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PRCTICA #4: CROMATOGRAFA

Bautista H. Jos Nicols y Garca Malpica y A. David
Resumen
Esta prctica se realiz en dos partes: la primera fue sobre la separacin de los carotenos con la
tcnica de cromatografa en columna y la segunda fue de la separacin de licopenos empleando
el mismo mtodo. A este equipo se le asign la segunda experiencia.
Introduccin
*La cromatografa es un mtodo fsico de separacin de distintas especies, aunque estas sean muy
parecidas, basado en la distribucin diferencial de una mezcla entre una fase estacionaria fija y una
fase que se mueve a contracorriente respecto a la primera. De este modo se producen
transferencias repetidas de los componentes de la mezcla muchas veces entre las dos fases, lo cual
conduce a su separacin. La fase estacionaria puede ser la superficie de un soporte solido situado
en una columna o un lquido mantenido en un soporte slido, mientras que la fase que se desplaza
es un lquido o un gas.
Esta tcnica de separacin se puede realizar en funcin a las caractersticas de las especies
qumicas que se deseen separar, ello depender de sus cargas, masa, tamaos moleculares,
la polaridad de sus enlaces, sus potenciales redox, entre otros aspectos. Debido a ello existe una
gran variedad de tcnicas para llevar a cabo su separacin a travs de la cromatografa:
Tipo de cromatografa Fase mvil Fase estacionaria
Cromatografa en capa fina Liquido Solido
Cromatografa de gases Gas Slido o liquido
Cromatografa liquida Lquido (polar) Slido o liquido (menos polar)
C. liquida de intercambio inico Lquido (menos polar) Slido o liquido (polar)
C. liquida de exclusin Liquido (polar) Slido
C. liquida de absorcin Liquido Slido
C. liquida en fase inversa Liquido Slido
C. de fluidos supercrticos Liquido Slido
Cromatografa en papel Liquido Liquido (molculas de agua contenidas
en celulosa de papel)

La aplicacin de la cromatografa radica en la industria y anlisis en laboratorios. Por ejemplo en
aspectos de la petroqumica, principalmente en las plantas de gases, donde se obtienen los
productos acabados como son el propano y el butano. La industria farmacutica hace de esta
tcnica uso para la purificacin de biomolculas, pptidos, protenas, anticuerpos, etc. En la
tecnologa de alimentos y productos naturales puede realizarse la caracterizacin de aceites
esenciales y aromas, los cuales son empleados en la elaboracin de saborizantes, aromatizantes,
licores, perfumes, artculos de aseo. En el control ambiental, para determinacin de los
contaminantes posibles de ser estudiados, como: los hidrocarburos aromticos, BTEX, pesticidas
organo-clorados y organo-fosforados en muestras de aguas superficiales, subterrneas, suelos y
lodos. En la determinacin y cuantificacin de alcohol en sangre, anlisis de licores, entre otros.
Adems de controlar los procesos de obtencin en distintos puntos, es de inters conocer el grado
de pureza de los mismos una vez acabado dicho proceso, para lo cual por medio de la
cromatografa se realiza un anlisis cualitativo y cuantitativo de los componentes.


