Contaminación microbiológica del aire interior: Hongos y bacterias

CURSO: Contaminacin Atmosfrica
PROFESOR: Ph. D. Sergio Pacsi Valdivia

ESPECIALIDAD: Ingeniera Ambiental

ALUMNOS:
Giancarlos Arcayo Palacios
Luis E. Loaiza Guillen

2013
TRABAJO ENCARGADO DE INVESTIGACIN:
CARACTERSTICAS & MONITOREO DE HONGOS &
BACTERIAS EN LA CALIDAD DEL AIRE EN INTERIORES

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA
LA MOLINA
FACULTAD DE CIENCIAS
Caractersticas & Monitoreo de Hongos & Bacterias en la Calidad del Aire en Interiores
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Contaminacin Atmosfrica Trabajo de Investigacin

NDICE

I. INTRODUCCIN

II. OBJETIVOS

III. DESARROLLO
1. GENERALIDADES
1.1. Atmo-ecsfera
1.2. Aerobiologa & Microbiologa del Aire
1.3. Calidad del Aire& Calidad del Aire Interior

2. CONTAMINACIN MICROBIOLGICA DEL AIRE EN INTERIORES
2.1. Definiciones
2.2. Microbiota del aire
2.3. Fuentes de Contaminacin

3. HONGOS & BACTERIAS DEL AIRE EN INTERIORES
3.1. Hongos frecuentes
3.2. Bacterias frecuentes
3.3. Efectos sobre la Salud

4. MONITOREO DE HONGOS & BACTERIAS: MUESTREO
4.1. Mtodos de muestreo de microorganismos en el aire
4.2. Cultivo de Muestras

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5. MONITOREO DE HONGOS & BACTERIAS: DETERMINACIN & CUANTIFICACIN
5.1. Aislamiento & Identificacin de Especies
5.2. Recuento de Colonias

6. ANLISIS DE CASOS
6.1. Estudio de contaminantes biolgicos (hongos y bacterias) en aire interior
de oficinas administrativas de una empresa petroqumica, estado Anzotegui-
Venezuela
6.1.1. Descripcin General
6.1.2. Materiales & Mtodos
6.1.3. Resultados & Discusin
6.2. Calidad Microbiolgica del Aire en Interiores de Habitaciones
Universitarias
6.3. Contaminacin biolgica intradomiciliaria y su relacin con sntomas
respiratorios indicativos de asma bronquial en preescolares de Bucaramanga,
Colombia

IV. CONCLUSIONES
V. REFERENCIAS

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I. INTRODUCCIN
La evaluacin de la calidad del aire interior ha sido un tema de creciente preocupacin en
los ltimos aos, ya sea que los microorganismos puedan generar enfermedades que
puedan perjudicar el rendimiento en oficinas, o el bienestar en hogares. Existe una amplia
variedad de partculas de origen biolgico y qumico en el aire interior. Principalmente los
virus, bacterias, hongos y protozoos; adems, el aire interior puede contener restos de
materia orgnica proveniente de los microbios, como granos de polen, detritus animal y
fragmentos de insectos y caros y sus productos de excrecin.
Actualmente se emplea el trmino bioaerosol, para designar a las microorganismos y
estructuras de origen biolgico en suspensin el aire, ya que estos tienden a asociarse a
partculas o restos de materia orgnica presente en el aire. Cabe decir, que la atmsfera
no tiene una microbiota autctona pero es un medio para la dispersin de muchos tipos
de bioaerosoloes (esporas, bacterias, virus y hongos), procedentes de otros ambientes.
La exposicin a agentes biolgicos, particularmente hongos y bacterias en los ambientes
interiores es un problema frecuentemente implicado como uno de los cofactores que
pueden explicar el aumento de enfermedades respiratorias, y alergias, en grupos de
poblacin especialmente vulnerables.
El presente trabajo pretende ofrecer una introduccin terica al problema de la
contaminacin microbiolgica del aire en interiores, con nfasis en las bacterias y hongos
presentes; y a las tcnicas de monitoreo de dichos organismo. Adems de revisar
experiencias reales del monitoreo, y los avances cientficos en la materia

II. OBJETIVOS
General: Analizar las caractersticas y efectos de hongos y bacterias en el aire; as
como las tcnicas de monitoreo de estos, en espacios interiores.

Especficos:

Asociar el efecto de hongos y bacterias sobre la salud humana, y por tanto con
la calidad del aire.
Describir y evaluar tericamente, las diversas tcnicas de muestreo,
incubacin, aislamiento y determinacin de hongos y bacterias en el aire.
Analizar casos de aplicacin del monitoreo de hongos y bacterias; evidenciando
su importancia y complementariedad con otros estudios.

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III. DESARROLLO
1. GENERALIDADES
1.1. Atmo-ecsfera
Este concepto busca considerar el aire como un subecosistema, el cual empieza
desde el suelo hasta las diferentes regiones y capas consideradas en la
atmosfera. De acuerdo a la meteorologa, se ha clasificado acorde con la
temperatura, y propiedades fsico-qumico.

