Proteínas Plasmáticas

Proteínas Plasmáticas

1. Proteínas plasmáticas. Funciones generales de las proteínas del plasma.

Regulación de la presión oncótica.
2. El metabolismo de las proteínas plasmáticas. Síntesis, distribución y
catabolismo.
3. Métodos de análisis cualitativo de proteínas plasmáticas: Electroforesis
4. Proteinograma normal. Proteínas más representativas.
5. Alteraciones típicas del proteinograma
6. Análisis cuantitativo de proteínas plasmáticas. Medida de la proteína
total y proteínas específicas.

1
 Funciones generales de las proteínas plasmáticas

• El plasma, fracción de proteínas solubles de la sangre

• El suero, fracción de proteínas solubles que aparecen tras la retracción
del coágulo sanguíneo. Carece de fibrinógeno
• Funciones:
9Transporte de compuestos endógenos/exógenos poco solubles
en agua.
9Regulación de la presión oncótica y el balance intra/extravasal
de agua.
9Respuesta inflamatoria y control de la infección.

El fenómeno de la presión osmótica por proteínas

La difusión de moléculas a través de una

membrana, puede condicionar su paso

Membrana
semi-permeable

2
Regulación de la presión oncótica y el balance intra/extravasal de agua

Presión
osmótica
debida a
proteínas
(oncótica)

P1>P2 P1<P2

Balance proteico
Síntesis:
• La síntesis de la mayor parte de las
proteínas plasmáticas tiene lugar en el
hígado
• Los linfocitos B son los responsables de
la síntesis de las inmunoglobulinas
Degradación/Pérdidas.
• El catabolismo tiene lugar en muchas
distintas células (endoteliales, fagocitos
mononucleares, fibroblastos cutáneos)
• Pérdidas por filtración glomerular
• Pérdidas a través de la pared intestinal

3
 ¿Cuándo y cómo son sintetizadas las proteínas que son
secretadas por las células...?

¿Cómo son exportadas dichas proteínas al exterior de las células

Las proteínas destinadas al plasma son sintetizadas de manera singular

4
 Los grupos funcionales ácidos y básicos presentes en las cadenas laterales de
los aminoácidos, al disociarse en el agua, confieren a la proteína cargas
positivas y negativas

-
+
- + - -
+ - +
+ - + -
+ -
+

R-COO- + H3O+
R-COOH+H2O↔R

R-NH3+ + OH-
R-NH2+H2O↔R

La carga neta de una proteína depende de la suma de cargas de ambos signos

La carga eléctrica de la proteína depende del grado de disociación de sus

grupos funcionales ácidos y básicos,
básicos lo que depende del pH.

pH ácido pH básico

+
- + - +
- + -
+ +
+ - + - + - + -

- R-COOH+H2O → R-COO- + H3O+

COOH 2O ←R-COO + H3O+
R-COOH+H
R-NH2+ H3O+ →R-NH3+ + OH- R-NH2+ H3O+ ← R-NH3+ + OH-

5
 Sometidas a un campo eléctrico, las proteínas son
capaces de moverse en función de su carga y tamaño

La movilidad electroforética es proporcional al cociente: Carga/Masa

Aplicación de la muestra

+ -

Proteinograma normal del suero

Albúmina

α1 α2 β1 β2 γ

+ -

6
Fracción de albúminas
Albúmina sérica
• Banda mayoritaria (53-66%) del total del proteinograma
•Valores normales:
•Recién nacidos: 2.9-5.5 g/100ml
•Niños: 3.8-5.5
•Adultos (V): 3.3-6.1; (H): 2.7-5.6

Pre-
Pre-albúmina (retinol binding protein)
protein)
•Mayor movilidad electroforética.
•Rápido recambio (18-45 mg/100ml)
•Indicador de estado nutricional

Fracción α1 globulinas
Aumenta durante los procesos inflamatorios agudos, neoplasias,
infartos y necrosis (1.9-4.1% del total del proteinograma)
™ α1 glicoproteína ácida
™ α1 antitripsina
™ α1 antiquimiotripsina
™ α1 fetoproteína (<2 mg/100 ml)

