PRCTICA 5

ACTIVIDAD ENZIMATICA
Introduccin
Los enzimas son protenas altamente especializadas que catalizan numerosas reacciones en los
sistemas biolgicos. Una propiedad importante es su especificidad a la hora de reaccionar con
sustratos, acelerando determinadas reacciones qumicas en disolucin.
En general, un enzima proporciona el ambiente en que una reaccin determinada es,
energticamente, ms favorable. El rasgo distintivo de una reaccin catalizada enzimticamente es
que ocurre en un lugar especfico del enzima, el sitio activo. La molcula fijada en el sitio activo y
sobre la que acta el enzima se denomina sustrato. El complejo enzima-sustrato formado es de
vital importancia para definir el comportamiento cintico de las reacciones catalizadas. La funcin
del catalizador es aumentar la velocidad de una reaccin reduciendo la energa de activacin de la
misma, Ea. Los catalizadores no modifican los equilibrios de la reaccin ni se consumen durante el
proceso.
Objetivos
1. Determinar el efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad de reaccin.
2. Representar grficamente la actividad enzimtica de la catalasa de acuerdo con el modelo
de Michaelis-Menten.
3. Transformar el grafico de Michaelis-Menten a la representacin del modelo de inversos de
Lineweaver-Burk.
4. Determinar la K a partir de los grficos obtenidos en los objetivos 2 y 3.

Metodologa
-Preparacin de soluciones
Solucin H
2
SO
4
2N
En un matraz de 500ml depositar 300ml de agua destilada y agregar lentamente por las paredes
del matraz 25.9ml de H
2
SO
4
mezclando en cada adicin. Llevar a 500ml.
NOTA. Para la reaccin final aada 1mg/ml de MnSO
4

Solucin KMnSo
4
.05N
En un matraz de 500ml depositar 7g de KMnO
4
disolver en unos 200ml de agua y una vez disuelto
llevar a 500ml
Solucin de H
2
O
2
.24%
Adicionar en un matraz de 500ml 4ml de H
2
O
2
al 30% y llevar a 500ml.













Matraz H
2
O
2
(ml)
H
2
O
(ml)
Catalaza
(ml)
H
2
SO
4

2N (ml)
A
KMnO
4
0.05 N
(ml)
X meq
de
H
2
O
2

Y meq de
H
2
O
2
descompuesto
1 .5 7.5 0 R
E
P
O
S
O
5 .05 .025
2 .5 7.5 0.5 5 .05 .025
3 1 7 0 5 .15 .0075 .0075
4 1 7 0.5 5 .2 .01 .01
5 2 6 0 5 .2 .01 .01
6 2 6 0.5 5 .2 .01 .01
7 4 4 0 5 .3 .016 .016
8 4 4 0.5 5 .25 .0125 .0125
9 5 3 0 5 .35 .0175 .0175
10 5 3 0.5 5 .35 .0175 .0175
11 6 2 0 5 .45 .0225 .0225
12 6 2 0.5 5 .45 .0175 .0175
13 8 0 0 5 .53 .0275 .0275
14 8 0 0.5 5 .45 .0225 .0225

Calculos
Actividades
1 Calcule la velocidad de reaccin para cada mezcla de reaccin dividiendo la cantidad de meq de
H
2
O
2
destruida en 5 min.
2 Grafique en papel milimetrico la velocidad de reaccin obtenida contra la concentracin de
sustrato.
3 Transforme el grafico anterior de Michaelis-Menten a la representacin del modelo de inversos
de Lineweaver-Burk.
4 Determine Km a partir de los graficos obtenidos en (2) y (3).
5 Interprete los resultados explicando el comportamiento de la actividad de la enzima en funcin
de la concentracin del sustrato.
Cuestionario
1. Mencione dos reacciones en donde se produzca H
2
O
2
en la clula.
-oxidacin de los cidos grasos
Aproximadamente un 25% de los cidos grasos se degradan en peroxisomas y el resto en
mitocondrias. En ambos orgnulos este proceso de degradacin se denomina -oxidacin
y conduce a la formacin de acetil-CoA. La diferencia reside en que, mientras en las
mitocondrias la primera reaccin oxidativa es catalizada por una deshidrogenasa, en los
peroxisomas esta oxidacin la realiza una oxidasa flavnica. La oxidacin del acil-CoA por el
O2 forma H2O2, que es descompuesto por la catalasa. Los acetil-CoA formados pasarn a
diferentes rutas (biosntesis de azcares, ciclo de Krebs).
Conversin de grasa en carbohidratos: Ciclo del glioxilato
El acetil-CoA producido en la degradacin de cidos grasos puede seguir una ruta
metablica importante en algunos rganos vegetales (endosperma de semilla de ricino,
Euglena sp.). Las molculas de acetil-CoA producidas en la degradacin de los cidos
grasos en el peroxisoma (glioxisoma) se utilizan para producir cido succnico, en el
proceso conocido como ciclo del glioxilato. El cido succnico producido en este ciclo
abandona los peroxisomas y penetra en las mitocondrias, en cuya matriz es oxidado por
las enzimas del ciclo de Krebs a cido oxalactico, que abandona las mitocondrias y se
convierte en glucosa enel citosol.
2. Explique con dos ejemplos la utilidad de la determinacin de la actividad enzimtica en el
rea clnica.

3. Investigue el pH ptimo de las siguientes enzimas
Fosfatasa alcalina PH 9.0
Pepsina: PH de entre 2 y 4
Hidrolasas lisos micas: PH cercano a 5
4. Indique cual es la ventaja del grafico de Lineweaver-Burk sobre el de Michaelis-Menten.