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Mortero

Embudo
Matraz
Papel de
filtro
Alcohol
Hojas de
espinaca
Extraer los pigmentos fotosintticos y separarlos mediante una tcnica
sencilla de cromatografa en papel.
1. Lavar las hojas de espinacas, retirar los nervios y ponerlas en un
mortero, junto con el alcohol y una pequea cantidad de carbonato
clcico que evita la degradaci!n de los pigmentos fotosintticos".
#riturar la me$cla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente
adquiera un color verde intenso. Fotografa 1.
%. &iltrar con un em'udo y papel de filtro. Fotografa 2
Fotografa 1
Fotografa 2
Otros alumnos y alumnas machacando espinacas...
(. )olocar el filtrado en una placa *etri, y so're ella pon un rect+ngulo
de unos 1, centmetros de ancho por 1- centmetros de alto do'lado
en . para que se mantenga en pie so're la placa de *etri. Fotografa
3
/ejar as el montaje y esperar unas horas. Los pigmentos se ir+n
separando seg0n su adsorci!n.Fotografa 4
fotografa 3 Fotografa 4
Al observar el papel donde hemos
hecho la cromatografa vemos
cuatro bandas o zonas !figura A"
#ue corresponden a los distintos
pigmentos fotosint$ticos presentes
en las hojas de espinaca% &eg'n su
grado de solubilidad con el alcohol
se reconocen estas bandas ( en este
orden)
1% clorofila b
2% clorofila a
*% +antofila
,% carotenos
Figura A
Este es el aspecto final de la cromatografa o'tenida con las hojas de
espinacas
12#34 Esta experiencia puede reali$arse con otras hojas verdes si no se
dispone de espinacas. Es interesante reali$ar tam'in esta experiencia con
otras sustancias como tinta china.
-.uiored v 1%/
http)00111%ugr%es02#uiored0doc0p2*%pdf
1
Separacin de los pigmentos de la hoja de espinaca mediante
cromatografa en capa fina
Introduccin
La cromatografa en capa fina (CCF) es una forma de cromatografa de adsorcin
slido-lquido que constituye una tcnica importante en Qumica Orgnica para el
anlisis
rpido de muestras que en algunos casos puede estar en el rango de los !-" g#
Frecuentemente se usa para el seguimiento de la e$olucin del progreso de una
reaccin% o
para el control y seguimiento de las separaciones que se producen mediante una
cromatografa en columna preparati$a#
&ara reali'ar el anlisis de una muestra por CCF se utili'a un adsor(ente slido
como gel de slice ()iO*# +*O) o al,mina (-l*O.)% unido a una placa rectangular de de
$idrio o
plstico# /l adsor(ente sir$e de fase estacionaria# La muestra se aplica en disolucin
con un
capilar de $idrio en un e0tremo de la placa% pero no so(re el mismo (orde# -
continuacin se
introduce la placa en un tanque cerrado conteniendo un disol$ente o me'cla de
disol$entes
(fase m$il)% de manera que la placa quede apoyada so(re el fondo y el punto con la
muestra% por encima del ni$el del lquido# /l tanque contiene una atmsfera saturada
en el
disol$ente para lo cual se introduce un tro'o de papel de filtro que de(e# La fase m$il
asciende por capilaridad% de forma que se produce el mayor o menor a$ance de los
componentes de de la me'cla% seg,n su polaridad#
Procedimiento
a. Preparacin de la muestra
/n un mortero% mac1acar una 1o2a de espinaca con una me'cla de 3 ml de 1e0ano y
* ml de etanol# Con una pipeta &asteur transferir el e0tracto a un tu(o de ensayo y
agitar con muc1a sua$idad con una cantidad igual de agua% e$itando la formacin de
Los colores de las plantas
HAY MS D L! "# PA$%
&D'(D S)( L!S %!L!$S*
NIVEL
:
+, ciclo S! - .achillerato
PROFESORES
:
4arta Lpe' 5arca
