1

PRACTICA N 2
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL MEDIO AMBIENTE
I. OBJETIVOS
- Evaluar cualitativamente los microorganismos que se encuentran en el medio
ambiente
- Preparar los medios de cultivo para el desarrollo de los microorganismos

II. FUNDAMENTO TEORICO
2.1. Medio de cultivo
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado
ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin
de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en
composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se
aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de
cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento
de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.

2

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que
bastantes bacterias provocan su licuacin.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar
el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden
para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias
y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y
amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

2.2. Condiciones generales para el cultivo de microorganismos
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado
por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o
captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de
carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de
estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de
los factores nutritivos lbiles.

3

Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es
utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de
nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar
directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y
otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a
muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamnica.

Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer
de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

2.3. Clasificacin de microorganismos
En los microbios estn representados cuatro grupos de seres: bacterias, protozoos,
hongos y algas.
2.3.1. Virus
Los virus son sistemas biolgicos que presentan incluso tamaos
ultramicroscpicos (los ms pequeos y los de tamaos medianos solo se
pueden observar mediante microscopio electrnico), los cuales pueden causar
infecciones y solo se reproducen en clulas husped. Los virus fuera de clulas
husped estn en forma inactiva. Los virus constan de una cubierta protectora
proteica o cpside que rodea el material gentico. Su forma puede ser espiral,
esfrica o como clulas pequeas, de tamao entre 10 y 300 nm. Al tener un
tamao menor que las bacterias, pueden pasar filtros que permiten la
retencin de las mismas.
Al contrario que las bacterias y los protozoos parsitos, los virus contienen un
solo tipo de cido nucleico (ARN o ADN). No se pueden reproducir por s solos,
4

sino que necesitan de la maquinaria metablica de la clula husped para
asegurar que su informacin gentica pasa a la siguiente generacin.
Al contrario que las bacterias, los virus no estn presentes en el ser humano de
manera natural (excepto como un elemento viral endgeno). Cuando las
personas quedan afectadas por un virus, estos generalmente se eliminan del
cuerpo humano mediante secreciones.
En las ltimas dcadas se han empezado a utilizar virus en medicina, por
ejemplo para la debilitacin de bacterias, la creacin de antitoxinas, la
utilizacin para libreras genmicas, como vectores en terapia gnica, para la
destruccin de clulas tumorales

2.3.2. Microorganismos Procariotas
Las bacterias y las arqueas son microorganismos procariontes de forma esfrica
(cocos), de bastn recto (bacilos) o curvado (vibrios), o espirareles (espirilos).
Pueden existir como organismos individuales, formando cadenas, pares,
ttradas, masas irregulares, etc. Las bacterias son una de las formas de vida
ms abundantes en la tierra. Tienen una longitud entre 0,4 y 14 m.
Consecuentemente solo se pueden ver mediante microscopio. Las bacterias se
reproducen mediante la multiplicacin del ADN, y divisin en dos clulas
independientes; en circunstancias normales este proceso dura entre 30 y 60
minutos.
Cuando las condiciones del medio son desfavorables, cuando cambia la
temperatura o disminuye la cantidad de los nutrientes, determinadas bacterias
forman endosporas como mecanismo de defensa, caracterizadas por presentar
una capa protectora resistente al calor, a la desecacin, a la radiacin y a la
trituracin mecnica y que protege la bacteria de manera muy eficiente. De
esta manera, pueden soportar temperaturas elevadas, periodos de sequa,
heladas, etc. Cuando las condiciones del medio mejoran, se desarrolla una
nueva bacteria que contina el crecimiento y la multiplicacin.
Las bacterias tienen un papel funcional ecolgico especfico. Por ejemplo,
algunas realizan la degradacin de la materia orgnica, otras integran su
metabolismo con el de los seres humanos.
5