En general estos parmetros no son
favorables para el crecimiento idneo de los
microorganismos, ya sea por la baja
concentracin de carbono, o la disminucin
de oxigeno que limita el crecimiento de
organismos aerbicos, y el parmetro
fundamental que es la temperatura. Sin
embargo, la tropsfera, que es la capa
inmediata al suelo, presenta la mayora de
organismos vivos, por ello es de esperar que
los microorganismos presentes en la
hidrosfera o litosfera, pasen a la atmo-
ecosfera.
Se considera la Tropsfera como la regin
ms importante de este ecosistema, debido
principalmente a la influencia directa con el hombre. En el caso de
microorganismos se tiene en consideracin:

Presentan poblaciones microbianas alctonas.
El aire es el medio de transporte o dispersin.
Existe la mezcla rpida del aire, por lo cual es comn encontrar
microorganismos. adheridos a otras partculas orgnicas o inorgnicas.

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1.2. Aerobiologa & Microbiologa del Aire
La Aerobiologa es la rama de la biologa que estudia los microorganismos
presentes en el aire, donde se incluyen los procesos de liberacin, retencin,
dispersin, deposicin e incidencia atmosfrica de organismos
aerotransportados y al mismo tiempo sus efectos ambientales. (Meza. 2011).
Dichos microorganismos tienen importancia econmica y biolgica, ya que
producen enfermedades en
plantas, animales y
humanos, adems pueden
causar alteracin de
alimentos y materiales
orgnicos y contribuyen al
deterioro y corrosin de
monumentos y metales.
En el cuadro adjunto, se
muestran los principales
microorganismos segn la
altura.
No se puede asegurar que exista en el aire un aeroplankton, es decir un
microorganismo que viva, se reproduzca y alimente en este medio (M.C. de la
Rosa. 2002). Por ello, como ya se mencion, el aire no contiene
microorganismos autctonos pero es un medio de transporte de estos, el cual
puede ser en forma de bioaerosoles, que pueden formarse por; lluvia,
movimiento del agua en los ros y mar, tratamiento de aguas residuales,
aspersores de riego, aire acondicionado o secreciones respiratorias del hombre
y de los animales. Los microorganismos tambin pueden encontrarse en el aire
sobre partculas de polvo (Atlas y Bartha, 2002).
Tipos de microorganismos:
La atmosfera contiene diversos microorganismos, donde se destaca la
presencia de bacterias y hongos, (...) Cladosporium es el hongo que
predomina en el aire, tanto sobre la tierra como sobre el mar, aunque
tambin es frecuente encontrar otros mohos, como Aspergillus,
Penicillium, Alternaria y Mucor (Takahashi. 1997). Entre las bacterias
tambin son muy frecuentes los bacilos pleomrficos Gram positivos
(Corynebacterium) y los cocos Gram positivos (Micrococcus y
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Staphylococcus). Los bacilos Gram negativos (Flavobacterium,
Alcaligenes) se encuentran en menor proporcin y disminuyen con la
altura (Gregory, 1973; Pelczar et al., 1993). (M.C. de la Rosa. 2002)

Los virus tambin pueden encontrarse en el aire y ser transportados por
l. Numerosos virus humanos (Orto y Paramixovirus, Poxvirus,
Picornavirus) se transmiten por va respiratoria. (M.C. de la Rosa. 2002)
El nmero de microorganismos disminuye con la altura, es por ello que en las
capas con contacto directo al suelo presentan mayor cantidad, adems la
proporcin vara de acuerdo a la zona, ya sean centros poblados (se advierte
mayor concentracin), agrcolas, o ambientes naturales.

1.3. Calidad del Aire & Calidad del Aire Interior
Para determinar si el aire es de buena o mala calidad es necesario tomar en
cuenta, su composicin, para as verificar la idoneidad de esta para diversas
aplicaciones, de acuerdo a distintos estndares o leyes. Por ello, la calidad del
aire se expresa mediante la concentracin de contaminantes qumicos y
microbiolgicos.
En el caso de contaminantes biolgicos, conforme a diversos estudios se ha
concluido que no existe normativa legal sobre valores lmite para agentes
biolgicos, segn ACGIH (American Conference of Governmental Industrial
Hygienists) las razones son:

Los bioaerosoles son mezclas complejas de diferentes clases de partculas.
Las respuestas de los seres humanos a los bioaerosoles varan desde
efectos inocuos hasta enfermedades graves, dependiendo del agente
especfico y de los factores de susceptibilidad de cada persona.
Las concentraciones medidas de los bioaerosoles cultivables y contables
dependen del mtodo de toma de muestra y anlisis. No es posible
recoger y evaluar todos los componentes de los bioaerosoles utilizando un
nico mtodo de muestreo.