4#6 7os 8urgos &astor
9ati$idad :e 4arco ;edondo
<sa(el 8arrio ;odrgue'
CENTRO
:
I//S/ Luis 0arca .erlanga
JSTIFIC!CI"N # O$JETIVOS:
Los o(2eti$os de estas dos e0periencias son= compro(ar% mediante la tcnica de la cromatografa% la
e0istencia de diferentes pigmentos presentes en las plantas% aunque no siempre se $ean> y o(ser$ar%
con ayuda del microscopio ptico% las distintas estructuras celulares donde las plantas almacenan los
pigmentos#
HAY MS D L! "# PA$%
Material necesario
:os soportes con pin'a% cuatro $asos de precipitados% dos matraces /rlenmeyer% dos tu(os de
ensayo con tapn% una gradilla% pipetas con aspirador% cristali'ador% infiernillo% filtros% dos tiras
de papel ?a1tman n#@ % acetona% ter% etanol% (enceno% 1o2as de lom(arda y 1o2as de
espinaca#
Aplicacin did1ctica
Los colores de las plantas se de(en a la com(inacin de los diferentes pigmentos que contienen# &ara
aislar y e0traer dic1os pigmentos se pueden utili'ar diferentes procedimientos# Ano de ellos es la
cromatografa% que consiste en la separacin en (andas de los diferentes pigmentos en funcin de su
solu(ilidad# /n esta e0periencia se 1an utili'ado dos tcnicas=
Cr%mat%&raf'a en papel: )e (asa en la diferencia de $elocidad al
despla'arse los distintos pigmentos so(re una (anda de papel
poroso# Los pigmentos de(en estar pre$iamente disueltos en un
disol$ente# Los ms solu(les se despla'arn ms deprisa y los
menos solu(les ms despacio% apareciendo so(re el papel
diferentes (andas de color# &ara compro(arlo se 1a utili'ado un
e0tracto de 1o2a de espinaca disuelto en etanol y otro de 1o2a de
lom(arda disuelto en acetona# :e a(a2o arri(a% con el e0tracto de
espinaca se o(ser$an las siguientes (andas= clorofila a ($erde
claro)% clorofila ( ($erde oscuro)% 0antofilas (amarilla) y carotenos
(anaran2ada)# Con el de lom(arda= clorofilas ($erde)% 0antofilas
(amarilla) y antocianinas (morada)#
Cr%mat%&raf'a en tu(% de ensa)%: )e (asa en la diferencia de solu(ilidad de los pigmentos#
Con una me'cla de disol$entes de distinta densidad% podemos conseguir
que los diferentes pigmentos se separen en (andas% ya que cada tipo de pigmento es solu(le
en un tipo de disol$ente# Atili'ando el mismo e0tracto que en el caso anterior se aBade ter y
agua destilada al e0tracto de espinaca% y (enceno y agua destilada al de lom(arda# Con el
e0tracto de la espinaca se o(tienen tres (andas= 0antofilas (a(a2o)% clorofila ( y clorofila a
(arri(a)# /n el caso de la lom(arda se o(tienen= antocianinas (a(a2o)% 0antofilas y clorofilas
(arri(a)#
&D'(D S)( L!S %!L!$S*
Material necesario
4icroscopio ptico% portao(2etos% cu(reo(2etos% pin'as% (istur% ti2eras% /lodea canadiense%
ptalos de rosa% patata y tomate#
Aplicacin did1ctica
Los pigmentos que dan color a las plantas se encuentran en el interior de unos orgnulos celulares
llamados cromatforos y $acuolas#
Los cromatforos son orgnulos de forma o$oide rodeados por una do(le mem(rana que almacenan
pigmentos liposolu(les# &ueden ser de distintos tipos=
Cloroplastos= &resentes en las 1o2as $erdes y responsa(les de la fotosntesis# Contienen $arios
tipos de pigmentos= clorofilas% de color $erde> carotenos% de color ro2o-anaran2ado% y 0antofilas%
de color amarillo#
Cromatforos no fotosintticos= Contienen carotenos y 0antofilas% responsa(les de los colores
amarillo% naran2a y ro2o de muc1as flores y frutos#
Leucoplastos= )on incoloros% aunque pueden almacenar sustancias% como el almidn% que les
