UNIVERSIDAD ANDRES BELLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLGICAS












LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR BIO-131


GUA N 4:
COMPONENTES QUMICOS DE LA CLULA

INTRODUCCIN

Las clulas son estructuras increblemente complejas y diversas, capaces de autorreplicarse
y de realizar una amplia variedad de funciones especializadas en los organismos
multicelulares.

En trminos generales, las clulas se componen de agua, iones inorgnicos (sales
minerales) y molculas orgnicas que contienen carbono. Tanto el agua como las sales
minerales son muy importantes en el funcionamiento celular, sin embargo, son los
compuestos orgnicos de la clula los que dan caractersticas nicas.

Hidratos de carbono, protenas, lpidos y cidos nucleicos son los cuatro tipos principales
de molculas orgnicas que se encuentran en la clula, y cumplen en ella roles tanto
estructurales como funcionales. Las clulas obedecen a las mismas leyes fsicas y qumicas
que determinan el comportamiento de los sistemas no vivos y su qumica bsica puede ser
entendida en trminos de las estructuras y funciones de estas cuatro clases principales de
molculas orgnicas.


Objetivo General del laboratorio:
El objetivo de este laboratorio es que el estudiante sea capaz de reconocer y diferenciar
molculas orgnicas e inorgnicas; que comprenda y explique, por medio de la justificacin
de los resultados obtenidos, los fundamentos de las metodologas de reconocimiento
utilizadas.


Los HIDRATOS DE CARBONO o GLCIDOS (dulce). Como su nombre lo indica, se
componen de carbono, hidrgeno y oxgeno. Los carbohidratos ms simples son los
monosacridos. Todos ellos contienen grupos hidroxilo, as como grupos aldehdos o cetos.
Estos azcares simples se polimerizan (se agrupan en molculas ms complejas, formando
cadenas), a travs de reacciones de
deshidratacin para formar oligosacridos (2-6
molculas de monosacridos) o polisacridos
(cientos o miles de molculas de
monosacridos). El enlace formado en esta
reaccin se conoce como enlace glucosdico, y
se establece entre el carbono del grupo
hidroxilo de una unidad y el carbono del grupo
aldehdo o ceto de otra unidad.

Los glcidos estn presentes en la totalidad de las clulas, a veces libres, e intervienen en
los procesos qumicos celulares, o constituyen macromolculas como por ejemplo,
celulosa, almidn y ARN. Los polisacridos juegan papeles importantes como molculas de
almacenamiento de energa, y tambin son componentes estructurales de la superficie
celular. Los oligosacridos se unen comnmente a protenas o lpidos, dando origen a las
glicoprotenas y glicolpidos. Estos son parte importante de las membranas y participan en
los procesos de reconocimiento celular e interaccin entre clulas.
Las PROTENAS. Todas ellas contienen carbono, oxgeno, hidrgeno y nitrgeno; y
adems la mayora contiene azufre y algunas, fsforo, hierro, zinc o cobre. Estn formadas
por monmeros llamados aminocidos, que se unen entre s por medio del enlace
peptdico. Este enlace covalente, a travs del cual los aminocidos polimerizan, se forma
entre el grupo cido carboxlico (-COOH) de un aminocido y el grupo amino (-NH
2
) del
siguiente mediante la eliminacin de una molcula de agua. Las interacciones hidrofbicas
y covalentes, como los puentes de azufre (S-S), que se establecen entre los aminocidos que
forman una protena determinan en ella diferentes niveles de estructura, los cuales
contribuyen a su plegamiento y a que adopten su conformacin final caracterstica. Por
tanto la prdida de esta conformacin puede llevar a la prdida de la funcin que una
protena realiza.


En la clula, las protenas realizan importantes funciones; proveen rigidez estructural
(colgeno, queratina), controlan la permeabilidad de las membranas (protenas
transmembranales), regulan las concentraciones de los metabolitos (insulina, glucagn),
reconocen y se unen a otras biomolculas en forma covalente (protenas de
reconocimiento), participan en el transporte y movimiento celular (hemoglobina, miosina y
actina), se encargan de la defensa del organismo frente a patgenos (inmunoglobulinas),
etc.

El grupo de protenas ms especializado es el de las ENZIMAS, las cuales son protenas
con funcin catalizadora, es decir, se encargan de acelerar la velocidad de las reacciones
qumicas. Las enzimas son grandes molculas de protena formadas por una o varias
cadenas polipeptdicas. Se caracterizan por presentar alta especificidad por un sustrato y
por su conformacin tridimensional que da origen al sitio activo, especializado en la unin
con los compuestos sobre los cuales actan las enzimas. Algunas enzimas necesitan un
componente adicional en el sitio activo para realizar su actividad catalizadora, este
compuesto se denomina cofactor.

