2.

3 UREA
MTODO CINTICO "UREASA-GLDH".

1. INTRODUCCIN
Urea y amonaco

La concentracin sangunea de amoniaco es superior en los infantes que en los
adultos, debido a que el desarrollo de la circulacin heptica se termina despus
del nacimiento. La hiperamonemia es una entidad que se presenta con
frecuencia debido a defectos congnitos en el ciclo de la urea. El error innato del
metabolismo ms comn es la deficiencia en ornitina transcarbamilasa. La
hiperalimentacin es una causa mucho ms frecuente de hiperamonemia en
infantes. Con frecuencia, se diagnostica el sndrome de Reye por un amoniaco
sanguneo elevado en ausencia de otra causa demostrable.
Los pacientes adultos muestran elevadas concentraciones de amonaco
sanguneo en las etapas terminales de: la cirrosis heptica, la falla heptica y la
necrosis del hgado aguda y subaguda. Se presagia el comienzo de la
encefalopata heptica por una elevacin en el amonaco sanguneo. Se ha
demostrado que la medicin en lquido cefalorraqudeo (LCR) de la glutamina,
correlaciona bien con el desarrollo de la encefalopata heptica. Tambin se
puede utilizar la medicin de la glutamina en el LCR, para diferenciar la
encefalopata heptica de la sptica. Sin embargo, no es comn la medicin de la
glutamina en el LCR. La excrecin de amonaco urinario se eleva con la acidosis
y se disminuye en la alcalosis, puesto que la formacin de sales de amonio es un
mecanismo importante para excretar el exceso de iones hidrgeno. Daos en los
tbulos renales distales, tal como ocurre en la falla renal, la glomerulonefritis, el
hipercorticoidismo y la enfermedad de Addison, conllevan a una excrecin de
amonaco disminuida sin presentar cambios en los niveles sanguneos de
amonaco.
Puesto que la urea se sintetiza en el hgado, en la enfermedad heptica sin dao
en la funcin renal, se presenta nitrgeno ureico srico bajo, aunque la relacin
urea a creatinina se puede conservar normal. La elevacin en el nitrgeno ureico
srico no implica necesariamente dao renal, puesto que la deshidratacin puede
llevar a concentraciones de nitrgeno ureico tan altas como 600 mg/L. En los
infantes que reciben una frmula alta en protenas pueden tener niveles de
nitrgeno ureico de 250 a 300 mg/L. Naturalmente, enfermedades como la
glomerulonefritis aguda, la nefritis crnica, el rin poliqustico y la necrosis renal
elevan el nitrgeno ureico.

OBJETIVOS

Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de urea en
una muestra biolgica
Establecer los valores de referencia de la urea y comparar con el valor de
nuestra muestra problema a analizar.
Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de urea en una muestra biolgica.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO

La ureasa cataliza la hidrlisis de la urea dando amonio y CO
. El amonio formado
se valora mediante una reaccin enzimtica (GLDH), pasando NADH a NAD
2
.
La disminucin de la absorbancia frente al tiempo es proporcional a la
concentracin de urea.
Ureasa
Urea + H
2
O +2H
+
2 NH
2

GLDH
2NH
3
3
+ CO
+ a-cetoglutarato + 2NADH H
2
O + NAD
+
+ 2L-glutamato

4. PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA
Suero o plasma heparinizado.

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario
1 Micropipeta de 1 mL
1 Micropipeta de 200 L.
1 Piseta con agua desionizada o destilada
2 Celdas de plstico de 3 ml
5 Tubos de vidrio de 13X100
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

EQUIPO
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 340 nm.
Centrfuga
CONTENIDO DEL EQUIPO
Reactivo 1 Tampn TRIS pH 7.8, 80 mmol/L

Reactivo 2 Ureasa 3750 U/L
Vial enzimas GLDH 6000 U/L
NADH 0.32 mmol/L
a-cetoglutarato 6 mmol/L

Estndar Sol. Urea 50 mg/dl

PREPARACIN Y ESTABILIDAD
Disolver el contenido del vial enzimas R.2 en el frasco de solucin tampn R.1

El reactivo al uso es estable un mnimo de 4 semanas a +2+8C 7 das a
+15+25C.

5. PROCEDIMIENTO

5.1 TCNICA
Termperatura: 25/30/37C
Longitud de onda: 340 nm. /334 nm
Paso de luz: 1 cm
Lectura: frente a agua destilada

Blanco Estndar Muestra
Estndar 10 L
Muestra 10 L
Reactivo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL

Pipetear en un tubo:
Muestra o _estndar . . . . . . . . . . . . . . . 0.01 mL
Reactivo al uso. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.00 mL
Mezclar y anotar la disminucin de extincin entre los 30 y los 90 segundos
( Extincin)

6.0 RESULTADOS
6.1Clculo
Con las diferencias de extincin anotadas, aplicar la siguiente
ecuacin:
. Extincin muestra/ . Extincin estndar x conc. estndar = conc. muestra

Factor de conversin : mg/dL x 0.1665 = mmol/L

6.2Linealidad
El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dL (83.25 mmol/L)
Para concentraciones superiores se deber diluir la muestra a 1:2 con solucin
salina, multiplicando el resultado por 2.

Suero: de 15 a 45 mg/dL
Orina: de 20 a 35 g/24 horas

NOTAS:
Muestra: Suero, plasma o orina..
La orina diluirla a 1:50 con agua destilada.
No emplear suero o plasma turbios o hemolizados.

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico