Aplicaciones de la biotecnologa vegetal en la fitopatologa
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RESUMEN
La biotecnologa es el uso de organismos vivos o de compuestos obtenidos de organismos vivos para obtener productos en beneficio para el hombre. La biotecnologa ha existido desde muchos aos atrs, conocida como biotecnologa clsica, Esta con los aos fue evolucionando hasta que llegamos a tener la biotecnologa aplicada, despus del descubrimiento del ADN recombinante a eso de 1970. La biotecnologa modernas compone de una variedad de tcnicas derivadas de la investigacin, la cual se puede utilizar en plantas y animales. La biotecnologa vegetal Es una extensin de la tradicin de modificar las plantas, con una diferencia muy importante: la biotecnologa vegetal permite la transferencia de una mayor variedad de informacin gentica de una manera ms precisa y controlada. Los Fitopatgenos se clasifican en tres grandes reas: Fitopatgenos Eucariontes, Fitopatgenos Procariontes y Virus Dentro de las aplicaciones de la biotecnologa vegetal en el enfrentamiento de fitopatgenos encontramos 2 grandes tcnicas: tcnica de cultivo de tejido y tcnicas de ingeniera gentica Las tcnicas de cultivo de tejido principalmente se desarrolla cultivos de tejidos vegetales in vitro para hacer experimentos con especies vegetales los cuales sean sometidos a contaminaciones pudiendo as llevara acabo las investigaciones necesarias en el mbito fitopatolgico y en adicin para la propagacin ms rpida de ejemplares. Dentro de las tcnicas de la ingeniera gentica encontramos la clonacin, la utilizacin de vectores de clonacin tal como plsmidos Ti, virus fitopatgenos y los propios componentes genmicos de las plantas.
INTRODUCCION
La biotecnologa se define como el manejo, modificacin gentica y propagacin de organismos vivos, mediante el uso de tcnicas, como el cultivo de tejidos y la ingeniera gentica. La Biotecnologa vegetal se basa en un conocimiento de biologa molecular, en especial de las plantas, utilizando tcnicas que para identificar, aislar y transferir genes especficos de un organismo a una planta. Esta permite la clonacin de las plantas, acelera y amplia los limites bajo condiciones del cultivo de tejido. La Biotecnologa vegetal influye sobre la fitopatologa en diferentes maneras. Una de las mayores forma de producir plantas resistentes es promedio de la clonacin, ya que se buscas plantas madres sanas y con esto la proteccin de subsecuente de las plantas hijas contra el ataque de los patgenos; pero esta no es la nica, encontramos el cultivo de callos y clulas aisladas, el uso de protoplastos y haploides. Las tcnicas ingeniera genrica, tiene un propsito similar al del cultivo de tejido pero la gentica utiliza mtodos muy diferentes. Uno de los medios ms utilizados y fcil de integrar genes externos a una planta es por medio de los mimos fitopatgenos en particular la bacteria Agrobacteriumtumefociens y el virus del mosaico de la coliflor, y muchos otros virus utilizados como vectores. El estudio de los genes de las plantas que confieren resistencia a las enfermedades y de los genes de los patgenos que les confieren a estos ltimos virulencia, se est impulsando en forma considerable por la ingeniera gentica, y para el futuro se esperan grandes avances. 2
Gracias a los estudios hechos con respecto a los fitopatogenos, de a podido enfrentar y controlar diversas plagas, por medio de la insercin de genes resistentes que puedan antagonizar o competir eficientemente con determinados patgenos.
Qu es la Biotecnologa?