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Discusin

El equipo nmero 5 se encarg de efectuar la experiencia 2 de la prctica, la cual
fue sobre la separacin de licopenos de una fase homognea, para ello se
emple la cromatografa en columna. En este mtodo se pueden usar un amplio
espectro de adsorbentes slidos, como la slice, la almina y la slice gelatinosa.
Despus de montar el equipo se coloc en el interior de la columna de vidrio una
porcin de algodn, acomodndola con la piceta, se agreg hexano para
comprobar el paso correcto (cantidad y velocidad) de las sustancias a travs de
la columna, a continuacin se introducen la silica gel y el eluyente (hexano) en la
columna (existe una llave de seguridad para controlar el paso de sustancias al
exterior de la columna), se abre la llave de seguridad y se deja salir al eluyente
dejando una pequea cantidad en parte superior de la silica. Esta es la fase
estacionaria utilizada, es decir, el absorbente (que permite la retencin y reparto
de una especie qumica en los sitios activos de la superficie de un slido).
Seguidamente se introdujo la mezcla orgnica que se necesitaba separar, la
depositamos por la parte superior de la fase estacionaria con mucho cuidado,
baando solamente las paredes con nuestra sustancia orgnica evitando tener un
contacto directo con la silica gel puesto que si la su distribucin no ser la
adecuada, se introduce ms eluyente y se abre la llave de seguridad para dejarlo
pasar, si la concentracin de la sustancia no es la suficiente se prueba el mismo
procedimiento con distintas concentraciones de eluyente:
Hexano 100%
Hexano-Acetato de etilo (19:1)
Hexano Acetato de etilo (9.1)
Hexano-Acetato de etilo (17:3)
Hexano Acetato de etilo (8:2)
Hexano Acetato de etilo(7:3)
Hexano Acetato de etilo (1:1)
Metanol 100%
As la fase mvil podr ir atravesando el sistema. En este caso nuestra
concentracin en la que empez a gotear el lquido colorido fue Hexano: Acetato
de etilo (8:2), en tubos de ensaye empezamos a obtener las fracciones coloridas
que arrastraba la fase fluida. Despus de 5 fracciones recolectadas en tubos de
ensayo obtenidos el color iba siendo ms tenue. Al final la columna se fraccion y
comenz a salir lquido incoloro nuevamente.
Para la cromatografa en capa fina obtuvimos los siguientes resultados





Revelador: Revelador: Revelador Revelador
Molibdeno Permanganato Luz UV
1.5 = 0.3604 2.75 = 0.6395 1.9 = 0.4418 1.6 = 0.3720
4.3 4.3 4.3 4.3

4.3 cm 1.5 cm 4.3 cm 2.75 cm 4.3 cm 1.9 cm
4.3 cm
1.6 cm

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Conclusiones
Se identificaron los fundamentos tericos y prcticos de la tcnica de cromatografa: este se trata
de un proceso de separacin, para el anlisis de sustancias, mediante el desplazamiento
diferenciando a travs de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. Depende
de la polaridad de las sustancias.
Bibliografa
1. *J. M. Costa. Diccionario de Qumica Fsica. 2 ed. Espaa. Ed Daz de Santos. Pg. 110, 2005








TERMINOLOGA EN CROMATOGRAFA
"

Absorcin:
es la retencin de una especie qumica por parte de una masa ydepende de la tendencia que tiene sta a formar
mezcla o a reaccionar qumicamente con la misma.


5
"

Adsorbente:
fase estacionaria en la C. de adsorcin y de reparto.

"

Adsorcin:
Es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de lasuperficie de un slido, quedando limitado el fenmeno
a la superficie que separalas fases o superficie interfacial, esta retencin superficial puede ser fsica oqumica.

"

C. en fase inversa:
C. con una fase estacionaria no polar y una fase mvil polar.

"

C. en fase normal:
C. con una fase estacionaria polar y una fase mvil no polar.

"

Disolvente o revelador:
Cualquier fase mvil.

"

Elucin:
Proceso de extraer un soluto de la fase estacionaria.

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"

Eluyente:
La fase mvil una vez que se extrae de la columna.

"

Fase estacionaria:
Material que permanece dentro de la columna cromatogrficadurante la cromatografa y que
retiene algn componente de la muestra, posee unagran rea superficial y puede ser un slido o un lquido
dispuesto sobre un slidoque acta como soporte.

"

Fase mvil:
Es un fluido que puede ser lquido, gas o fluido supercrtico que seusa como portador de la mezcla y que se hace pasar a
travs de la columnacromatogrfica y la fase estacionaria.

"

Origen:
Lugar fsico donde se coloca la muestra al principio.

"

Revelado:
Proceso de separar un soluto de la muestra por medio de cromatografa.

"

Soporte:
El material slido inerte que en la C. de reparto sirve para sostener lafase estacionaria lquida en su sitio.

"

Sorbente:
Cualquier fase estacionaria