electiv anumite substane, ca, de
exemplu, selenitul acid de sodiu, care permite dezvoltarea salmonelelor din materiile fecale.
Alte medii se bazeaz pe propietatea unor germeni de a se dezvolta la un pH mai acid sau mai
alcalin dect majoritatea speciilor bacteriene de interes medical. Astfel, vibrionul holeric se
dezvolt la un pH alcalin (9) iar brucelele la la un pH acid (6).
Medii selective. Dac un mediu de mbogire se solidific, rezult un mediu selectiv care are
avantajul obinerii microbilor sub form de colonii izolate. Datorit acestor medii, izolarea i
identificarea bacteriilor este astzi mult simplificat. Mediile selective, care se bazeaz pe
particularitile metabolice ale unor specii microbiene sau mai ales pe rezistena natural a
acestora la antibiotice, sunt utilizate n mod curent n laboratoarele de bacteriologie, deoarece
permit, practic, izolarea dintr-un amestec de microbi, a oricrui microb n cultur pur.
Mediile de diagnostic sunt medii de cultur care evideniaz anumite proprieti fiziologice i
caractere biochimice ale tulpinilor bacteriene pe baza crora acestea pot fi identificate. Astfel,
de exemplu, numeroase specii bacteriene se recunosc pe baza zaharurilor pe care le
fermenteaz. Mediile de diagnostic cu zaharuri conin zaharul de cercetat i un indicator de
pH. n cazul n care bacteria nsmnat n acest mediu va fermenta zaharul, culoarea
mediului se va schimba dup cteva ore datorit scderii pH-ului.
Dac n trecut mediile de cultur se preparau n laboratoarele de bacteriologie, astzi
producia lor a devenit o industrie puternic. Exist mii de firme care sunt ntr-o permanent
concuren, rezultatul fiind elaborarea unor medii de cultur din ce n ce mai performante,
care uureaz i mbuntesc asistena medical microbiologic.
41

GENETICA BACTERIAN

Ereditatea este nsuirea general biologic a tuturor vieuitoarelor de a transmite caracterele
specifice speciei la urmai iar variabilitatea apariia unor caractere diferite de cele ale
genitorilor.
Dintre cele dou laturi ale geneticii bacteriene, variabilitatea este cea care intereseaz
medicina n mod deosebit. Modificarea zestrei ereditare la bacteriilor d natere unor tulpini
bacteriene noi care, prin virulen i rezistena la chimioterapice, se adapteaz mai bine
condiiilor de mediu i nlocuiesc bacteriile mai puin adaptabile. Un exemplu foarte sugestiv
n acest sens l reprezint modificarea, numai ntr-un secol, a etiologiei infeciilor
nosocomiale1 1. Astfel, agenii etiologici ai hospitalismului clasic ca, de pild, bacteriile din
genurile Clostridium i Streptococcus, se ntlnesc astzi extrem de rar, ei fiind nlocuii cu
agenii etiologici ai hospitalismului modern care sunt tulpini multirezistente la antibiotice ce
aparin speciilor Staphylococus aureus, Pseudomonas aeruginosa, familiei Enterobacteriaceae
etc.
Pentru a nelege mecanismele variabilitii, vom schia, pe scurt, bazele structurii, replicrii
i funcionalitii materialul genetic la bacterii.
SUPORTUL MATERIAL AL EREDITII
Totalitatea caracterelor unei bacterii sunt determinate genetic, informaiile fiind codificate de
ADN. Exprimarea manifest a acestor caractere constituie fenotipul unei tulpini iar
informaiile care le codific genotipul.
Genetica molecular, n general, a avut ca punct de pornire studiul bacteriilor i
bacteriofagilor.
n anul 1892 August Weisman susinea, deja, c esena ereditii const n transmiterea la
descendeni a unei substane nucleare cu structur molecular specific. Cunoaterea precis
a substanei care pstreaz i transmite caracterele ereditare a parcurs un drum lung, care a
nceput n anul 1928 prin experienele bacteriologului englez Fred Griffith.
Griffith a pornit de la observaia c pneumococul de tip S, virulent, capsulat, injectat la
oarecele alb produce la acesta septicemie mortal, n timp ce injectarea pneumococului de
tip R, nevirulent, necapsulat, sau a pneumococului de tip S capsulat omort prin cldur
rmne fr efect. Injectnd ns un amestec dintr-o tulpin de pneumococ de tip R
necapsulat, nevirulent, viu i o tulpin de pneumococ de tip S, capsulat, omort prin cldur,
la oarece, acesta a dezvoltat o septicemie mortal. Prin hemocultur s-a izolat pneumococ
viu, de tip S, capsulat. Griffith a tras concluzia c pneumococul viu de tip R necapsulat a
preluat un principiu transformant de la pneumococul de tip S omort, principiu ce i
permite sinteza factorului de virulen - capsula.
Precizarea naturii acestui principiu transformant este meritul unui colectiv format din Avery,
Mc Leod i Mc Carty, care n anul 1944 au extras diferite substane din pneumococul virulent
(polizaharid capsular, lipide, proteine, acizi nucleici) i au artat c transformarea
pneumococului de tip R se face numai n prezena acidului dezoxiribonucleic provenit de la
pneumococul de tip S.


1
Infeciile nosocomiale sau de spital sunt infecii pe care un pacient le contracteaz n timpul sau dup
spitalizare, datorit condiiilor de spitalizare i sunt legate de actul medical sau chirurgical.
42


Figura 5.1. Structura ADN

Dovada hotrtoare c ADN este depozitarul informaiei genetice a fost adus dup
descoperirea bacteriofagului de ctre Twort i dHerelle, independent n 1915 i 1917. Atunci
s-a demonstrat c bacteriofagul i injecteaz numai ADN n celula gazd i c acesta singur
este capabil s determine n celula gazd sinteza de bacteriofagi complei, identici cu cei de la
care provenea acidul nucleic.
Structura ADN
ADN este format din 2 catene spiralate complementare i de polaritate invers (modelul
Watson, Crick i Wilkins), fiecare fiind rezultatul polimerizrii ntr-o anumit ordine a
untilor structurale de baz a acizilor nucleici, nucleotidele. Acestea sunt formate la rndul
lor dintr-o molecul de dezoxiriboz, o molecul de acid ortofosforic i dintr-una din bazele
azotate purinice - adenina (A) i guanina (G) - sau pirimidinice - citozin (C) i timina (T).
Scheletul spiralei este format din acidul ortofosforic i dezoxiriboz de care se leag bazele
azotate. Complementaritatea celor dou lanuri de nucleotide se realizeaz prin relaiile
sterice ce se stabilesc ntre bazele complementare, iar legturile prin puni de hidrogen.
Proporia de baze complementare este constant n cadrul unei specii, raportul adenin-
timin/guanin-citozin (AT/GC) servind drept criteriu taxonomic de baz n clasificarea
modern a bacteriilor.
Replicarea ADN
Structura dublu spiralat a ADN permite replicarea lui identic, semiconservativ. Spirala se
deschide ca un fermuar la locul iniial al replicrii sub aciunea unei ADN-giraze. Pe fiecare
spiral se va sintetiza o spiral nou, complementar, cu participarea ADN - polimerazei (I,
II, III) din direcia captului 5' terminal spre captul 3' terminal.
43

Transcripia i translaia
S-a stabilit c specificitatea biologic a funcionalitii ADN const n secvena de nucleotide.
Cele 4 baze se succed n lanul de ADN ntr-o ordine specific ce se aseamn cu un text,
secvena lor reprezentnd coninutul textului. Fiecare aminoacid dintr-un polipeptid este
codificat de trei nucleotide consecutive (triplet) ce alctuiesc un codon. Codul genetic este
corespondena dintre secvena codonilor i cea a aminoacizilor n cadrul unui polipeptid.
O gen (sau un cistron) reprezint o anumit secven de nucleotide ce codific structura
primar a unui polipeptid care funcioneaz direct sau mpreun cu alte polipeptide ca enzim
sau protein structural.
Pe lng genele care codific polipeptide, exist, de asemenea, gene ce codific ARN-ul
ribozomal i ARN-ul de transfer.
Transcripia reprezint transcrierea codului genetic de pe ADN pe ARNm, proces la care
particip o ARN - polimeraz ADN dependent. Aceast enzim gsete prin intermediul
unui factor promotorul, locul de legare i recunoatere situat deasupra genei, sau a genelor
din ADN care codific ARNm. La bacterii, promotorul este reprezentat de regul de 40 de
baze. ARN-polimeraza determin separarea catenelor de ADN i iniierea transcripiei
ARNm. Punctul de start corespunde primului nucleotid de m - ARN. Terminatorul este
reprezentat de o succesiune de baze care ncheie sinteza de ARNm. Cei mai muli ARN-m
bacterieni sunt policistronici, deci conin informaii codificate de mai multe gene.
Ceea ce deosebete transcripia la celulele procariote de cele eucariote este faptul c translaia
ncepe imediat dup iniierea transcripiei informaiei n ARNm, nainte chiar ca sinteza
acestuia s fie ncheiat. Procesul de cuplare transcripie-translaie este regul la bacterii.
Translaia reprezint transpunerea, respectiv concretizarea, informaiei m-ARN la nivelul
ribozomilor n secvena de aminoacizi din cadrul unui polipeptid.
ARN-m transpune informaia de pe gena corespunztoare la ribozomi nespecifici, crora le
confer o specificitate temporar sintezei unui anumit polipeptid. Ribozomul se nir pe
ARNm, acesta fixndu-se de unitatea 30S a ribozomului.
Aminoacizii sunt adui la ribozomi de ARNt sub forma de aminoacyl - tARN, pentru fiecare
dintre aminoacizi existnd cel puin un ARN de transfer. Acesta poart un anticodon
complementar codonului de pe m-ARN. De exemplu, ARNt pentru metionin are un
anticodon UAC, ce se va lega de codonul AUG de pe ARNm.
Iniierea i terminarea translaiei secvenei de nucleotide ale m-ARN ntr-o secven de
aminoacizi ntr-un peptid sunt determinate de codoni speciali, codon start i stop. Regiunea
ARN-m dintre cele 2 semnale se numete regiune de codare, iar intervalul dintre 2 asemenea
segmente, regiune intercistronic.
Sintezei oricrui polipeptid ncepe prin fixarea anticodonului de pe ARNt pentru
formilmetionin pe codonul de iniiere (start) de pe ARNm situat n poziia A a ribozomului
(locul de fixare a aminoacidului). Menionm c formilmetionina transportat aici de ARNt
nu particip la structura polipeptidului, ci are numai rol de iniiere a sintezei. n cazul cnd
intr n structura polipeptidului, ea trebuie s fie neformilat. (Formil-metionina este o
substan chemoatractant puternic pentru leucocite, influennd deci aprarea
antinfecioas.)
44


Figura 5.2. Sinteza unui polipeptid

Dup fixarea anticodonului de codonul metioninei, ribozomul se deplaseaz de-a lungul
ARNm n aa fel nct pe poziia A a ribozomului trece codonul urmtor al ARNm, iar ARNt
legat de ARNm trece n poziia P a ribozomului(locul de elongare propriu-zis a peptidului).
n poziia A vine urmtorul aminoacyl-ARNt. ntre metionin i al doilea aminoacid se
realizeaz legtura peptidic (NH-CO-) i ARNt al celui de al doilea aminoacid este eliberat.
Ribozomul sufer din nou o translocaie. Poziia A este din nou liber pentru al urmtorul
ARNt, iar n poziia P se afl primul ARNt de care este legat un dipeptidul rezultat. La acesta
se va aduga un al treilea aminoacid adus la ribozom i aa mai departe pn se ncheie
sinteza polipeptidului care este semnalat de un codon nonsens (stop) de pe ARNm. n
aceast etap lanul peptidic este eliberat din legtura cu ARNt i ARNm i ribozom.
Reglarea activitii genelor
Jacob i Monod au imaginat un model de funcionare al genelor bacteriene care a fost
demonstrat ulterior experimental. Scopul mecanismelor de control genetic la bacterii este
ajustarea metabolismului la condiiile mediului nconjurtor n aa fel nct creterea i
multiplicarea s se produc n condiii optime. Aceste mecanisme ale reglrii negative,
prezente numai la procariote, pot fi prezentate sintetic dup cum urmeaz:
genele structurale codific sinteza unor enzime care aparin unei anumite linii
metabolice sunt situate una dup alta i formeaz o unitate care se numete operon. Acesta
este delimitat de secvenele de control care sunt:
- operatorul, care reprezint poriunea de ADN din structura operonului care
recepioneaz semnalele asigurnd funcionarea coordonat a operonului, promotor i
terminator;
- promotorul, care este situat lng operator i iniiaz transcrierea genei structurale. La
unii operoni operatorul i promotorul sunt identici. La alii ei sunt nvecinai, sau chiar se
ntreptrund;
- terminatorul, care incheie transcriptia;
45

gen reglatoare conduce activitatea unui operon i codific sinteza unui represor. Acesta,
prin configuraia sa steric este capabil s se fixeze pe operator, blocnd activitatea m-ARN
polimerazei.
activitatea proteinei represoare este indus sau oprit printr-un efect alosteric determinat de
molecule semnal. Astfel, unele substane, ca de exemplu lactoza, inactiveaz represorul,
rezultatul fiind declanarea activitii genelor care codific enzimele catabolizante ale
lactozei. Substanele care inactiveaz represiunea se numesc inductori. Produii finali de
degradare a unui substrat, activeaz represorul. Astfel operonul anabolizant, ce codific
enzimele sintetice va fi inhibat. Produii operonilor anabolici, ce activeaz represorul se
numesc corepresori.

Figura 5.3. Schema unui operon bacterian i a genei reglatoare.

ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC LA BACTERII
Genomul bacterian este alctuit din repliconi, care sunt formaiuni genetice ce se pot replica
independent. Astfel, se descriu:
cromozomul bacterian
elemente genetice extracromozomiale - plasmide
- genomul bacteriofagilor
elementele genetice transpozabile - fragmentele de inserie (IS)
- transpozonii (Tn).
Cromozomul bacterian
Majoritatea genelor bacteriene se gsesc ntr-un cromozom haploid, echivalent nuclear care
codific informaiile absolut necesare supravieuirii speciei n condiii normal
Cromozomul la Escherichia coli este format dintr-o molecul circular dublu spiralat de
ADN ce reprezint 80% din greutatea lui, dintr-o component proteic, ARN-polimeraza care
reprezint 10% iar restul de 10% din ARNm i ARNr n curs de sintetizare.
Pe lng dispoziia dublu spiralat spre dreapta a catenelor de ADN (o spir = 10 baze),
acestea sufer o suprahelicare spre stnga (o spir suprahelicat = 15 spire). Acest mod de
organizare denumit supercoil sau supertwist asigur pe de o parte mpachetarea
economic a ADN i pe de alt parte o configuraie optim activitii funcinale a ADN
(replicare, transcripie, recombinare). Modelul de mpachetare a nucleului bacterian a fost
46

descris de Pettijohn i Hecht (1973) pentru E. coli i se pare c are un caracter general la
bacterii.
Formaiunile genetice extracromozomiale
Plasmidele
Plasmidele sunt formaiuni genetice autonome, extracromozomiale, libere n citoplasm,
reprezentate de molecule circulare de ADN care se replic independent de cromozom.
Denumirea de plasmide le-a fost dat de Lederberg n 1952, iar importana lor practic a fost
sesizat n 1963 de Watanabe, o dat cu descoperirea posibilitii transmiterii prin plasmide a
rezistenei la antibiotice ntre bacterii .
Bacteriile conin foarte frecvent plasmide, descriindu-se peste 1.000 de tipuri diferite.
Lungimea acestor molecule variaz ntre 1-150 mm i greutatea molecular ntre 2-3 milioane
(3x103 pn la 450x103 perechi de baze). Plasmidele mici se gsesc de obicei ntr-o celul
bacterian n 10-40 de copii, pe cnd cele mari n numr mai redus de 1-3 copii. n aceeai
celul nu pot coexista mai multe plasmide nrudite (cu mecanism comun de control al
replicrii), ele fiind incompatibile, spre deosebire de cele nenrudite (cu mecanism distinct de
reglare al replicrii), care sunt compatibile. Compatibilitatea exprim competiia plasmidelor
pentru un anumit situs de legare n celula bacterian.
Plasmidele pot fi:
conjugative, care se pot transfera singure la alte bacterii, ca de exemplu plasmidele de
rezisten la antibiotice R,
neconjugative, care nu pot prsi ele nsi bacteria de origine, ci numai prin intermediul
unui alt plasmid conjugativ sau a unui bacteriofag (de exemplu plasmidul care codific
secreia de beta-lactamaz la S.aureus)
episomi, care se pot integra prin recombinare n cromozomul bacterian, pierzndu-i astfel
autonomia de replicare. Un exemplu de episom este factorul de sex F (plasmidul F sau
factorul de fertilitate).
Determinanii genetici eseniali ai plasmidelor codific informaiile legate de replicarea lor
autonom, iar cei accesorii caractere fenotipice neeseniale supravieuirii celulei bacteriene n
condiii naturale: gene de transfer (tra), de rezisten la antibiotice (factorul R), de secreie a
colicinelor (factorul col), de secreie a unor toxine, de metabolizarea unor substraturi, de
rezisten la unii ioni i compui organometalici etc. Unele plasmide nu au un efect
observabil asupra fenotipului bacteriei i se numesc plasmide criptice.
Pentru medicin important este cunoaterea plasmidelor de virulen i a celor care confer
bacteriilor rezistena la antibiotice.
Plasmidele de virulen poart determinanii genetici ai unor factori de virulen la bacterii,
ca de exemplu secreia de enterotoxina (termolabil i termostabil) i factorul de colonizare
la Escherichia coli, hemolizina la Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis i E.coli,
exfoliantina la S. aureus, gena de invazivitate la Shigella etc.
Plasmidele R -de rezisten la chimioterapice (Factorul R) sunt molecule circulare de ADN
care constau n esen din dou regiuni genetice distincte: genele care codific rezistena la
antibiotice R, care pot fi unice sau multiple i genele care confer plasmidului capacitatea
de a se transfera FTR.
Rezistena la peste 90% din tulpinile de spital este de natur plasmidic. Existena acestor
plasmide se explic prin aglomerarea mai multor gene de rezisten R, pe acelai plasmid,
prin fenomenul transpoziiei repetate de material genetic. Plasmide de rezisten au fost
evideniate la genurile Escherichia, Salmonella, Shigella, Proteus, Providencia, Klebsiella,
47