dan una coloracin (lanquecina# -parecen en 1o2as $ariegadas y en rganos de reser$a como
races o ri'omas% adems de en plantas parsitas#
Las $acuolas son orgnulos rodeados por una mem(rana simple que ocupan la prctica totalidad de la
clula# )on a(undantes en los ptalos de las flores y contienen pigmentos 1idrosolu(les de dos tipos=
antocianinas% que dan una coloracin a'ul% $ioleta o ro2o purp,reo% y anto0antinas% que originan colores
amarillo plido#
Con esta acti$idad se pueden o(ser$ar los distintos tipos de orgnulos celulares al microscopio ptico
utili'ando muestras $egetales diferentes=
O(ser$acin de cloroplastos= Comando 1o2as de /lodea% se pone so(re un porta la parte ms
fina de la 1o2a y% tras colocarle un cu(re% se o(ser$a al microscopio#
O(ser$acin de cromatforos= ;aspando pulpa de tomate% se pone un poco so(re el porta y se
procede como en el caso anterior#
O(ser$acin de leucoplastos= )e raspa un poco de patata con el (istur y se procede de la
misma manera#
O(ser$acin de $acuolas= )e corta un trocito de ptalo de rosa y% raspando con un (istur% se
separa una capita fina que se pone so(re el porta para su o(ser$acin#
Pigmentos fotosintticos
Por el Ing. Agr. Carlos Gonzlez.
Entre todos los caracteres m3s e+ternos de los vegetales el m3s notable ( caracterstico
es probablemente el color% El color no es 'nicamente un car3cter llamativo de la
vegetaci4n sino #ue adem3s algunos de los pigmentos #ue lo condicionan est3n
estrechamente ligados a las actividades fisiol4gicas del propio vegetal% Por consiguiente
el estudio de c4mo las plantas viven ( se desarrollan re#uieren el previo conocimiento
de los pigmentos vegetales%
Qu son los pigmentos?
&i es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices ( combinaciones de colores
del espectro e+iste un predominio general de los colores primarios) verde amarillo
rojo azul% Estos colores son conferidos a los vegetales por determinados compuestos
qumicos definidos llamados pigmentos% El color particular #ue presenta un
determinado 4rgano vegetal depende generalmente del predominio de uno u otro o la
combinaci4n de ellos% &e debe tener claro #ue cuando un vegetal presenta un color
blanco es debido a la falta de tales pigmentos% 5a luz solar #ue incide sobre ellas no es
absorbida selectivamente como ocurre en las partes coloreadas sino #ue es transmitida
o reflejada pr3cticamente sin sufrir modificaci4n%
Las Clorofilas. El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es debido a
la presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados llamados clorofila a
clorofila b % &e encuentran pr3cticamente en todas las plantas con semilla helechos
musgos ( algas% Pueden formarse en las races tallos hojas ( frutos a condici4n de #ue
estos 4rganos est$n situados por encima del suelo ( #ueden e+puestos a la luz% 6ambi$n
aun#ue aparentemente falten en algunas hojas de color rojo o amarillo cuando se
e+traen las otras sustancias colorantes de estas puede comprobarse incluso all la
presencia de las clorofilas #ue estaban enmascaradas por los dem3s pigmentos%
!"n#e estn los pigmentos?
Estos pigmentos se encuentran en el interior de la c$lulas vegetales especficamente en
una organela llamada cloroplasto % 5os cloroplastos son simplemente pl3stidos #ue
contienen pigmentos cloroflicos% 5os compuestos cloroflicos est3n ligados
#umicamente con las estructuras internas del cloroplasto !membrana tilacoides" ( se
hallan retenidos en estado coloidal% Asociados con las clorofilas e+isten tambi$n en los
cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos ( amarillo7anaranjados #ue son los
xantofilas ( carotenides%
C"mo se #i$i#en los sol$entes?
5os pigmentos cloroflicos son insolubles en el solvente universal llamado agua % Pero
s son solubles !afinidad #umica" en solventes orgnicos como por ejemplo alcohol
etlico ( acetona% A los solventes #ue e+traen simult3neamente todos los pigmentos de
la hoja se los suele llamar extractantes% E+isten otros solventes #ue presentan afinidad
por algunos pigmentos ( se los llama separadores como por ejemplo el tetracloruro de
carbono ( el $ter de petr4leo%
En el m$todo de e+tracci4n simple como se desarrolla m3s adelante se utilizar3 como
e+tractante el alcohol etlico ( como separador el tetracloruro de carbono% Estos dos
solventes org3nicos responden en forma diferente a los pigmentos cloroflicos como as
tambi$n a sus diferencias fsicas #ue hacen #ue sean dos l#uidos no misibles ( con
diferente peso especfico%
En el segundo m$todo por cromatografa se utilizar3 como e+tractante la acetona (
como separador el $ter de petr4leo% Este m$todo se trata de una separaci4n m3s fina de
los pigmentos ( se basa en la absorci4n ( solubilidad diferenciales de varias sustancias
entre las #ue se inclu(en los pigmentos% 8n soporte inerte como papel de filtro para la
corrida ( unos granos de carbonato de calcio para deshidratar la muestra son los
componentes necesarios para desarrollar la t$cnica%
Qu es la energa ra#iante o la luz?
Para el adecuado conocimiento de la fotosntesis de la sntesis ( propiedades de la
clorofila ( de muchos otros procesos vegetales es esencial un conocimiento elemental
de las propiedades fsicas de la luz ( otros tipos de energa radiante% 9sta se propaga a
trav$s del espacio en forma de ondas% 5a luz del sol o la luz blanca procedente de
cual#uier fuente artificial aparece como homog$nea al ojo humano pero cuando se la
pasa a trav$s de un prisma se descompone en un espectro de colores% El orden #ue
aparecen los colores m3s importantes en el espectro de la luz blanca son) el rojo
anaranjado amarillo amarillo7verdoso vede verde7azulado azul ndigo violeta% :ada
uno de estos colores responde a un rango diferente de longitud de onda de luz% 5a
longitud de onda es la diferencia entre dos crestas de ondas sucesivas% 5as longitudes de
onda #ue producen la luz se hallan apro+imadamente entre los *;// < en el violeta
hasta =>// < en la zona m3s alejada al rojo% Por debajo de la regi4n de la luz visible
en la escala de energa radiante sigue la zona del ultravioleta !8?"% A#uellos #ue est3n
por encima de la luz visible responden al infrarrojo !@A%"%
En la actualidad todos estos fen4menos de la luz pueden ser e+plicados si se admite #ue
la luz tiene naturaleza particulada !formada por partculas"% :onforme a este concepto
un ra(o de luz puede ser imaginado como una corriente de pe#ueBas partculas cada
una de las cuales se llama fotn% :uando tales fotones chocan contra una sustancia
adecuada su energa puede ser transferida a los electrones sobre los #ue golpean
realizando as reacciones fotosint$ticas%
5a manifestaci4n energ$tica de un fot4n se llama cuanto% El valor energ$tico del cuanto
vara inversamente con la longitud de onda%
Qu es un espectroscopio?
8n espectroscopio es un aparato #ue nos puede decir a partir de un e+tracto alcoh4lico
de hojas verdes #u$ longitudes de onda o colores son capaces de ser absorbidos por los
pigmentos cloroflicos%