La biotecnologa es el uso de organismos vivos o de compuestos obtenidos de organismos vivos para obtener productos en beneficio para el hombre. Como tal, la biotecnologa ha sido utilizada por el hombre desde los comienzos de la historia en actividades tales como la preparacin del pan y de bebidas alcohlicas o el mejoramiento de cultivos y de animales domsticos. Histricamente, biotecnologa implicaba el uso de organismos para realizar una tarea o funcin. La biotecnologa ha estado presente por mucho tiempo. Biotecnologa clsica frente a biotecnologa moderna Como la biotecnologa comprende conocimientos de distintas reas de la ciencia, como fisiologa vegetal, celular y molecular, inmunologa, bioqumica, podemos considerar tres etapas, relacionadas con los avances de conocimientos en estas ciencias: Biotecnologa tradicional: es la que no tiene base cientfica. Se pona en prctica con el vino de Mesopotamia en el 5000-4000 a.C., con la fabricacin de la cerveza de los sumerios en el 6000 a.C., o la fabricacin de pan en 4000-3000 a.C gracias a los egipcios. Biotecnologa clsica: es la considerada de los siglos XIX- XX cuando empiezan a entenderse los procesos de la biotecnologa tradicional. Implica, por ejemplo, la regeneracin de plantas a partir de partes de ellas mismas. Biotecnologa moderna: desde 1970 donde se conoci la tecnologa del ADN recombinante, que consiste en una molcula de ADN artificial formada de manera deliberada in vitro por la unin de secuencias de ADN y que proviene de dos organismos de especies diferentes que normalmente no se encuentran juntos. La biotecnologa moderna est compuesta por una variedad de tcnicas derivadas de la investigacin en biologa celular y molecular, las cuales pueden ser utilizadas en clulas vegetales y animales. Tiene un enorme impacto potencial, porque la investigacin en ciencias biolgicas est efectuando avances vertiginosos y los resultados no solamente afectan una amplitud de sectores sino que tambin facilitan enlace entre ellos. Por ejemplo, resultados exitosos en fermentaciones de desechos agrcolas, podran afectar tanto la economa del sector energtico como la de agroindustria y adicionalmente ejercer un efecto ambiental favorable. Biotecnologa moderna, entonces, es la aplicacin comercial de organismos vivos o sus productos, la cual involucra la manipulacin deliberada de sus molculas de ADN.
Qu es Biotecnologa vegetal? Es una extensin de la tradicin de modificar las plantas, con una diferencia muy importante: la biotecnologa vegetal permite la transferencia de una mayor variedad de informacin gentica de una manera ms precisa y controlada. Al contrario de la manera tradicional de modificar las plantas que inclua el cruce incontrolado de cientos o miles de genes, la biotecnologa vegetal permite la transferencia selectiva de un gen o unos pocos genes deseables. Con su mayor precisin, esta tcnica permite que los mejoradores puedan 3
desarrollar variedades con caractersticas especficas deseables y sin incorporar aquellos que no lo son. Muchos de estas caractersticas desarrollados en las nuevas variedades defienden a las plantas de insectos, enfermedades y malas hierbas que pueden devastar el cultivo. Otros incorporan mejoras de calidad, tales como frutas y legumbres ms sabrosas. Estas mejoras en los cultivos pueden contribuir a producir una abundante y saludable oferta de alimentos y proteger nuestro medio ambiente para las futuras generaciones. En la base de las nuevas biotecnologas desarrolladas estn las tcnicas de aislamiento de clulas, tejidos y rganos de plantas y el crecimiento de estos bajo condiciones controladas (in vitro). Existe un rango considerable de tcnicas disponibles que varan ampliamente en sofisticacin y en el tiempo necesario para producir resultados tiles. El desarrollo ms crucial para la biotecnologa fue el descubrimiento