Los LPIDOS. Son molculas insolubles o escasamente solubles en agua, debido a que una
gran parte de ellos es hidrofbica. Esta parte hidrofbica slo contiene carbono e
hidrgeno. Los lpidos proveen una importante forma de almacenamiento de energa, son
los principales constituyentes de las
membranas, y son importantes en los
procesos de sealizacin celular, tanto
como hormonas esteroidales como
molculas mensajeras.

Los CIDOS NUCLEICOS poseen 2 tipos principales de macromolculas, el cido
ribonucleico o ARN y el cido desoxirribonucleico o ADN. Ambos tipos estn formados
por polmeros de nucletidos (ribonucletidos en el caso de ARN y 3
desoxirribonucletidos en el caso de ADN) unidos por enlaces fosfodister. Ambos tipos se
diferencian en el azcar que contienen en sus nucletidos (ribosa en el ARN y 3-
desoxirribosa en el ADN), y en que el ARN se presenta como una molcula de una sola
hebra, mientras que el ADN es de doble hebra. La funcin general de los cidos nucleicos
es permitir el flujo de la informacin gentica contenida por una clula a otra clula hija, y
utilizar esta informacin para la expresin gnica. La molcula de ADN se conoce como la
molcula de la herencia y almacena la informacin gentica en los genes que codificarn
para protenas y ARN. El ARN participa principalmente en transformar la informacin
contenida en el ADN a molculas funcionales como lo son las protenas. El ARN se
presenta principalmente en tres formas que cumplen distintas funciones: el ARN mensajero
que transporta la informacin contenida en un gen
hasta el citoplasma; el ARN ribosomal que forma
parte estructural y cataltica de los ribosomas en los
cuales se produce la traduccin de la informacin
contenida en los ARN mensajeros a protenas; y el
ARN de transferencia que participa como molcula
adaptadora para transformar la informacin desde el
ARN mensajero a protena.

Las SALES MINERALES son molculas inorgnicas que se encuentran formando parte
de los seres vivos y, aunque se encuentran en pequeas cantidades en comparacin a las
biomolculas, tienen funciones muy importantes en las reacciones metablicas, en la
regulacin de stas o como constituyentes celulares. Las sales ms abundantes en los seres
vivos son los cloruros, los fosfatos y los carbonatos de calcio, sodio, potasio y magnesio.
La funcin que las sales minerales desempean en el organismo depende del estado fsico
en que se encuentren, ya sea como sales precipitadas, donde forman parte de
endoesqueletos de vertebrados (fosfatos y carbonatos), de conchas de moluscos y dientes
(carbonatos) y de estructuras de sostn en plantas como las gramneas (slice); o como sales
disueltas, formando parte de todos los plasmas intra e intercelulares, disociadas en forma de
iones como los cloruros (Cl
-
), fosfatos (PO
4
-3
), etc. Las sales disueltas tienen numerosas
funciones, pero la ms importante es la funcin homeosttica o el mantenimiento constante
del medio celular interno. Tambin participan en la regulacin de la presin osmtica
determinando la concentracin de la disolucin.

ACTIVIDADES PRCTICAS

ACTIVIDAD N1: RECONOCIMIENTO DE HIDRATOS DE CARBONO

A) Identificacin de monosacridos mediante la reaccin de Fehling:
Los monosacridos y algunos disacridos, en medio alcalino y en caliente, presentan una
capacidad reductora que permite su reconocimiento en distintos tipos de muestras, entre
ellas los lquidos biolgicos como la orina y la leche.

La reaccin de Fehling permite la deteccin rpida de azcares basada en la capacidad de
los monosacridos para reducir algunas molculas, entre ellas los hidrxidos metlicos.
Calentando el reactivo de Fehling en presencia de un hidrato de carbono reductor como la
glucosa, aparece un precipitado rojo ladrillo correspondiente a xido cuproso (Cu
2
O).

Para comparar la capacidad reductora de distintas muestras que contienen mono y
polisacridos, se realizar la reaccin de Fehling en distintas soluciones. Esto permitir
identificar la presencia y el tipo de hidrato de carbono que se encuentra en las distintas
soluciones que se entregarn en el laboratorio.

