ANLISE QUMICA

Anlise Instrumental



Prof. Juarez Denadai
2011



APRESENTAO
A Qumica Analtica compreende o conjunto de tcnicas e mtodos que visam caracterizar a
natureza e determinar a composio de amostras de diferentes origens, em termos de
elementos, espcies ou agrupamentos de tomos ou molculas.

O desenvolvimento de mtodos analticos depende do aparecimento de novos instrumentos
de medida e da eletrnica. Porm, os princpios bsicos que norteiam as determinaes
analticas instrumentais continuam basicamente os mesmos de anos atrs.

Devido necessidade de determinao de concentraes extremamente baixas de diferentes
espcies qumicas, com rapidez, a anlise qumica encontra-se dependente da disponibilidade
de equipamentos modernos o que, em muitos casos, permite a automao das anlises.
Entretanto, no se deve esquecer que, na maioria dos casos, uma titulao ou um simples
ensaio qualitativo por via mida pode fornecer a informao procurada, e que os mtodos
volumtricos e gravimtricos tradicionais continuam sendo extremamente teis nos
laboratrios de ensino, pesquisa e industrial.

No restam dvidas de que, medida que o tempo passa, o mercado e os clientes internos ou
externos das empresas tornam-se mais exigentes no que se refere qualidade dos produtos e
prpria anlise qumica.

Hoje, os profissionais da qumica contam com vrios equipamentos, a maioria controlada por
computadores com softwares que fornecem curvas, resultados rpidos e variados das mais
importantes anlises qumicas.

Aliado a isso, para que a determinao ou a quantificao de componentes de uma amostra
material fornea um resultado analtico preciso e confivel, necessrio uma calibrao
correta dos equipamentos, um espao fsico conveniente, equipamentos funcionais e, ainda
mais importante, a formao e treinamento adequado do pessoal tcnico.

E pensando nesse treinamento bsico que elaboramos esta apostila, onde procuramos
ilustrar os principais temas relacionados Anlise Instrumental, de uma maneira simples,
didtica e objetiva, que serviro de base aos futuros tcnicos qumicos para que, ao
ingressarem no mercado de trabalho e ao terem contato com equipamentos analticos
variados, no se tornem somente seguidores de receitas ou leitores de manual de
aparelhos, mas que sejam profissionais que entendam o que esto operando e analisando, e
que procurem ter iniciativa e criatividade no desempenho do seu trabalho.

1. INTRODUO AOS MTODOS INSTRUMENTAIS

1.1 A ANLISE QUMICA:
A anlise qumica pode ser realizada de duas formas, dependendo da necessidade do analista:

1 - quando se deseja determinar quais substncias esto presentes em determinada amostra
2 - quando se deseja determinar a quantidade de cada componente ou de certos componentes,
presentes na amostra.
No primeiro caso, denomina-se Anlise qumica Qualitativa, e no segundo, Anlise qumica
Quantitativa.
As etapas gerais de uma anlise qumica so:
- Formulao da questo (problema)
- Seleo dos procedimentos analticos
- Amostragem
- Preparao da amostra
- Anlise qumica clssica ou instrumental
- Relatrio e interpretao
- Concluses
Dentre as aplicaes prticas da anlise qumica esto:
- Desenvolvimento de novos produtos: onde se determinar se a composio da mistura
apresenta certas caractersticas que adequem sua finalidade.
- Anlise quantitativa do ar, gua e solo para determinar a quantidade de poluentes.
- Anlise de solos
- Composio geolgica de rochas e amostras de solos
- Controle de qualidade de alimentos
Nos primeiros anos da Qumica, a maioria das anlises era realizada por separao dos
componentes da amostra por precipitao, extrao ou destilao. Em anlises qualitativas os
componentes separados eram identificados por sua cor, ponto de fuso ou ebulio,
solubilidade, odor, atividade tica ou seus ndices de refrao. Em anlises quantitativas,
utilizavam-se medidas titulomtricas ou gravimtricas.
Ainda hoje os laboratrios empregam muitos mtodos clssicos de separao e determinao
de analtos, mas sua aplicao est diminuindo em funo dos novos mtodos instrumentais.
Devido ao desenvolvimento tecnolgico a que os processos esto sujeitos, a anlise qumica
tambm se desenvolveu e, atualmente, a maioria das anlises tanto qualitativas quanto
quantitativas, so realizadas atravs de instrumentos ou aparelhos prprios, desenvolvidos
para realizar uma gama muito grande de anlises, surgindo, ento a Anlise Instrumental.
A anlise instrumental no dispensa, entretanto, o conhecimento das anlises via mida
tradicionais (qualitativa e quantitativa), nem os fundamentos bsicos da instrumentao
utilizada, visto que o tcnico qumico no deve tornar-se um mero seguidor de receitas ou de
roteiros e, muito menos, um leitor de manuais de aparelhos.
Mtodos Convencionais de anlise qumica:
Estes mtodos no envolvem nenhum equipamento sofisticado, utilizando apenas vidrarias e
reagentes. As anlises quantitativas que utilizam os mtodos convencionais geralmente so
baseadas na:
gravimetria, atravs de uma balana de preciso;
volumetria, atravs de vidrarias ou recipientes cuidadosamente calibradas.
Mtodos instrumentais de anlise qumica:
Neste caso so utilizados equipamentos eletrnicos mais sofisticados. Apesar de mais
utilizado em relao aos convencionais, podem ter seu uso limitado em funo dos seguintes
motivos:
1. Alto custo dos equipamentos eletrnicos;
2. No existncia de um equipamento disponvel para determinada anlise;
3. Existncia de requerimento de um mtodo convencional sob o aspecto legal, por se tratar
de um mtodo oficial;
4. Em casos raros, os mtodos convencionais podem apresentar resultados melhores que os
instrumentais.
Exatido dos resultados analticos:
Os mtodos gravimtricos e volumtricos podem alcanar uma exatido de at 99,9%, quando
o composto analisado se encontra em mais de 10% na amostra. Para componentes presentes
em quantidades menores que 10%, a exatido cai bastante, e ento a escolha do mtodo
apropriado deve recair em mtodos mais sofisticados e exatos como mtodos instrumentais.
Quantidade relativa do componente analisado:
Os componentes podem ser classificados em maiores (mais de 1%), menores (0,01 1%),
micros (menores de 0,01%) e traos (ppm e ppb) em relao ao peso total da amostra. Para os
componentes maiores, so perfeitamente aplicveis os mtodos gravimtricos e volumtricos.
Para os componentes menores e micro, geralmente necessrio o emprego de tcnicas mais
sofisticadas e altamente sensveis, como mtodos instrumentais.

1.2 A CINCIA DA INSTRUMENTAO:
1.2.1 O mtodo instrumental:
Os mtodos que dependem da medio de propriedades eltricas, e os que esto baseados na
determinao da absoro da radiao, ou na medida da intensidade de radiao emitida,
exigem o emprego de um instrumento (por exemplo, espectrofotmetro, condutivmetro, etc.)
e, por isso so denominados mtodos instrumentais.
Os sistemas instrumentais aplicados anlise e controle qumicos, so amplamente aceitos
como mtodos rpidos, requerem menos separaes qumicas e so seguros e sensveis, e so
amplamente aplicados na indstria.
A vantagem que se tem sobre os mtodos de anlise por via mida de que determinam a
composio qumica atravs da medio das propriedades fsicas, tais como: ndice de
refrao, cor, susceptibilidade magntica, condutividade eltrica, grau de acidez e muitas
outras.
Apesar das vantagens oferecidas pelos mtodos instrumentais, a sua generalizada adoo no
tornou obsoletos os mtodos puramente qumicos ou clssicos por que:
a) A aparelhagem necessria para os procedimentos clssicos barata e encontra-se com
facilidade em todos os laboratrios; muitos instrumentos, no entanto, so caros e a sua adoo
s se justifica quando so muitas as amostras a analisar, ou quando se trata da determinao
de substncias em quantidades diminutas (anlise de traos).
b) Nos mtodos instrumentais necessrio efetuar uma operao de calibrao, em que se
usa amostra do material com a composio conhecida como substncia de referncia.
c) Enquanto um mtodo instrumental o ideal para a execuo de um grande nmero de
determinaes de rotina, no caso de uma anlise episdica, fora da rotina, muitas vezes mais
simples usar um mtodo clssico do que Ter o trabalho de preparar os padres indispensveis
e calibrar o instrumento.
1.2.2 A natureza de uma medio:
O instrumento para a anlise qumica converte a informao armazenada nas caractersticas
fsicas e qumicas da substncia em um tipo de informao que pode ser manipulada e
interpretada pelo homem. Para conseguir esta informao, necessrio fornecer um
ESTIMULO (na forma de energia eltrica, mecnica, nuclear, eletromagntica), para se obter
a RESPOSTA do sistema em estudo.
Por exemplo: a passagem de um feixe de luz visvel de uma estreita faixa de comprimentos de
onda atravs da amostras para medir o quanto foi absorvido pela substncia.
O processo de medio bsico em um mtodo instrumental. Portanto, importante conhecer
os diversos passos envolvidos em qualquer determinao, tais como:
a) Gerao de Sinal: a maioria das medies fsicas so registros da resposta de uma
substncia a um sinal imposto. Exemplo: uma determinao da condutividade requer uma
corrente eltrica e uma medio da absoro requer um feixe de luz. Quase sempre, os sinais
pticos se originam em uma fonte, e os eltricos em um gerador.
b) Deteco e Traduo: geralmente, a informao detectada e transformada em uma forma
de sada til atravs de um s componente. Por exemplo, um tubo fotoeltrico no somente
detecta sinais de luzes como as transforma em correntes eltricas. Se substituir por um tubo
fotoeltrico multiplicador, este proporcionar 3 tipos de aes: detecta a luz; transforma em
corrente; a amplifica 107 vezes.
c) Amplificao: geralmente os detectores que respondem transformando a informao
original em um sinal eltrico, seja corrente ou voltagem, so preferidos devidos
possibilidade de amplificao atravs do uso da eletrnica.
d) Computao: sua funo a converso do sinal a uma forma til de apresentao. Por
exemplo, nos espectrofotmetros de leitura direta, as concentraes so calculadas
automaticamente, usando os dados brutos dos sinais.
e) Apresentao ou Sada: representada por valores impressos em papel ou mostrados em
visores, indicador de deflexo de um medidor, etc.