Serratia din familia Enterobacteriaceae, la genurile Pseudomonas, Acinetobacter, Vibrio,
Yersinia, Pasteurella, Campylobacter, Haemophilus, Neisseria, Bacteroides, Staphylococcus,
Streptococcus, Bacillus, Clostridium, i Corynebacterium. Plasmidele prezente la bacilii
gram-negativi sunt mai mari dect cele evideniate la bacteriile gram-pozitive.
Plasmidul F se mai numete i plasmid de sex, sau factor de fertilitate i conine, pe lng ali
determinani genetici, genele de transfer tra. Plasmidul F se poate transmite altor celule
bacteriene prin conjugare. El se poate integra n cromozomul bacterian putnd media
transferul de gene cromozomiale de la o celul bacterian donor la cea receptor. n funcie de
prezena factorului F, bacteriile se mpart n:
bacterii F- lipsite de factorul F, denumite celule femele i care sunt receptoare de material
genetic,
bacterii F+, masculine, care au factorul F+, autonom, ca plasmid n citoplasm i care sunt
celule donoare,
bacterii Hfr care au factorul F+ integrat n cromozom, de asemenea masculine,
bacterii F care au factorul F+ ca plasmid autonom, dup ce acesta a fost integrat n
cromozom i l-a prsit rupnd un fragment ADN din cromozom. i aceste celule dunt
donoare, deci masculine.
Bacteriofagii
Sunt virusuri care pazariteaz bacteriile. Se cunosc 6 grupe morfologice de bacteriofagi, cei
mai bine studiai fiind bacteriofagii T ai bacilului coli.

Figura 5.4. Structura bacteriofagului

Morfologie. Bacteriofagii sunt formai dintr-un cap hexagonal, un gt i o prelungire numit
picior (coad). Capul este alctuit dintr-un nveli proteic caracteristic virusurilor (capsida) i
adpostete ADN. Coada este un cilindru rigid nvelit ntr-un manon proteic asemntor
miozinei i se termin cu o plac hexagonal ce conine o enzim de tipul lizozimului. De
placa bazal se aprind 6 fibre cu rol n fixarea bacteriofagului pe suprafaa bacteriei.
Ataarea bacteriofagului pe suprafaa peretelui bacterian este determinat de existena unor
receptori de perete, specifici. Aceast specificitate este de tip enzimatic i st la baza
48

lizotipiei2. Dup ataare are loc contracia manonului proteic i bacteriofagul i injecteaz
numai ADN n celula bacterian.


Figura 5.5. Ptrunderea bacteriofagului n celula bacterian.




2
Determinarea sensibilitii la bacteriofagi a unei tulpini bacteriene. Sensibilitatea diferit a tulpnilor aparinnd
aceleiai specii este mportan n epidemiologia infeciilor. Astfel dac ntr-o epidemie, toate tulpinile izolate
de la bolnavi aparin aceluiai lizotip, sursa de infecie este unic, iar dac se izoleaz mai multe lizotipuri
sursele de infecie sunt multiple.
49


Figura 5.6. Ciclul litic al bacteriofagilor.

Dup ptrunderea genomului fagic n celula bacterian, acesta va determina sinteza de noi
bacteriofagi identici cu cel de la care a provenit ADN. ADN se replic prin replicare
semiconservativ iar ribozomii bacterieni vor sintetiza proteinele capsidale i ale cozii. Dup
asamblarea noilor virusuri ele vor prsi celula bacterian care se lizeaz. Acesta este ciclul
litic al bacteriofagilor, iar ei se numesc fagi viruleni.
Dar nu ntotdeauna relaiile bacteriofag-bacterie evolueaz n acest fel. Uneori genomul
bacteriofagului se va integra n cromozomul bacterian ncadrndu-se i funcional n acesta.
n aceast situaie el nu se mai replic dect n acelai timp cu cromozomul bacterian, deci n
timpul diviziunii bacteriene i se numete profag. Acest ciclu este ciclul lizogen iar
bacteriofagii se numesc fagi temperai.
Lizogenia are urmtoarele consecine pentru bacteria n cauz:
bacteria lizogenizat este imun la infecia cu acelai bacteriofag, dar nu pentru ali
bacteriofagi
50


Figura 5.7. Ciclul lizogen al bacteriofagilor la E. coli.

profagul codific el nsui unele caractere pe care le dobndete astfel bacteria lizogen. Un
exemplu clasic n acest sens este toxigeneza la bacilul difteric care este codificat de un
profag ce se afl n cromozomul bacterian. Tulpinile de bacili difterici care nu sunt
lizogenizate de acest profag, nu sunt capabile s secrete toxina i sunt, deci nepatogene,
transducia, mecanism de transfer genetic de la o bacterie la alta, mediat de bacteriofagi i
asupra creia vom reveni la variabilitatea bacterian.
Elemente genetice transpozabile
Elementele genetice transpozabile sunt fragmentele de inserie (IS) i transpozonii (Tn).
IS i Tn sunt fragmente mici de ADN cu limite structurale bine precizate care se pot integra
repetat n mai multe situsuri dintr-un genom. Existena lor a fost presupus nc n anul 1931
i n anul 1952 de Barbara Mc Clintock care le-a denumit gene sltree (jumping genes).
Descoperirea a fost primit cu mult scepticism i nencredere la vremea respectiv, dar timpul
a dovedit importana ei, autoarea fiind onorat cu premiul Nobel n anul 1983.
VARIABILITATEA LA BACTERII
Bacteriile sunt supuse acelorai legi ale eredittii, unitare lumii vii, cu unele particulariti
dictate de organizarea materialului genetic. Astfel, n timpul diviziunilor succesive (n lipsa
unui accident genetic) toi descendenii unei bacterii sunt identici ntre ei i identici cu celula
din care provin. Aceasta este descendena vertical cu formare de clone de indivizi identici,
stabilitatea fiind posibil datorit cromozomului haploid cu set unic de gene.
Variabitatea la bacterii, latur a geneticii care are implicaii deosebite n medicina practic,
poate fi explicat prin dou procese fundamentale:
variaia fenotipic, care reprezint schimbarea unor nsuiri ale bacteriilor, ca adaptare la
condiiile mediului nconjurtor, fr s intervin vreo modificare n genomul bacterian i
variaia genotipic, ce rezult prin modificarea genomului.
Apariia modificrilor genetice la bacterii este cunoscut de mult dar nu s-a tiut, ns, dac
aceste modificri urmeaz aceleai legi ca i la organismele cu organizare superioar. n 1943
51

s-a dovedit faptul c modificrile proprietilor unei populaii bacteriene este rezultatul unor
variaii rare la un numr mic de celule, care se selecteaz i dau natere unei populaii noi.
Variabilitatea la bacterii se produce prin: mutaii, transfer de material genetic i transpoziie.
Mutaia
Modificrile spontane ale genomului se numesc mutaii i constau din modificarea secvenei
de nucleotide dintr-o gen. Ele pot fi punctiforme, inversii, inserii, deleii i mutaii
secundare.
Mutaiile punctiforme afecteaz un singur nucleotid n cadrul unei gene i sunt reversibile.
Consecinele unei astfel de mutaii pot fi:
nlocuirea unui codon cu altul, ceea ce se va traduce prin nlocuirea unui aminoacid cu altul
din structura unui polipeptid. Aceast mutaie se numete mutaie cu sens greit,
apariia unui codon nonsens. Mutaia nonsens mpiedic sinteza n continuare a unui
polipeptid, iar dac ea se produce la nceputul genei ce codific un polpeptid - mutaie polar,
acesta nu se va mai putea sintetiza deloc.
Inseria i deleia nseamn adugarea, respectiv pierderea a dou pn la sute sau chiar mii
de nucleotide, procesul fiind ireversibil. Acest tip de mutaie duce la modificarea important
a secvenei de aminoacizi, fiind denumit mutaie cu schimbare de proiect.
Mutaiile secundare sunt mutaiile reverse, care restabilesc o secven nucleotidic ce s-a
modificat, iar mutaiile supresoare permit exprimarea funciei anterioare a unei gene care a
suferit o mutaie, fr restaurarea codonilor iniiali. Acest fenomen se explic prin sinteza
unui ARNt care tie s citeasc un codon nonsens.
Frecvena pe unitatea de timp cu care se produc mutaiile este diferit i se numete rat de
mutaie. Mutaia spontan variaz de la gen la gen ntre 10 -6 i 10 -10.
Mutaiile duc la apariia unor indivizi cu caractere noi, cum sunt rezistena la chimioterapice,
structur antigenic modificat, pierderea unor receptori specifici pentru bacteriofagi,
pierderea capacitii de sintez a unui metabolit etc.
Din punct de vedere medical intereseaz n mod deosebit mutaia spre chemorezisten care
se poate produce dintr-o dat, adic one-step, sau n mai multe etape, multistep.
Prin mutaie one-step bacteria devine rezistent brusc peste noapte la un antibiotic, pe
cnd prin mecanism multistep se produc mutaii multiple, succesive, pn ia natere o
mutant rezistent la concentraii ridicate de antibiotic. Astfel prima mutant va fi puin mai
rezistent dect tulpinile slbatice din care provine, mutanta a doua mai rezistent dect
mutanta 1 .a.m.d.
Dat fiind c mutaiile naturale sunt rare, este necesar un mijloc care s selecteze mutanta
pentru ca aceasta s se transforme ntr-o populaie bacterian cu proprieti noi.
Rata mutaiei poate fi crescut n mod considerabil prin ageni mutageni, ca, de pild, raze X,
UV, derivai acridinici, ageni alchilani etc.
Mutaiile spontane sau induse pot duce la pierderea integral a unui plasmid printr-o
modificare ce produce deficiene ale mecanismului de replicare, astfel nct plasmidele nu vor
mai fi motenite de celulele fiice.
Transferul de material genetic
Organismele superioare se reproduc sexuat. Materialul genetic a 2 indivizi de sex opus se
transmite combinat urmailor. Bacteriile se nmulesc vegetativ prin diviziune direct, deci
materialul genetic provine de la o singur celul. Cu toate acestea exist i la bacterii
mecanisme care permit schimbul de material genetic de la o bacterie la alta. Dat fiind c
aceste mecanisme nu urmeaz legile sexuale ale transmiterii caracterelor ereditare, ele se
52

numesc mecanisme parasexuale. Transmiterea materialului genetic de la celula donor la
celula receptor este unidirecional i se realizeaz prin transformare, transducie i
conjugare.
Transformarea
Reprezint transferul de material genetic de la o celul donor la una receptor sub forma de
ADN pur, eliberat fie prin liza celulei donor, fie prin extracie chimic. Acest proces a fost
observat pentru prima oar la pneumococi de Griffith n 1928. ADN-ul pneumococilor
viruleni, capabili s sintetizeze capsula, s-a transferat la mutante R, nevirulente, acestea din
urm dobndind capacitatea de a sintetiza capsula. Transformarea s-a pus n eviden ulterior
la numeroase genuri cum sunt, de pild, Streptococcus, Haemophilus, Bacillus, Neisseria,
Salmonella etc. i se petrece nu numai ntre tulpiile aceleiai specii, ci i ntre specii diferite.


Figura 5.8. Transformarea

Transformarea genetic este posibil numai dac bacteria receptoare se afl n stare de
competen, stare care-i permite nglobarea de ADN strin. Competena este o stare
fiziologic temporar a bacteriei, care variaz n funcie de specie i de faza de multiplicare n
care se afl bacteria. Dup unii autori, celulele competente au pe suprafaa lor un antigen
special numit factor de competen. n timpul strii de competen se modific structura
peretelui celular, care devine mai poros, ncrcat electropozitiv, favoriznd legarea ADN-lui
strin.
Transformarea depinde n egal msur i de unele proprieti ale ADN transformant, cum
sunt structura dublu catenar i o dimensiune minim a moleculei de 1 x 106 daltoni.
Cu toate c transformarea s-a descoperit experimental i se practic astzi pe scar foarte
larg n tehnicile de inginerie genetic, ea se petrece n mod natural n mediile n care triesc
53

mpreun multe specii bacteriene i unde procesul de liz a celulelor bacteriene este frecvent,
ca de exemplu n colon . Aici se pun n libertate cantiti mari de ADN care, dac ntlnete
celule bacteriene n stare de competen, va ptrunde i se va recombina cu genomul acestora,
conferindu-le caractere noi.
Majoritatea bacteriilor nu sunt n mod natural capabile de transformare dar experimental s-au
dezvoltat metode de inducere artificial a strii de competen foarte utile ingineriei genetice.
Transducia
Transducia reprezint un transfer de gene cromozomiale de la o celul bacterian la alta,
mediat de bacteriofagi. Unii bacteriofagi sunt capabili s transfere orice gen bacterian
(transducie generalizat) iar alii numai anumite gene (transducia specializat).


Figura 5.9. Transducia generalizat. (modificat dup Tortora).

Transducia generalizat este mediat de fagii viruleni, litici, care dup ptrunderea n celula
bacterian se multiplic i determin liza celulei gazd. n timpul lizei celulei bacteriene
54

cromozomul acesteia se fragmenteaz. Se poate ntmpla, ocazional, ca un fragment cu o
dimensiune apropiat de cea a genomului fagic s se integreze n capisda bacteriofagului, n
locul genomului fagic. Astfel de fagi sunt defectivi i nu se vor mai putea replica, dar pot
ptrunde n alte celule bacteriene injectndu-le ADN-ul, ce provine de fapt din genomul
celulei donoare. ADN-ul se va integra n cromozomul celulei receptoare prin recombinare,
conferindu-i acesteia caractere noi, ca, de exemplu, rezistena la chimioterapice, proprieti ce
in de patogenitatea bacteriei etc.
Transducia specializat este mediat de fagii temperai. Dup ptrunderea n celula
bacterian a ADN-lui bacteriofagului temperat, acesta sufer iniial un proces de circularizare
dup care se inser n cromozom prin recombinare sub forma de profag. Inseria n
cromozom se face pe baza homologiei dintre 10 perechi de baz ale ADN fagic i bacterian.
Profagul devine parte integrant a cromozomului bacterian, se va replica o dat cu acesta i
nu independent, deoarece este supus unui proces de represie din partea genomului gazd.
Bacteriile care au integrate n cromozomul lor un profag sunt n stare de lizogenie. n anumite
condiii, ns, are loc un proces de derepresie i genomul bacteriofagic prsete cromozomul
bacterian devenind din nou autonom. Cnd prsete cromozomul bacterian poate detaa din
acesta un fragment de ADN care va rmne legat de genomul bacteriofagic. Acest bacteriofag
nu se va putea nmuli, fiind defectiv, dar va putea intra n alt celul integrndu-se n
cromozomul acesteia tot sub forma de profag. Fragmentul provenit de la prima celul
bacterian poate s codifice diferite caractere (rezistena la antibiotice, secreia unor enzime,
toxine etc.), ce se vor manifesta fenotipic la noua bacterie gazd.
Cel mai bine studiat exemplu de transducie specializat este cea mediat de fagul lambda i
gena bacterian ce codific degradarea galactozei (lambda-gal).
Transducia specializat nu trebuie s se confunde cu conversia lizogen. In acest caz
caracterul nou al celulei bacteriene este codificat chiar de genomul bacteriofagului temperat.
Fenomenul a fost descris pentru prima oar, aa cum am mai artat, la Corynebacterium
diphteriae, toxigeneza fiind tributar prezenei unui fag temperat n cromozomul bacterian.


Figura 5.10. Transducia specializat.
Profagul se afl n cromozomlng gena gal+ care codific enzimele de catabolizare a
lact
(b). Fagul va infecta o alt celul (c) i se va integra n cromozom transfernd i gena gal+

Conjugarea
Conjugarea este transferul de material genetic de la o bacterie donoare la una receptoare
printr-un proces de mperechere, ce se realizeaz prin contactul direct dintre cele dou celule.
55

Prin conjugare se pot transmite plasmide, precum i gene cromozomiale (prin intermediul
factorului F+).
Conjugarea la bacilii gram negativi. Factorul F+ poate fi situat, aa cum s-a mai artat, ntr-
un plasmid, favoriznd transferul acestuia sau n cromozomul bacterian, fcnd posibil
transferul unor gene cromozomiale de la o bacterie la alta. Celulele bacteriene care au
factorul F+ integrat n cromozom se numesc Hfr (high freqency of recombination ), deoarece
ele pot transfera material genetic cromozomial cu o frecven mare, ceea ce duce la
recombinarea unor gene din cromozomul bacteriei donoare cu material genetic al
cromozomului celulei receptoare.
Prin intermediul factorului F+ inserat n cromozom se poate transfera o copie ntreag a
cromozomului celulei donoare la cea receptoare.
Transferul integral dureaz n jur de 100 minute. Procesul de mperechere este un mijloc ideal
de localizare a genelor pe cromozomul celulei donoare. Ca celul donoare se alege o tulpin
Hfr. Aceasta va fi cultivat cu celule F-. Prin agitare puternic a mediului se intrerupe
procesul de mperechere la anumite intervale de timp, i se caut recombinani printre
celulele receptoare. Cu ct ntreruperea recombinrii se produce mai repede cu att gena
studiat se afl mai aproape de vrful moleculei de ADN transferat.
Transferul prin conjugare a plasmidelor este condiionat de prezena n plasmid a genelor de
transfer tra, care sunt responsabile de sinteza sex-pilului i de transferul plasmidului.
Conjugarea ncepe prin sinteza sex-pilului care va adera de receptori specifici prezeni pe
peretele celular al bacteriei receptoare. Dup formarea legturii dintre celula donor i cea
receptor are loc replicarea de transfer a plasmidului. O caten parental de ADN va rmne n
celula donor, iar a doua va trece n celula receptoare, pe tiparul lor sintetizndu-se catene
complementare.
Din punct de vedere medical importante sunt plasmidele conjugative de rezisten -
plasmidele R.


Figura 5.11. Plasmid de rezisten.
R = determinani R care codific rezistena la antibiotice
IS1 = fragmente de inserie
RTF = gene ce codific replicarea i transferul plasmidului R

Dintre proprietile plasmidelor de rezisten ale bacililor-gram negativi, 3 sunt de interes
medical deosebit :
56

frecvena transferrii: frecvena transferului multor plasmide slbatice pe receptori adecvai
este relativ sczut 10-4/ cel., i se datoreaz faptului c plasmidele tulpinilor slbatice sunt
reprimate, adic produc un represor care inhib activitatea propriei gene de transfer. Dac se
incubeaz donorii i receptorii mpreun mai multe ore, numrul de celule recombinante
cresc;
spectrul de gazde: plasmidele transferabile R circul ntre specii diferite. Acest transfer are
loc i n laborator i n macroorganism. S-a descris astfel transferul de plasmide de la bacilul
coli nepatogen la salmonele sau shigelle. Nu s-a observat ns transferul plasmidelor de la
bacterii gram-negative la cele gram-pozitive;


Figura 5.12. Transferul prin conjugare al plasmidelor.

determinanii de rezisten R: caracteristici pentru plasmidele conjugative sunt
determinanii de rezisten multipli. S-au evideniat astfel la tulpinile izolate din spital
plasmide ce au factori de rezisten fa de toate chimioterapicele uzuale (ampicilina,
cefalosporine, streptomicina, tetraciclina, cloramfenicol, kanamycina, gentamicina,
sulfonamide).
Conjugarea la bacterii gram-pozitive.
S-au descris procese de mperechere i la bacteriile gram-pozitive ca, de pild, la genurile
Streptococcus, Streptomyces, Clostridium, procesul bazndu-se pe performana celulei
receptoare.
Celula receptoare produce un peptid cu mol. mic (GM=1000 daltoni) care determin sinteza
unor substane proteice de agregare de ctre celula donoare cu afinitate pentru unele substane
adezive de pe suprafaa receptorului. Se produce astfel o legtur strns ntre receptor i
donor cu formarea unei puni intercelulare care permite transferul de material genetic. Prin
analogie cu substanele atrgtoare la insecte peptidul ce induce substana de agregare a fost
desemnat ca sexpheromon.
Transpoziia
Transpoziia presupune integrarea ntr-un genom al unui elemente genetic transpozabil din
aceeai molecul de ADN sau din alta prezent n aceeai celul. Elementele genetice
transpozabile sunt secvenele de inserie IS i transpozonii.
Secvenele de IS au n jur de 1000 de baze i fac parte n mod normal din cromozom sau
plasmide. Ele sunt prezente n mai multe copii i sunt flancate la cele 2 capete a aceleai
baze, 10-40 pb-IR (inverted repeats), dar n ordine inversat. Acestea nrmeaz secvena ce
codific proteine necesare procesului de transpoziie. IS nu confer ele nsi un caracter nou
celulei, dar pot produce dup inseria lor modificri n expresia genelor adiacente inserrii.
57



Figura 5.13. Fragmentele de inserie IS.
Transpozonii se mpart dup mecanismul de transpoziie n dou clase, I i II.

Transpozonii de clasa I sau retrotranspozoni sunt transcrii iniial n ARN prin intermediul
unei reverstranscriptaze. ARN-ul este recopiat intr-un ADN care se va insera ntr-o alt
poziie n materialul genetic al bacteriei. Reverstranscripataza este codificat de transpozon.
Transpozonii de clasa II cuprindefamilia de transpozoni TnA care se transloc dup modelul
transpoziiei replicative, adic prin reduplicarea Tn nainte de translocare. Tn original rmne
pe loc, iar copia se inser n noul situs. La proces particip 2 enzime: transpozaza i
rezolvaza. n timpul translocrii replicative se formeaz un produs intermediar ntre
repliconul donor i receptor care se numete cointegrat i care va fi desfcut de rezolvaz. Pe
lng genele care codific enzimele necesare transpoziiei, Tn de clasa II mai conine o gen
ce confer celulei un caracter. Tn3, de pild, codific rezistena la Ampicilin.
Bacteriofagii transpozabili ca, de pild, fagul Mu i D 108, folosesc transpoziia ca mod de
replicare. Fagul Mu este un fag temperat care se inser n cromozomul celulei bacteriene
dup ptrundere. Inseria acestui fag intrerupe activitatea genei n care s-a inserat i a unor
gene neadiacente din acelai operon. Fagul se replic, originalul ramne pe loc, iar copia se
inser n orice alt loc de pe cromozom.
Inseria oricrei gene ntre dou elemente transpozabile face posibil transferul ei prin
recombinare neomolog, n aceeai celul pe o molecul de ADN nenrudit structural.
Astfel, prin transpoziie se pot produce deleii, inversii, transpuneri de determinani genetici
de pe un plasmid pe altul sau chiar fuzionarea stabil a unor repliconi complei, de pild a
dou plasmide.
Evoluia rezistenei la antibiotice a bacteriilor nu poate fi conceput astzi fr fenomenul de
transpoziie.
Studii moleculare au relevat posibilitatea ca genele de rezisten la antibiotice s fi aprut cu
mult timp nainte, la microorganismele productoare de antibiotice. Aceti determinani
genetici au fost mobilizai i au ptruns prin mecanismele transferului genetic la bacteriile
importante din punct de vedere clinic.
Mecanismele transpoziiei sunt responsabile de formarea plasmidelor cu multirezisten, prin
inserarea succesiv pe un plasmid a determinanilor genetici de rezisten situai ntre dou
elemente transpozabile de pe alte plasmide.
RECOMBINAREA SECVENELOR DE ADN
Indiferent care este mecanismul prin care are loc transferul sau transpoziia de material
genetic, inserarea ADN la noul sediu are loc prin recombinare.
Prin recombinare se nelege formarea de noi combinaii genetice ntr-un genom. Ea se poate
petrece prin schimb de segmente homologe sau prin integrare suplimentar de ADN.
58

Recombinarea legitim sau homolog are loc atunci cnd un fragment de ADN provenit de la
celula donoare, sau chiar din alt molecul de ADN se inser ntr-o regiune a ADN receptor
ce se aseamn din punct de vedere chimic cu cea a ADN-ului donor, deci prezint o
homologie de baze. Este ntlnit n transformare, dar i n unele forme de transducie i
conjugare.
n ADN receptor se produc rupturi cu schimbul unor secvene homologe. n acest proces sunt
implicate mai multe enzime dintre care recA-proteina i recBC nucleaza. De aceea
recombinarea legitim se mai numete recA-dependent.
Recombinarea nelegitim sau heterolog const n integrarea de ADN suplimentar ntr-un
replicon i este recA-independent. Exemple de recombinare heterolog sunt integrarea a
plasmidului F sau a unor profagi n cromozom sau transpoziia elementelor genetice mobile.
Clonarea genelor este o form deosebit de recombinare nelegitim genetic in vitro. Astfel,
plasmidele uor transmisibile de la o bacterie la alta sunt folosite frecvent ca vectori pentru
transferul i clonarea de material genetic de la o bacterie la alta sau ntre organisme foarte
ndeprtate din punct de vedere filogenetic. Prin aceast tehnic se introduc n genomul
bacterian gene care codific sinteza unor substane ca, de exemplu, interferoni, insulin, STH
etc., a cror obinere pe cale chimic ar fi fie imposibil, fie foarte costisitoare.
Bacteria preferat a ingineriei genetice este Escherichia coli, care n mod natural nu este
capabil de transformare, dar creia n vitro i s-au introdus n genom cei mai diveri
determinani genetici provenind de la organisme ndeprtate filogenetic, cum sunt omul i
animalele.
59

FACTORII DE PATOGENITATE AI BACTERIILOR
Patogenitatea este un proces complex i multifactorial, care cuprinde totalitatea
mecanismelor biochimice prin care microorganismele produc infecii. n timp ce unele
microorganisme (patogene) produc n mod obinuit infecii la indivizii neimunizai, dar cu
rezistena natural intact, altele (oportuniste) produc infecii doar la indivizi cu barierele
aprrii naturale compromise.
Virulena este gradul de patogenitate a unei tulpini n cadrul speciei. Spre deosebire de
patogenitate, care este un caracter de specie, virulena este un caracter de tulpin. De
exemplu, n cadrul speciei Corynebacterium diphteriae exist specii toxigene virulente i
netoxigene, deci nepatogene. Chiar i ntre tulpinile toxigene exist o diferen n ceea ce
privete cantitatea de toxin secretat.
Dac am mpri bacteriile dup capacitatea de invazie a organismului, la un capt s-ar afla
bacteriile toxigene, care se multiplic discret la poarta de intrare, iar toxina, secretat i apoi
vehiculat de snge n organsim, este responsabil de apariia bolii (cazul bacilului difteric i
tetanic, care produc infecia prin multiplicarea lor la poarta de intrare, fr a invada
organismul, sau a bacilului botulinic, care i secret toxina n conservele alimentare).
La cellalt capt se afl bacteriile invazive pentru care ataarea constituie un prim pas n
penetrarea mai adnc a esuturilor sterile. Ajunse aici, se vor multiplica, vor secreta diveri
factori de patogenitate, rezultatul fiind infecia (bacilul crbunos, pneumococul etc.).
La aceste dou categorii se adaug bacteriile sensibilizante, care prin infecie sensibilizeaz
organismul. Acesta va rspunde prin reacii imunopatologice ce i sunt nocive i genereaz
leziuni (bacilul tuberculos).
O bacterie poate fi n acelai timp invaziv, toxigen i sensibilizant, ca, de exemplu,
Streptococcus pyogenes, dotat cu enzime invazive, cu capacitatea de a secreta eritrotoxina
(responsabil de apariia scarlatinei) i de a produce prin mecanism alergic cardita
reumatismal, reumatismul poliarticular acut, glomerulonefrita acut etc.
Pentru a produce o infecie, microorgansimele trebuie s parcurg, n general (dar nu n mod
obligatoriu), urmtoarele etape:
ataarea i ptrunderea n organismul gazd;
invadarea local sau general a organismului;
multiplicarea n organismul gazd i secreia unor factori de patogenitate.
1. Factori de ptrundere i aderen
Organismul uman are multiple posibiliti prin care se opune ptrunderii agenilor infectioi.
Totui, o serie de microorganisme reuesc s evite aceste bariere sau profit de situaii
deosebite care le permit ptrunderea n organism.
Astfel, o leziune traumatic care ntrerupe integritatea pielii, principala barier extern
antiinfecioas, creeaz condiii de ptrundere pentru germeni care se gsesc n mod normal
pe tegumente (S. aureus, Pseudomonas aeruginosa).
Unele microorganisme ptrund prin nepturile unor insecte (Plasmodium vivax, Borrelia
burgerdorfi, Yersinia pestis) sau prin muctura unui animal (virusul rabic), iar altele sunt
introduse n organism n timpul unor acte medicale, cum sunt injeciile, transfuziile
(virusurile hepatitice, virusul SIDA etc.), operaii pe cordul deschis (S.epidermidis) etc.
Leptospirele, care sunt bacterii spiralate, pot ptrunde chiar i prin pielea intact datorit unor
micri de nurubare.
60

Alte ci de ptrundere pentru agenii infectioi sunt calea digestiv, respiratorie, urogenital
i conjunctival. Ele sunt prevzute cu diverse mecanisme de clearance a particulelor strine
(lacrimi, mucus, micrile cililor vibratili etc.) care se opun aderenei microbilor.
Microorganismele care reuesc s ptrund pe aceste ci dispun de mecanisme speciale de
aderen, ce depesc mecanismele rezistenei naturale.
Prima relaie care se stabilete ntre microorganismul infectant i gazda sa este ataarea
microorganismului de suprafaa celulelor.
Aderena microbilor de organismul gazd presupune prezena unei sau mai multor adezine
microbiene prezente pe peretele bacterian i un receptor pe celula eucariot. Adezinele
bacteriene sunt fimbriile i adezinele nefimbiale.
Fimbriile
Fimbriile sunt oligomeri proteici care apar ca apendici filamentoi la suprafaa celulei
bacteriene.
fimbriile de tip 1, sau pilii comuni, sunt prezente la multe specii de Enterobacteriaceae.
fimbriile P sunt prezente pe tulpinile de Escherichia coli pielonefritogene.
fimbriile S s-au evideniat la tulpinile de E.coli implicate n meningite
fimbriile K88 i K89 se gsesc la tulpinile de E.coli enterotoxigene ce produc diaree.
fimbriile ce conin N-metilfenilalanin au fost evideniate la o serie de genuri de bacterii
gram-negative, cum sunt Pseudomonas (bacilul piocianic), Neisseria (gonococ i
meningococ), Bacteroides, Vibro etc.
Adezine nefimbriale
La unele microorganisme s-au pus n eviden componente nefimbriale care asigur funcia
de adezine. Astfel, Salmonella typhimurium i Bordetella pertussis au la suprafaa lor o
hemaglutinin care le asigur ataarea de celulele int.
Capsula unor microbi faciliteaz uneori ataarea bacteriilor de celulele gazd pe lng faptul
c este un factor de inhibiie a nglobrii microbilor de ctre fagocite.
Pe de alt parte, unele substane din organism pot facilita la rndul lor aderena bacteriilor.
Astfel, fibronectina, o glicoprotein plasmatic ce se gsete i n spaiul extracelular, are
proprietatea de a adera la suprafeele mucoase. Unele bacterii care ptrund n organism ader
la rndul lor de fibronectin i prin intermediul ei de suprafaa celulelor epiteliale. Astfel de
microorganisme sunt Streptococcus pyogenes (streptococul beta-hemlolitic de grup A),
Staphylococcus aureus, Treponema pallidum, situsul lor de legare fiind ns diferit.
Factori de invazie microbian
Diseminarea bacteriilor n organsim se poate face pe mai multe ci:
din aproape n aproape, prin intermediul unor exoenzime i a unor elemente
structurale ale bacteriilor;
prin endocitoz i translocare;
pe cale sanghin sau/i limfatic.
Exoenzime
Bacteriile secret numerose exoenzime dintre care o parte, agresinele, faciliteaz invazia n
esuturi. Astfel:
61

hialuronidaza, sau factorul de difuziune este o enzim ce hidrolizeaz acidul
hialuronic din substana fundamental a esutului conjunctiv permind ptrunderea prin esut
a unor bacterii (Streptococcus pyogenes, S.aureus i Clostridium welchii);
coagulaza, enzim asemntoare trombinei este produs de toate tulpinile de
S.aureus. Ea protejeaz stafilococii, pe de o parte prin formarea unor bariere de fibrin n
jurul stafilococilor i a leziunilor produse ce acetia iar, pe de alt parte prin inactivarea unor
substane bactericide prezente n serul sanguin;
fibrinolizina secretat, de exemplu, de Streptococcus pyogenes i S.aureus favorizeaz
difuzarea infeciei prin lizarea fibrinei ce se formeaz n jurul leziunilor produse de bacteriile
respective;
enzimele hidrolitice (lipaze, proteaze, nucleaze) sunt secretate de toate speciile
bacteriene indiferent de patogenitatea lor.
enzimele citolitice cum sunt hemolizinele i leucocidinele. Astfel, de pild,
Streptococcus pyogenes secret streptolizina O cu aciune litic asupra hematiilor ce provin
de la diverse specii animale.
Pe lng exoenzimele amintite, un rol important l au unele componentele de nveli ale
bacteriilor ca, de pild, capsula (Streptococcus pneumoniae, Bacillus anthracis), unele
proteine de suprafa (proteina M a streptococului betahemolitic de grup A) etc. Aceste
componente protejeaz bacteriile de nglobare de ctre fagocite.
Endocitoza i translocarea
Unele bacterii au un habitat extracelular, fiind astfel mai accesibile mecanismelor de aprare
antiinfecioas a organismului, pe cnd altele se nmulesc n interiorul celulelelor, avnd
deci un habitat intracelular. Dintre acestea o parte au un habitat facultativ intracelular (bacilul
Koch, Brucella etc.) iar altele un habitat obligatoriu intracelular (Chlamydia trachmomatis).
Habitatul intracelular plaseaz bacteriile ntr-un mediu bogat n substane nutritive, le scutete
de competiia cu alte microorgansime i n acelai timp le protejeaz de rspunsul imun. Cele
mai invazive bacterii sunt cele cu habitat intracelular deoarece supravieuirea lor n diverse
celule i mai ales n fagocite favorizeaz diseminarea lor n organism.
Ptrunderea bacteriilor n celula gazd se face prin endocitoz. O serie de bacterii ptrund n
celule doar temporar, pentru a fi apoi ejectate. Acest proces se numete translocare.
Microorgansimele cel mai bine studiate ce invadeaz celulele organismului gazd prin
translocare sunt cele din genul Salmonella, Shigella, Yersinia, Escherichia coli i Bordetella.
Toxine bacteriene
Toxinele bacteriene sunt substane solubile cu efect toxic asupra organismului. Ele se mpart
n exotoxine, pe care bacteriile le secret n mediul nconjurtor ca un produs al
metabolismului propriu, i endotoxine, care fac parte din structura peretelui celular la
bacteriiile gram-negative i sunt eliberate n mediu numai dup moartea bacteriei.
Exotoxine
Exotoxinele bacteriene sunt proteine biologic active cu o toxicitate de regul foarte ridicat.
Unele dintre ele sunt cele mai puternice otrvuri cunoscute.
Exotoxinele sunt puternic imunogene i se transform prin nvechire i sub aciunea
formolului n derivai imunogeni, dar netoxici, numite anatoxine. Fiind netoxice, dar
imunogene, anatoxinele constituie baza vaccinrii mpotriva bolilor produse de bacterii
toxigene (tetanos, difterie).
62

Unele bacterii, ca, de pild, baciul difteric, tetanic, botulinic, holeric, au ca singur factor de
patogenitate toxigeneza, iar tabloul clinic este caracteristic toxinei respective.
Exotoxinele bacteriene sunt formate din dou domenii funcionale polipeptidice legate prin
puni disulfurice, fragmentul A i B. Fragmentul B nu este toxic dar asigur ataarea toxinei
de receptorii specifici de pe membrana citoplasmatic a celulei int facilitnd ptrunderea n
celul a fragmentului A care este toxic. Dup aciunea lor, exotoxinele se mpart n:
toxine care blocheaz sinteza proteinelor celulare (toxina difteric)
neurotoxine. Din aceast categorie fac parte cele mai puternice exotoxine, exotoxina
tetanic (provoac paralizia spastic a musculaturii striate moartea survenind) i exotoxina
botulinic (produce paralizia flasc a musculaturii netede);
toxine ce modific metabolismul celulei. Aceste toxine nu duc la moartea celulei, ci la
modificarea unei funcii ale acesteia (toxina holeric, toxina termolabil a E.coli, toxina
produs de Bordetella pertussis etc.).
Endotoxine
Endotoxina este lipopolizahardul (LPZ) din membrana extern a peretelui celular al
bacteriilor gram-negative i joac un rol important n patogenia infeciilor produse de aceste
microorgansime. Se compune din 3 uniti: un glicofosfolipid ce se numete lipidul A, o parte
numit core format din zaharuri, etanolamin i acid fosforic i antigenul O, un lan lung, de
zaharide, mai puin obinuite, specific de specie. Partea activ este lipidul A, celelalte avnd
rol de carrier.
Efectele endotoxinei nu sunt specifice speciei, ci sunt identice indiferent de la ce bacterii
gram negative provine. Ea se elibereaz numai dup distrugerea bacteriilor. n cantiti mici
produce reacii de alarm benefice organismului. n cantiti mari, ns, produce ocul
endotoxic ce poate evolua fatal.
Reaciile de alarm
febra. Endotoxina acioneaz ca un pirogen atunci cnd n esuturi apare un numr
suficient de mare de bacterii gram-negative care s le permit contactul cu circulaia
sanguin. Endotoxina determin reacia febril prin aciunea ei asupra macrofagelor care vor
secreta pirogeni endogeni (interleukina I, Tumor Necrosis Factor);
activarea complementului-pe cale alternativ, ceea ce favorizeaz liza bacteriilor i
chemotaxia fagocitelor n focarul infecios;
activarea macrofagelor. Sub aciunea endotoxinei, macrofagele vor secreta enzime
lizozomale n cantiti crescute, intensificndu-i fagocitoza;
stimularea limfocitelor B. Interleukina 1 secretat de macrofagele activate de
endotoxin induce proliferarea limfocitelor B. Din acest considerent, endotoxina este
considerat un imunomodelator.
ocul endotoxic. Reaciile descrise anterior fac parte din rezistena antiinfecioas. n situaia
cnd depesc anumite limite, ele devin foarte nocive organismului. Acest aspect se ntlnete
uneori n septicemiile cu bacili gram-negativi, cnd n organism se elibereaz cantiti mari
de endotoxin i se produce ocul endotoxic. Acesta se caracterizeaz prin hipotensiune,
coagulare intravascular diseminat, evoluia fiind grav. ocul endotoxic poate aprea i n
cazul administrrii unor perfuzii n care endotoxina provine de la bacili gram negativi
omori prin sterilizare. Deci, perfuziile trebuie s fie lipsite total de germeni pentru a exclude
posibilitatea existenei endotoxinei.

63

PATOGENITATEA MICROBIAN
Clasificarea microorganismelor dup patogenitate
ntre organismul uman i microorganisme (bacterii, virusuri, fungi, protozoare) se stabilesc
relaii care pot fi de comensalism, mutualism i parazitism.
Comensalismul este o asociaie n care un microorganism folosete ca mediu de via un alt
organism fr s-l prejudicieze. Omul este gazda unei flore comensale foarte bogate, prezent
pe piele, mucoase, tract digestiv etc. i care alctuiete flora normal.
Mutualismul este o relaie care se stabilete n beneficiul ambilor parteneri ai asociaiei. De
exemplu, ntre bacilii lactici i gazda uman exist un beneficiu reciproc: vaginul ofer
condiii de via bacililor lactici, iar acetia la rndul lor acidific mediul, mpiedicnd
dezvoltarea altor microorganisme.
Parazitismul este o relaie care se stabilete n mod cert n beneficiul microorganismului i n
detrimentul gazdei umane. Din aceast categorie fac parte microorganismele patogene.
Microorganismele nu se pot clasifica ns rigid, din punct de vedere al patogenitii, deoarece
n anumite condiii acelai microorganism stabilete relaii diferite cu gazda uman.
La un capt al clasificrii n funcie de patogenitate se afl microorganismele nepatogene care
triesc n mediul nconjurtor i nu gsesc condiii prielnice de dezvoltare n gazda uman, iar
la cellalt capt se afl microorganismele patogene care produc ntotdeauna mbolnviri cu
penetraie mare n populaie (Salmonella typhi, Yersinia pestis etc.) sau mbolnviri cu
consecine grave (Streptococcus pyogenes, Treponema pallidum).
ntre aceste dou extreme se afl flora condiionat patogen care, de regul, provine din flora
normal a organismului i care produce infecii doar n anumite condiii, ca de exemplu, n
scderea rezistenei antiinfecioase a organismului (n stress, dup viroze, dup tratament
imunodepresor, n SIDA etc.) i n cazul n care colonizeaz zone anatomice sterile
(septicemii, meningite).
Flora accidental patogen provine din flora comensal a organismului, dar necesit condiii
deosebite de nmulire, chiar dac ptrunde n zone anatomice sterile. Astfel, streptococii
viridans se gsesc n mod normal n faringe i ajung n circulaie dup extracii dentare sau
chiar i dup periaje energice ale dinilor. La omul sntos, mecanismele rezistenei naturale
antiinfecioase nltur streptococii n cteva ore de la ptrunderea lor n snge, pe cnd la cei
cu vicii valvulare, la care exist depozite de fibrin pe endocard, streptococii se vor nmuli
producnd endocardita lent malign. Sunt cunoscute, de asemenea, eecurile din chirurgia
ortopedic i cardiac datorita ptrunderii, n timpul operaiei, a tulpinilor de Staphylococcus
epidermidis, principalul comensal al pielii. Flora condiionat patogen i cea accidental
patogen alctuiesc flora oportunist, care profit n orice mprejurare de vulnerabilitatea
gazdei umane.
De-a lungul timpului a ponderea germenilor n etiologia infeciilor s-a modificat ncontinuu.
Pn la descoperirea rolului microbilor n producerea acestora, patologia infecioas a fost
dominat clar de bacteriile nalt patogene care au generat de-a lungul secolelor epidemii
pustiitoare. Astzi, etiologia infeciilor este dominat de flora condiionat patogen. n
ultimul deceniu, microbiologia clinic are o nou problem legat de diagnosticul
microbiologic al infeciilor care apar la bolnavii cu SIDA. Infeciile, la aceti bolnavi cu
imunitatea compromis, sunt produse de microorganisme condiionat patogene, accidental
patogene i uneori chiar i de microorganisme care pn n prezent nu au fost deloc s-au
foarte rar izolate n infecii.
64

Flora normal a organismului
n timpul vieii intrauterine, organismul este steril, fiind ferit de contaminarea ascendent prin
membranele fetale, iar placenta este impermeabil pentru majoritatea microorganismelor, cu
excepia unor virusuri (virusul rubeolic, citomegalic etc.), bacterii (Treponema pallidum) i
parazii (Toxoplasma gondi). Prima ntlnire a organismului uman cu microorganismele
mediului nconjurtor se produce n momentul naterii, cnd ftul vine n contact cu flora
vaginal i cutanat a mamei.
Dup natere, organismul este supus unei contaminri continue. Unele din speciile cu care
organismul vine n contact dispar foarte repede, iar altele colonizeaz pielea i suprafeele
organismului ce vin n contact cu exteriorul, constituind flora normal a organismului.
Organismul uman este populat de foarte multe de specii bacteriene i de un numr mai mic de
virusuri, fungi i protozoare.
Flora normal a organismului depinde de o serie de factori, cum sunt: vrsta, regimul
alimentar, statusul hormonal, starea de sntate, condiiile de igien colectiv i personal.
Zonele organismului populate n mod normal cu microorganisme sunt: pielea, tractul
respirator superior (vestibul nazal, faringe), tubul digestiv (cavitatea bucal i intestinul gros),
tractul urinar (partea anterioar a uretrei) i vaginul.
n zonele intens colonizate, ca, de pild, n intestinul gros, numrul de bacterii este de 1 x
1012/ml, pe cnd n zonele cu flor mai redus, cum sunt pielea, vaginul, numrul lor nu
depete n mod normal 1 x 106/ml.
n afar de aceste zone, microorganisme mai pot aprea n numr mic i n mod pasager n
restul tractului respirator, digestiv i n uter, fiind rapid ndeprtate de mijloacele de aprare
ale organismului. Sngele, lichidul cefalorahidian, lichidele sinoviale, din seroase, esuturile
profunde sunt sterile. Prezena microbilor n aceste zone are ntotdeauna o semnificaie
patologic.
Flora normal a pielii
Pielea este populat de multe specii bacteriene, densitatea acestora fiind mai mare n zonele
umede, cum sunt axila, zona perineal, zonele interdigitale i scalpul. Specia cel mai des
ntlnit, care reprezint 90% din flora cutanat aerob este Staphylococcus epidermidis. n
regiunile umede se poate ntlni i S. aureus. n afar de speciile menionate, pe piele se mai
gsesc bacili difterimorfi anaerobi, ca, de pild, Propionibacterium acnes. Acetia din urm
sunt prezeni n foliculii piloi, transpiraie, glandele sebacee, se nmulesc mai ales n
pubertate i contribuie la producerea acneei juvenile. La 20% din populaie se izoleaz de pe
piele Clostridium perfringens. n mod pasager se evideniaz n patul periunghial i pe scalp
specii de Candida.
Flora normal a cavitii bucale i a vestibului nazal
Speciile ce colonizeaz aceste zone anatomice sunt, n general, streptococi, stafilococi, bacili
difterimorfi, coci gram-negativi i mai rar ciuperci. Unele din aceste specii, ca, de exemplu,
S.aureus, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Candida, sunt condiionat
patogene.
Densitatea florei microbiene este foarte mare n cavitatea bucal, fiind apreciat la 1011
celule bacteriene la un g de esut. Suprafeele dinilor i anurile gingivale sunt sediul unei
bogate flore anaerobe.
Placa dentar este un film format din celule bacteriene ancorate ntr-o matrice polizahardic
secretat de acestea. Dac igiena cavitii bucale este deficitar, placa se ngroa i sub
65