Segn las siguientes instrucciones realice un esquema de trabajo que le permita seguir
claramente las acciones a realizar. Repita este proceso en cada uno de los experimentos
siguientes.

Procedimientos y Observaciones

Prepare 5 tubos de ensayo colocndolos en una gradilla. Rotule cada uno de los
tubos de tal modo que pueda recordar claramente con qu muestra est trabajando.
Agregue a cada uno de los tubos 1 ml del reactivo Fehling A y 1 ml del reactivo
Fehling B ya preparados. Luego agregue 3 ml de cada una de las siguientes
muestras segn el siguiente esquema:

Tubo Muestra
1 Agua destilada
2 Solucin glucosa 1%
3 Solucin almidn 1%
4 Leche
5 Solucin NaCl 1%

Agitar bien cada uno de los tubos, y colocarlos en un vaso de precipitado a bao
Mara hirviendo durante 3 minutos (anote la temperatura del bao).
Deje enfriar y observe si aparece algn precipitado suspendido en solucin.
Interprete cada uno de los resultados obtenidos.
Cul es el color y la cantidad relativa del precipitado en cada uno de los tubos?
Revise la estructura qumica de los monosacridos. A qu caracterstica se debe su
capacidad reductora?

B) Identificacin de polisacridos mediante la prueba del Lugol:
El reactivo Lugol est formado por una mezcla de yoduro de potasio (KI) con una solucin
de yodo (I
2
) y posee una coloracin marrn-rojiza muy caracterstica. La prueba del Lugol
permite la identificacin de polisacridos como el almidn en muestras de distinto origen:
soluciones, slidos y muestras de origen vegetal como semillas y tubrculos.

Al interactuar el I
2
con el almidn se produce una coloracin azul-violeta caracterstica que
se explica porque el yodo queda atrapado entre dos tipos distintos de cadenas que
conforman la estructura qumica del almidn: las cadenas de amilosa, sin ramificaciones,
que producen el color azul intenso y las cadenas ramificadas de amilopectina, que al unirse
al yodo produce la coloracin violeta.

Los productos de hidrlisis del almidn producen una coloracin azul muy intensa y si son
de muy bajo peso molecular no forman productos coloreados.

Procedimientos y Observaciones

De manera similar al experimento anterior, compararemos la capacidad de distintas
muestras representativas de mono y polisacridos para reaccionar con el Lugol.

Prepare 5 tubos de ensayo con 3 ml de cada una de las muestras segn el mismo
esquema del experimento anterior.
Agregue a cada uno de los tubos 1 gota de solucin de Lugol diluida y agite.
Observe el color producido en cada uno de los tubos. Interprete los resultados
obtenidos segn su conocimiento de la estructura de mono y polisacridos.

ACTIVIDAD N 2: RECONOCIMIENTO DE PROTENAS

Reaccin de Biuret para la identificacin de protenas:
Las protenas son macromolculas formadas por polmeros de aminocidos unidos
mediante enlaces peptdicos. Esta caracterstica estructural de pptidos y protenas permite
su identificacin en solucin mediante distintos mtodos, entre los que destaca la
utilizacin del reactivo de Biuret. ste se utiliza para realizar un anlisis cuantitativo
mediante mediciones de espectrofotometra. El reactivo de Biuret est formado por sulfato
de cobre (CuSO
4
) y tartrato doble de sodio y potasio (C
4
H
4
KNaO
6
* 4H
2
O) en medio
alcalino. El Cu
+2
reacciona con los grupos amino (>NH) del enlace peptdico de las
protenas, formando un enlace coordinado con 4 tomos de nitrgeno. Este enlace
coordinado es responsable de la coloracin azul-violeta caracterstica del mtodo al
reaccionar las protenas con el reactivo.

Procedimientos y Observaciones

Rotular 5 tubos de ensayo y colocar en cada uno de ellos 2 ml de cada una de las
siguientes muestras:

Tubo Muestra
1 Agua destilada
2 Solucin glicina 1%
3 Clara de huevo
4 Leche
5 Solucin NaCl 1%

Agregar a cada tubo 2 ml del reactivo de Biuret y agitar.
Observar la variacin de color en los tubos.
Cmo explica la diferencia de intensidades en los tubos que presentaron una
reaccin positiva?

ACTIVIDAD N 3: RECONOCIMIENTO DE LPIDOS

Solubilidad:
Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se forman
pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que es transitoria pues
desaparece en reposo, por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que por su
menor densidad se sita sobre la capa de agua. Por el contrario, las grasas son solubles en
los llamados disolventes orgnicos, como el ter, benceno, xilol, cloroformo, etc.