1.2.3 Tipos de mtodos instrumentais:
Os principais mtodos empregados na anlise quantitativa esto baseados:
a) No desempenho quantitativo de reaes qumicas apropriadas, seja pela medio do
reagente necessrio para completar a reao (anlise volumtrica), seja pela determinao da
quantidade de produto obtido na reao (anlise gravimtrica).
b) Em medies eltricas apropriadas (por exemplo, potenciometria).
c) Na medio de certa propriedades pticas (por exemplo, espectrofotometria de absoro).
Assim, temos:
MTODOS INSTRUMENTAIS ELTRICOS: envolvem a medio de corrente, de
voltagem (tenso), ou de resistncia, em funo da concentrao de uma certa espcie em
soluo. As tcnicas que podem se includas nessa categoria so:
- Potenciometria (medida do potencial de um eletrodo em equilbrio com um on a ser
determinado);
- Condutimetria (medida da condutividade eltrica de uma soluo);
- Eletrogravimetria (pesagem do depsito slido de um eletrodo decorrente da eletrlise da
soluo).
MTODOS INSTRUMENTAIS TICOS: dependem ou da medio da quantidade de
energia radiante de um certo comprimento de onda que absorvida pela amostra (mtodos de
absoro), ou da emisso de energia radiante e da medio da quantidade emitida com um
certo comprimento de onda (mtodos de emisso). Podem ser divididos em:
a) Mtodos ticos de absoro de luz:
- Espectrofotometria no visvel (colorimetria);
- Espectrofotometria no ultravioleta
- Espectrofotometria no infravermelho.
- Espectroscopia de absoro atmica: envolve atomizao da amostra (pulverizao de uma
soluo da amostra numa chama) seguida pela determinao da quantidade de luz absorvida.
- Turbidimetria: determina a quantidade de luz absorvida por uma suspenso.
b) Mtodos ticos de emisso de luz: envolvem o tratamento da amostra pelo calor ou pela
eletricidade, de modo que os tomos so promovidos a estados excitados que proporcionam a
emisso de energia; mede-se a intensidade desta energia emitida. As tcnicas usuais da
excitao so:
- Espectroscopia de emisso, na qual a amostra sujeita a um arco eltrico ou a uma centelha
e examina-se a luz emitida;
- Fotometria de chama, na qual uma soluo da amostra injetada numa chama;
- Fluorimetria, em que uma substncia conveniente em soluo (comumente um complexo de
reagente fluorescente com um metal) excitada pela irradiao com luz visvel ou
ultravioleta.
MTODOS INSTRUMENTAIS DE SEPARAO: a Cromatografia um processo de
separao empregado para separar as substncias de um mistura, amplamente utilizada para
identificar componentes de um mistura e determin-los quantitativamente. Aplica-se a tcnica
de separao em que os componentes da soluo passam atravs de uma coluna em
velocidades diferentes. A coluna est cheia de um recheio de slido finamente dividido (usa-
se p de celulose, slica-gel e alumina) ou de um liquido. Introduzindo-se a soluo amostra
na coluna junto com um solvente apropriado, os componentes da amostra podem ser
separados por adsoro ou partio, em tempos diferentes. Esta tcnica pode ser realizada por
via mida (mtodo clssico) ou por via instrumental (automatizada).


1.3 INSTRUMENTOS PARA ANLISE:
Um instrumento para anlise qumica converte a informao armazenada nas caractersticas
fsicas e qumicas do analito em um determinado tipo de informao, que pode ser
manipulada ou interpretada pelo homem. Geralmente, os instrumentos para anlise qumica
compreendem alguns componentes bsicos, como os da tabela 3.


1.4 SELEO DO MTODO ANALTICO:
Como as tcnicas apresentadas tm diferentes graus de complicao, sensibilidade,
seletividade, custo e tempo, importante escolher a melhor tcnica para realizar uma
determinao analtica. Para isso, necessrio levar em considerao:
a) Tipo de anlise: elementar ou molecular, rotineira ou episdica.
b) Problemas decorrentes da natureza do material investigado: substncias corrosivas,
radioativas, afetadas pela gua, calor, etc.
c) Interferncias de outros componentes do material.
d) Intervalo de concentrao que precisa ser investigado.
e) Exatido exigida.
f) Facilidades disponveis (tipo de equipamento)
g) Tempo necessrio para completar a anlise
h) Nmero de anlises de mesmo tipo que devem ser efetuadas.
i) Natureza da amostra
j) Espcie de informao que se procura
k) Quantidade da amostra disponvel




1.5 OBTENO DOS RESULTADOS:
Uma vez escolhida a tcnica analtica, a anlise dever ser realizada em duplicata ou,
preferivelmente, em triplicata. No caso de tcnicas analticas clssicas, os resultados
experimentais devem ser anotados em um registro de anlise. Para mtodos de anlise
instrumentais, muitos instrumentos so acoplados a computadores e os resultados analticos
podem ser expostos num monitor e registrados na impressora.
Um clculo simples converter os dados experimentais na percentagem do componente
presente na amostra. Quando se utilizam computadores acoplados ao instrumento, o registro
impresso dar o valor procurado em percentagem, direto.

2. MTODOS ESPECTRAIS - PTICOS
Os mtodos espectrais antigamente referiam-se ao espectro luminoso - radiaes visveis, que
separados em seus comprimentos de onda componentes, produziam um espectro. Hoje a
aplicao da espectroscopia foi expandida a outros tipos de radiao eletromagntica, tais
como: Raio-X, Ultravioleta, infravermelho, microondas, radiofreqncia, dentre outros.
Dentro da anlise instrumental, os mtodos espectrais so os mais amplamente empregados e
se baseiam na interao da energia radiante com a matria. Nessa aula veremos as
caractersticas e propriedades das radiaes eletromagnticas e discutiremos a relao entre
suas interaes com a matria e as regies do espectro.
RADIAES ELETROMAGNTICAS - REM
As radiaes eletromagnticas so formas de transferncia de energia radiante em linha reta,
atravs de oscilaes ortogonais de campo eltrico e magntico. As radiaes
eletromagnticas apresentam propriedades de onda e de partculas.
Um grande nmero de fenmenos ptico pode ser descrito tratando-se as Radiaes
Eletromagnticas como ondas como: refrao, reflexo, interferncia, difrao, polarizao e
disperso. Entretanto, diferentemente de outros fenmenos ondulatrios, como o som, as
radiaes eletromagnticas no precisam de meio material para ser propagadas. Ou seja, a
caracterstica ondulatria no suficiente para explicar as caractersticas das Radiaes
Eletromagnticas, desse modo preciso assumir a existncia de partculas discretas de
energia, chamadas ftons.
Propriedades ondulatrias
As radiaes eletromagnticas tm a componente de um campo eltrico alternado no espao,
sendo essa ortogonal a componente do campo magntico. Entretanto somente a componente
eltrica interage com o meio material e por essa razo somente o campo eltrico
considerado para estudo das radiaes. Desse modo importante considerarmos as seguintes
propriedades de uma radiao.
Freqncia ()
A freqncia definida como o nmero de oscilaes de uma onda por segundo, sua unidade
usual o Hertz (1Hz = 1ciclo/s).
Comprimento de onda ()
a distncia linear entre duas cristas de uma onda (ou quaiquer outros dois pontos
correspondentes; Figura 1), pode ter como unidades o m (micrmetro, 10
-6
m), o m
(nanmetro10
-9
m) ou o (ngstron,10
-10
m), dependendo da regio espectral.