aciunea unor specii ca Streptococcus mutans se produc cariile dentare. n cavitatea bucal
pot coexista i protozoare, ca, de exemplu, Trichomonas tenax.
Flora faringian este reprezentat de streptococi viridans i ocazional de streptococi beta-
hemolitici (specie patogen), la care se adaug difterimorfi, neisserii hemolitice, stafilococi
etc.
Tractul respirator inferior este steril, dar din plmnul persoanelor sntoase s-a izolat
Pneumocistis carinii. Acest parazit nu are semnificaie patologic la aceste persoane, dar
poate da pneumonii grave la persoanele imunocompromise, cum sunt bolnavii de SIDA.
Flora normal a tubului digestiv
Stomacul conine doar ocazional flor bacterian acidotolerant (unii lactobacili i
streptococi) dat fiind aciditatea gastric pronunat. De pe mucoasa gastric se izoleaz
frecvent Helicobacter pylori, care ar putea constitui cauza unor gastrite i a ulcerului
duodenal. La personane la care se admnistreaz o medicaie ce schimb pH-ul coninutului
gastric, flora normal sufer modificri.
Partea incipient a intestinului subire conine un numr redus de microbi, care crete
vertiginos spre ileon unde se vor gsi streptococi, lactobacili, enterobacterii, specii de
Bacteroides etc.
Intestinul gros este cea mai populat zon cu microbi a organismului. Aici, peste 90% din
flor este anaerob, reprezentat mai ales de bacili aparinnd genului Bacteroides, nsoit de
enterobacterii care sunt facultativ anaerobe, la care se adaug protozoare nepatogene, ca, de
pild Entamoeba coli. Tratamentul cu antibiotice altereaz rapid echilibrul care se stabilete
ntre aceste specii cu nmulirea consecutiv a unor specii mai rezistente la antibiotice cum
sunt Clostridium difficile, specii din genul Enterococcus i Pseudomonas care pot produce
diaree cu posibiliti de evoluie spre colit pseudomembranoas.
Flora normal a tractului urogenital
Uretra anterioar este populat la ambele sexe cu flor asemntoare celei de pe piele: S.
epidermidis, Enterococcus faecalis, difterimorfi etc.
Flora vaginal variaz n funcie de vrst. Astfel, pn la pubertate flora vaginal conine
specii prezente pe piele, iar dup pubertate pn la menopauz vaginul este populat cu o
varietate foare mare de bacterii, predominante fiind speciile de Lactobacillus (bacili
Dderlein). Dintre speciile prezente menionm: stafilococi coagulazo-negativi, streptococi
(mai ales din grupul B), enterococi, Gardnerella vaginalis, micoplasme, Mobiluncus etc.
Ocazional pot fi prezente i specii de Candida.
Rolul florei normale
Flora normal joac un rol important att n meninerea strii de sntate ct i n producerea
unor infecii. Astfel:
este un factor important n aprarea antiinfecioas natural
Prin prezena lor, microorganismele induc sinteza de anticorpi care, datorit faptului c
reacioneaz ncruciat i cu alte specii microbiene, particip la aprarea antiinfecioas a
organismului. De asemenea, deprim nmulirea florei patogene prin mecanisme competitive
pentru un substrat nutritiv, pentru aceiai receptori celulari i producerea de bacteriocine.
contribuie la nutriia i metabolismul organismului
Flora normal (specii de Bacteroides i E. coli) sintetizeaz n intestin unele vitamine, cum
sunt vitamina K i vitamine din grupul B. De asemenea, intervine n circuitul hepato-entero-
hepatic al unor substane cum sunt hormonii steroizi i srurile biliare.
66

constituie sursa majoritii infeciilor oportuniste
Medicul practician ntlnete mai frecvent infecii produse de microorganisme ce fac parte
din flora normal dect infecii produse de flora patogen provenit din mediul extern al
organismului. Astfel, speciile de Bacteroides de pild, rezidente ale intesinului gros, dac
ptrund n zone sterile ale organismului, produc abcese. Staphylococcus epidermidis, cea mai
important specie a florei normale a pielii, are proprietatea de a se ataa n mod nespecific de
catetere de plastic, producnd septicemii. De asemenea, E. coli, prezent n flora intestinal
este cel mai frecvent agent etiologic al infeciilor urinare. Aceste infecii cu germeni
comensali i condiionat patogeni sunt favorizate de admnistrarea necontrolat a
antibioticelor.

67

FACTORII DE PATOGENITATE AI BACTERIILOR
Patogenitatea este un proces complex i multifactorial, care cuprinde totalitatea
mecanismelor biochimice prin care microorganismele produc infecii. n timp ce unele
microorganisme (patogene) produc n mod obinuit infecii la indivizii neimunizai, dar cu
rezistena natural intact, altele (oportuniste) produc infecii doar la indivizi cu barierele
aprrii naturale compromise.
Virulena este gradul de patogenitate a unei tulpini n cadrul speciei. Spre deosebire de
patogenitate, care este un caracter de specie, virulena este un caracter de tulpin. De
exemplu, n cadrul speciei Corynebacterium diphteriae exist specii toxigene virulente i
netoxigene, deci nepatogene. Chiar i ntre tulpinile toxigene exist o diferen n ceea ce
privete cantitatea de toxin secretat.
Dac am mpri bacteriile dup capacitatea de invazie a organismului, la un capt s-ar afla
bacteriile toxigene, care se multiplic discret la poarta de intrare, iar toxina, secretat i apoi
vehiculat de snge n organsim, este responsabil de apariia bolii (cazul bacilului difteric i
tetanic, care produc infecia prin multiplicarea lor la poarta de intrare, fr a invada
organismul, sau a bacilului botulinic, care i secret toxina n conservele alimentare).
La cellalt capt se afl bacteriile invazive pentru care ataarea constituie un prim pas n
penetrarea mai adnc a esuturilor sterile. Ajunse aici, se vor multiplica, vor secreta diveri
factori de patogenitate, rezultatul fiind infecia (bacilul crbunos, pneumococul etc.).
La aceste dou categorii se adaug bacteriile sensibilizante, care prin infecie sensibilizeaz
organismul. Acesta va rspunde prin reacii imunopatologice ce i sunt nocive i genereaz
leziuni (bacilul tuberculos).
O bacterie poate fi n acelai timp invaziv, toxigen i sensibilizant, ca, de exemplu,
Streptococcus pyogenes, dotat cu enzime invazive, cu capacitatea de a secreta eritrotoxina
(responsabil de apariia scarlatinei) i de a produce prin mecanism alergic cardita
reumatismal, reumatismul poliarticular acut, glomerulonefrita acut etc.
Pentru a produce o infecie, microorgansimele trebuie s parcurg, n general (dar nu n mod
obligatoriu), urmtoarele etape:
ataarea i ptrunderea n organismul gazd;
invadarea local sau general a organismului;
multiplicarea n organismul gazd i secreia unor factori de patogenitate.
Factori de ptrundere i aderen
Organismul uman are multiple posibiliti prin care se opune ptrunderii agenilor
infectioi. Totui, o serie de microorganisme reuesc s evite aceste bariere sau profit de
situaii deosebite care le permit ptrunderea n organism.
Astfel, o leziune traumatic care ntrerupe integritatea pielii, principala barier extern
antiinfecioas, creeaz condiii de ptrundere pentru germeni care se gsesc n mod normal
pe tegumente (S. aureus, Pseudomonas aeruginosa).
Unele microorganisme ptrund prin nepturile unor insecte (Plasmodium vivax,
Borrelia burgerdorfi, Yersinia pestis) sau prin muctura unui animal (virusul rabic), iar
altele sunt introduse n organism n timpul unor acte medicale, cum sunt injeciile,
transfuziile (virusurile hepatitice, virusul SIDA etc.), operaii pe cordul deschis
(S.epidermidis) etc.
68

Leptospirele, care sunt bacterii spiralate, pot ptrunde chiar i prin pielea intact
datorit unor micri de nurubare.
Alte ci de ptrundere pentru agenii infectioi sunt calea digestiv, respiratorie, urogenital
i conjunctival. Ele sunt prevzute cu diverse mecanisme de clearance a particulelor strine
(lacrimi, mucus, micrile cililor vibratili etc.) care se opun aderenei microbilor.
Microorganismele care reuesc s ptrund pe aceste ci dispun de mecanisme speciale de
aderen, ce depesc mecanismele rezistenei naturale.
Prima relaie care se stabilete ntre microorganismul infectant i gazda sa este ataarea
microorganismului de suprafaa celulelor.
Aderena microbilor de organismul gazd presupune prezena unei sau mai multor adezine
microbiene prezente pe peretele bacterian i un receptor pe celula eucariot. Adezinele
bacteriene sunt fimbriile i adezinele nefimbiale.
Fimbriile
Fimbriile sunt oligomeri proteici care apar ca apendici filamentoi la suprafaa celulei
bacteriene.
fimbriile de tip 1, sau pilii comuni, sunt prezente la multe specii de Enterobacteriaceae.
fimbriile P sunt prezente pe tulpinile de Escherichia coli pielonefritogene.
fimbriile S s-au evideniat la tulpinile de E.coli implicate n meningite
fimbriile K88 i K89 se gsesc la tulpinile de E.coli enterotoxigene ce produc diaree.
fimbriile ce conin N-metilfenilalanin au fost evideniate la o serie de genuri de bacterii
gram-negative, cum sunt Pseudomonas (bacilul piocianic), Neisseria (gonococ i
meningococ), Bacteroides, Vibro etc.
Adezine nefimbriale
La unele microorganisme s-au pus n eviden componente nefimbriale care asigur funcia
de adezine. Astfel, Salmonella typhimurium i Bordetella pertussis au la suprafaa lor o
hemaglutinin care le asigur ataarea de celulele int.
Capsula unor microbi faciliteaz uneori ataarea bacteriilor de celulele gazd pe lng faptul
c este un factor de inhibiie a nglobrii microbilor de ctre fagocite.
Pe de alt parte, unele substane din organism pot facilita la rndul lor aderena bacteriilor.
Astfel, fibronectina, o glicoprotein plasmatic ce se gsete i n spaiul extracelular, are
proprietatea de a adera la suprafeele mucoase. Unele bacterii care ptrund n organism ader
la rndul lor de fibronectin i prin intermediul ei de suprafaa celulelor epiteliale. Astfel de
microorganisme sunt Streptococcus pyogenes (streptococul beta-hemlolitic de grup A),
Staphylococcus aureus, Treponema pallidum, situsul lor de legare fiind ns diferit.
Factori de invazie microbian
Diseminarea bacteriilor n organsim se poate face pe mai multe ci:
din aproape n aproape, prin intermediul unor exoenzime i a unor elemente
structurale ale bacteriilor;
prin endocitoz i translocare;
pe cale sanghin sau/i limfatic.
Exoenzime
Bacteriile secret numerose exoenzime dintre care o parte, agresinele, faciliteaz invazia n
esuturi. Astfel:
69

hialuronidaza, sau factorul de difuziune este o enzim ce hidrolizeaz acidul
hialuronic din substana fundamental a esutului conjunctiv permind ptrunderea prin esut
a unor bacterii (Streptococcus pyogenes, S.aureus i Clostridium welchii);
coagulaza, enzim asemntoare trombinei este produs de toate tulpinile de
S.aureus. Ea protejeaz stafilococii, pe de o parte prin formarea unor bariere de fibrin n
jurul stafilococilor i a leziunilor produse ce acetia iar, pe de alt parte prin inactivarea unor
substane bactericide prezente n serul sanguin;
fibrinolizina secretat, de exemplu, de Streptococcus pyogenes i S.aureus
favorizeaz difuzarea infeciei prin lizarea fibrinei ce se formeaz n jurul leziunilor produse
de bacteriile respective;
enzimele hidrolitice (lipaze, proteaze, nucleaze) sunt secretate de toate speciile
bacteriene indiferent de patogenitatea lor.
enzimele citolitice cum sunt hemolizinele i leucocidinele. Astfel, de pild,
Streptococcus pyogenes secret streptolizina O cu aciune litic asupra hematiilor ce provin
de la diverse specii animale.
Pe lng exoenzimele amintite, un rol important l au unele componentele de nveli ale
bacteriilor ca, de pild, capsula (Streptococcus pneumoniae, Bacillus anthracis), unele
proteine de suprafa (proteina M a streptococului betahemolitic de grup A) etc. Aceste
componente protejeaz bacteriile de nglobare de ctre fagocite.
Endocitoza i translocarea
Unele bacterii au un habitat extracelular, fiind astfel mai accesibile mecanismelor de
aprare antiinfecioas a organismului, pe cnd altele se nmulesc n interiorul celulelelor,
avnd deci un habitat intracelular. Dintre acestea o parte au un habitat facultativ intracelular
(bacilul Koch, Brucella etc.) iar altele un habitat obligatoriu intracelular (Chlamydia
trachmomatis).
Habitatul intracelular plaseaz bacteriile ntr-un mediu bogat n substane nutritive, le scutete
de competiia cu alte microorgansime i n acelai timp le protejeaz de rspunsul imun. Cele
mai invazive bacterii sunt cele cu habitat intracelular deoarece supravieuirea lor n diverse
celule i mai ales n fagocite favorizeaz diseminarea lor n organism.
Ptrunderea bacteriilor n celula gazd se face prin endocitoz. O serie de bacterii ptrund n
celule doar temporar, pentru a fi apoi ejectate. Acest proces se numete translocare.
Microorgansimele cel mai bine studiate ce invadeaz celulele organismului gazd prin
translocare sunt cele din genul Salmonella, Shigella, Yersinia, Escherichia coli i Bordetella.
Toxine bacteriene
Toxinele bacteriene sunt substane solubile cu efect toxic asupra organismului. Ele se
mpart n exotoxine, pe care bacteriile le secret n mediul nconjurtor ca un produs al
metabolismului propriu, i endotoxine, care fac parte din structura peretelui celular la
bacteriiile gram-negative i sunt eliberate n mediu numai dup moartea bacteriei.
Exotoxine
Exotoxinele bacteriene sunt proteine biologic active cu o toxicitate de regul foarte ridicat.
Unele dintre ele sunt cele mai puternice otrvuri cunoscute.
Exotoxinele sunt puternic imunogene i se transform prin nvechire i sub aciunea
formolului n derivai imunogeni, dar netoxici, numite anatoxine. Fiind netoxice, dar
imunogene, anatoxinele constituie baza vaccinrii mpotriva bolilor produse de bacterii
toxigene (tetanos, difterie).
70

Unele bacterii, ca, de pild, baciul difteric, tetanic, botulinic, holeric, au ca singur factor de
patogenitate toxigeneza, iar tabloul clinic este caracteristic toxinei respective.
Exotoxinele bacteriene sunt formate din dou domenii funcionale polipeptidice legate prin
puni disulfurice, fragmentul A i B. Fragmentul B nu este toxic dar asigur ataarea toxinei
de receptorii specifici de pe membrana citoplasmatic a celulei int facilitnd ptrunderea n
celul a fragmentului A care este toxic. Dup aciunea lor, exotoxinele se mpart n:
toxine care blocheaz sinteza proteinelor celulare (toxina difteric)
neurotoxine. Din aceast categorie fac parte cele mai puternice exotoxine, exotoxina
tetanic (provoac paralizia spastic a musculaturii striate moartea survenind) i exotoxina
botulinic (produce paralizia flasc a musculaturii netede);
toxine ce modific metabolismul celulei. Aceste toxine nu duc la moartea celulei, ci
la modificarea unei funcii ale acesteia (toxina holeric, toxina termolabil a E.coli, toxina
produs de Bordetella pertussis etc.).
Endotoxine
Endotoxina este lipopolizahardul (LPZ) din membrana extern a peretelui celular al
bacteriilor gram-negative i joac un rol important n patogenia infeciilor produse de aceste
microorgansime. Se compune din 3 uniti: un glicofosfolipid ce se numete lipidul A, o parte
numit core format din zaharuri, etanolamin i acid fosforic i antigenul O, un lan lung, de
zaharide, mai puin obinuite, specific de specie. Partea activ este lipidul A, celelalte avnd
rol de carrier.
Efectele endotoxinei nu sunt specifice speciei, ci sunt identice indiferent de la ce bacterii
gram negative provine. Ea se elibereaz numai dup distrugerea bacteriilor. n cantiti mici
produce reacii de alarm benefice organismului. n cantiti mari, ns, produce ocul
endotoxic ce poate evolua fatal.
Reaciile de alarm
febra. Endotoxina acioneaz ca un pirogen atunci cnd n esuturi apare un numr suficient
de mare de bacterii gram-negative care s le permit contactul cu circulaia sanguin.
Endotoxina determin reacia febril prin aciunea ei asupra macrofagelor care vor secreta
pirogeni endogeni (interleukina I, Tumor Necrosis Factor);
activarea complementului-pe cale alternativ, ceea ce favorizeaz liza bacteriilor i
chemotaxia fagocitelor n focarul infecios;
activarea macrofagelor. Sub aciunea endotoxinei, macrofagele vor secreta enzime
lizozomale n cantiti crescute, intensificndu-i fagocitoza;
stimularea limfocitelor B. Interleukina I secretat de macrofagele activate de endotoxin
induce proliferarea limfocitelor B. Din acest considerent, endotoxina este considerat un
imunomodelator.
ocul endotoxic.Reaciile descrise anterior fac parte din rezistena antiinfecioas. n situaia
cnd depesc anumite limite, ele devin foarte nocive organismului. Acest aspect se ntlnete
uneori n septicemiile cu bacili gram-negativi, cnd n organism se elibereaz cantiti mari
de endotoxin i se produce ocul endotoxic. Acesta se caracterizeaz prin hipotensiune,
coagulare intravascular diseminat, evoluia fiind grav. ocul endotoxic poate aprea i n
cazul administrrii unor perfuzii n care endotoxina provine de la bacili gram negativi
omori prin sterilizare. Deci, perfuziile trebuie s fie lipsite total de germeni pentru a exclude
posibilitatea existenei endotoxinei.