Procedimientos y Observaciones

Tomar dos tubos de ensayo y poner en uno de ellos 3 ml de agua y en el otro tubo 3
ml de ter.
Aadir a cada tubo 1ml de aceite y agitar fuertemente. Observar la formacin de
gotitas o micelas y dejar en reposo en la gradilla. Observe la reaccin.

Tubo Muestra
1 Agua + Aceite
2 ter + Aceite


ACTIVIDAD N4: RECONOCIMIENTO DE SALES MINERALES

Procedimientos y Observaciones

Preparar una gradilla con dos tubos de ensayo. En cada tubo agregar 3 ml de
Cloruro de Calcio. Numerar los tubos con 1 y 2.

A) Identificacin de Cloruros
Al tubo 1 aadir 1 ml de solucin de Nitrato de Plata al 1%.
Observar un precipitado blanco de aspecto lechoso.

B) Identificacin de Calcio
Al tubo 2 aadir 1 ml de solucin de Oxalato de Amonio al 1%.
Observar un precipitado blanco cristalino

Tubo Muestra
1 Nitrato de Plata
2 Oxalato de Amonio

ACTIVIDAD N5: RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS

Determinacin de la presencia de Catalasa:
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y
vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el
metabolismo celular, se forma una molcula txica llamada perxido de hidrgeno o H
2
O
2

(agua oxigenada). Esta enzima lo descompone en agua y oxgeno, por lo que se soluciona el
problema.


La reaccin de la catalasa sobre el H
2
O
2
, es la siguiente:
2H
2
O
2
2H
2
O + O
2
Catalasa

Procedimientos y Observaciones

Activacin de la enzima
Colocar en un tubo de ensayo unos trozos de hgado.
Aadir 5 ml de Agua Oxigenada.
Observar y registrar resultados.

Inactivacin de la enzima
Colocar un un tubo de ensayo unos trozos de hgado.
Aadir agua para hervir la muestra.
Hervir durante unos minutos para cocer el hgado.
Despus de este tiempo, desechar el agua sobrenadante.
Aadir 5 ml de Agua Oxigenada.
Observar y registrar resultados.

BIBLIOGRAFA

De Robertis, Eduardo D. P.1913. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Panamericana, c2005.
Alberts, Bruce. 1938. Introduccin a la biologa celular. Barcelona: Omega, c1999.


Materiales Laboratorio. Componentes Qumicos de la Clula
Materiales por grupo (3 alumnos por grupo)

Reactivos y Material Biolgico

Fehling A = 10 ml
Fehling B = 10 ml
Lugol = 15 ml (para todo el curso, con gotario)
Glucosa 1% = 10 ml
Almidn 1% = 30 ml
NaCl 1% = 15 ml
NaOH 20% = 15 ml
CuSO
4
1% = 5 ml
Glicina 1% = 5 ml
Nitrato de Plata 1% = 10 ml (para todo el curso, con gotario)
Oxalato de Amonio 1% = 10 ml (para todo el curso, con gotario)
Cloruro de Calcio 1% = 3 ml
ter = 5 ml
Acido Actico = 20 ml (para todo el curso, con gotario)
Agua Oxigenada = 15 ml
Alcohol 96 a 0C = 50 ml
Agua destilada = 50 ml
NaCl 2M = 50 ml
SDS (detergente lquido) = 15 ml (para todo el curso)
Aceite Vegetal = 3 ml
Clara de Huevo = 5 ml
Leche = 1 litro (para todo el curso)
Hgado de Pollo fresco y trozado = 3 (para todo el curso)

Material de Vidrio por grupo

30 tubos de ensayo.
2 gradillas
1 mortero de cermica
1 trozo de gaza para filtrar
3 vasos pp de 100 ml
1 vaso pp 500 ml
1 embudo
1 probeta 100 ml
1 varilla de vidrio
3 gotarios
3 pipetas graduadas 1 ml
2 pipetas graduadas de 5 ml
3 pipeta graduada de 10 ml
1 matraz Erlenmeyer 500 ml
1 matraz Erlenmeyer 250 ml
1 piceta con agua destilada
1 mechero (trpode y rejilla)
1 pinza madera para tubo
1 lpiz rotulador.
1 cooler con hielo por mesn de trabajo


Nota: Las pipetas deben reciclarse, por tanto, deben ser lavadas con abundante agua
destilada antes de volver a utilizar.