de que una secuencia de ADN (gen) insertado en una bacteria induce la produccin de la protena adecuada. Esto ampli las posibilidades de la recombinacin y la transferencia de genes, con implicaciones a largo plazo a travs de la manipulacin gentica de microorganismos. Biotecnologa y fitopatologa. La fitopatologa es el estudio de los genes de varias bacterias y virus con condiciones y caractersticas adecuadas, con el fin analizar su estructura fsica sus funciones metablicas y sus mecanismos de regulacin. Una vez que esos genes se hayan identificado y aislado acta la biotecnologa manipulando, modificando y transfiriendo, sus asociaciones con los genes del hospedante y, por ltimo, inhibiendo y neutralizando su accin. Asimismo, una vez que se hayan identificado y se cuente con ellos, los genes que determinan las caractersticas de virulencia o inhibicin podrn ser transferidos a microorganismos que sean antagnicos de los patgenos, los cuales sern aplicados sobre la superficie de las plantas para proteger a stas del ataque por los fitopatgenos. Ms all del estudio de los genes que determinan la virulencia de los patgenos, es probable que el conocimiento de la naturaleza y expresin de los genes del hospedante que determinan su resistencia a las enfermedades proporcione los mayores dividendos de la biotecnologa aplicada al control de las enfermedades de las plantas. Los primeros resultados tangibles de la ingeniera gentica y de la biotecnologa estn comenzando a surgir. Algunas especies vegetales pueden ser tratadas con las tcnicas de la ingeniera gentica para volverlas resistentes a los antibiticos que muestran una gran efectividad contra algunos patgenos, con el fin de que no sean daadas cuando se traten para controlar estas enfermedades. Ciertos virus (bacterifagos) o bacterias que han sido tratados con las tcnicas de la ingeniera gentica se asperjan sobre los cultivos, para evitar que stos sean daados por las heladas. Adems, se han producido anticuerpos monoclonales para combatir a diferentes virus y bacterias fitopatgenos, y existen comercialmente equipos de diagnstico de estos patgenos. Y, por ltimo, pueden utilizarse pruebas de hibridacin de cidos nucleicos y equipos de prueba para detectar y diagnosticar viroides. Todo mundo sabe que esto es apenas el inicio; y pacientemente se esperar para conocer lo que vendr en el futuro. 4
Para conocer la forma de enfrentar algn tipo de enfermedad, es necesario conocer las caractersticas de los fitopatgenos. Los Fitopatgenos se clasifican en tres grandes reas: Fitopatgenos Eucariontes, Fitopatgenos Procariontes y Virus Fitopatgenos Eucariontes: son organismos que poseen en sus clulas un ncleo determinado, donde se encuentran su material gentico, suelen ser mayores y ms complejas que las clulas eucariontes. Dentro de los fitopatgenos eucariontes, los mas reconocidos son los Hongos, estos son Omnipresentes y cosmopolitas; pueden aparecer en cualquier sitio. Se conocen ms de 80 mil especies, aunque probablemente existan muchsimas mas no descritos. La mayor parte de los hongos son saprofitos (descomponen materia muerta) y juegan un papel vital en el mantenimiento del ecosistema. Por otro lado, hay varios miles de especies que parasitan a las plantas; de hecho, los hongos son los fitopatgenos por excelencia. Fitopatgenos Procariontes: normalmente son unicelular, en este grupo encontramos a las Bacterias, son organismos relativamente simples en comparacin a las clulas Eucaroticas. No poseen un ncleo, por lo cual su material gentico se encuentra en el citoplasma en una zona denominada nuclede. Virus fitopatgenos: son par titulas muy pecunias, tienen diferentes formas y tamaos diferentes dependiendo del grupo ala que pertenezcan. Los virus no tiene la capacidad de penetrar la cutcula sin herida, por lo que requieren de un agente para dispersarse.