71

REZISTENA ANTIINFECIOAS
Mediul nconjurtor conine o infinitate de ageni infecioi, omul fiind supus unei
contaminri permanente. Cu toate acestea, la individul sntos, infeciile se produc rar, sunt
de obicei de durat limitat i dispar fr sechele, datorit mecanismelor rezistenei
antiinfecioase.
Rezistena antiinfecioas este suma tuturor mecanismelor care protejeaz organismul de
infecii i cuprinde:
factori genetici
bariere externe
rezistena nnscut, care asigur rezistena natural, nespecific, fa de agenii
infecioi, comun tuturor indivizilor unei specii, necondiionat de un contact
anterior cu un agent infecios, i
rezistena dobndit sau imunitatea antiinfecioas, care se dezvolt pe parcursul
vieii, ca urmare a contaminrii continue cu diveri ageni infecioi i care depinde,
deci, de experiena individual a fiecruia.

Fig. 9.1. Cele 4 niveluri ale aprrii antiinfecioase

Factorii genetici
Rezistena antiinfecioas de specie. Fiecare specie este genetic rezistent la anumii ageni
etiologici infecioi. Astfel, de pild, omul este rezistent fa de virusul Carr, agentul
etiologic al jigodiei la cine, la virusul hepatitei cinilor sau la pesta aviar. Pe de alt parte,
72

omul este singura specie care face n mod natural infecia sifilitic, Treponema pallidum
nefiind patogen pentru alte specii animale.
Rezistena genetic antiinfecioas de specie este absolut. Ea se explic prin condiiile
impropri pe care un organism le ofer microorganismului fa de care este rezistent i prin
lipsa receptorilor celulari specifici pentru agentul infecios respectiv.
Rezistena individual. n cadrul aceleiai specii, rezistena antiinfecioas prezint variaii de
ras i individuale. Este cunoscut faptul c n timpul unor epidemii, ca, de pild, n cele de
poliomielit, unii indivizi fac forme grave de boal infecioas, cu sechele, alii forme fruste
iar majoritatea infecii clinic inaparente. De asemenea, n timp ce exist purttori sntoi de
streptococ beta-hemolitic de grup A, infeciile streptococice pot produce n funcie de
rezistena individual, infecii faringiene banale sau complicaii alergice severe.
Relaia dintre factorii genetici i sensibilitatea la diveri ageni infecioi este deosebit de
important, infeciile constituind de-a lungul timpului factorul cel mai puternic al seleciei
naturale. S-au evideniat o serie de gene care sunt responsabile de susceptibilitatea la anumite
infecii cum sunt cele cu HIV, virusul hepatitei B, tuberculoza, lepra etc.

Tabelul 9.1. Particularitile rezistenei naturale i a rezistenei dobndite

Caracteristici Sistemul imun nnscut Sistemul imun adaptativ
Receptori Codificai genetic Codificai de gene rezultate n urma
rearanjrii somatice
Distribuie Nu este clonal, celulele
aparinnd aceleiai clase
fiind egale
Clonal, fiecare celul fiind
purttoarea unui anumit receptor
Recunoate Tipare moleculare mai
multor ageni infecioi -
PAMPs
Detalii moleculare ale proteinelor
(peptide), zaharidelor
Discriminarea
self/nonself
Este perfect Imperfect, deoarece depinde de
experiena imunologic a fiecruia
Timp de aciune Imediat, minute, ore Zile, sptmni
Rspuns Molecule stimulatoare
(B7)
Citokine (IL-1, IL-6)
Chemokine (IL-8)
Expansiune clonal: anticorpi i LT
sensibilizate
Citokine: IL-2, IL-4, INF

Barierele anatomice
Integritatea anatomic a organismului este unul din factorii eseniali n aprarea
antiinfecioas natural.
Pielea i mucoasele.Tegumentele i mucoasele constituie bariere mecanice eficiente n
prevenirea ptrunderii microbilor n organism.
Pielea intact este impermeabil prin structura ei pentru majoritatea microorgansimelor, cu
unele excepii, ca, de exemplu, leptospirele, virusurile papiloma i dermatofiii. Orice leziune
a pielii poate constitui punctul de plecare a unei infecii. Astfel, bacilul piocianic, rezident al
florei cutanate normale, infecteaz aproape ntotdeauna plgile arse.
73

Acizii grai liberi produi de glandele sebacee i de unele specii microbiene de pe suprafaa
pielii, acidul lactic, rezultat al metabolismului local, pH-ul sczut (5-6) i uscciunea relativ
a pielii creeaz condiii nefavorabile dezvoltrii majoritii microorganismelor, cu excepia
germenilor din genurile Staphylococcus, Corynebacterium, Proprionibacterium etc. i confer
pielii proprieti autosterilizane. Pe suprafaa pielii sunt prezente o serie de substane
antimicrobiene, mai ales peptide care sunt secretate ca precursori i care sub aciunea unor
protease devin defensine i cathelicidine active i au asupra bacteriilor o aciune
asemntoare dezinfectantelor. Proprietatea autosterilizant a pielii curate este superioar
celei murdare. Descuamarea continu a stratului cornos este, de asemenea, o modalitate de
ndeprtare a florei bacteriene de pe piele.
Sub epiderm sunt prezente celulele Langerhans (celule dendritice imature), care fagociteaz
microbii, i migreaz pna la primul ganglion limfatic unde iniiaz raspunsul imun dobndit
(sau adaptativ).
Mucoasele, structuri ce delimiteaz suprafeele interne ale organismului, gzduiesc un mare
numr de microbi i se opun ptrunderii acestora n organism nu att prin rezistena mecanic
ct prin secreiile cu proprieti antibacteriene. Astfel, mucusul cervical, lichidul prostatic,
lacrimile sau alte secreii au proprieti bactericide ce se datoreaz unor substane, dintre care
aminitim lizozimul, activ mai ales pe flora gram-pozitiv i lactoferina, protein chelatoare ce
spoliaz mediul de fierul necesar multiplicrii bacteriene. Sub membrana bazal a mucoaselor
se afl esutul limfatic ataat mucoaselor MALT (mucosa-associated lymphoid tissue)
care preia antigenele microbiene i declanseaz astfel un rspuns imun adaptativ.
Pe suprafaa mucoaselor mai este prezent IgA - secretor care mpiedic ataarea bacteriilor
de celule prin fixarea i blocarea unor receptori pentru bacterii, inhib mobilitatea bacterian,
aglutineaz unele microorganisme sau neutralizeaz toxinele lor.
Tractul respirator este prevzut cu mecanisme de clearence microbian foarte eficiente.
Mucoasa respiratorie este lubrefiat cu un strat de mucus. Acesta are proprieti tensioactive
i surfactante inhibnd fixarea bacteriilor de celulele epiteliale3.
Microorganismele inhalate n particule de praf sau picturi mai mari dect 5 m ader de
mucoasa tractului respirator superior i sunt readuse prin micrile cililor vibratili n faringele
posterior, de unde sunt fie expectorate, fie nghiite. La micrile cililor se mai adaug tusea
i strnutul, ambele foarte eficiente n eliminarea diverselor impuriti din cile respiratorii.
Particulele mai mici de 5 m ajung pn n tractul respirator inferior, unde sunt fagocitate de
macrofagele alveolare. Fumul de igar sau ali poluani, precum i unele bacterii i virusuri
(B. pertussis, v. gripal) blocheaz acest clearence, prin paralizia cililor, favoriznd producerea
unei pneumonii secundare. Intubaia sau tracheostomia scad eficiena rezistenei naturale n
cile respiratorii. Reflexul de tuse i strnutul contribuie deasemenea la ndeprtarea
microbilor.
La nivelul alveolelor pulmonare este prezent surfactantul A i D, glicoproteine opsonizate cu
rol n potenare fagocitozei.
Tubul digestiv. Microorganismele sunt supuse deja n cavitatea bucal aciunii salivei care,
prin coninutul de lizozim, lezeaz peretele celular i membrana citoplasmatic a unor
bacterii gram-pozitive. La aceasta se adaug aciunea unor anticorpi care se pot gsi n saliv.
n stomac, flora bacterian sufer o reducere drastic sub aciunea acidului clorhidric din
sucul gastric (pH=1,5). n perioadele de var crete numrul de toxiinfecii alimentare
deoarece consumul de lichide este mare i sucul gastric se dilueaz. Creterea consecutiv a
pH-ului permite trecerea microbilor de bariera gastric i nmulirea lor eficient n intestin.

3
In fibroza chistic, o boal genetic caracterizat prin nefuncionarea unor canale de Cl - ce va determina
secreia unui mucus foarte vscos, infeciile sunt foarte frecvente.
74

Tripsina i celelalte enzime din sucul pancreatic au aciune bactericid prin hidroliza
proteinelor din peretele celular i membrana celular, iar bila interfereaz funciile vitale ale
membranei celulare avnd i o aciune neutralizant asupra unor toxine bacteriene.
Tractul genito urinar. Urina este n mod normal steril. pH-ul acid i curgerea urinii asigur
o splare permanent a cilor urinare.
Infeciile urinare sunt mai rare la brbai, deoarece uretra este lung (20cm) limitnd accesul
microbilor n vezica urinar, spre deosebire de uretra feminin (5cm) care permite mai uor
colonizarea vezicii. Rinichii secret o glicoprotein, proteina Tamm-Horsfall, care este
excretat prin urin i are proprietatea de a fixa bacteriile ca un burete, mpiedicndu-le s se
fixeze de uroteliu.
Staza urinar cauzat prin reflux, hipertrofie de prostat sau calculoz renal favorizeaz
nmulirea microbilor i deci infecia.
Vaginul este protejat parial de pH-ul acid rezultat n urma metabolizrii glicogenului de ctre
bacilii lactic i care este impropriu dezvoltrii unui numr mare de specii microbiene.
Lichidul seminal conine spermina, o poliamin dependent de pH i care inhib creterea
florei gram pozitive.

Tabelul 9.2. Bariere externe ale rezistenei naturale
Sediu Mecanisme de protecie
Piele Barier mecanic;
Secreia de acizi grai;
prezena de peptide cu activitate antibacterian (defensine,
cathilicidine)

Cavitate bucala Enzime
calprotectina: cation chelator bivalent ce restricioneaz nutriia
microbian
alfa i beta defensine: peptide ce produc liza osmotic a celulelor
bacteriene prin formarea de pori n membrana citolasmatic
lizozimul: desface legturile dintre acidul N-acetil muramic i N-
acetil glucozamin din peptidoglican, fiind activ pe bacteriile gram
pozitiv
Peroxidaza: oxideaz enzimele glicolitice ale bacteriilor
anticorpii din saliv;
Aciunea de splare a salivei;
Aparat respirator Micarea firelor de pr din vestibulul nazal care capteaz
microbii;
Enzimele i capacitatea surfactant a mucusului;
Micrile cililor vibratori;
Macrofagele alveolare
Tract digestiv pH-ul gastric (1 - 2;)
Enzimele i anticorpii din mucus;
Micrile peristaltice;
Flora intestinului gros;
75

Ochi Lizozomul din lacrimi;
Aciunea de splare a lacrimilor;
Ureche Aciunea antimicrobian a cerumenului;
Aparat
genitourinar
pH-ul vaginal, flora local;
pH-ul urinii;
Aciunea de splare a urinii;
Majoritatea limfocitelor T i B sunt implicate n imunitatea dobndit. Exist ns o
subpopulaie de limfocite T intraepiteliale i limfocite B1 are se gsesc n epiderm i n
epiteliul mucoaselor. Ele au mai degrab un rol efector n cadrul imunitii nnscute dect n
imunitatea adaptativ.
Limfocitele T intraepiteliale, cunoscute sub numele de limfocite T, se gsesc mai ales n
piele i mucoase i au o diversitate restrns de receptori, cu care recunosc tiparele
moleculare comune asociate germenilor patogeni (PAMPs). Ele secret citokine, poteneaz
fagocitoza i distrug celule infectate. Limfocitele B-1 se gsesc mai ales n cavitatea i
peritoneal unde recunoate germeni ce au trecut de peretele intestinal. Limfocitele B1
produc IgM circulani ce constituie anticorpii naturali. Ambele subpopulaii joac rol de
santinel a mucoaselor n aprarea natural.
Flora normal. Flora normal are o serie de funcii fiziologice, printre care prevenirea
colonizrii organismului cu flor patogen. Mecanismele prin care flora normal se opune
multipicrii florei patogene sunt:
competiia pentru acelai receptor celular,
competiia pentru un substrat nutritiv,
secreia unor produi secundari toxici,
stimularea sistemului imun, care va produce anticorpi naturali, ce vor reaciona
ncruciat cu antigenele florei patogene.
Administrarea abuziv de antibiotice va distruge echilibrul dintre speciile florei normale i
unele specii condiionat patogene sau patogene, lipsind organismul de un mecanism
antiinfecios important. Astfel, tratamentul oral ndelungat cu antibiotice va avea ca urmare
apariia diareei prin dezvoltarea necontrolat a unei singure specii ca, de pild, S.aureus,
Candida albicans, Clostridium difficile etc. care fac parte din flora normal i care se menin
la individul sntos n anumite limite tocmai datorit antagonismului bacterian.
4


4
Prin administrarea de antibiotice cu spectru larg pot apare superinfecii datorit distrugerii
echilibrului ecologic dintre specii.
76


Fig. 9.2. Barierele externe ale aprrii antiinfecioase
REZISTENA ANTIINFECIOAS NATURAL
Rezistena antiinfecioas natural reprezint totalitatea mecanismelor constituionale
nnscute care se opun penetrrii i dezvoltrii microbilor patogeni n organism.
Aa cum am vzut, organismul este aprat fa de unele infecii prin zestrea sa ereditar, care
nu permite dezvoltarea anumitor germeni. La ptrunderea germenilor la care este sensibil,
organsimul se opune prin bariere externe anatomice i chimice la care se adaug flora
normal a organismului. Dac totui germenii au reuit s strbat aceste bariere i ajung n
zonele interne sterile ale organismului, intervin receptori PRR (Pattern Recognition
Recepors) care recunosc tipare de suprafa, comune multor bacterii, virusuri i fungi care se
numesc PAMPs (Pathogen Associated Molecular Patterns). Ca urmare se secret o serie de
citokine, se activeaz complementul i se declaneaz inflamaia. In focarul inflamator se vor
acumula PMN, celule dendritice i macrofage, care vor fagocita agenii infecioi i iniia
apoi rspunsul imun dobndit. Bineneles c exist germeni care au dezvoltat strategii ce
ocolesc mecanismele rezistenei naturale i care dau infecii la indivizii neimunizai.
Cu toate c mecanismele rezistenei naturale sunt distincte de cele ale rezistenei dobndite,
ele nu pot fi separate deoarece se intric i acioneaz sinergic. Rspunsul imun nespecific
este triggerul rspunsului imun dobndit. De asemenea rspunsul imun natural nu este att
de nespecific cum a fost descris iniial. Sistmul imun nnscut dispune de vaste posibiliti
de recunoatere a multora dintre agenii infecioi ptruni n organism i este cel care ia
decizia de a rspunde sau nu la o stimulare extern.