Amplitude (A)
a distncia linear ortogonal direo de propagao, correspondente a distncia do mximo
ao eixo ou do mnimo ao eixo de propagao (Figura 1).
Nmero de onda ()
Corresponde ao nmero de oscilaes por distncia linear (cm
-1
ou m
-1
), corresponde ao
inverso do comprimento de onda e como tal dependente do ndice de refrao do meio.
Velocidade de propagao (c)
A velocidade de propagao de aproximadamente 2,99x108 m/s no vcuo. As relaes entre
essas propriedades das ondas podem ser obtidas pela Equao 1 abaixo:

Interferncias

Tal como outras ondas as Radiaes Eletromagnticas interagem umas com as outras
produzindo uma resultante de foras de intensidade maior ou menor dependendo das fases das
ondas originais. Esse fenmeno chamado de interferncia.




3. FUNDAMENTOS DA ESPECTROFOTOMETRIA
Muitos mtodos analticos quantitativos e qualitativos fazem uso da interao da energia
radiante (radiao eletromagntica = REM = luz) com a matria so chamados mtodos
fotomtricos ou mtodos ticos de anlise.
Os mtodos fotomtricos medem a quantidade de radiao de determinado comprimento de
onda que absorvida ou emitida por uma amostra lquida ou gasosa. No primeiro caso, so
chamados mtodos ticos de absoro de luz, e no segundo caso, mtodos ticos de emisso
de luz.

3.1. INTERAO ENTRE A MATRIA E A ENERGIA RADIANTE:
3.1.1- Estados energticos das espcies qumicas:
A teoria quntica, proposta por Marx Planck em 1900, procura explicar as propriedades da
radiao emitida por corpos aquecidos. A teoria foi posteriormente estendida para explicar
outros processos de emisso e absoro de luz, atravs de dois postulados importantes:
1 tomos, ons e molculas podem existir somente em certos estados discretos de energia.
Quando uma espcie altera seu estado, absorve ou emite uma quantidade de energia
exatamente igual diferena de energia entre os estados.
2 quando tomos, ons ou molculas absorvem ou emitem radiao ao efetuar uma
transio de um estado de energia para outro, a radiao de freqncia f ou de comprimento
de onda est relacionada diferena de energia entre dos dois estados pela equao:

E
1
= estado de energia mais elevado ou excitado
E
0
= estado de energia mais baixo ou fundamental
c = velocidade da luz no vcuo
h = constante de Planck
= comprimento de onda
f = freqncia
A energia de um tomo tanto maior quanto mais distante do ncleo estiver localizada a
rbita que o eltron percorre. Geralmente, para um tomo qualquer, quando os eltrons
percorrem rbitas situadas o mais prximo possvel do ncleo, a energia do tomo mnima,
e o tomo encontra-se no estado fundamental. Os estados de maior energia nos quais um ou
mais eltrons percorrem rbitas mais externas, so chamados estados excitados.
Regies do espectro
O espectro das Radiaes Eletromagnticas dividido em algumas regies, para maior
convenincia de seu estudo. Essas regies foram obtidas atravs de limites prticos adequados
a mtodos experimentais de produo de deteco de radiaes. Essas regies ainda informam
o tipo e o mecanismo de interao com a matria. As regies mais importantes so mostradas
abaixo.
As de maior importncia nas pesquisas e nas aplicaes prticas, em funo do comprimento
de onda (propriedade que fornece uma das principais caractersticas da onda): Raios-X (faixa
de 10
-1
a 10 ), ondas ultravioletas (faixa de 1 a 400 m), o espectro de luz visvel (faixa de
400 a 700 m), ondas infravermelhas (faixa de 700 m a 1 mm) e faixas de radiofreqncia
que variam de 20 cm at 105 m. (Figuras 5 e 6 e Tabela 1)



3.1.2- Absoro da radiao eletromagntica:
Quando um feixe de radiao atravessa um meio material slido, lquido ou gasoso certas
freqncias podem ser seletivamente absorvidas. A energia dos ftons absorvida fixada por
tomos ou molculas da amostra, que conseqentemente, sofrem excitao, passando de seu
estado energtico fundamental para estados energticos superiores. Por isso, dizemos que
quando uma molcula absorve um fton, a energia da molcula aumenta.
Os tomos, as molculas e os ons possuem um nmero limitado de nveis energticos
quantizados. Para que a absoro possa ocorrer, o fton excitador deve possuir uma energia
apropriada (E = h.f). Essa excitao pode ser produzida por varias formas, tais como:
a) Bombardeamento com eltrons
b) Exposio a uma corrente eltrica
c) Exposio ao calor de uma chama
d) Irradiao com um feixe de radiao eletromagntica ou fonte de luz
e) Reao qumica exotrmica.
As partculas excitadas tm uma durao relativamente curta. Aps aproximadamente 10
-8

segundos, elas retornam ao estado fundamental, e a energia devolvida ou em forma de calor
(mais freqente), ou a espcie excitada sofre uma transformao qumica (reao
fotoqumica) ficando a energia retida no sistema, ou em outros casos, a radiao reemitida
como fluorescncia ou fosforescncia.
Ento, quanto uma molcula emite um fton, a energia da molcula diminui.
Exemplificando:



As radiaes visvel e ultravioleta tem energia suficiente para provocar transies somente
dos letrons da camada mais externa, ou dos eltrons de ligao. Por outro lado, as
freqncias dos raios X so mais energticas e so capazes de interagir com eltrons mais
prximos dos tomos.
3.1.2.1- Fluorescncia e fosforescncia:
So importantes processos analticos de emisso, nos quais os tomos ou molculas so
excitados por um feixe de radiao eletromagntica; ento, a emisso radiante ocorre quando
as espcies excitadas retomam ao estado fundamental. A fluorescncia ocorre mais
rapidamente que a fosforescncia e geralmente se completa aps 10
-5
segundos a partir do
instante da excitao. A emisso fosforescente acontece em perodos superiores a 10
-5

segundos, e pode permanecer ativa por minutos e at horas.
3.1.3- Emisso de radiao eletromagntica:
Quando o eltron perde a excitao ou a energia absorvida, isto , passa de um estado
energtico mais elevado para outro menos elevado, ele emite energia na forma de radiao
eletromagntica.
Quanto maior o salto energtico que o eltron realiza ao deslocar-se de uma rbita mais
externa para outra mais interna, maior a freqncia do fton emitido (e menor seu
comprimento de onda) e maior a energia emitida.
A radiao emitida pelos tomos excitados ao retornarem ao estado fundamental, pode ser
exibida em ESPECTROS DE EMISSO, como se fossem fotografias das transies
eletrnicas dos tomos ou molculas das espcies qumicas.
Temos dois tipos de espectros de emisso:
a) ESPECTROS DE LINHAS OU ATMICO:
composto por uma srie de linhas estreitas paralelas correspondentes a cada comprimento
de onda emitido, geradas pela excitao de tomos individuais do elemento qumico, na fase
gasosa. So emisses de REM na regio do visvel e UV e tanto mais cheio de linhas quanto
maior for o nmero de transies eletrnicas que o tomo pode realizar. Por isso,
caracterstico (especfico) para cada elemento, e serve para identific-lo.
b) ESPECTRO CONTNUO OU MOLECULAR:
composto por uma faixa de comprimentos de onda emitidos, formado por uma banda sem
diferenciao entre uma faixa e outra. So emisses de REM provocadas por um slido
incandescente (filamento de uma lmpada, por exemplo), nas regies do UV, visvel e IF.
3.1.4 Aplicabilidade analtica da absoro/emisso da radiao
a) Mtodos de Absoro - baseados na medida dos comprimentos de onda ou das
intensidades da REM absorvidas pela amostra: na anlise quantitativa, o n0 de ftons
absorvidos funo da concentrao ou n0 de tomos, ons ou molculas das espcies
absorventes; na anlise qualitativa, os comprimentos de onda absorvidos so caractersticos
dos tomos, ons ou molculas que os absorvem.




b) Mtodos de Emisso - baseados na emisso da energia radiante emitida por tomos, ons
ou molculas excitados. Na anlise qualitativa, se baseia na medio dos comprimentos de
onda de radiao e na anlise quantitativa, se mede a intensidade da radiao emitida.