Dentro de las aplicaciones de la biotecnologa vegetal en el enfrentamiento de fitopatgenos encontramos 2 grandes tcnicas: tcnica de cultivo de tejido y tcnicas de ingeniera gentica
Tcnicas de cultivo de tejidos:
Principalmente se desarrolla cultivos de tejidos vegetales in vitro para hacer experimentos con especies vegetales los cuales sean sometidos a contaminaciones pudiendo as llevara acabo las investigaciones necesarias en el mbito fitopatolgico y en adicin para la propagacin ms rpida de ejemplares. Aquellas investigaciones infieren en poder encontrar ejemplares que se puedan ver afectados por infecciones tales como nematodos, virus y hongos; tambin para poder encontrar si que sustancias toxicas o qumicas provenientes de agentes patgenos y agentes biocidas segn corresponda, afectan de alguna manera nuestros brotes de ensayo. De aqu se tomaran nuestros futuros tejidos resistentes que sern las madres y se podrn obtener una serie de cultivos sanos y de una uniformidad gentica deseada, tambin se obtendrn plantas con genes deseados una vez estudiados, localizados y detectados en la planta para ser transferidos a aquellos que tengan menos resistencia a patgenos. En adicin la propagacin masiva de ejemplares para poder realizar aquellos experimentos.
I. Propagacin rpida por clonacin
Mtodo:
1. Seleccin de un explante segn objetivos deseados de una planta determinada, en nuestro caso con fines fitopatolgicos. 5
2. Extraccin de una parte de la planta sea esta hoja, plntula germinada (Semilla germinada) o pices de la raz (en los extremos de la races), que tengan un potencial de formar callos, o bien rganos o tejidos que tengan caractersticas embrionarias, meristmicas o reproductivas. En algunos casos el potencial se vera afectado dependiendo del desarrollo o de la edad del ejemplar como por ejemplo para plantas leosas el belloto del sur [Beilshmiedia berteroana (Gay) Kosterm] 1 debe hacerse a partir de ejemplares jvenes y en plantas herbceas como el man [Arachis hypogaea] debe hacerse desde hojas restringido de ejemplares jvenes. Otro factor importante de potencial de regeneracin es el tamao, a menor sea este menos probabilidades tiene de que crezcan brotes y a mayor tamao lo contrario, pero este ultimo puede traer consigo una mayor probabilidad de contaminacin por lo que los costos por usos de algn compuesto que facilite su esterilizacin se veran aumentado. 3. En la fase de esterilizacin o de asepsia se lleva acabo superficialmente para eliminar microorganismo que al momento de extraer nuestro explante combaten por sus nutrientes. En esta etapa se utilizaran compuestos tales como hipoclorito de sodio (1% al 3% v/v) y de calcio (6% al 12% v/v), etanol (70%v/v), entre otros. Ya que no todos los explantes suelen ser resistentes a estos qumicos se deben a veces tomar consideraciones que ya estn establecidas en base de datos como por ejemplo para la desinfeccin de la Oryza sativa el explante inflorescencia se debe hacer con etanol al 70% v/v durante 4 segundos y para otros casos desconocidos deben hacerse por ensayo y error. Luego los residuos deben ser removidos con agua destilada a lo menos 3 veces y con la cantidad superior a 3 veces a la sustancia utilizada, todo esto debe hacerse en una cmara de transferencia. 4. Los componentes del medio a utilizar donde pondremos nuestro explante debe contener ciertos nutrientes para que su desarrollo sea fructuoso y pueda producir callos, aquello nutrientes mas importantes son conocidos como medio basal (a+b+c): a. Carbono: Sacarosa (2% al 5%) la ms comnmente utilizada. b. Nutrientes minerales: Adicin de micro y macro nutrientes. c. Vitaminas: Tiamina la mas esencial. d. Agentes gelificantes: Agar 2 (0.6% al 1.0%) e. Sustancias reguladoras de crecimiento: auxinas (2,4-D /ANA/ AIA), citocininas (KIN, BAP, ZEA). f. Otros compuestos. Antioxidantes (ej.: acido ascrbico), anti metabolitos txicos (carbn activado 0.1% al 5%).