Sin embargo, algunas organizaciones han clasificado los niveles de
contaminacin por hongos y bacterias, como es el caso de CEC (Commission for
Environmental Cooperation), donde obtuvieron valores para el aire interior de
oficinas de empresas no industriales.
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Para las bacterias se obtuvo:

Fuente: CEC. 1993
Para los hongos se obtuvo:

Fuente: CEC.1993

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2. CONTAMINACIN MICROBIOLGICA DEL AIRE EN INTERIORES
2.1. Definiciones
Si la contaminacin atmosfrica se puede entender como la presencia en el aire
de materias o formas de energa, cuya cantidad o persistencia pueden afectar a
los ecosistemas; y por tanto, a sus organismos y materiales; deteriorando su
calidad o alterando su estado. Al delimitar dicho concepto, al aire de un espacio
confinado (interiores) y considerando entre las materias, a microorganismos y
estructuras de origen bioqumico; nos estaramos refiriendo a la contaminacin
microbiolgica del aire en interiores.
Este tipo especfico de contaminacin localizada, tiene su origen en el hecho de
que la atmosfera funciona como un hbitat, en lo que se ha denominado Atmo-
ecsfera (Atlas et al. 2002); denominndose contaminacin cuando los
microorganismos presentes alcancen poblaciones numerosas, o se presenten
especies cuyos efectos en la salud sean anmalos.

2.2. Microbiota del aire
El conjunto de microorganismos presentes en el aire (la biocenosis de la Atmo-
ecsfera), constituye su Microbiota. Aqu se incluye a bacterias (Eubacterias),
arqueas (arquebacterias), protozooarios, caros y hongos.
Aunque en microbiota, se consideran a las formas vivientes, propiamente dicho;
la contaminacin microbiolgica, considera tambin a los virus, polen, esporas y
toxinas; que si bien tienen origen biolgico, no estn formalmente vivos. Para
englobar ambos grupos, se suele usar el trmino bioaerosol.
La carga microbiolgica del aire es transitoria y variable, y muy dependiente de
la fuente de contaminacin; por lo que solo tiene sentido la composicin
microbiolgica el aire en trminos de frecuencia y persistencia de los
microorganismos locales.
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*Tiempo de supervivencia de algunas especies de bacterias y arqueas, presentes
en el aire. (Atlas et al. 2002)

2.3. Fuentes de Contaminacin
Los bioaerosoles (microorganismos y estructuras de origen biolgico), como
cualquier contaminante pueden provenir de infinidad de fuentes; las que
pueden agruparse (entre otros criterios) en:

Artificiales. Debido a procesos e instituciones humanas, que empleen o
manipulen microorganismos, como las plantas depuradoras de aguas
residuales, laboratorios, centros de manejo de residuos slidos,
composteras, fermentadoras, hospitales y otros.

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Naturales. Aqu se incluyen los bioaerosoles que provienen de:
Humanos. Liberados del interior del organismo, como al
estornudar; o clulas prdidas de la piel y cabellos. As como
parsitos y bacterias de la flora intestinal.
Suelo. Los microorganismos del suelo, suspendidos tras
perturbacin mecnica.
Vegetales y Hongos. Las estructuras como el polen y las esporas.
Otros microorganismos. Las endosporas y toxinas, producidas
bioqumicamente.

3. HONGOS & BACTERIAS DEL AIRE EN INTERIORES

3.1. Hongos frecuentes
Los hongos se dividen en dos grupos: el primero, las levaduras y mohos
microscpicos conocidos como microhongos, y el segundo, los hongos del yeso
y de la madera podrida, denominados macrohongos, ya que producen esporas
macroscpicas apreciables a simple vista (Guardino Sol.2009).
*Los bioaerosoles se
originan tanto en procesos
naturales como
antropognicos.

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Generalmente se considera que las esporas en suspensin presentes en el aire
interior provienen del exterior, por lo que su concentracin sera similar, si es
que no existe ventilacin. Sin embargo, la Cladosporium tambin es capaz de
crecer y producir esporas sobre superficies hmedas en el interior,
contribuyendo as a la carga biolgica del aire interior. Adems se considera que
las diversas especies de Penicillium se originan generalmente en el interior, al
igual que Aspergillus y Eurotium.

Fuente: (Morales. 2010)

3.2. Bacterias frecuentes
Los tipos grampositivos ms frecuentes se originan en la boca, la nariz, la
nasofaringe y la piel, y son Staphylococcus epidermidis, S. aureus y especies de
Aerococcus, Micrococcus y Streptococcus. Las bacterias gram-negativas no
suelen ser abundantes, pero en ocasiones especies de Actinetobacter,
Aeromonas, Flavobacterium y especialmente Pseudomonas pueden ser
importantes (Morales. 2010).
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El agente causal de la enfermedad del legionario, Legionella pneumophila,
puede estar presente en suministros de agua caliente y en humidificadores de
aire acondicionado, as como en, jacuzzis, saunas y duchas (Guardino Sol.2009)


3.3. Efectos sobre la Salud
Segn diversos estudios, se ha demostrado que la presencia de patgenos
micticos es mnima en el aire interior, sin embargo; A. fumigatus, puede
invadir el tejido humano, ya que crece en la tierra de las plantas colocadas en
macetas. Aunque no es probable que las esporas de stos y de otros patgenos
oportunistas, sean peligrosas para la salud, s pueden serlo para personas
inmunodeprimidas (Guardino Sol.2009).