Os mtodos espectromtricos abrangem um grupo de mtodos analticos baseados na
espectroscopia atmica e molecular. Espectroscopia um termo geral para a cincia que
estuda a interao de diferentes tipos de radiao com a matria.

Os mtodos espectromtricos ou fotomtricos mais amplamente utilizados fazem uso da
radiao eletromagntica, que um tipo de energia que toma diferentes formas, sendo a luz
visvel e o calor radiante as mais facilmente reconhecveis. As interaes mais sofisticadas
incluem os raios gama e raios X, bem como a radiao ultravioleta, microondas e
radiofreqncia.

Os diferentes mtodos espectromtricos empregados pelos qumicos para identificao e
determinao dos elementos presentes nas varias formas de matria incluem:




4. COLORIMETRIA E ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO NO
ULTRAVIOLETA E VISVEL:

4.1. INTRODUO:

Desde que a cor foi reconhecida como uma caracterstica de certos materiais, ela tem sido
utilizada como um meio de identificao. Porm, as anlises qualitativas baseadas na
colorao so limitadas tanto em preciso como em alcance, j que se baseia no olho humano
como detector da energia radiante.

A construo de outros detectores de radiao junto com o avano da instrumentao tem
produzido uma grande extenso das tcnicas neste campo, que cobrem todo o espectro
eletromagntico desde a regio do infravermelho at o ultravioleta.

As tcnicas fotomtricas esto baseadas na capacidade que as substncias tm de interagir
com freqncias de radiao caractersticas. Como cada espcie isolada de on, tomo ou
molcula exibir um conjunto de nveis de energia definidos, absorver somente as
freqncias eletromagnticas que correspondem excitao de um nvel ao outro.

Trataremos dos mtodos analticos baseados na absoro da REM. A luz tem radiaes para
as quais a vista humana sensvel, e as ondas de comprimentos de onda diversos provocam
cores diferentes.

A percepo visual das cores provocada pela absoro seletiva, por um objeto corado, de
certos comprimentos de onda da luz incidente. Os outros comprimentos de onda so refletidos
ou transmitidos, e so percebidos como a cor do objeto. Se um corpo slido opaco tem
aparncia de branco, todos os comprimentos de onda so refletidos; se o corpo parece negro, a
reflexo da luz de qualquer comprimento de onda mnima; se um corpo parece azul, so
refletidos os comprimentos de onda que correspondem cor azul, e assim sucessivamente.

A variao da cor de um sistema com a modificao da concentrao de um certo componente
a base da ANLISE COLORIMTRICA. A cor provocada pela formao de um
composto corado, resultante da adio de um reagente apropriado, ou pode ser intrnseca do
constituinte analisado.

A COLORIMETRIA visa a determinao da concentrao de uma substncia pela medida da
absoro relativa da luz, tomando como referncia a absoro da substncia numa
concentrao conhecida.

Na COLORIMETRIA VISUAL usa-se como fonte a luz branca natural ou artificial. As
determinaes so feitas num instrumento chamado COLORMETRO OU COMPARADOR
DE CORES.

Quando a vista substituda por uma clula fotoeltrica (dispositivo detector de radiao) a
tcnica chamada de COLORIMETRIA FOTOELTRICA e o instrumento o
FOTOCOLORMETRO. Neste instrumento, usa-se a luz que est numa banda estreita de
comprimentos de onda, que se consegue pela passagem da luz atravs de filtros (dispositivo
selecionador de comprimento de onda), que so materiais coloridos na forma de placas de
vidro, gelatina, etc., que s transmitem a luz numa regio espectral limitada.

Na ESPECTROFOTOMETRIA a fonte de radiao emite da regio visvel at a regio UV
(160 a 780 nm) do EEM, o que necessita de um instrumento mais complicado, e por isso,
mais caro o ESPECTROFOTMETRO.

A principal vantagem dos mtodos colorimtricos e espectrofotomtricos a de
proporcionarem um meio simples de determinar quantidades diminutas de substncias.

4.2. ORIGEM DO ESPECTRO DE ABSORO UV-VIS:

Quando a luz branca passa por uma amostra, a luz pode ser totalmente refletida, caso a
substancia seja branca ou a luz pode ser totalmente absorvida, neste caso a substancia tem a
cor negra.

Contudo, apenas uma poro da luz absorvida e uma parte refletida, a cor da amostra e
determinada pela cor refletida. Assim:

Quando a luz incide em uma amostra, ela pode:
_ ser totalmente refletida
_ ser totalmente absorvida
_ somente uma parte ser absorvida e restante refletida

As cores so complementares.
_ Se o Violeta absorvido, a amostra amarelo-esverdeado.
_ Se o Amarelo absorvido, a amostra azul.

H uma relao entre as cores da substancia e a estrutura eletrnica. Uma molcula ou on
exibir uma absorbncia nas regies do ultravioleta, quando a radiao for originria de uma
transio eletrnica no interior do tomo ou molcula. A energia fornecida por uma fonte de
luz promover os eltrons do estado fundamental para o estado excitado.



4.2.1- Cromforos:

Um grupo cromforo um grupo funcional, no conjugado com outro grupo, o qual exibe um
espectro de absoro caracterstico na regio Ultra-Violeta ou Visvel.

Um cromforo um grupo no qual, quando introduzido a um hidrocarboneto saturado, produz
um composto o qual possuem uma banda de absoro entre 180 e 1000 nm. Por exemplo, n-
octano um hidrocarboneto saturado o qual transparente nesta regio. Entretanto, se um
grupo nitrila introduzido no radical octil o composto octilnitrila produzido. O grupo nitrila
classificado como um cromforo e apresentara um espectro diferente do n-octano.

A tabela abaixo ilustra um pequeno grupo de simples cromforos com seus comprimentos de
onda mximo e absortividade molar. A absortividade molar a medida da intensidade da
banda de absoro. Como se pode observar, a intensidade de absoro de diversos cromforos
varia acentuadamente de um grupo para outro.

4.3. TEORIA DA COLORIMETRIA E ESPECTROFOTOMETRIA:

Quando a luz (monocromtica ou heterognea) passa atravs de um meio, por exemplo, um
gs ou lquido, ocorre uma certa perda de intensidade, em decorrncia de que uma parcela da
luz incidente refletida, outra parcela absorvida no meio e o restante transmitido.

Absorciometria


No estudo das interaes das radiaes com a matria necessrio estudar o modelo:



Nesse modelo, observa-se uma quantidade de energia luminosa (Po) entrando no volume de
estudo e a intensidade final (P) saindo desse volume



Transmitncia

A relao entre Po (intensidade inicial da radiao) e P (intensidade final da radiao que
deixa o meio material) chamada transmitncia (T).



Normalmente a Transmitncia expressa em porcentagem:


Entretanto a transmitncia no suficiente para converter as intensidades luminosas em
concentrao, pois a correlao entre T e concentrao no linear.

Da o emprego de outro conceito chamado de Absorbncia.

Absorbncia

a relao que expressa a relao entre a intensidade da radiao e a concentrao do
composto absorvedor. A relao entre a absorbncia (A) e a transmitncia (T) dada pelas
Equaes abaixo:





Ao se considerar a transmitncia, ou a absorbncia, e a fim de continuar nosso estudo
devemos estudar como essas propriedades variam.

4.3.1- A lei de Beer-Lambert:

Lambert estudou a transmisso de luz por slidos homogneos. Beer estendeu o trabalho de
Lambert ao estudo de solues. Pode-se apresentar as concluses dos dois pesquisadores na
forma de uma lei conhecida como a Lei de Lambert-Beer.
Atravs dessa lei, intensidades da radiao incidente e emergente podem ser relacionadas com
as concentraes do material presente na soluo. Vamos discorrer brevemente sobre essa lei,
com os seguintes esclarecimentos:
1. So considerados desprezveis os efeitos de reflexo, refrao e espalhamento.

2. A radiao incidente deve ser monocromtica, isto , conter somente um comprimento de
onda. I
0
e I so, respectivamente, as intensidades da radiao incidente e transmitida pela
amostra. Muitas vezes, a intensidade transmitida decai exponencialmente com o aumento do
caminho percorrido na soluo (comprimento l), e tambm com o aumento da concentrao c.
Suponha-se que uma radiao monocromtica de potncia I
0
incide sobre as faces planas e
paralelas de uma cubeta de espessura b, a qual contm uma soluo de uma espcie qumica
que absorve energia radiante. Designando por I, a potncia da radiao que emerge da cubeta,
sabe-se que I < I
0
, devido absoro da radiao pela espcie qumica contida na soluo que
preenche a cubeta.
fcil perceber que a diminuio da potncia da radiao incidente dependente do nmero
de partculas absorventes encontradas pelo feixe ao atravessar a cubeta. Isso o mesmo que
dizer que a atenuao da potncia da radiao depende da concentrao da soluo (c) e do
percurso da radiao (b) no interior da cubeta.