5. Se deben preparar para el cultivo mediante el uso de agua destilasa o bi-destilada y una serie de procedimientos de laboratorios como incorporacin de MB, ajuste de pH, adicin del Agar, esterilizacin, entre otros dependiendo del tipo de medio sea este liquido o semi-slido. Todo esto se lleva acabo en tubos de ensayos. Las condiciones ambientales ideales son 25-28 C y luces que simulan la luz del da durante un periodo de 16h encendida. 6. Hasta el punto anterior el procedimiento es comn para casi cualquier mtodo de propagacin in-vitro ahora solo depender de que sea necesario producir en este caso clonaciones directas a partir del callo producido principalmente. Este mtodo de propagacin es utilizado en especies leosas difciles de reproducir hacindolo en poco tiempo a partir de explantes de meristemos y en especies herbceas se puede tomar muestras incluso hasta de hojas. 7. Luego se formara un callo al que se le deben poner hormonas para estimular el crecimiento de races y rganos (en muchos casos tallos), para esto se trasplanta en un medio con ms sales minerales,
1 Actualmente en peligro de extincin. 2 Gelatina vegetal de origen marino. 6
disminuyendo las citocininas y aumentando las auxinas exgenas para poder obtener brotes que sern nuestros explantes primarios traspasndolo a medios independientes dando a luz nuestros ejemplares. 8. Para dar termino se pasa a la fase de adaptacin al medio en donde se har el trasplante final conocido como etapa de endurecimiento, que consiste principalmente en limpiar los sedimentos del Agar y trasplantar nuestra nueva planta un suelo estril y rodeando la planta en una bolsa de polietileno para luego ir perforndola gradualmente hasta completar de manera perfecta su adaptacin a su nuevo medio, aportndole en sus riegos lo mismos nutrientes y tambin de manera gradual ir diluyendo esta al 50% hasta que se riegan con soluciones mucho menos complejas.
II. Cultivo de callos y clulas individuales
Mtodo:
1. Luego que obtenemos el callo a partir de los pasos empleados en el procedimiento anterior (1-5), podemos producir empleando auxinas y agitando de manera continua creara una serie de clulas no diferenciadas las que en presencia de un medio liquido con una mayor cantidad de de esta ultima hormona y citocininas se pueden dar paso a otra fase. 2. La embriognesis somtica (producir una estructura bipolar (embrin) a partir de una clula somtica, Embriognesis somtica Carlos Lpez Encina y Rosa Pern Quesada) se aplicaran de dos maneras directa e indirecta:
a. Somtica directa: Clulas somticas del explanto siguen un lnea directa para la formacin de los futuros embriones. b. Somtica indirecta: Involucra una induccin al callo formado para que sigan la va embriognica, para lo cual es necesario auxinas exgenas, fuente y concentracin de nitrgeno y entre otras como la sacarosa.
3. Luego de obtener nuestros embroides pasamos a al etapa de diferenciacin en al cual queda esperar para que se transformen luego en vstagos y races, dando por ultimo a una plata completa. 4. Para finalizar se lleva acabo un procedimiento similar a que se describe en la propagacin rpida por clonacin en el punto numero 8.
III. Protoplastos
Se usan los protoplastos en el estudio del comportamiento de la membrana plasmtica, incluyendo el ingreso de macromolculas y virus.
Tambin se usan implante en la transformacin gentica de bacterias y de clulas vegetales. Al estar desprovistos de pared, es ms fcil introducir ADN exgeno en los protoplastos, que en las bacterias o clulas vegetales ntegras. De ah que los protoplastos son ampliamente usados en Ingeniera Gentica de Bacterias y en el estudio de la expresin temporal de genes en plantas. Por otro lado, a partir de un protoplastos se puede regenerar una planta completa usando micro propagacin, una tcnica moderna usada en cultivo de tejidos vegetales.
Finalmente, tambin se usan protoplastos en el mejoramiento gentico vegetal. Para ello se usa una tcnica conocida como fusin de protoplastos, en la que protoplastos de diferentes plantas se fuerzan a fusionarse para generar tejidos hbridos. De esta forma se puede generar: Plantas poliploides, fusionando dos plantas de la misma especie, lo que lleva a una duplicacin del nmero de cromosomas que poseen respecto a las plantas originales. 7
Plantas que posean cromosomas de distintas especies o variedades en una misma planta, a partir de la fusin de dos plantas diferentes. Los protoplastos se usan en el estudio del comportamiento de la membrana plasmtica, incluyendo el ingreso de macromolculas y virus.