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Por otra parte, se ha confirmado distintos procesos alrgicos causados por
microorganismos entre los que se incluyen:
dermatitis alrgica atpica;
rinitis;
asma;
fiebre por humidificadores, y
alveolitis alrgica extrnseca (AAE), tambin conocida como Neumonitis por
hipersensibilidad (NH). (Guardino Sol.2009)

Los hongos presentes en el aire interior son contaminantes ms importantes
que las bacterias, ya que a los hongos se puede atribuir la enfermedad ms
comn de estos ambientes que es la rinitis o asma. El principal causante de esta
enfermedad es la especie Eurotium, sin embargo existen otras especies
causantes de esta enfermedad que se presentan a continuacin:

Fuente: Guardino Sol.2009
En el caso de las bacterias, generalmente no presentan riesgo para la salud, ya
que se esperara la existencia de bacterias gram (+) en el aire interior,
proveniente de la respiracin y piel, por lo cual son bacterias inocuas para el
hombre (Micrococcus y Staphilococcus). Por lo cual niveles altos de estos,
indican una ventilacin inadecuada. Sin embargo, si las bacterias son gram(-),
implicara la presencia de aguas estancadas y/o contaminadas. Estas bacterias
gram (-), en particular las endotoxinas liberadas de su pared, provocan sntomas
de fiebre, alteraciones en el nmero de leucocitos, alteraciones respiratorias,
etc. (Hernndez Calleja. 2005)

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4. MONITOREO DE HONGOS & BACTERIAS: MUESTREO
Como se sabe, la primera etapa efectiva del monitoreo es el muestreo. Bsicamente, el
objetivo del muestreo es transferir los microorganismos de una determinada cantidad
de aire del interior a analizar, hacia un medio de cultivo. Esto es un material nutritivo
slido o lquido, elaborado para el crecimiento de microorganismos en el laboratorio
(Moreno et al. 2000).
Entonces, el muestreo incluye la coleccin y el cultivo de muestras; posteriormente,
con la aplicacin de tcnicas de microbiologa experimental, se aslan los hongos de las
bacterias, y si se desea- se aslan especies dentro de esos grupos.

4.1. Mtodos de muestreo de microorganismos del Aire
De acuerdo a la Nota Tcnica de Prevencin 203 del Instituto Nacional de
Seguridad e Higiene en el Trabajo de Espaa (INSHT), sobre evaluacin de
contaminantes biolgicos en ambientes laborales; las tcnicas para la obtencin
de muestras aero-microbianas sobre medios de cultivo, se pueden caracterizar
en 4 grupos:
Sedimentacin. Es el mtodo ms antiguo, comn y econmico; consiste
en exponer placas de Petri, con el medio de cultivo adecuado, en una
ubicacin y perodo determinados, durante el cual los microorganismos
y las partculas del aire se depositan en el medio. Como inconvenientes
se presentan: la no deteccin de los microorganismos menos pesados,
las interferencias por turbulencia y slidos sedimentables. Adems, de
que el resultado, no se puede relacionar a un volumen determinado de
aire. (De La Rosa et al. 2002)

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Filtracin. Consiste en hacer pasar un volumen determinado de aire a
travs de un filtro, con la ayuda de una bomba de vaco. El filtro es un
medio poroso, habitualmente se usan membranas de gelatina o agar, en
el cual quedan retenida las partculas portadoras de microorganismos;
posteriormente se realiza la incubacin sobre medios de cultivo
apropiados. Se pueden conseguir porttiles, y determinar una
concentracin media por unidad de volumen.

Recogida en medio acuoso (impinger). Tambin traducido como
borboteo en lquido (De La Rosa et al. 2002), consiste succionar un
volumen determinado de aire (por lo que tambin requiere una bomba)
y hacerlo burbujear a travs de un frasco que contiene el caldo de
cultivo o solucin isotnica, que retiene los microorganismos para su
anlisis posterior. Los muestreadores May o Burkard, se basan en este
principio.

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Impactacin: Es el mtodo ms usado (De La Rosa et al. 2002), donde un
determinado volumen de aire succionado atraviesa un medio de
cultivoslido en una placa Petri perforada, aprovechando que por inercia
las partculas y microorganismos se separan de la corriente de aire.
El ms usado es el impactador Andersen, que permite la distribucin por
tamao de los bioaerosoles.

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4.3. Cultivo de Muestras
Si bien en todos los mtodos de muestreo se obtienen los microorganismos
sobre un medio de cultivo o un filtro del que se puede hacer una siembra; en
ningn caso se hace la distincin entre muestreo de bacterias u hongos. Para tal
propsito, el muestreador debe contener un medio de cultivo selectivo.
De acuerdo a la Nota Tcnica de Prevencin 299 del INSHT: Mtodo para el
recuento de hongos y bacterias en aire (INSHT. S.f.); el medio de cultivo que
permitir la seleccin de hongos es el Agar Sabouraud , mientras que para las
bacterias se usa el Agar Tripticasa soya (Triptisoy).

Agar Sabouraud.