77

Mecanisme de recunoatere moleculare a agenilor infecioi n cadrul rezistenei
antiinfecioase nnscute
Molecule de suprafa comune asociate agenilor infecioi-PAMPs
Dac un microorganism trece de stratul protector al barierelor anatomice, el ntlnete
mecanismele de aprare nespecifice nnscute, umorale i celulare, prezente n lipsa unui
contact anterior cu agentul infecios respectiv.
Sistemul rezistenei naturale recunoate molecule de suprafa care sunt:
comune multor ageni infecioi (bacterii, virusuri, fungi)
neschimbate n cursul evoluiei filogenetice
neexprimate de esuturile gazdei
Aceste tipare moleculare comune asociate germenilor se numesc PAMPs - Pathogen
Associated Molecular Patterns. Majoritatea celulelor sunt capabile s recunoasc aceste tipare
structurale i s-a demonstrat i existena unor receptori solubili plasmatici cu rol de opsonine
ce pot activa complementul dup unirea cu PAMPs. Se apreciaz c sistemul imun nnscut
recunoate in jur de 103 PAMPs. Cele mai importante PAMPs pe care le prezint agenii
infecioi sunt:
Lipopolizaharidul de perete al bacteriilor gram negative
Lipoproteine bacteriene
Porinele
Peptidoglicanul bacteriilor gram pozitive
Acizii teichoici i lipoteichoici
Lipoarabinomanani prezeni n peretele celular al bacteriilor acidoalcoolorezistente
Zaharide scurte care au la capt fructoz sau manoz
Flagelina din flagelii bacterieni
Acizi nucleici virali i bacterieni
N-formilmetionina, aminoacid ce intr n alctuirea proteinelor bacteriene
Acizi lipoteichoici, glicolipide i zimozan la fungi
Fosforilcolina din membranele celulare bacteriene

Receptorii de recunoastere a moleculelor de suprafa- PRR
Agenii microbieni care exprim aceste tipare pot fi recunoscui i eliminai de celule care
utilizeaz sisteme neschimbate, bine conservate de recunoatere (patternurile de recunoatere)
.
Pentru a recunoate PAMPs de pe suprafaa germenilor pe majoritatea celulelor sunt prezeni
receptori corepunztori ce se numesc PRR Pattern-Recognition-Receptor. PRR constituie o
clas de proteine care se exprim la suprafaa celulelor ca rspuns la prezena PAMPs sau n
prezena unor semnale venite de la celulele propri aflate n suferin (DAMPs Danger
Associated Molecules Patterns).
78


Figura 9.3 Relaia PAMPS cu PRR

Celulele purttoare a acestor PRR sunt, mai ales, celulele dendritice, macrofagele, celulele
endoteliale, celulele epiteliale ale mucoaselor i limfocitele. Aceti receptori sunt codificai
de gene ce se motenesc i nu depind de un contact prealabil cu moleculele de suprafa
recunoscute. PRR au fost mprii n 3 clase largi n funcie de expresia, localizarea i funcia
lor.
PRR care semnalizeaz prezena germenilor
PRR care semnalizeaz prezena germenilor sunt familia Toll like receptorilor (TLR),
receptorii NOD (nucleotid-binding oligomerization domain) i receptorii de tip CARD
(caspase activating and recruitment domain). Ataarea de PAMPs-uri are ca rezultat secreia
unor citokine cu rol esenial n iniierea att a rspunsului imun natural precum i a
rspunsului imun dobndit.
Familia receptorilor Toll-like. Numele vine de la asemnarea cu o protein prezent la
Drosophyla melanogaster nesesar embriogenezei acestei insecte (Christiane Nsslein-
Volhard, premiul Nobel 1995). Receptorii Toll-like pot fi situai pe membrana citoplasmatic
i pe sistemul membranar intracelular (endosomi). Pna n prezent se cunosc 13 receptori
Toll-like. Separat, sau n combinaie au rol major n aprarea antiinfecioas nnscut i
declanarea raspunsului imun specific.
TRL situai pe membrana citoplasmatic a celulelor fagocitare i a altor celule
TLR-2 : recunoate peptidoglicanul, lipoproteine bacteriene, acizi lipoteichoici i porine
TLR-4: recunoate LPZ de peretele, manani dela fungi, nveliuri virale, fosolipide parazitare
TLR-5: recunoate flagelina
TLR-1 mpreun cu TLR-2 recunosc lipopeptide i glicozilfosfatinozitolul de pe suprafaa
paraziilor
TLR-2 mpreun cu TLR-6 se leag de acidul lipoteichoic, peptidoglican

79


Figura 9.4 TLR de suprafa i endosomali ai macrofagelor, PMN i celulelor dendritice

TLR care se leag de PAMPS provenite din peretele celular al bacteriilor stimuleaz secreia
de citokine inflamatoare cum sunt IL-1, IL-6, IL-8, TNF i IL-12.


Figura 9.5 Mecanismul de secreie al citokinelor inflamatoare prin LPZ

n figura de mai sus este redat mecanismul prin care LPZ al bacteriilor gram negative
stimuleaz secreia de citokine. LPZ eliberat prin bacterioliz (sub aciunea complementului)
este preluat de o protein transportatoare i prin intermediul unei molecule CD14 se ataeaz
80

de TLR-4. Ca urmare, se vor activa molecule activatoare ale factorului de transcripie NF-kB
(factorul nuclear kB), care ptrunde n nucleu i activeaz genele ce codific citokinele
rspunsului imun natural, respectiv IL-1,IL-6, IL8, IL-12 i TNF. Ele vor declana
mecanismele aprrii antiinfecioase nnscute: inflamaia, febra, i fagocitoza.
TLR situai pe membrana sistemului membranar intracelular (endozomi)
TLR-3: leag ARN viral dublu catenar
TLR-7: leag ARN viral monocatenar cu coninut ridicat de guanin/uracil
TLR-8: leag ARN viral monocatenar
TLR-9: leag secvene de CpGDNA (dinucleotide nemetilate de citozin-guanin) din
genomul bacteriilor i virusurilor
Toll-like receptorii care se leag de componente virale vor declana secreia de interferoni
care opresc replicarea viral.
PPR citoplasmatici
Proteinele NOD sunt proteine citoplasmatice care recunosc componente ale peptidoglicanului
Receptorii NOD-1 recunosc dipeptidul NAG NAM gamma D glutamil - acid
mezodiaminopimelic (prezent la bacterii gram negativ i mai puin la cele gram pozitiv).
Receptorii NOD-2 recunosc segmentul NAG-NAM-L-alanil-isoglutamin prezent la aproape
toate bacteriile
Proteinele CARD conin receptori de tipul RIG-1 i MDA-5 care detecteaz RNA viral mono
i bicatenar i declaneaz secreia de interferon
PRR solubili prezeni n plasm
PRR care se gsesc liberi n plasm se leag de suprafaa germenilor i activeaz
complementul. Un astfel de receptor este MBL o lectin seric (mannan-binding lectin),
sintetizat de ficat n cadrul rspunsului de faz acut i care este capabil s activeze
complementul, deci s declaneze inflamaia.
PRR care favorizeaz fagocitoza (endocitari)
Receptorii endocitari sunt situai pe suprafaa macrofagelor, PMN i celulelor dendritice i
favorizeaz fagocitoza prin ataarea microorganismelor purttoare a PAMPs corespondente
de aceste celule.
Receptorii pentru manoz: recunosc manoza sau fructoza prezent pe suprafaa microbian.
Suunt importani n activarea complementului
Receptori de tip scavanger: recunosc componente de suprafa ale peretelui celular ca, de
pild, LPS, peptidoglicanul i acizii teichoici. Recunosc deasemenea celule lezate i infectate
Opsonine: molecule solubile care leag cu un capt de bacterie i cu un capt de celula
fagocitar
Proteinele de faz acut: MLB (manose binding protein) i proteina C-reactiv
Proteinele cii de activare a complementului (C3b)
Proteinele surfactante din alveolele pulmonare SP-A i SP-D
Receptori pentru N-formilmetionin a cror legare de bacterii poteneaz mobilitatea
i chemotaxia fagocitelor

81

9.3.2 Mecanismele umorale ale rezistenei naturale
n esen, ptrunderea microbilor n esuturi duce la activarea complementului, ceea ce are ca
urmare liza celulelor microbiene, pe de o parte, i declanarea rspunsului inflamator
infecios, pe de alt parte. Cascada de activare a complementului va antrena eliberarea unor
mediatori chimici (citokine, proteinele de faz acut, mediatori rezultai din degranularea
mastocitelor etc.) care particip direct n procesul inflamator i vor atrage n focarul infecios
fagocitele. Acestea vor nltura microorganismele invadatoare prin fagocitoz.
Cascada de activare a complementului
Complementul este un sistem seric de peste 30 de proteine enzime care, ca i sistemul
coagulrii i fibrinolizei, se activeaz n cascad sub aciunea unui trigger5, rezultatul final
fiind bacterioliza i declanarea inflamaiei.
Desemnarea componentelor sistemului complement este ngreunat de numerotarea nelogic
n ordinea descoperirii lor i nu n ordinea n care se activeaz. Componentele majore sunt
notate cu C1-C9. Cnd o component se activeaz, ea se descompune n 2 subuniti notate
cu literele a i b. De exemplu, factorul C3 se transform prin activare ntr-un peptid cu GM
mic, notat C3a i unul mai mare, notat C3b. n cazul n care un produs intermediar activat se
inactiveaz, va fi precedat de litera i, de pild iC3b.
Activarea complementului se poate petrece pe trei ci cu punct de plecare diferit, dar care
converg spre aceiai produi finali:
- calea alternativ, mai veche din punct de vedere filogenetic care se activeaz n absena
anticorpilor specifici
- calea lectinic, care este activat de prezena manozei la suprafaa bacteriilor, i face parte
ca i calea alternativ din rezistena antiinfecioas natural, i
- calea clasic, a crei activare presupune prezena anticorpilor specifici (IgG i IgM), deci un
contact prealabil cu agentul etiologic respectiv.
Indiferent de calea de activare, momentul esenial n activarea complementului este
descompunerea C3 n C3a i C3b sub aciunea C3-convertazei i stabilizarea acesteia prin
ataarea de o suprafa. Dup descompunerea C3, calea este comun celor trei mecanisme de
activare, rezultatul fiind formarea complexului de atac al membranei (CAM).
Calea alternativ. n plasma normal C3 este supus permanent unei activri spontane
discrete prin clivarea n C3a i C3b. C3b se combin cu factorul B rezultnd C3bB. Acesta la
rndul su este supus aciunii factorului D care va transforma C3bB n C3bBb i Ba.

5
trigger = trgaci.
82


Figura 9.6 Schema activrii complementului pe cale alternativ
C3bBb este C3-convertaza cii alternative. Aceast convertaz, rezultat, deci, n mod
fiziologic ar putea cliva cantiti mari de C3 printr-un feedback pozitiv, asemntor unui cerc
vicios, dac nu ar exista mecanisme foarte riguroase de reglare, prin factorii H i I, ce
mpiedic activarea spontan a unor cantiti mari de C3.
n prezena unor polizaharide de pe suprafaa bacteriilor, a endotoxinei i a acizilor theicoici,
C3bBb rezultat n urma clivrii fiziologice se leag de suprafaa bacteriilor fiind protejat
astfel de inactivare. La stabilizarea C3bBb particip i o protein plasmatic, properdina.
Calea lectinic este activat de lectine serice (MLB-manan-binding-lectin), capabile s se
lege de molecule de manoz de pe suprafaa microbian. Acestor lectine se asociaz 2
proteaze, MASP1 i MASP2, enzime ce seamn cu componentele C1r i C1s ale cii clasice.
Dup fixarea MLB de moleculele de manoz de pe suprafaa microbian cele dou proteaze
se ataeaz de MLB i cliveaz C4 n C4a i C4b, si C2 n C2a i C2b. C4bC2a este
convertaza cii lectinice (similar cii clasice).
Deci, activarea complementului pe calea alternativ i lectinic este rezultatul stabilizrii
C3bBb (a C3-convertazei) ce poate fi determinat, printre altele, de prezena bacteriilor.
Activarea complementului pe calea clasic se produce de regul n prezena complexelor
antigen-anticorp, deci n urma unui rspuns imunitar. Astfel, bacteriile cu care organismul a
mai venit n contact, ptrund n organism i ntlnesc anticorpii corespunztori cu care vor
forma complexe antigen anticorp.


83

Figura 9.2. Schema activrii complementului pe cale clasic
Cte o molecul de C1q, C1s i dou molecule de C1r formeaz unitatea de recunoatere care
se va lega de complexul antigen-anticorp. Unitatea de recunotere va cliva C2 i C4 n C2a,
C2b i C4a, C4b. C4b2a va forma C3 convertaza cii clasice, care va cliva C3 n C3a i C3b,
piesa esenial n reaciile urmtoare.
Formarea complexului de atac al membranei. Indiferent pe ce cale s-a activat complementul,
reaciile urmtoare sunt comune celor trei ci. C3 convertaza se combin cu C3b formnd C5
convertaza (C3b2BbP pentru calea alternativ i C3b4b2a pentru calea clasic i lectinic).
C5 se va descompune n C5a i C5b. C5b se fixeaz pe suprafaa celulei pe suprafaa creia
se afl antigenul - deci n cazul nostru pe suprafaa bacteriei. De C5b se vor lega n
continuare C6,7,8 care mpreun cu mai multe molecule de C9, care polmerizeaz, formeaz
un complex de atac al membranei ce perforeaz membrana celular cu liza consecutiv a
celulei bacteriene.



Figura 9.3. Schema formrii complexului de atac al membranei.
Rolul biologic al complementului
Activarea complementului genereaz o serie de efecte biologice de o importan deosebit n
rezistena antiinfecioas:
declanarea inflamaiei. Activarea complementului aduce dup sine declanarea
reaciei inflamatorii prin produii intermediari rezultai pe parcursul activrii. Astfel, C5a este
un puternic factor chemotactic i chemokinetic pentru PMN pe care le va aduce n focarul
infecios. C3a i C5a sunt anafilatoxine care vor duce la o degranulare fiziologic a
mastocitelor cu eliberarea unor mediatori chimici vasoactivi;
citoliza. Celulele pe care s-a fixat complementul i care n mod fiziologic sunt celulele
strine organismului (bacteriile, n cazul de fa) sunt lizate sub aciunea complexului de atac
al membranei. n cazuri patologice, complementul se poate fixa de celulele proprii
organismului producnd distrugerea acestora;
opsonizarea. Fagocitele au pe suprafaa lor receptori pentru C3b. Astfel, microbii de
care s-a fixat C3b vor adera de celulele fagocitare fiind fagocitai mai eficient.
Deficienele ereditare ale unor componente ale complementului scad capacitatea de aprare
antiinfecioas a organismului. Astfel, un deficit de C1q, C1r, C1s, C4, C2 se asociaz cu o
susceptibilitate crescut pentru infecii cu germeni piogeni. O deficien de C3 duce la
perturbarea activrii complementului pe ambele ci. La indivizi cu deficien de C3
opsonizarea este slab, eficien fagocitozei redus, evoluia infeciilor putnd fi fatal.
Deficiena de properdin favorizeaz infeciile cu germeni piogeni, remarcndu-se n special
apariia infeciilor meningococice cu evoluie fulminant. Deficiene ale factorilor C5, C6,
C7, C8 i C9 cresc susceptibilitatea pentru infeciile diseminate cu cu neisserii. Mecanisme
de eludare a activrii complemenului.
9.1.4.2. Mediatorii inflamaiei
84

9.1.4.2.1. Citokine
Citokinele sunt peptide, asemntoare hormonilor, cu proprieti imunomodulatoare, produse
de celulele care rspund invaziei microbiene. Ele sunt mesageri chimici care permit
comunicarea ntre celulele sistemului imun, dar i comunicarea cu celulele din afara acestui
sistem. Cele care acioneaz chiar asupra celulelor care le produc sunt denumite autocrine,
cele cu efect pe celulele nvecinate paracrine, iar cele cu efect pe celule la distan endocrine.
Exist multe celule productoare de citokine, dar cele mai importante sunt macrofagele i
limfocitele. Din punct de vedere funcional distingem 3 categorii de citokine:
citokinele rspunsului imun nnscut,
citokinele raspunsului imun dobndit i
citokinele care intervin n hematopoez.
Citokine care intervin n reglarea rspunsului imun nnscut sunt secretate de macrofage,
celule dendritice, LT, NK, celule endoteliale si celulele epiteliilor mucoaselor ca rspuns la
stimularea acestora de ctre PAMPs prin activarea factorului nuclear de transcripie NF-B.
Dintre acestea menionm:
IL-1. are rol n producerea febrei, creterea permeabilitii vasculare, induce explozia
respiratorie n macrofage i PMN
IL-6: declaneaz n ficat sinteza proteinelor de faz acut.
IL-8: secretat de macrofage la stimularea acestora de Il-1, favorizeaz migrarea leucocitelor
din snge spre locul inflamaiei
TNF - principala citokin n inflamaia acut
este un puternic factor chemotactic pentru PMN, contribuind astfel la formarea puroiului n
focarul infecios.
favorizeaz agregarea i activarea PMN i eliberarea enzimelor proteolitice din celulele
mezenchimale, deci sunt productoare de leziuni tisulare. In exces produce complicaii
sistemice - oc
induce rspunsul de faz acut
simptome generale ale infeciei: febra, somnolena, starea de disconfort, durerea muscular
IL-12 mediaz rspunsul imun natural la germeni cu habitat intracelular. Induce mecanismele
imunitii mediate celular
Chemokinele sunt citokine cu GM mic care au rolul de a atrage leucocitele n focarul
infecios i se mpart n doua categorii:
Chemokine , din care fac parte IL-8, factorul trombocitar 4, IFN-, factorul de activare a
macrofagelor i care atrag n focar mai ales PMN neutrofile i
Chemokinele , care atrag monocitele, LT, PMN eozinofile i bazofile i celulele NK.
Citokinele rspunsului imun dobndit le vom descrie la imunitatea dobndit.
9.1.4.2.2. Interferonii
Interferonii e proteine care joac un rol important n aprarea antiinfecioas natural,
constituind prima linie de aprare n infeciile virale. Ele sunt secretate de celulele infectate
cu un virus, sau de prezena n celule a unor substane cu rol de inductori de interferoni. Chiar
dac interferonii secretai nu reuesc s salveze celula ei se vor ataa de suprafaa celulelor
invecinate, protejndu-le pe acestea de infecia viral. Se cunosc 2 tipuri de interferoni:
Interferoni de tip I (glicoproteine GM 20 kD)care mediaz rezistena fa de virusuri
IFN-, - 13 subtipuri, secretat de macrofage i PMN ca urmare a infeciei celulelor respective
cu un virus sau dup stimulare cu diverse componente bacteriene (endotoxina b.gr.-) etc.;
85

IFN-, secretat de fibroblati n aceleai condiii;
Interferonii de tip II: IFN- sau interferonul imun
secretat de limfocitele T dup stimularea acestora cu un antigen fa de care limfocitele au
fost sensibilizate anterior i de limfocitele NK
are activitate antiviral antimitotic i imunomodulatoare.
Interferonii nu sunt specifici pentru virusul care le-a indus sinteza ci pentru celula
productoare, i specia organismului. Astfel, interferonii produi de un animal nu vor fi activi
asupra celulelor umane.
n prezent se produce industrial o mare varietate de interferoni umani prin metodele ingineriei
genetice. Ei sunt utilizai cu rezultate bune n diverse infecii (hepatit B, C, infecie
herpetic, SIDA) i n diverse afeciuni proliferative cum sunt leucemiile, limfoamele,
sindromul Kaposi, etc.
9.1.4.3. Rspunsul de faz acut
Este o reacie generalizat, nespecific a organismului, stimulat de infecie, inflamaie,
leziuni tisulare i inconstant de procese proliferative, fiind mediat de citokine dintre care mai
importante sunt IL-1, IL-6, TNF, PGE1 (prostaglandina E1) i interferoni.
Febra este cel mai evident semn al rspunsului de faz acut i este rezultatul aciunii IL-1,
TNF i alfa interferonului care acioneaz mpreun asupra centrului termoreglrii din
hipotalamus. La aceasta se adaug creterea PMN n sngele periferic. Se remarc scderea
fierului i zincului n ser, necesare multiplicrii bacteriilor.
Proteinele serice a cror concentraie crete n timpul rspunsului de faz acut sunt:
componente ale complementului, proteinele coagulrii, proteinele de transport, inhibitori ai
proteazelor ce favorizeaz fagocitoza i stimuleaz migraia leucocitar.
O protein de faz acut este proteina C-reactiv (CRP), produs de celula hepatic stimulat
de IL-1. n 24-48 ore de la debutul inflamaiei acute concentraia seric a CRP crete de mii
de ori. CRP se poate lega de polizahardele unui numr mare de bacterii i fungi. Prin
activarea consecutiv a a complementului, pe cale alternativ, se faciliteaz ndeprtarea
acestor microorgansime prin bacterioliz i fagocitoz.
9.1.4.4 Opsoninele i opsonizarea
Opsoninele sunt substane care ader de suprafaa unui microorganism fcndu-l accesibil
fagocitozei. Exist opsonine nespecifice i specifice. C3b, de pild, opsonin nespecific care
se produce n timpul activrii complementului se leag covalent de microbi. Acest complex,
microb-C3b, se leag de glicoprotein-receptorul pentru C3b prezent pe membrana fagocitelor
(CR1). Fiind legat de fagocit, microbul va fi fagocitat eficient.
Alt exemplu de opsonin nespecific este fibronectina, o glicoprotein cu funcii de opsonin
fa de bacteriile gram-pozitive. Ea se gsete la suprafaa mucoaselor, mpiedicnd, prin
proprietatea de a se lega de flora gram-pozitiv, colonizarea mucoaselor cu flor gram-
negativ (de exemplu mucoasa faringian).
Opsoninele specifice sunt unii anticorpi care, ns, sunt implicai n aprarea antiinfecioas
dobndit i presupun un contact anterior cu agentul infecios.
9.1.5 Rspunsul inflamator
Inflamaia acut este rezultatul schimbrilor ce se petrec ntr-un esut ca rspuns la o
agresiune mecanic, chimic sau infecioas. Ea este un mecanism de aprare antiifecios
rapid, care tinde s localizeze infecia i s previn diseminarea ei. Manifestrile locale ale
inflamaiei sunt eritemul (rubor), cldura (calor), durerea (dolor) i edemul (tumor).

86


Figura 9.5. Rspunsul acut inflamator mediat prin activarea pe cale alternativ a
complementului (modificat dup Roitt, 1994).
Inflamaia poate evolua spre vindecare cu restitutio ad integrum a esuturilor sau cu sechele.
Deznodmntul unei reacii inflamatorii depinde de extinderea procesului inflamator, de
microorganismele implicate, precum i de reactivitatea gazdei.
Cele 3 evenimente majore ale inflamaiei sunt:
vasodilataia capilar local,
modificrile structurale microvasculare, i
acumularea leucocitelor la locul injuriei.
Vasodilataia capilar. Mediatorii plasmatici ai inflamaiei, ca, de pild, complementul, exist
sub forma unor precursori care, aa cum am vzut, devin biologic activi numai dup activare.
Activarea C3 a complementului este o etap critic a inflamaiei.
C3a i C5a rezultate n cursul activrii complemenetului sunt anafilatoxine puternice ce
determin degranularea mastocitelor cu eliberarea unor mediatori chimici.
O parte dintre acetia sunt preformai, aa cum este histamina. Ea are aciune vasodilatatoare
asupra capilarelor, crescnd totodat i permeabilitatea acestora. n consecin, se produce o
exudare din capilare spre zona infectat a plasmei cu mediatorii pe care aceasta i conine.
Modificrile structurale microvasculare i acumularea de leucocite. Sub aciunea unor
mediatori chimici rezultai n timpul activrii complementului i secretai de macrofagele
stimulate de toxine bacteriene se modific endoteliul capilar, care permite adeziunea PMN de
acesta.
PMN sunt atrase de factorii chemotactici de natur bacterian, de cei produi n urma
activrii complementului i de cei rezultai din degranularea mastocitelor. Ele vor prsi
capilarul prin diapedez i se vor ndrepta ctre focarul inflamator unde vor distruge microbii
prin fagocitoz.

9.1.6. Mecanisme celulare nespecifice
Fagocitoza este un mecanism important de ndeprtare a microorganismelor i a celulelor
lezate. Celulele fagocitare sunt: macrofagele i PMN neutrofile i eozinofile. n anumite
87

condiii i alte celule - fagocite facultative - pot dobndi proprieti fagocitare, ca, de pild,
fibroblatii.
Polimorfonuclearele neutrofile opereaz ca un front n aprarea fa de agenii patogeni.
Numrul lor crete n timpul unei infecii bacteriene, dar scade n infeciile virale.
PMN, precum i macrofagele fagociteaz o gam larg de antigene, mai ales bacterii
opsonizate. Dup nglobare, antigenele strine sunt distruse de enzimele lizozomale. PMN au
n citoplasma lor granulaii primare azurofile ce conin mieloperoxidaz i alte enzime cum
sunt beta-glucuronidaz, elastaza i catepsina G. Granulaiile specifice, neutrofile conin
lizozim i lactoferin. Aceste enzime hidrolitice i digestive sunt eliberate n fagozom
favoriznd digestia materialului fagocitat. Frecvent, leucocitele sunt distruse n urma
fagocitozei, ca n cazul infeciilor cu germeni piogeni (stafilococi, streptococi, neisserii). Ele
reprezint celulele kamikaze a aprrii antiinfectioase, deoarece sosesc primele la locul
injuriei.
Polimorfonuclearele eozinofile reprezint 1-3% din totalul leucocitelor sanguine. Numrul lor
crete n timpul reaciilor alergice, n cazul infeciilor parazitare. Ele iau parte la aprarea
antiparazitar i conin enzime ce metabolizeaz histamina i leucotrienele fiind astfel
capabile s joace un rol important n limitarea reaciilor alergice. Pe de alt parte, ele conin
proteine toxice, ca, de pild, proteina major bazic ce duce la distrugerea celulelor epiteliale
n tractul respirator, fiind responsabile de inflamaia cronica n astmul bronic.
Eozinofilele fagociteaz complexe antige-anticorp precum i unele resturi antigenice ce
rezult din rspunsul imun i care n alte condiii ar duce la boli autoimune.
Polimorfonuclearele bazofile reprezint aproximativ 0.5% din leucocite i sunt echivalentul
mastocitelor tisulare. Bazofilele au granulaii mari ce conin numeroi mediatori chimici i
precursorii acestora, ca, de exemplu, histamina, leucotriene, prostaglandine, factori activatori
al trombocitelor, etc. Aceti mediatori sunt eliberai, n mod normal, la nevoie, n cantitti
reduse. Eliberarea lor masiv poate fi duntoare i poate duce la reacii alergice de tip I
anafilatic, ca: astm bronic, urticarie, febr de fn sau chiar oc.
Fagocite mononucleare includ monocitele din snge i macrofagele tisulare. Ele sunt capabile
s fagociteze microorgansime opsonizate, s distrug unele dintre ele dar nu pe toate. Unele
microorgansime (micobacterii, listerii, brucelle, crypococci, toxoplasme) supravieuiesc i se
nmulesc n macrofage. n acest caz celula servete ca factor de diseminare al infeciei,
protejnd microorganismele respective. n cadrul proceselor imunitare mediate celular,
monocitele activate pot omor germenii patogeni intracelulari.
9.1.6.1. Fagocitoza
Fagocitoza este proprietatea unor celule de a ngloba i digera particule strine organismului.
Aceste celule sunt PMN i monocitele (care dup ce migreaza n esuturi se numesc
macrofage) i au un rol important n aprarea gazdei fa de infecii.
PMN apar primele ca rspuns ntr-o inflamaie acut, urmate mai trziu de macrofage.
Factorii chemotactici sunt eliberai de numeroi microbi. Aceti factori sunt atractani
puternici pentru celulele fagocitare care au receptori specifici.
Fagocitoza are urmtoarele etape: chemotaxia, opsonizarea, ataarea, internalizarea i digestia
Chemotaxia. Fagocitele sunt atrase n focarul infecios de factori de origine bacterian
(formilmetionil-leucil-fenilalanina) i factori chimiotactici ce apar n cursul inflamaiei, cum
sunt: C5a, kallicreina produs de esuturile lezate, produi rezultai din metabolismul acidului
arahidonic (prostaglandine, tromboxan, leucotriene). Aceste substane favorizeaz exprimarea
receptorilor pentru C3b al fagocitelor. Fagocitele prsesc capilarele prin diapedez.
88

Opsonizarea. Reprezint faza n care microorganismele sunt pregtite pentru fagocitoz i
ader de fagocite. Aceast aderare comport 4 modaliti ce definesc eficiena fagocitozei.


Figura 9.7. Eficiena fagocitozei n funcie de opsonizare ( dup Roitt,.

Menionm c ultimele dou posibiliti aparin rezistenei antiinfecioase dobndite,
deoarece presupun participarea anticorpilor rezultai n urma unui rspuns imunitar.
nglobarea. Dup ataare, particulele sunt nglobate ntr-o vacuol format din membrana
citoplasmatic. Acest vacuol, sau fagozom, va fuziona cu lizozomii primari pentru a forma
fagolizozomii n care enzimele lizozomale vor declana digestia. Totodat are loc explozia
respiratorie care este de fapt o activare puternic a metabolismul oxidativ al PMN.

89


Figura 9.8. nglobarea unei bacterii opsonizate de C3b i IgG (modificat dup Schaechter,
1994).

Digestia. Distrugerea microbilor sub aciune enzimelor lizozomale se petrece prin dou
mecanisme: oxigen dependente i oxigen independente.
mecanismele dependente de oxigen sunt consecina exploziei respiratorii
(intensificare brusc a metabolismului) ce nsoete fagocitoza i pe parcursul creia se
formeaz ioni de superoxid (O3-), oxigen atomic (O-), radicali hidroxili, peroxid de hidrogen
(H2O2) i hipoclorit. Toi aceti produi sunt puternic bactericizi.
mecanismele bactericide independente de oxigen se datoreaz unor enzime ca:
- enzime hidrolitice: catepsina, glicozidaza, arilsulfataza ce diger peretele celular al
microbilor;
- defensine: proteine cationice care se leag de peretele celular i determin formarea
unor canale ce strpung peretele;
- lizozimul care atac peptidoglicanul;
- lactoferina care spoliaz mediul de fierul necesar bacteriilor.
Fagocitoza prin PMN poate fi considerat principalul mecanism de aprare fa de bacteriile
piogene.
Fagocitoza prin macrofage. Rolul fagocitozei prin PMN este distrugerea bacteriilor.
Macrofagele intervin mai trziu n focarul infecios, unde vor fagocita microbi i detritusurile
celulare rezultate n urma leucocitelor distruse la locul injuriei. Fazele fagocitozei prin
macrofage sunt asemntoare cu cele descrise mai sus, dar, spre deosebire de PMN,
macrofagele se pot activa dac sunt stimulate corespunztor. Ele se activeaz sub aciunea
unor substane ce apar n urma prezenei microorganismelor, ca, de pild, C3b i -interferon,
unele componente bacteriene, cum ar fi endotoxinele, i de limfocitele Tdh n cadrul
rspunsului imun celular. Cu toate acestea, unele bacterii, protozare sau fungi sunt capabile s
supravieuiasc i s se multiplice n macrofagul neactivat (micobacterii, brucelle, criptococi,
listerii etc.). Dup activare unele ele pot fi distruse. Deci, fagocitoza efectuat de macrofage
este eficient asupra microorganismelor cu habitat intracelular. Uneori, ns,
90

microorganismele nu sunt distruse i supravieuiesc pe durat lung n macrofag, rezultatul
fiind inflamaia cronic.
Fagocitoza prin macrofage are, pe lng rolul de a ndeprta bacteriile, mai ales cele cu
habitat intracelular, i cel de a iniia rspunsul imun. Macrofagele sunt celule prezentatoare
de antigen care dup prelucrarea acestuia l prezint limfocitelor Th sensibiizate, deci a celor
cu memorie. Limfocitele Th naive sunt stimulte de celulele dendritice care sunt celule
prezentatoare de antigen (CPA) profesioniste.

Figura 9.9. Fagocitoza prin macrofage.

9.1.6.2. Limfocitele NK
Celulele NK sunt limfocite citotoxice naturale care exist deja la natere. Ele nu sunt
fagocite, dar pot ataca i distruge n mod nespecific celule infectate cu virusuri sau chiar
celule tumorale.


Figura 9.10. Aciunea limfocitelor NK asupra celulelor tumorale sau virus infectate.

n contact cu celulele infectate, celulele NK secret o perforin nrudit cu C9 a
complementului. Aceasta polimerizeaz pe membrana celulei int i formeaz aici canale ce
distrug integritatea acesteia.