IV. Haploides
Consiste en el cultivo de anteras u vulos para la produccin de clulas haploides las cuales despues de doblar sus lotes de cromosomas nos llevan a la obtencin de plantas homocigotas. Estos metodos presentan varias ventajas durante el proceso de mejoramiento 1.-La fijacin de un hibrido por haplometodo permite acortar 5 aos el proceso 2.-facilita el anlisis gentico ya que los genes recesivos se expresaran en la primera generacion 3.-la diploidizacion permite recombinaciones geneticas nuevas que no se observaban naturalmente
Tcnicas de Ingeniera Gentica
Los patgenos mencionados al principio tambin pueden servir como vehculos para insertar material gentico externo a las plantas, de manera de hacerlas mas resistente a ciertos patgenos invasivos. Cuando una planta se modificada genticamente, para resistir ciertas enfermedades, nos estamos refiriendo, entonces, a plantas transgnicas.
Algunas tcnicas proporcionadas por la ingeniera gentica en la fitopatologa son: a) Clonacin gentica: entendemos por clonacin gentica como la obtencin de mltiples copias de un gen o de su producto gnico, usualmente una protena. La clonacin molecular se hace utilizando clulas hospedadoras, bacterias normalmente. Es decir, se inserta el ADN deseado en su ADN y cuando la bacteria se reproduzca har mltiples copias de ese ADN.
Para ello, una vez aislado el ADN hay que insertarlo en el ADN bacteriano. Se utilizan los vectores de clonacin o de clonado. Estos vectores son pequeos molculas de ADN que tienen capacidad de autorreplicacin independientemente del ADN de la clula husped, como plsmidos, bacterifagos y csmidos. El gen deseado hay que insertarlo primero en estos vectores. Estos vectores llevan adems unos genes llamados marcadores que sirven para detectar o identificar las clulas que han incorporado los vectores. Estos marcadores son genes de resistencia a antibiticos (si se inserta en una bacteria) o genes de bioluminiscencia (si se inserta en una eucarionte). Los plsmidos naturales no tienen estos marcadores, sino que se aaden artificialmente. Cmo se inserta el vector en el ADN de la clula husped? Se corta el ADN del vector y el 8
que contiene el gen deseado con la misma restrictasa y luego se unen con la ligasa. As tenemos un ADN recombinante, ya que procede de dos molculas distintas.
La introduccin de un ADN extrao en bacterias, ya sea de forma natural o por vectores, se llama transformacin. Si el vector es un virus, la transformacin se llama transduccin. Si se hace en eucarionte se llama transfeccin, y si se inserta en las clulas germinales de estos se llama transgnesis y los descendientes de estos organismos, transgnicos o modificados genticamente (OMG). Uno de los vectores ms utilizados en plantas es la bacteria Agrobacterium tumafaciens.. Una vez que las bacterias se han transformado, se las pasa a un medio de cultivo para que se multipliquen. Al mismo tiempo se replican los vectores de clonado y as se obtienen mltiples copias del gen deseado. Cada grupo de bacterias que procedan de una sola, llevarn ese vector y ese gen, constituye un clon. As se obtienen tantos clones como fragmentos de ADN se hayan insertado en las bacterias. El conjunto de clones obtenido se llama biblioteca genmica o genotecas. De todos los clones obtenidos slo uno portar el gen deseado. Cmo se localiza o se extrae de la biblioteca genmica?. Es decir, hay que localizar un fragmento de ADN, que est dentro de una clula. El mtodo depende del vector utilizado:
Transfiriendo los clones a cultivos con antibiticos. El que sobreviva es el que porta el marcador de resistencia. Otro mtodo muy usado es la hibridacin de cidos nucleicos, utilizando una sonda.