2. A absoro da luz tanto maior quanto maior for distncia percorrida pelo feixe luminoso
atravs das amostras:













soluo 10 g/l
I
o
I
T1
soluo 20 g/l

I
T2

I
o
feixe de luz de
intensidade I
o
1 cm
I
o
I
T1
I
o
I
T3
3 cm
feixe de luz de
intensidade I
o
Juntando (1) e (2), temos a lei de Beer-Lambert:










sendo c a concentrao do material em estudo, l o comprimento interno do recipiente que
contem a soluo, e

(epsilon) absortividade ou coeficiente de absoro, um fator

caracterstico da substancia absorvedor (e o solvente), que depende do comprimento de onda
da radiao.
A absortividade molar () prefervel quando se deseja comparar quantitativamente a
absoro de vrias substncias. Para uma mesma espessura do absorvedor (caminho ptico),
quanto maior o valor de maior a sensibilidade do mtodo. uma medida da quantidade de
luz absorvida por unidade de concentrao".
A absorbividade molar uma constante para uma substncia especfica, de modo que se a
concentrao da soluo reduzida para a metade, tambm a absorbncia cair pela metade,
que o que ns esperaramos.









Normalmente usam-se cubetas com 1 cm de comprimento, de modo que a equao fica:

absorvncia

( fixo)
=
Absortividade
( fixo)


A

c.l

concentrao
da soluo
absorvente



absorvente
distncia percorrida
pelo feixe luminoso
atravs da amostra

A

=log
10
I
o
I
T
I
o
luz incidente
I
T
luz transmitida

absortividade molar ou coeficiente de absoro.

c concentrao da substncia (em moles/l)
l distncia percorrida pela luz atravs da substncia

Nesta equao,
Ou seja, a absorbncia da luz a cada comprimento de onda diretamente proporcional
concentrao da soluo contida na cubeta. Esta linearidade deixa de ocorrer a concentraes
muito elevadas da substncia, podendo nesses casos diluir previamente a amostra a medir.
Sabe-se que sais coloridos, diludos em diferentes propores apresentam diferentes nuances
de cor. Por exemplo, o cromato de potssio deve se apresentar semelhante figura a seguir:


Ou seja, aumentando-se a concentrao diminui-se a intensidade de luz que atravessa o meio
contendo nossa substncia de estudo.

De uma maneira geral, para uma soluo de dada substncia, em um certo solvente, analisada
a um certo comprimento de onda da radiao, pode-se traar uma curva da absorbncia A em
funo da concentrao c; a partir dessa curva ser possvel determinar a concentrao de
qualquer amostra dessa soluo.

4.4. CURVA DE CALIBRAO:

Uma curva de calibrao mostra a resposta de um mtodo analtico para quantidades
conhecidas de constituinte.
Solues contendo concentraes conhecidas de uma substncia so chamadas
solues-padro.
Solues contendo todos os reagentes e solventes usados na anlise, mas sem a adio
da substncia de interesse, so chamadas solues branco. O branco mede a resposta
do procedimento analtico para impurezas ou espcies interferentes nos reagentes.

A relao entre Absorbncia de uma soluo e a sua concentrao proporcional , de maneira
que possvel utilizar tais valores para construir curvas de calibrao ou analticas.

Os instrumentos atuais esto calibrados para fazer leituras seja em % de Transmitncia, em
Absorbncia ou em ambas. A figura abaixo ilustra graficamente as relaes existentes entre
transmitncia, absorbncia e concentrao, em um determinado comprimento de onda.

Os valores de absorbncia plotados em papel milimetrado, quando a Lei de Beer obedecida,
formam uma reta perfeita, o que no ocorre nas curvas feitas com %T.

Uma relao linear (reta) em qualquer um dos grficos indica que a substncia em soluo
obedece a Lei de Beer, nas condies da anlise, e pode servir de curva de calibrao para a
determinao da concentrao de solues de mesma natureza. Quando h uma resposta
linear o sinal analtico corrigido (= sinal da amostra sinal do branco) proporcional
quantidade de constituinte.

Atualmente, a maioria dos equipamentos dispe de programas (softwares) que expressa os
resultados da anlise e constri sua curva de calibrao, armazenando-as para quando forem
necessrias em outras determinaes.

4.4.1- Procedimento para construo da curva de calibrao no espectrofotmetro:

1. Prepara-se uma srie de solues padro contendo a espcie em estudo, a diferentes
concentraes perfeitamente conhecidas, cobrindo uma faixa conveniente de concentrao;
2. A resposta do fotocolormetro ajustada em 100% de T ao inserir-se a soluo de
referncia (branco); se o fotocolormetro apresenta A no lugar de %T, a leitura do branco
estaria fixada em 0 (zero).
3. Determina-se a absorbncia (ou %T) de cada uma dessas solues padro e constri-se o
grfico de A (absorbncia) em funo de C (concentraes das solues padro), em papel
milimetrado.
4. Pode ser usado o aplicativo Excel para tabular as leituras e concentraes das solues
padro. O ajuste da reta feito pelo mtodo dos mnimos quadrados, e uma equao da reta
apresentada, facilitando o clculo da concentrao da amostra pela equao (ver capitulo 2).

O conjunto de solues de nmeros 1 a 5 constitui o que se denomina curva de calibrao ou
curva padro, e o nosso referencial indispensvel para determinar a concentrao de
qualquer soluo, desde que se conhea sua absorbncia. Ela pode ser representada em um
grfico de coordenadas cartesianas como uma reta, o que j era indicado pela Lei de Beer, que
permite calcular concentraes graficamente, conforme indicado na Figura.


y = 10.723x - 0.0005
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0 0.01 0.02 0.03 0.04
[Cu
+2
] mol L
-1
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a
4.4.2- Desvios da lei de Beer-Lambert:

Esses desvios podem ser classificados como positivos ou negativos, e ocorrem quando
algumas das seguintes condies ideais para as determinaes no so respeitadas:
- comprimento de onda determinado para a espcie absorvente em questo
- meio homogneo (sem turbidez)
- ausncia de reaes indesejveis entre molculas do soluto e solvente

Alguns destes desvios podem ocorrer como conseqncia da maneira como as medidas de
absorbncia foram feitas ou como resultado de mudanas qumicas associadas com variaes
de concentrao. A lei de Beer bem sucedida ao descrever o comportamento da absoro de
solues com concentraes relativamente baixas (usualmente < 0,01 M).

Os desvios podem ser divididos em dois grupos: desvios qumicos e desvios devido ao
instrumento :

Desvios qumicos:
- interao qumica do soluto com reagentes de anlise ou impurezas
- alta concentrao da soluo (maior que 0,01 mol/L)
- variaes no pH
- pureza e estabilidade dos reagentes
- tempo de leitura (estabilidade qumica) temperatura na qual desenvolve-se a cor

Desvios devido ao instrumento:
- desgaste nos fotodetectores
- troca de lmpada por outra no correspondente
- p sobre a ampola da lmpada
- uso de filtros de outros aparelhos. Cada vez que se troca um filtro, o instrumento dever ser
recalibrado.
- Uso de tubos de vidro comum ao invs de cubetas especialmente fabricadas para o aparelho
- Perda de calibrao do comprimento de onda
- Flutuaes na fonte de radiao.


4.5. A CURVA DE ABSORO:

Para se encontrar a mxima absoro de uma substncia devemos saber qual o comprimento
de onda de luz adequado para que ela absorva mais intensamente.

Quando esse comprimento de onda que dever estar calibrado o aparelho para aquela anlise
no for disponvel, deve-se construir uma Curva de Absoro para aquela substncia que se
quer determinar a sua concentrao , da seguinte forma:

1. Prepara-se uma soluo padro da substncia a analisar.
2. Determina-se a absorbncia dessa soluo padro em vrios comprimentos de onda,
dentro de uma escala por ex. de 400 a 700 nm, onde a cada 50 nm determina-se uma
absorbncia.
3. Plota-se os valores obtidos de absorbncia nas ordenadas e de comprimento de onda
na abscissa. No valor de mxima absoro (pico) seus comprimentos de onda
correspondente ser o timo para realizar a anlise daquela substncia.

Espectro de absoro grfico que mostra a variao de A com comprimento de onda.

4.6. DETERMINAO NUMRICA DA CONCENTRAO DE UMA SOLUO:

Requisitos:

a espcie a ser analisada deve absorver luz em conhecido de absoro deve ser
diferenciado de outras substncias presentes na amostra.
Preparo de um branco: soluo que contm todos os reagentes presentes na soluo da
espcie a ser analisada (amostra), menos a espcie a ser analisada. Subtrai-se Absorbncia do
branco da Absorbncia da amostra antes de realizar os clculos.

a) Por comparao com uma soluo padro FRMULA MATEMTICA:
necessrio ler a absorbncia (Ap) de uma soluo padro de concentrao conhecida (Cp) e
a absorbncia da soluo amostra (Aa).

Considerando que a absorbncia proporcional concentrao do soluto, essa relao
permite o clculo da concentrao da soluo amostra (Ca) pelo FATOR DE CALIBRAO
(Fc) : Fc = Cp/Ap
Mas: Ca = Aa x Fc
Substituindo Fc deriva a equao: Ca = Aa x Cp Ap

b) Utilizando a curva de calibrao (manual ou automtica) PELA CURVA:

1. Preparam-se as solues padro da substncia problema numa faixa de concentrao
prxima do valor esperado, considerado normal. Por ex., no caso de uma curva para
determinao de fsforo, em que o valor estimado da substncia encontra-se em torno
de 4 ppm, as solues padro devem abranger valores compreendidos pelo menos
entre 2 e 6 ppm.
2. Com os valores obtidos no espectrofotmetro, constri-se a curva de calibrao
plotando-se as leituras de absorbncia na ordenada (eixo y) e as concentraes na
abscissa (eixo x). Se a leitura for em %T, calcula-se a absorbncia para que a curva
seja linear.
3. Faz-se a leitura da soluo problema (amostra) e localiza o valor da absorbncia da
amostra no eixo y da curva, interceptando-a para encontrar a concentrao
correspondente no eixo x.
4. A curva deve ser traada em papel milimetrado.
5. A curva pode ser traada em planilhas eletrnicas (Excel) que traam grficos a partir
de resultados experimentais em tabelas, e calculam a concentrao a partir das curvas
de calibrao, fazendo o ajuste da reta pelo mtodo dos mnimos quadrados, o qual d
uma equao do tipo y = ax + b, usada para calcular a concentrao da amostra.

Observaes para o preparo da curva de calibrao:

- As condies de trabalho para a construo da curva com solues padro devem ser
mantidas em relao soluo problema (seleo do mesmo comprimento de onda, cubeta,
lmpada, pH, reagentes, temperatura).
- Se a curva for construda com diluio de 1:10, por exemplo, a soluo problema dever ser
diluda de 1:10.
- A curva dever compreender faixas teis, ou seja, valores situados abaixo do normal, dentro
do normal e acima do normal do elemento ou substncia pesquisada.
- A curva dever ser traada numa faixa de concentrao da substncia que siga a Lei de Beer,
utilizando o comprimento de onda de mxima absoro.


4.7. INSTRUMENTAO:

Espectrofotmetros em geral so instrumentos compostos por um conjunto de componentes
do seguinte tipo:

- uma fonte de radiao eletromagntica
- um conjunto de componentes pticos que levam esta radiao at a amostra
-um compartimento de amostra e um ou mais detectores que medem a intensidade de
radiao.

Dependendo da finalidade e do fabricante os arranjos pticos destes instrumentos podem ser
bastante diferentes. Este texto se refere apenas aos espectrofotmetros de absoro, operando
na regio, espectral do ultravioleta (UV) ( = 200/380nm - 400 nm), visvel (Vis) ( =
380/400 nm 700/800 nm)

Os componentes de um sistema fotomtrico de absoro de luz so:





4.7.1- Fonte de radiao:

Ser denominada radiao eletromagntica o feixe proveniente de uma fonte emissora
(lmpada). Nos espectrofotmetros de absoro estas fontes so lmpadas que emitem feixes
na regio do espectro denominada ptica. Por isto do lugar chamada espectroscopia ptica.

Se a fonte emitir na regio do visvel, a radiao conhecida como luz. A fonte de radiao
(comumente chamada de lmpada) ideal para um espectrofotmetro aquela que apresenta
uma intensidade aproximadamente constante em toda faixa de comprimento de onda de
operao, com pouco rudo e longo perodo de estabilidade.

Funo da fonte de radiao:

Proporcionar uma radiao contnua de energia constante sobre a regio de comprimento de
onda desejado.

As fontes de radiao so constitudas por substncias que podem ser excitadas a um estado
de energia mais elevado mediante uma descarga eltrica de alta voltagem ou por aquecimento
eltrico, e quando retornam aos estados de energia menores ou a seu estado fundamental,
emitem luz.

Tipos:

a) Fontes de radiao ultravioleta lmpadas de hidrognio e de deutrio. Baseiam-se na
incandescncia, onde qualquer substncia a uma temperatura acima de zero emite radiao.
So constitudas por um par de eletrodos colocados dentro de um tubo de vidro com uma
janela de quartzo, cheio de hidrognio ou deutrio presses relativamente altas; quando se
aplica uma alta voltagem constante aos eletrodos, se provoca uma descarga eltrica que excita
os eltrons dos gases a estados de maior energia; quando os eltrons retornam ao seu estado
fundamental, emitem radiao m que contnua na regio entre 180 e 350 nm
aproximadamente. A lmpada de xennio tambm usada como fonte de radiao UV,
proporcionando uma radiao de maior intensidade, porm no constante com a lmpada de
hidrognio. A lmpada de hidrognio vantajosa quanto ao uso e baixo custo, porm seu
espectro se estende a comprimentos de onda maio

b) Fontes de radiao visvel - lmpada de tungstnio, constituda por um filamento de
tungstnio que se aquece mediante uma corrente contnua e emite radiao contnua na regio
entre 350 e 2.500 nm.

Normalmente a regio espectral em que se pode medir os espectros a regio chamada UV-
Vis ( = 200 nm a 800 nm). Normalmente a troca de uma lmpada por outra ocorre durante a
varredura do espectro de modo completamente automtico, de modo que o operador muitas
vezes no toma conhecimento do fato.

O desempenho fotomtrico de um espectrofotmetro grandemente relacionado ao desenho
do sistema tico. O sistema tico do instrumento deve:

a) Acoplar eficientemente a luz proveniente da lmpada.
b) As fendas de entrada e sada devem permitir que os feixes de luz possam passar sem
ocorrer em perda de luz.
c) Focalizar os feixes na amostra.
d) Coletar a luz da amostra e direcion-la ao detector, sem causar instabilidade.


4.7.2- Seletor de comprimento de onda:

Os aparelhos que podem ser usados para selecionar regies particulares de comprimento de
onda na regio visvel e ultravioleta do espectro eletromagntico incluem o uso de:

a) Filtros pticos - so usados nos colormetros fotoeltricos, e permitem somente a
transmisso de regies de comprimento de onda limitado, absorvendo a maior parte da
radiao de outros comprimentos de onda. A cor da luz absorvida pelo filtro o complemento
da cor da prpria soluo: um lquido parece vermelho, por exemplo, porque transmite a
poro vermelha do espectro eletromagntico, mas absorve a verde. a intensidade da
radiao verde que varia com a concentrao: um filtro verde, portanto, deveria ser usado.
Assim, em geral, o filtro mais apropriado para uma anlise fotomtrica ser a cor
complementar da soluo que est sendo analisada. Consistem em pelculas delgadas de
gelatina com diferentes corantes, ou em lminas de vidro colorido, onde os fabricantes
informam as vrias faixas de transmisso para os vrios filtros. Nos dias de hoje, so
raramente usados; no entanto, tm a vantagem de serem mais baratos e muito satisfatrios
para medidas que no exigem muita preciso.

b) Monocromadores: permite isolar uma banda de comprimentos de onda mais estreita que a
obtida por um filtro, empregados para se Ter uma resoluo maior do espectro, no s no
visvel, mas tambm na regio UV. Um monocromador desdobra a radiao policromtica
nos comprimentos de onda que a formam, e separa estes comprimentos de onda em bandas.
constitudo por:

- uma fenda de entrada por onde penetra a radiao policromtica da fonte de luz (lmpada);
- um espelho ou lente, para colimar (estreitar) o feixe admitido;
- um elemento dispersor da radiao, como um prisma ou uma rede de difrao, que desdobra
a radiao nos comprimentos de onda componentes (separa a luz nos seus vrios
comprimentos de onda);
- uma lente ou espelho para focar (direcionar) a radiao dispersa;
- uma fenda de sada, que seleciona o comprimento de onda da radiao que ir incidir sobre a
amostra.

Tipos de elemento de disperso do monocromador:

Prismas: os prismas so elementos dispersantes convenientes entre o UV prximo e as
regies do infravermelho mdio. A disperso depende do ndice de refrao do material do
prisma variar com o comprimento de onda. Os prismas de vidro podem ser empregados na
regio visvel, entre 400 e 1000 nm, uma vez que o vidro absorve no ultravioleta. Abaixo de
400 nm (UV) so usados prismas de quartzo ou slica, fundidos.

Redes de Difrao: observou-se que um feixe de radiao monocromtica, ao passar por uma
placa transparente que possui um grande nmero de linhas paralelas bem finas riscadas sobre
ela, origina vrios feixes. As redes consistem numa placa fina de vidro ou plstico, com
vrias riscas, que difrata a luz, dispersando os diferentes comprimentos de onda.

Nos espectrofotmetros para o UV e visvel, as redes tem entre 10.000 e 30.000 linhas/cm,
que proporcionam uma disperso mais elevada que a obtida pelos prismas; uma nica rede
pode cobrir a regio do espectro entre 200 e 900 nm.

A forma com que a radiao eletromagntica sofre difrao atravs de uma grade est baseada
na lei de difrao de Bragg. A finalidade deste componente a de difratar a luz de modo que
diferentes comprimentos de onda iro incidir sobre a amostra permitindo que se determine sua
absorbncia em cada um destes comprimentos. Este conjunto de dados resulta no que se
chama espectro de absoro.

Uma grade de difrao um componente ptico que contm uma srie de ranhuras, que so
justamente os elementos responsveis pela difrao. Dependendo do nmero de ranhuras por
milmetro, haver uma maior ou menor resoluo dos espectros. Instrumentos com melhor
resoluo espectral tero grades de difrao com maior nmero de ranhuras por milmetro, e,
conseqentemente, este um (mas no o nico) parmetro a ser avaliado na seleo de um
instrumento.

Em pocas passadas as ranhuras eram feitas mecanicamente, porm atualmente estas so
feitas atravs de processos denominados hologrficos. Neste caso feito um depsito de uma
camada muito fina de um material sobre um substrato de vidro ou de quartzo, que ,
posteriormente, corrodo em certas regies definidas por uma figura de interferncia gerando
sobre este material um conjunto de vales e topos denominados ranhuras.

A qualidade de uma grade de difrao controlada pelo nmero de ranhuras por unidade de
rea e pela preciso com que estas foram feitas.

4.7.3- Recipientes para a amostra:

Chama-se cubeta, feita de material transparente radiao na regio espectral de trabalho.
Tm a forma retangular, com uma largura ptica de 1 cm. Para o uso de solues aquosas
existem clulas baratas de poliestireno. As clulas padro so feitas em vidro, para operar nos
comprimentos de onda de 340 a 1.000 nm (visvel), mas para operar em comprimentos de
onda mais baixos (at 185 nm, UV), as clulas devem ser feitas de slica ou de quartzo.

As espessuras das clulas variam de 1 a 10 cm. As clulas de absoro devem manter-se
rigorosamente limpas, pois tanto as impresses digitais como restos de amostras anteriores
podem ser, causas de erros considerveis nas determinaes quantitativas.

Acessrios de multi-cubetas

O acessrio de multi-cubeta ambiente ou termostatizvel consiste de dois conjuntos de seis
cubetas que se movem atravs do transportador de amostra posicionado no interior do
compartimento de amostras. O multi-cubetas possui as seguintes possibilidades:

- Utilizar campos de rotao magntica para promover agitao das cubetas.
- Utilizar aquecimento.
- Utilizar um canal de gua para controle de temperatura.

Quando conectado ao acessrio controlador de temperatura, a bomba de aquecimento pode
ser usada para transferir calor das cubetas para a gua circulante, ou transferir aquecimento da
gua para a cubeta. Usando este sistema possvel ajustar a temperatura de 10 a 100 graus
Celsius.

4.7.4- Detectores de radiao:

O outro conjunto importante de elementos que compe um espectrofotmetro o tipo de
detector que emprega. Assumindo-se que se est tratando de sistemas que empregam como
elemento de difrao da radiao uma grade, o tipo de detector ir definir todo o conjunto de
elementos pticos adicionais.

Duas grandes classes de espectrofotmetros esto disponveis: os que utilizam como sistema
de deteco um tubo fotomultiplicador e os que utilizam arranjo de diodos. J um colormetro
fotoeltrico utiliza-se da clula fotoeltrica para detectar a radiao transmitida.

a) Clula fotoeltrica: usadas na regio do visvel e ultravioleta. Constituda por um bulbo de
vidro que tem parte da sua superfcie interna revestida por uma camada delgada, sensvel, de
um material com xido de csio ou de potssio, com xido de prata (material que emite
eltrons quando iluminado); uma parte da superfcie do bulbo transparente luz. A camada
sensvel o ctodo e no centro do tubo. Quando a luz entra no bulbo e atinge a camada
sensvel (ctodo), h emisso de eltrons que provocam a circulao de uma corrente no
circuito externo, e uma medida da quantidade de luz. Usada nos fotocolormetros.

b) Tubo fotomultiplicador: formado por um tubo de vidro ou de quartzo sob vcuo, no qual
existe um conjunto de placas metlicas interligadas. Quando a radiao incide sobre estas
placas metlicas elas induzem uma corrente eltrica, de acordo com o que descrito pelo
efeito fotoeltrico proposto por Einstein. Em funo do fato destas placas estarem interligadas
e de uma diferena de potencial eltrico estar sendo aplicada entre elas, esta fotocorrente
amplificada por um circuito eletrnico adequado, de modo que um sinal muito baixo de
corrente eltrica pode ser detectado e registrado. Pode ser considerado um tipo de clula
fotoeltrica amplificada (da ordem de 106 vezes), usada nos espectrofotmetros. mais
sensvel, mede intensidades 200 vezes mais fracas do que as medidas por uma clula
fotoeltrica. Um instrumento que se utiliza deste detector deve fazer com que comprimentos
de onda individuais o atinja, de modo que para cada um deles seja detectado um sinal de
corrente, que ser transformado, segundo uma certa escala, em um sinal de absorbncia. Deve
ter ainda algum tipo de sistema que permita eliminar o sinal de fundo, comumente chamado
de background.

c) Arranjo de diodos (ou detectores do tipo fotodiodo): de modo simplificado, um arranjo de
diodos consiste em uma srie de detectores fotodiodo posicionado lado a lado em um cristal
de silcio, de modo que cada comprimento de onda difratado pela grade atinge um ponto deste
arranjo, e conseqentemente um detector. Cada diodo tem um capacitor dedicado e est
conectado por um interruptor tipo transistor para uma linha de sada comum a todos. Deste
modo, a radiao que atravessa a amostra integral e instantaneamente analisada
determinando-se, portanto, a absorbncia em todos os comprimentos de onda determinada
de modo simultneo. Este tipo de instrumento bastante simplificado na sua ptica, se
comparado aos instrumentos com fotomultiplicadoras como detectores, e os espectros so
obtidos mais rapidamente, mas um instrumento com menor sensibilidade.

Assim:

Qualquer tipo de detector absorve a energia dos ftons que chocam contra ele e a
converte em uma quantidade mensurvel, como a impresso em chapa fotogrfica,
uma corrente eltrica ou variaes trmicas.
Qualquer tipo de detector deve gerar um sinal que est quantitativamente relacionado
com a radiao recebida.

Todo detector deve obedecer aos seguintes critrios:

- alta sensibilidade;
- curto tempo de resposta;
- estabilidade a longo prazo para assegurar a exatido das respostas quantitativas;
- sinal eletrnico facilmente amplificvel por qualquer instrumento de leitura;

4.7.5- Tipos de instrumentos:

a) Feixe simples:


b) Feixe duplo:




4.8. ESQUEMA DE FUNCIONAMENTO DOS ESPECTROFOTOMETROS E
COLORMETROS:

4.8.1- Colormetros visuais (comparador colorimtrico):

So instrumentos em que se utiliza o olho humano como detector e o crebro como
amplificador e como dispositivo de apresentao. A dificuldade est relacionada deteco
visual, pois esta est limitada a poucas aplicaes, por apresentar algumas desvantagens:
regio espectral limitada, pouca exatido para distinguir as intensidades das cores, alto grau
de fatiga e lentido de resposta.

Dentre os tipos de fotmetros visuais temos: comparador Helige, que utiliza vrios
conjuntos de modelos de filtros de vidro, de absorbncias variveis. Para determinar a
concentrao de uma substncia desconhecida, insere-se o disco apropriado e seus filtros, e
compara-se visualmente com a amostra; ambas devem estar iluminadas pela mesma fonte. Os
filtros so calibrados em termos de concentrao para um comprimento da trajetria da cela
de amostra que o instrumento contm. Quando a cor da soluo amostra igual cor do filtro
empregado, se conhece imediatamente a concentrao aproximada. Usam-se padres de
vidros coloridos para determinaes de: amnia, oxignio dissolvido, cobre, nitratro, cloro
residual em gua.