La receta estndar de este agar:

Peptona de casena............ 5,0 g/l
Peptona de carne............... 5,0 g/l
D (+) Glucosa................... 40,0 g/l
Cloranfenicol...................... 0,5 g/l
Agar - agar...................... 15,0 g/l

De forma que 65.5 gramos de la mezcla de reactivos calidad anlisis, se
completan con agua bidestilada hasta un litro. Esto debe ser disuelto en
caliente y esterilizado en autoclave a 121 por 10 minutos. Adems el pH
final debe ser de 5.6

La selectividad de este medio radica en que los hongos prevalecen a pH
cido; y al agregrsele cloranfenicol, un antibitico, se inhibe el
crecimiento bacteriano. Por lo que al emplear este agar en un
muestreador, e incubarlo a 28 por cinco das; se tendran las
poblaciones fngicas del volumen de aire muestreado.

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Agar Tripticasa Soya

La composicin de este agar:

Peptona de casena...............15,0 g/l
Peptona de soja.......................5,0 g/l
Cloruro sdico.........................5,0 g/l
Agar-Agar.............................15,0 g/l

Nuevamente, el litro de mezcla que contiene los 40 gramos de reactivos;
debe esterilizarse a 121, por 15 minutos. El pH de uso del medio debe
ser aproximadamente 7.3.

Ahora, el pH cuasi neutro promueve la proliferacin de bacterias; la
incubacin se sugiere a 37 por dos das.

Se puede observar que la selectividad de los medios, radica en la presencia de
antibiticos, el pH del medio y la temperatura de incubacin.

5. MONITOREO DE HONGOS & BACTERIAS: DETERMINACIN & CUANTIFICACIN
5.1. Aislamiento & Identificacin de Especies
A partir de los medios selectivos que se han obtenido durante el muestreo, y
que contienen los hongos o las bacterias de una muestra de aire; y dado que es
evidente dichos microorganismos no se encuentran aislados, sino en
poblaciones mixtas, es necesario aislar cada especie en particular, para su
correcta identificacin.
El aislamiento requiere la utilizacin de los mismos medios de cultivo selectivo -
que inhiben el crecimiento de los microorganismos no deseados y la aplicacin
de alguna de las siguientes tcnicas:
Extensin en superficie
Se deposita sobre la superficie de una placa con el agar selectivo en
cuestin, una punzada de una colonia en la placa muestreada; y se
extiende con ayuda del cayado, previamente esterilizado. Luego se incuba
la placa, en posicin invertida, a la temperatura deseada segn el tipo de
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microorganismo (hongos, 28 y bacterias a 37). La posicin invertida
evitar que el agua de condensacin se deposite sobre la superficie del
medio, dificultando la obtencin de colonias aisladas.

Estra mltiple en superficie
Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra de
la placa del muestreo; y se extiende sobre un rea pequea de la
superficie de la placa con agar nutritivo, en forma de estras muy juntas.
Se flamea el asa, se enfra y despus de rozar la siembra realizada
previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo
nuevas estras. Este proceso se repite sucesivamente, flameando y
enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estra. Se lleva la
placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en posicin invertida.

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Diluciones sucesivas
Este mtodo se emplea para el muestreo en medio acuoso, el cual implica una
dilucin seriada (generalmente 6 diluciones) de la muestra en agua, caldo o
solucin salina, para posteriormente inocular las diluciones en medios de cultivo
slido e incubarlo durante 24-48 horas.

De cualquiera de las dos formas de aislamiento, se obtienen colonias separadas;
de una solo especie. La identificacin de estas, se hace tanto de forma
cualitativa como cuantitativa:
Identificacin macroscpica. Consiste en la inspeccin cualitativa de las
colonias, caracterizando su morfologa; esto a partir de su color, textura,
consistencia, tamao, elevacin, forma y otras propiedades.

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Identificacin microscpica. Aqu se caracteriza la morfologa celular, con
ayuda de un microscopio, que puede ser ptico o electrnico.
Se evala la forma de las clulas, la presencia de flagelos, hifas y cualquier
otra caracterstica celular que distinga entre especies de hongos y
bacterias.

5.2. Recuento de Colonias
Cuando una clula aislada comienza a crecer sobre un medio slido, el resultado
del crecimiento al cabo de un tiempo determinado es una colonia, por lo cual
dicha clula es denominada unidad formadora de colonia (UFC). Es importante
rescatar que el recuento nicamente se realiza en medio slido, por lo cual si la
muestra proviene de un medio acuoso (mtodo de impregnacin), ser
necesario llevarlo a medio slido a travs de diluciones, descrito anteriormente.
En el caso de que se conozca el volumen de bombeo, como es el caso de los
mtodos de impactacin, filtracin o bombeo en medio acuoso, la
contaminacin de microorganismos se expresa:

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Asimismo, es posible expresar la composicin de una determinada especie de
hongos o bacterias respecto al total, esta expresin es tpica del mtodo de la
sedimentacin.

Para efectuar el conteo, se puede realizar el conteo directo; as como usar
contadores electrnicos que calculan las UFC de forma inmediata, como es el
mtodo de Coutler.