7
 Fracción α2 globulinas
Aumenta en el síndrome nefrótico, ictericia obstructiva, tuberculosis,
inflamación crónica (7.7-12.3%)
™ α2 macroglobulina (150-420 mg/100ml; Síndrome nefrótico)
™ Ceruloplasmina (20-
(20-40 mg/100ml;
mg/100ml; transporte Cu2+; enf.
enf. Wilson)
™ Haptoglobina (60-
(60-270 mg/100ml),
mg/100ml), transporte Hb;
Hb; aumenta en
inflamación, neoplasias; disminuye hemólisis intravascular,
intravascular, anemia
perniciosa
™ Proteína C reactiva (<0.6 mg/100 ml). Inflamaciones e infecciones

Fracción β globulinas
Aumento moderado en síndrome nefrótico, ictericia obstructiva, cirrosis,
tuberculosis, inflamación crónica (7.6-13.0%)
™ Fibronectina (25-40 mg/100ml; aumenta en síndrome nefrótico,
colestasis, neoplasias. Disminuye en politraumatismos, quemaduras
extensas, sepsis)
™ Transferrina (200-
(200-400 mg/100ml;
mg/100ml; transporte Fe; aumenta en anemias)
™ Transcobalamina (900 pmol/L; transporte de B12).
™ Complemento (C3, C4) (85-190; 12-36 mg/100 ml). Aumentan en
procesos inflamatorios agudos. Disminuyen en reacciones autoinmunes.

8
Fracción γ globulinas
™ La fracción de las gammaglobulinas supone entre 10.3 y 20.8% del total
de proteínas del suero. Se pueden detectar IgG (2- 4mg/dl), IgM
(150mg/dl), IgA (0,15– 0,6mg/dl), e IgE (30µg/dl)
™ IgM aparece aumentada tras procesos agudos virales
™ IgA aumenta en enfermedades intestinales autoinmunes (Crohn
(Crohn))
™ IgG aumenta en enfermedades autoinmunes (lupus eritematoso,
eritematoso, hepatitis
crónica activa, infecciones bacterianas crónicas)
™ IgE está aumentada en enfermedades con un componente alérgico
(eczema, asma, infección parasitaria)

Principales alteraciones del proteinograma

™ Hipoproteinemia:
Hipoproteinemia: hipoalbuminemia
™ Deficiencias: α1 antitripsina, inmunoglobulinas, complemento
™ Paraproteinemia:
Paraproteinemia: presencia de proteínas anormales o en cantidad
excesiva (reacción de fase aguda, mielomas, macroglobulinemia,
linfomas B, etc.).

9
 Principales alteraciones del proteinograma (I)
α1 α2 β γ

Normal

Reacción inflamatoria
(fase aguda)

Reacción inflamatoria
(crónica)

La reacción de fase aguda

Cambios en la síntesis hepática de proteínas plasmáticas, como consecuencia de la regulación
de genes inducida por citoquinas inflamatorias (IL-6, IL-1β, TNF-α)

™ Aumento muy importante (>5x): CRP, SAA

™ Aumento moderado (1- (1-5x): α1 antitripsina, α1 glicoproteína
ácida, α1 antitripsina, ferritina, inmunoglobulina G, complemento
C3/C4, ceruloplasmina, α1 antiquimiotripsina
™ Pocos cambios (1-
(1-2x): Fibrinógeno, Haptoglobina
™ Disminución: Albúmina, Transferrina

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 Principales alteraciones del proteinograma (II)
α1 α2 β γ

Normal

Síndrome nefrótico

Cirrosis hepática

Alteraciones de la fracción de γ globulinas

™ Las hipergamaglobulinemias policlonales se manifiestan en
inflamaciones crónicas (hepatitis crónica, cirrosis) e infecciosas
(brucelosis, lepra, endocarditis), y ciertas enfermedades autoinmunes
(lupus).
™ Las hipogamaglobulinemias se presentan en el síndrome nefrótico,
mieloma con proteinuria Bence-Jones, gran parte de las leucemias
crónicas, síndrome de Cushing. Existen también a-gamaglobulinemias
™ Gamapatías de células B (Plasmacitomas, mieloma múltiple)
- Macroglobulinemia de Waldeström