4.8.2- Colormetro fotoeltrico:

So instrumentos em que a faixa espectral a ser usada na medida da transmitncia
selecionada com auxlio de filtros. O uso de fotocolormetros se restringe regio visvel do
espectro eletromagntico. As faixas isoladas pelo filtro so relativamente largas e de baixa
pureza espectral. Em geral, os fotocolormetros dispem de numerosos filtros, cada um dos
quais transmite uma diferente poro do espectro; a escolha do filtro depende da natureza do
sistema absorvente; d-se preferncia ao filtro com cor complementar da soluo problema.

Mecanismos de funcionamento:

A luz proveniente de uma fonte (ex. lmpada de tungstnio) delimitada, no percurso
tico, por uma abertura varivel (fenda); o filtro seleciona a faixa espectral desejada.
Aps atravessar a cubeta contendo a soluo amostra ou solvente (branco), a luz
transmitida alcana a fotoclula; a corrente gerada medida pelo galvanmetro, sobre
uma escala de 0 a 100%.
Inicialmente, o medidor ajustado mecanicamente para leitura zero. Em seguida, o
aparelho deve ser calibrado para 100% de transmitncia, com relao ao solvente puro
(branco): coloca-se o solvente na cubeta e regula-se a 100% de T. Finalmente,
coloca-se a na cubeta a soluo amostra e l-se a transmitncia. A escala do medidor
d diretamente a percentagem de transmitncia; em muitos casos, a escala do medidor
d os correspondentes valores de absorbncia.

Colormetro no visvel: lmpada de filamento de tungstnio, lente, filtro ptico, clula
fotovoltaica.

Colormetro no ultravioleta: lmpada de vapor de mercrio, filtro ptico, clula fotoeltrica.


4.8.3 - Espectrofotmetros:

Os espectrofotmetros utilizam monocromadores para isolar uma banda espectral desejada,
empregado no intervalo do visvel ao UV. O campo de trabalho deste instrumento se estende
de 220 nm a 1000 nm., e dispes de 2 fontes de radiao: uma lmpada de hidrognio ou
deutrio para a regio UV, e uma lmpada de tungstnio para o visvel e infravermelho. O
instrumento tem dois fototubos, um para ser usado acima de 600 nm e outro, abaixo de 600
nm. O monocromador constitudo por um prisma de quartzo ou uma rede de difrao.

Ao deixar o monocromador, a feixe de radiao refletido por uma srie de espelhos para
atingir o obturador eletromecnico. No caso dos espectrofotmetros convencionais, o
obturador eletromecnico formado por um disco giratrio dividido em trs partes: uma parte
espelhada (mirror), uma parte slida pintada de preto (solid matt black) e a outra vazada (cut
out). Este disco gira a uma certa velocidade, de modo que o feixe que o atravessa ser
modulado na mesma freqncia em que as aberturas do disco passarem pelo ponto de
incidncia do feixe, gerando um sinal luminoso.

Quando o feixe atinge a parte vazada atravessa e segue um caminho ptico; quando ele atinge
a parte espelhada refletido e segue um outro caminho; e finalmente, quando atinge a regio
negra, o feixe absorvido pelo disco. Portanto, a finalidade do obturador a de alternar o
caminho ptico do feixe. Como ele gira a uma velocidade maior que a velocidade de
varredura da grade, cada comprimento de onda selecionado pela grade que incide sobre o
disco ir, alternadamente, fazer um ou outro caminho ptico. Um destes caminhos far com
que o feixe atravesse a amostra; o outro caminho far com que o feixe atravesse uma soluo
padro ou branco.

Ambos os feixes sero posteriormente dirigidos, por espelhos at o detector (tubo
fotomultiplicador), de modo que este estar medindo a intensidade do feixe que,
alternadamente, passa pela amostra e pela referncia, a cada comprimento de onda.

Um circuito eletrnico compara estes dois sinais e os converte em uma escala apropriada de
absorbncia a cada comprimento de onda, corrigida eletronicamente.

Espectrofotmetro para a regio visvel: projetados para operar no intervalo de de
380 a 800 nm, simples construo, de feixe nico e rede de difrao, relativamente
baratos (< U 1.000 at U$ 3.000), resistentes e portteis. Aplicao mais comum a
anlise quantitativa. Possui fonte de filamento de tungstnio, rede de difrao simples,
clula fotoeltrica.
Espectrofotmetros para a regio UV/visvel: faixa de medio de de 190 a 210 nm
(extremo inferior) e 800 a 1.000 nm (extremo superior), equipado com lmpadas
intercambiveis de tungstnio e hidrognio ou deutrio, tubos fotomultiplicadores e
redes de difrao, leitura digital. Seu preo varia de U$ 2.000 a U$ 8.000.
Espectrofotmetros computadorizados: operam na regio de 190 a 800 nm de , com
varredura de . As amostras so lidas e as absorbncias calculadas com a ajuda de
softwares. Possui vrias opes de tratamento dos dados e apresentao, como
absorbncia, transmitncia, derivadas, espectros de absoro, clculos de
concentrao, etc.


Mecanismo de funcionamento: a luz emitida da lmpada (2) purificada nos filtros (3) e
condensada sobre a fenda de entrada (4). O feixe de luz atravessa a fenda de entrada ,
refletido pelo espelho plano,,sendo condensado pelo espelho colimador sobre a rede de
difrao (5), que obtm-se a varredura dos comprimentos de onda. O feixe de luz que passa
pela fenda de sada atravessa o compartimento de amostras (7) cubeta e atinge o detector
(8).


Diferena entre colormetro e espectrofotmetro:

O termo colormetro geralmente restrito aos instrumentos visuais e fotoeltricos mais
simples para a regio visvel. O termo espectrofotmetro usa bandas de comprimentos de
onda mais estreitos, produzidas por um monocromador. Todas as formas devem ter certas
caractersticas e componentes em comum; alguns dos instrumentos mais simples podem
omitir um ou mais itens, e a seqncia na qual a radiao passa de um item para o outro no
a mesma:


4.9 Manuseio da amostra no UV/Vis:

A amostra lida em soluo ou vapor. Existem no mercado clulas de quartzo para
a,determinao de amostras em fase vapor, no ultravioleta. Estas clulas so providas de uma
entrada e sada para o gs, e algumas pemitem circulao de um liquido que mantm
constante a temperatura no interior da clula.

Para analisar amostras em soluo, retira-se alquotas e dilui sucessivamente, conforme
procedimento recomendado pelo mtodo. de mxima importncia que as cubetas estejam
limpas, e costuma-se enxagu-las vrias vezes entre uma leitura e outra. Pode ser necessrio
limpar as clulas com detergente ou cido ntrico a quente para remoo de traos de amostras
anteriores.

Muitos solventes so usados na regio do UV-Vis: ciclohexano, etanol 95% e 1,4-dioxano,
desde que corretamente purificados. Outros solventes de pureza espectroscpica adequados
para o UV encontram-se atualmente no mercado. Estes solventes so classificados como de
grau espectroscpico e encontram-se livres da absoro devido a interferentes.


4.10 Aplicao na anlise qualitativa:

A absoro de radiao no UV por muitos compostos ocorre numa faixa muito reduzida de
comprimentos de onda, o que faz com que suas curvas se sobreponham, quase que
impossibilitando sua identificao.

Como conseqncia, a absoro no UV oferece menos possibilidades para a identificao de
grupos funcionais que outros mtodos espectroscpicos, tais como o IV (infravermelho) e o
RMN (ressonncia magntica nuclear). Mesmo assim, a espectroscopia UV muito utilizada
na identificao dos constituintes de diversas plantas e na determinao de impurezas em
amostras orgnicas.


4.11 Aplicao na anlise quantitativa:

A espectroscopia UV-Vis regida pela Lei de Beer, onde a maior parte dos equipamentos
registra diretamente a leitura em absorbncia, onde posteriormente ser construda a curva de
calibrao para a determinao da concentrao das amostras.

A espectrofotometria VIS determina quantidades de compostos inorgnicos (metais e nions
inorgnicos tais como fosfato, sulfato, cromato, etc.) em amostras liquidas (gua, soluo de
solo, alimentos, tintas, combustveis, bebidas, etc.).

Algumas aplicaes da espectrofotometria UV so as determinaes de:

- compostos aromticos
- produtos naturais como esterides e clorofila
- corantes e vitaminas
- estabilizantes e antioxidantes