C"mo funciona un espectroscopio?
&e trata de colocar una l3mpara puntiforme de gran intensidad encendida frente a un
espectroscopio el cual en su parte anterior presenta un orificio por donde pasa el haz de
luz% &eguidamente ha( un prisma #ue descompone la luz ( la pro(ecta en una pantalla
en la cual se puede observar con una lente ocular los diversos colores mencionados
anteriormente% El paso a seguir es colocar entre la l3mpara ( el aparato un tubo de
ensa(o conteniendo el e+tracto alcoh4lico de las hojas verdes% 5uego se pone el ojo
sobre el ocular ( se observa cu3les fueron los colores o longitudes de onda absorbidas
por los pigmentos cloroflicos !espectro de la clorofila" ( cuales son dejadas pasar sin
ning'n problema% Por 'ltimo se puede tambi$n ver sobre el e+tracto alcoh4lico la
fluorescencia es decir aparece el color verde por transparencia ( el color rojo parduzco
por refle+i4n%

Mtodos de separacin de pigmentos!
a" &eparaci4n de pigmentos vegetales por separaci4n simple%
b" &eparaci4n de pigmentos vegetales por cromatografa sobre papel%

a. a. %eparaci"n #e pigmentos $egetales por separaci"n simple.
"lementos)
Mortero 7 Embudo cribado 7Citasato 7 Papel de filtro 7 6ubos de ensa(o 7 Alcohol 7
6etracloruro de carbono 7 Hojas de espinaca o Acelga 7 Domba de vaco%
Ob#etivo)
E+traer los pigmentos fotosint$ticos ( separarlos mediante una t$cnica sencilla de fases%
$cnica)
1% 5avar las hojas de espinacas o acelga retirar los nervios ( ponerlas en un
mortero junto con el solvente e+tractante !acetona"%
6riturar la mezcla hasta #ue las hojas se decoloren ( el disolvente ad#uiera un
color verde intenso% Fotografa 1.
2% 2. Filtrar con un embudo papel de filtro ( bomba de vaco% Fotografa 2
Fotografa 1

Fotografa 2
*% *% Pasar el filtrado en dos tubos de ensa(o !a ( b" en partes iguales% El tubo a
se lo dejar3 para trabajar con el espectroscopio en un lugar sombro%
,% ,% Al tubo b se le agregar3 tetracloruro de carbono ( luego se lo agitar3 por
unos segundos% &e lo dejar3 reposar en una gradilla por 1/ minutos%!Fotografa
7"
E% E% 5os pigmentos se ir3n separando seg'n su adsorci4n o afinidad con los
solventes%!Fotografa 8"

Fotografa =


Fotografa F
Al observar el tubo de ensa(o donde se
encuentran los dos solventes vemos dos
zonas !figura D" #ue corresponden a los
distintos pigmentos fotosint$ticos presentes
en las hojas de espinaca o acelga% &eg'n su
grado de solubilidad con el alcohol ( el
tetracloruro de carbono se reconocen estas
zonas heterog$neas ( no miscibles en este
orden)
1% clorofila a G b G 6etracloruro de :%
2% +antofilas ( carotenoides G Alcohol


Figura D

b" %eparaci"n #e pigmentos $egetales por cromatografa so&re papel.
"lementos)
Mortero7 Embudo cribado 7Citasato 7 Papel de filtro 7 6ubos de ensa(o 7
Acetona 7 9ter de Petr4leo 7 Hojas de espinaca o Acelga 7 :loruro de
:alcio7 Domba de vaco 7 :apilar o Pipeta Pasteur 7 ?aso de precipitado%
Ob#etivo)
E+traer los pigmentos fotosint$ticos ( separarlos mediante una t$cnica
compleja de cromatografa en papel%

$cnica)
1% 5avar las hojas de espinacas o acelga retirar los nervios ( ponerlas en
un mortero junto con el solvente e+tractante !acetona"%
6riturar la mezcla hasta #ue las hojas se decoloren ( el disolvente
ad#uiera un color verde intenso% Fotografa 1.
2% Filtrar con un embudo papel de filtro ( bomba de vaco% Fotografa 2
*% Pasar el filtrado en un tubo de ensa(o colocar * a E perlas de :loruro
de calcio% Hejar reposar de E a 1/ min%
,% 6omar con un capilar o pipeta el sobrenadante del tubo anterior% &obre
un rect3ngulo de papel de filtro de unos 1E centmetros de ancho por 1/
centmetros de alto doblado en ? !para #ue se mantenga en pie" se traza
con l3piz una lnea de siembra a * cm de la base% &obre la lnea se
realizan de E a F pasadas con el capilar cargado de pigmento dejando
entre cada pasada #ue se evapore acetona%
E% &e coloca el papel (a sembrado en un vaso de precipitado #ue
contendr3 el solvente separador !$ter de petr4leo" dej3ndolo unos E a 1/
min% Fotografa3
'. 5os pigmentos se ir3n separando seg'n su adsorci4n o afinidad con el
solvente% Fotografa 4
Fotografa *

Fotografa ,
Al observar el papel donde hemos hecho la
cromatografa vemos cuatro bandas o zonas
!figura A" #ue corresponden a los distintos
pigmentos fotosint$ticos presentes en las
hojas de espinaca% &eg'n su grado de
solubilidad con el $ter de petr4leo se
reconocen estas bandas ( en este orden)
I clorofila b
I clorofila a
I +antofila
I carotenos

Figura A
Este es el aspecto final de la cromatografa obtenida con las hojas de
espinacas o acelga

Agosto %&&%
Voler

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