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6. ANLISIS DE CASOS

6.1. Estudio de contaminantes biolgicos (hongos y bacterias) en aire interior
de oficinas administrativas de una empresa petroqumica, estado Anzotegui-
Venezuela (Parra et al. 2008)

Este caso de estudio se centra en la sede administrativa de la empresa, donde
se tiene antecedentes de malestar diagnosticadas por mdicos, especialmente
estornudos, alergias, gripe, olores extraos entre otros. Adems, la presencia de
moho en los bordes de los techos y paredes, as como la falta de aplicacin de
un sistema de ventilacin. Por otra parte, el nivel de humedad es alto,
aprecindose la condensacin en las ventanas por lo cual se est provocando
ambientes propicios para el crecimiento y contaminacin biolgica. El estudio
tuvo varias fases, donde se analiza la percepcin de los trabajadores por
encuestas y talleres, sin embargo, el presente informe se centrar en el anlisis
microbiolgico.

La estrategia de muestreo fue la siguiente:
Da de muestreo: Se realiz por das consecutivos; lunes 21/07/08 y
martes 22/07/08. En el horario comprendido desde las 7:00am a
12:00pm y en la tarde de 1:00pm a 5:00pm

Tiempo de muestreo: El tiempo para cada muestra se determin en
cinco minutos (5minutos/muestra). Es decir, tomar un punto de
muestreo llev un tiempo de diez minutos. Cinco minutos para hongos y
cinco minutos para bacterias. En segundo piso se realiz el muestreo
bajo la aplicacin de 2 mtodos (Acuosos y de Impactacin) el tiempo de
muestreo se prolong en veinte minutos pues se us diez minutos para
cada mtodo de muestreo.

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Mtodos de captacin:
o Biosampler (Medio acuoso): Colecta partculas bioaerosoles que
se encuentran suspendidas en el aire dentro de trampas de
lquido.
o HiAir Sampler System (Medio solido-Impactacin): En este equipo
el volumen de aire es impulsado por una hlice sobre una cinta
de plstico portadora de cultivo slido.

Tcnica de estimacin de la densidad microbiana:
Para estimar las UFC, se utiliz el mtodo directo de recuento en placa,
para ello se tomaron alcuotas de 1ml de las muestras y se colocaron en
9 ml de solucin salina. Seguidamente, se realizaron diluciones seriadas
en solucin salina peptonada (SSP) hasta 1:1000000 para bacterias y
1:10000 para hongos. Cada una de las diluciones se sembraron por
superficie en placas con Agar Tripicasa de Soya (ATS) con fungicida para
el aislamiento de bacterias y en placas de Agar Extracto Malta (AEM)
con antibitico para el aislamiento de hongos.
Luego de la incubacin, 24horas para bacterias y 7 das para hongos, se
procedi al conteo de UFC.

Los promedios de UFC de Bacterias (UFC/m
3
):

Segn el cuadro anterior se evidencia la mayor concentracin de bacterias
en el piso 2, especficamente en lado este, cabe resaltar que en esa zona se
advirti ms moho en las ventanas, humedad y quejas de los trabajadores
por enfermedades respiratorias. Adems, se verific que las bacterias gram
(+) de tipo cocos son las predominantes.
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Los promedios de UFC de Hongos (UFC/m
3
):

*Promedio de Hongos UFC/m3
Respecto a los hongos se encontr ms en la planta baja a ambos lados del
edificio, pero siendo mayor en el este. Se advierte que se supera el lmite de
referencia exterior, sin embargo, para el caso de hongos, se suele
establecer el lmite de 500 UFC/m
3
. Pero si analizamos los puntos de
muestreos individualmente se advierte:

Se verifica que para dos casos en la planta baja se supera el valor de 1000
UFC/m
3
, por lo cual se necesita atencin inmediata.

Por lo tanto se concluye que la concentracin de estos microorganismos
est por encima de los lmites estudiados, causando afecciones
respiratorias.

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6.2. Calidad Microbiolgica del Aire en Interiores de Habitaciones
Universitarias (Luksamijarulkul et al. 2012)
Debido a la gran poblacin que recurre a estas zonas, se evalu la calidad
de aire de estos edificios, ya que existieron quejas de una inadecuada
ventilacin vinculndolo con alergias y gripe, es por eso que este trabajo se
centr en la observacin a largo plazo; evaluacin en dos aos, de la calidad
microbiolgica de aire en los edificios Universitarios ubicados en el centro
de Poznan, Polonia.
Mtodo:
Sedimentacin de Koch; Este mtodo se basa en la deposicin
gravitatoria de los microorganismos sobre las placas Petri con medios
nutritivos y expuesto para un periodo de tiempo. El nmero de
microorganismos se estim a travs de la siguiente ecuacin:

Toma de muestra:
Las placas Petri fueron expuestas por 15 minutos, adems todas las
muestras fueron tomadas en septiembre (antes del inicio del ciclo
acadmico) y octubre (en curso), en dos aos de funcionamiento; 2002
y 2003. Adems hubo dos periodos de toma de muestra en la maana
(7:30 a 8:00am) y en la tarde (2:30 a 3:00pm).