La sonda es un fragmento de ADN o ARN de cadena sencilla complementaria a la secuencia del fragmento que queremos localizar. Esta sonda puede ser:
El ARNm correspondiente a la protena que codifica el en buscado, y que se ha sintetizado in vitro. Un ADN llamado complementario (ADNc), obtenido a partir del ARNm por la transcriptasa inversa.
La sonda lleva una molcula (reporter) que puede un istopo radioactivo o una sustancia fluorescente. Sirve para verla por medio de autorradiografa (si lleva istopos) o con microcosopio de florescencia si lleva sustancia fluorescente. La sonda se aade al conjunto de clones y se espera que hibride.
b) Vectores de clonacin en plantas: los vectores son organismos o agentes que transfieren material gentico desde el organismo donador al receptor, de tal forma que el material gentico transferido persista se exprese en la clula receptora.
Plsmidos bacterianos Ti como vectores: Los Plasmidos Ti de Agrobacterium tumefaciens. Cuando las cepas virulentas de A. tubamefaciens 9
inafectan alas plantas, inducen la formacin de tumores (llamados agallas de de la corona) por medio de un plsmido que esta contiene, denominado plsmido Ti. Un Plsmido Ti es una molcula de ADN circular de doble cadena y banda que contiene hasta 200 mil pares de bases organizadas en varios genes. Cuando Agrobacterium tumefaciens entra en contacto con una clula vegetal ya lesionada, el plsmido Ti, se transfiere de la bacteria a la clula. Una zona especifica del plsmido, el ADN-T, se trasfiere de el ncleo de la clula vegetal, donde ingresa al genoma nuclear de la planta y se transcribe. El plsmido Ti contiene muchos genes, algunos identificados. La regin del ADN-T contiene genes que comprenden: 1. Gen que sintetiza la opina, que son sustancias que solo sintetizan las clulas vegetales trasformadas (clulas tumorosas) y se utilizan como una fuente de carbono y nitrgeno para las bacterias que contienen los plsmidos Ti y el gen especifico para el catabolismo de las opinas en particular. 2. Gen o genes que controlan la biosntesis de tocinina, la cual al inactivarse provoca tumores en las races. 3. Los genes que controlan la biosntesis de auxinas, cuya in activacin lleva a la formacin de tumores en los vstagos 4. Los 25 pares de bases terminales que al parecer se necesita par ocupar la transferencia de ADN-T hacia el genoma de la planta.
Pese a que por lo visto, los plsmidos Ti son eficientes vectores naturales del ADN bacteriano en clulas vegetales, su unos como vector de otro material gentico extrao, ha sido problemtico, ya que las clulas infectadas se trasforman en clulas tumorales, de hay que es difcil generarlas como plantas completas. Virus fitopatgenos como vectores: uno de los vectores ms eficiente de material gentico son los virus. Hasta ahora el mejor vector (si no es el nico) ha sido el plsmido TI. Tomando en cuenta el cada ves mayor numero de estudios de los virus fitopatolgico como vectores potenciales de genes de plantas, se piensa que pronto se podr contar con uno o varios virus vectores para realiza trasferencia eficiente de genes dentro de las plantas. Debe sealarse que no es posible que los virus fitopatolgico vectores de incorporacin como el plsmido Ti. Ms bien es probable que trasfieran algn gen en una clula vegetal, donde dicho gen se replica casi un milln de veces con el virus y donde tambin se propagara sistemticamente en toda la planta. La introduccin de genes que se desee por medio de virus a plantas Perennes, que se propagan vegetativamente, o en plantas en las que el gen se propague rpidamente en las semillas, permitir que dichos genes se perpeten en la planta. Algunos virus estudiados son: 10
Caulimovirus: virus del mosaico de la coliflor. Limitacin en el tamao: se soluciona con virus accesorios Geminivirus: genoma dividido en un par de molculas de DNA que codifican para diferentes genes Virus de RNA: se pueden sustituir los genes de la cpside por material exgeno Viroides