Patológico

Normal

11
 Inmunodeficiencias asociadas a células B

1. Agamaglobulinemia infantil asociada al

cromosoma X (enfermedad de Bruton; 1/100.000)
2. Hipogamaglobulinemia transitoria del recién
nacido (células T-helper)
3. Deficiencias en la producción del anticuerpo
* IgA : la más común
* IgM : rara
* IgG : muy infrecuente

Principales alteraciones del proteinograma (III):

(paraproteinemias)
α1 α2 β γ

IgA

IgG

IgG

Waldeström (IgM)

12
Principales alteraciones del proteinograma:
(deficiencias)

Alb α1 α2 β γ

Déficit α1
antitripsina

Normal

Principales alteraciones del proteinograma:

(albúmina)

Alb α1 α2 β γ

Albúmina/ bilirrubina

Bisalbuminemia

Bisalbuminemia

Analbuminemia

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 Alteraciones del proteinograma: (albúmina)
Causas de la hipoalbuminemia:
hipoalbuminemia:
•Artefactual (por dilución):
• Error en la toma (miembro infundido)
• Excesiva administración parenteral de líquidos

•Redistribución:
• Posicional (de pie, vs.decúbito)
• Aumento de la permeabilidad capilar (postoperatorio, shock)
• Retención de líquido (edema)

•Balance negativo:
• Menor síntesis (enfermedad crónica hepática, malnutrición, síndromes de
malabsorción)
• Mayor catabolismo (muchos procesos patológicos con balance negativo de N2)
• Pérdidas (enfermedad renal, quemaduras extensas, epidermolisis, enteropatías)

Alteraciones del proteinograma: (albúmina)

Consecuencias de la hipoalbuminemia:
hipoalbuminemia:
•Edema:
• Extravasación de líquido, edema

•Transporte:
• Muchos compuestos endógenos van unidos a albúmina (Ca2+, ácidos grasos)
• Muchos fármacos se unen a albúmina. Puede aumentar la fracción libre de
fármaco, y con ello un exceso de efecto farmacológico.
• Desplazamiento de un fármaco por otro, y aumento de la concentración libre
plasmática

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Medida cuantitativa de proteínas plasmáticas

1. Reacción de biuret. Valores normales de proteína total

(6-8 g/100ml).
2. Medida de proteínas específicas por métodos
inmunológicos (nefelometría, inmunodifusión radial)

La Respuesta de Fase Aguda

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 Citoquinas e Virus Bacterias
Inflamación LPS Necrosis
IL-
IL-6 ?
IL-
IL-1
TNFα
TNFα - Monocitos
+ Macrofagos
IFN

IL-
IL-1 TNFα
TNFα

Fibroblastos (F)
ACTH Endoteliales (E)
F
IL6 Queratinocitos (K)
K

Glucocorticoides
+
HGF, LIF

” Biochem. J. 265, 621-636 (1990). Proteínas de Fase Aguda

Aparición secuencial de citoquinas durante la inflamación

3
Patients
Controls
Infarto de
Relative changes of cytokines

2
IL-1β
1 miocardio
0
5
3000
4

3
2500
c p m /m g p ro te in

2 IL-6 2000
1
1500
0
2 1000

500

1 0
TNF-α
IN F
C

CR
R
N -M C

IN F -M

0
0 4 8 12 16 20 24
• Am. J. Physiol. 269, R229-R235 (1995).
Time (hours)

16
 La Interleukina 6 es la señal inflamatoria más
potente para los hepatocitos humanos
Inhibition (%) - Fold increase

25
25 25
20
15 rhIL-
rhIL-6 15
rhIL-
rhIL-1β 15
rhTNFα
10
5 5
5

0 -5 -5

-5 -15 -15
-10
-25 -25
-15

-20 -35 -35

SAA CRP HTG ACH FBN AAT AGP AMG FNT TRF ALB SAA CRP HTG ACH FBN AAT AGP AMG FNT TRF ALB SAA CRP HTG ACH FBN AAT AGP AMG FNT TRF ALB

Fundamento de la inmunodifusión radial

1. Preparación de la placa
2. Adición de agar con anticuerpo
3. Aplicación de las muestras
4. Difusión Patrón 4
Patrón 3
Problema

Patrón 2

Patrón 5
Patrón 1

17
18