Medios de cultivo empleado
o Agar-Extracto de levadura (Merck); para la cuantificacin de
Hongos.
o Medio de Agar Sabouraud con 2% de glucosa (Merck) para la
cuantificacin de hongos.
o Czapek-Doxa Agar (BTL) para la identificacin de hongos
filamentosos.

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Diagnstico
Las bacterias se identificaron por tres matrices. La valoracin
macroscpica (Descripcin de Colonia). Segundo; estimacin
microscpica (teido por el mtodo de Gram y Schaeffer-Fulton). La
tercera parte; pruebas bioqumicas segn la clasificacin de bacterias
segn Bergey.

Diagnstico de hongos filamentosos se bas en la estimacin de las
caractersticas morfolgicas de crecimiento en medio de Czapek, as
como en la observacin microscpica segn Gua de estimacin de
hongos filamentosos.
Se obtuvo que en las maanas se mantiene una tendencia donde la
contaminacin fngica y bacteriana es menor que en la tarde, pero hubo
una excepcin, un aula ventilada, para el caso de los hongos; adems en
cuanto al crecimiento anual se determin que el crecimiento ms alto de
contaminacin fngica durante las tardes fue en el laboratorio qumico (en
2003; 5,8 veces mayor en las tardes que en las maanas), as como en la
biblioteca.

*Variacion UFC/m3 de Bacterias para el ao 2002-2003
A (sala ventilada), B(sala no ventilada), C(laboratorio), D(Biblioteca), E(sala
de lectura), F(Oficina decano), G (comedor) H(Baos), I(Corredor)
28

.
*Variacin de UFC/m3 de hongos para el ao 2002-2003

Por otra parte el crecimiento bacteriano ms intenso ocurri en las tardes
principalmente en el corredor, laboratorio qumico y en el comedor.
Ante la falta de una normativa, si se compara con el ndice de Grny y
Dutkiewicz, 5000UFC/m
3
, se advierte que no pasa dicho valor, sin embargo, en
Polonia se suele comparar con el lmite propuesto por la Asociacin Americana
Higiene Industrial, el cual nos indica un lmite de 250UFC/m3para Hongos, el
cual se supera en casi todos los casos.
Por otra parte, es importante resaltar el aumento de bacterias y hongos en la
apertura del ao, por lo cual est conectado a una fuente de contaminacin
biolgica, que sera en este caso el hombre, o la muchedumbre, ya que el
cuerpo humano, la ropa es lugar para crecimiento de microorganismos. Este
hecho se acenta con la comprobacin de que el mayor crecimiento de
microorganismos en el da ocurre en el corredor, comedor, biblioteca, los cuales
son lugares llenos de gente constantemente.
Para un mejor anlisis, los autores compararon los niveles de UFC/m
3
con los
del aire exterior, con la relacin: concentracin interior/exterior, donde se
concluy, que la relacin es mayor a 1 en casi todos los casos, razn por la cual
respalda que esta zona carece de una adecuada ventilacin de edificios.
29

6.3. Contaminacin biolgica intradomiciliaria y su relacin con sntomas
respiratorios indicativos de asma bronquial en preescolares de Bucaramanga,
Colombia (Herrera et al. 2011)
Investigacin realizada por Astrid B. Herrera, Laura A. Rodrguez y Jrg
Niederbacher; de la Universidad Industrial de Santander, en Bucaramanga,
Colombia. El objetivo de la investigacin fue evaluar la asociacin entre la
presencia de contaminantes biolgicos intradomiciliarios y sntomas
indicativos de asma, en prescolares de Bucaramanga (Herrera et al. 2011).
El estudio consisti en evaluar la relacin entre la manifestacin de
sintomatologa de asma bronquial de nios con menos de 7 aos de edad
(pre-escolares); con la presencia de hongos y caros en el interior de sus
hogares, prematuridad de nacimiento, antecedentes familiares, etc.
El estudio requiri el monitoreo de hongos y caro, el reconocimiento de
especies, el levantamiento de informacin epidemiolgica y demogrfica;
as como el tratamiento estadstico, para encontrar las relaciones.

El espacio muestral consisti de 678 nios (Edad media: 42 meses).
La informacin sobre el estado nutricional y las variables demogrficas se
obtuvo a travs de encuestas y mediciones en los hogares.
Para la evaluacin de caros (arcnidos), se tomaron muestras de polvo con
una aspiradora, se identificaron las especies al microscopio.
El monitoreo de hongos se realiz exponiendo por 15 minutos, dos placas
Petri con agar rosa de bengala cloranfenicol; que podan ser ubicadas
en la cama y el espacio de juego, o el corral y el coche, dependiendo de la
edad. Ntese que, como se ha explicado en el punto 4. MONITOREO DE
HONGOS & BACTERIAS: MUESTREO, se tratara de un mtodo de
muestreo por sedimentacin (de hongos); y el medio de cultivo, usa
cloranfenicol para inhibir el crecimiento bacteriano.
El trabajo en el laboratorio consisti en incubar las muestras e identificar
las especies fngicas.
30