c) Componentes genmicos de las plantas como vectores: ciertos elementos cromosmicos y extracromosmico parecen tener la capacidad de incorporar materia gentico en el genoma de las clulas vegetales y pueden ser potenciales vectores genticos. 1) Elementos transponibles o transferibles: los elementos transferibles son segmentos de ADN que existen, quizs en el genoma de todo tipo de organismo. Tiene la propiedad que cuando pasa mucho tiempo incorporado en el genoma de las clulas, puede trasferirse. Los elementos transponibles varan de tamao y parecen tener repeticiones terminales formadas por casi 11 pares de bases. Se piensa que cuando un gen transportable se asla, perfectamente un gen extrao de alguna planta puede introducirse en las clulas o protoplastos vegetales donde se puede incorporar al genoma. Este tipo de transferencia gentica ya se a realizado con la mosca de la fruta (Drosophilasp), pero aun no se a dado a conocer en las platas. Lo favorable de los genes transponibles es que pueden utilizarse en plantas tanto monocotiledneas, como en dicotiledonias, mientras que los plsmidos Ti solo infectan a estas ultimas.
2) Elementos extracromosmico: estos son segmentos de ADN lineal o circular que se replican de manera independiente, y que se localizan en el citoplasma celular. Parece ser que estos pueden transportarse por medio del genoma mitocondrial. Aun se desconoce su potencial como vector.
3) Elementos cromosmicos: Se realizan muchos esfuerzos para utilizar elementos cromosmicos como vectores genticos que permitirn incorporar algn otro material gentico distinto al del hospedante con o sin reemplazo de genes homologas del ultimo. Este tipo de trasferencia gentica no se a producido en plantas, pero si en levaduras, donde a resultado ser un buen vector gentico
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CONCLUSIN
Despus del descubrimiento de fitopatgenos, como el virus de la coliflor, hoy muchos laboratorios han dedicado sus esfuerzos a estudios de estos, los cuales han revelado los mecanismos de regulacin de los genes de varios virus. No solo se han descubierto las caractersticas de los virus si no tambin, la estructuras fsicas y posibles sistemas de resistencias de las propias plantas receptoras. Despus de identificar los genes de los patgenos y sus mecanismos de regulacin, es posible aislar aquel gen, y manipular, modificar, transferir, estudiar su asociacin con los genes de los hospedantes, y por ltimos y fin principal, inhibir y neutralizar su accin. Los mtodos de control varan considerablemente de una enfermedad a otra, dependiendo del tipo de patgeno, del hospedante y de la interaccin que se establece entre los dos. En el control de las enfermedades, las plantas se consideran generalmente como poblaciones, ms que como individuos, aunque ciertos hospedantes (en particular algunos rboles, plantas de ornato y a veces plantas infectadas por virus) pueden tratarse individualmente. Sin embargo, con excepcin de los rboles, el dao o la prdida que sufren una o varias plantas comnmente se considera insignificante y, por lo tanto, las medidas de control se utilizan por lo general ms para salvar a las poblaciones que a unas cuantas plantas individuales. Lo interesante es que despus de conocer la mayor cantidad de caractersticas de los fitopatgenos, estos mismos permiten ingresar genes externos al hospedante, pero ya no para infectarlo, si no que para hacerlo resistente al ataque de nuevos fitopatgenos. Los primeros resultados tangibles de la aplicacin de la biotecnologa vegetal en los fitopatgenos estn comenzando a surgir. Es claro, que queda mucho por hacer, muchas de las posibles tcnicas de la ingeniera gentica en la ayuda al enfrentamiento de fitopatogenos, no estn completamente claras por lo tanto es posible solo falta la intencin de seguir investigando.
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Bibliografia:
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