El anlisis microbiolgico, result en la identificacin de las especies ms
frecuentes de hongos y caros; asi, los gneros fungales en orden de frecuencia,
son: Cladosporium sp. (98%), Fusarium sp. (82%), Aspergillus sp. (54%),
Penicillium sp. (49%) y Acremonium sp. (7.82 %). Y las especies de caros, en
orden de predominancia: Dermatophagoides sp. (16,4 %), Cheyletus sp. (3,5 %),
Lepidoglyphus destructor (2,5 %) y Blomia tropicales (2,1 %)

Posteriormente, se realiz el anlisis bivariado entre la prevalencia de sntomas
de asma bronquial y todas las variables de estudio (prematuridad, mascotas,
antecedentes, otras enfermedades respiratorias, especies de hongos y caros).
Las variables con mayor relacin a la manifestacin frecuente de sntomas de
asma, se muestran en el siguiente cuadro; donde se caracteriza por el valor del
estadstico p, teniendo en cuenta que a menor valor de p, mayor
significancia.

El trabajo concluye que los principales factores que influyen en que los nios
menores a 7 aos en Bucaramanga, presenten sntomas de asma (p=0); son: la
presencia del hongo Acremonium sp., el hecho de ser prematuros y el padecer
de neumona.
Por tanto, el trabajo encuentra una relacin entre el Acremonium sp. y el
padecimiento de asma.

31

IV. CONCLUSIONES

La atmsfera, particularmente la zona ms baja, contiene una gran variedad de
microorganismos y estructuras de origen biolgico (bioaerosoles) en suspensin;
de tal forma que es un medio para la dispersin, de dichos contaminantes
biolgicos. A este propsito, se tienen campos relativamente nuevos como la
Aerobiologa, microbiologa del aire y la contaminacin microbiolgica.

El aire en espacios interiores, al estar especialmente cargado de hongos y bacterias
como: Aspergillus, Penicillium, Cladosporium, Staphylococcus, Mycobacterium y
Bacillus; constituye un factor que contribuye a la incidencia de alergias y
enfermedades respiratorias, as como a la disminucin en el rendimiento en
distintos ambientes (oficinas, colegios, hospitales, etc.). De tal forma afecta, la
habitabilidad y sanidad de los espacios interiores; de ah su relacin con la calidad
del aire en interiores.

La primera etapa del monitoreo la constituye el muestreo, las tcnicas que existen
para obtener los hongos y bacterias del aire, se clasifican de acuerdo al principio:
sedimentacin, filtracin, impregnacin en lquidos e Impactacin. La diferencia
radica en el uso de fuentes de energa, el medio de coleccin y el uso de equipos
automatizados.

Dado que al aplicar una tcnica de muestreo microbiolgico en el aire, no se
discrimina el tipo de microorganismos que se colecta; para salvar este
inconveniente los muestreadores incluyen un medio de cultivo que debe ser
modificado a selectivo. De tal forma, se usan el agar Sabouraud y el agar tripticasa
soya; que inhiben el crecimiento bacteriano y fngico, respectivamente. As se
obtienen muestras solo con hongos o solo con bacterias del aire en anlisis.

Para distinguir las distintas especies de hongos y bacterias, se deben aplicar
tcnicas de aislamiento sobre los agares selectivos mencionados, como: extensin
en superficie, diluciones y estras. De tal forma se puede obtener las variedades de
hongos y bacterias en el aire. Adems, los hongos y bacterias de las muestras
pueden cuantificarse como el nmero de unidades formadoras de colonias (UFC)
por volumen de aire muestreado o como la frecuencia porcentual de una
determinada especie, respecto al total.

32

El anlisis de casos, evidencia que el monitoreo de hongos y bacterias en el aire de
espacios interiores viene siendo empleado como una herramienta que permite
evaluar el grado de contaminacin fngica y bacteriana de dicho ambiente;
sirviendo de apoyo a estudios epidemiolgicos y de salud ocupacional.

De los tres casos de estudio, se concluye que la proliferacin de hongos y bacterias
est ligada a una mala ventilacin de los edificios, adems es comn usar como
referencia la calidad de aire exterior para obtener una nocin del grado de
contaminacin en interiores, ya que no existe una normativa reconocida
globalmente, ya que los efectos nocivos de los hongos y bacterias, vara de
acuerdo a la susceptibilidad de las personas. Tambin, se advierte que los ms
altos grados de contaminacin ocurrieron en zonas concurridas, como son los
colegios, donde los nios que son ms susceptibles a enfermedades respiratorias
corren ms peligro de desarrollar asma.

33

V. REFERENCIAS

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34

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al ttulo de Especialista enHigiene Ocupacional. Universidad Bolivariana de
Venezuela. Venezuela.

Contaminación microbiológica del aire interior: Hongos y bacterias

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CURSO: Contaminacin Atmosfrica

PROFESOR: Ph. D. Sergio Pacsi Valdivia

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