Si bien algunas bacterias son patgenas (causantes de diversas enfermedades),
una gran parte de ellas son inocuas o incluso buenas para la salud.
2.3.3. Microorganismos eucariotas
Se denomina eucariotas a todas las clulas que tienen su material hereditario
(su informacin gentica) encerrado dentro de una doble membrana, la
envoltura nuclear, que delimita un ncleo celular.
Hay tres tipos de microorganismos eucariotas, los protozoos (hetertrofos y sin
pared celular), las algas microscpicas (auttrofos y con pared celular de
celulosa) y los hongos microscpicos (hetertrofos y con pared celular de
quitina).
2.3.4. Protistas
Los protozoos son microorganismos unicelulares eucariticos cuyo tamao va
de 10-50 m hasta ms de 1 milmetro, y pueden fcilmente ser vistos a travs
de un microscopio. Son hetertrofos, fagtrofos, depredadores o detritvoros, a
veces mixtrofos (parcialmente auttrofos), que viven en ambientes hmedos
o directamente en medios acuticos, ya sean aguas saladas o aguas dulces. La
reproduccin puede ser asexual por biparticin y tambin sexual por
isogametos o por conjugacin intercambiando material gentico. En este grupo
encajan taxones muy diversos con una relacin de parentesco remota, que se
encuadran en muchos filos distintos del reino Protista, definiendo un grupo
polifiltico, sin valor en la clasificacin de acuerdo con los criterios actuales.
2.3.5. Hongos
El reino Fungi incluye muchas especies macroscpicas que en absoluto encajan
en la definicin de microorganismo, pero tambin forma microscpicas, como
las levaduras, que son campo de estudio de la microbiologa. Adems,
numerosos hongos producen enfermedades infecciosas en animales y plantas y
tienen un gran inters sanitario y agropecuario.
2.3.6. Microorganismos patgenos
Algunos microorganismos son capaces de penetrar y multiplicarse en otros
seres vivos, a los que perjudican, originando una infeccin; son los
denominados microorganismos patgenos. Los problemas que causa una
infeccin dependen del tipo de patgeno, el modo en que se transfiere, dosis
6

o concentracin de patgenos, persistencia de los microorganismos y la
resistencia del organismo infectado.
La dosis de infeccin significa el nmero de microorganismos que entra en el
cuerpo antes de que se produzca la infeccin o enfermedad. Esta dosis es muy
baja para los virus y protozoos parsitos. La persistencia de los
microorganismos depende del tiempo viable de los microorganismos cuando
no se encuentran en el husped humano. Por ejemplo, las bacterias son
generalmente menos persistentes mientras los quistes de los protozoos son los
ms persistentes.
Los jvenes, personas mayores y enfermos de otras patologas son los menos
resistentes a las enfermedades y por lo tanto son ms frgiles. Cuando una
persona es infectada, los patgenos se multiplican en el husped, y esto
supone un riesgo de infeccin o enfermedad. No todas las personas infectadas
por patgenos enferman. Las personas que enferman pueden contagiar y
extender la enfermedad mediante las secreciones y mediante contacto directo
de alguna manera con la mucosa del infectado.

III. MATERIALES Y METODOS
3.1. Materiales
- Placas Petri
- Matraz Erlenmeyer
- Bagueta
- Probeta
- Cocina elctrica
- Algodn
- Agar Plate count
- Agua destilada
- Papel aluminio
- Papel manteca

3.2. Mtodos
Desarrollar la prctica teniendo en cuenta el siguiente procedimiento:
7

a) Preparacin del medio de cultivo en un matraz disolver el agar en polvo con agua
destilada 9.50 gr de medio de cultivo en 150 ml de agua destilada, homogenizamos
disolvemos con la bageta, luego llevar a fuego para su completa disolucin. Tapar la
boca del Erlenmeyer con cierta cantidad de algodn o de papel aluminio, lo dejamos
ah por 5 minutos. (FIGURA1)
b) Esterilizamos las placas Petri, aislamos las placas con el papel manteca luego meter
al autoclave, dejamos abierta la vlvula de vapor, esperamos a que llegue hasta
0.0025 mega pascales. (FIGURA2)
c) Plaquear y fijar un lugar determinado del ambiente que se quiera analizar, en
nuestro caso hemos optado por llevar la placa Petri a la cafetera de la universidad,
dejando al descubierto las placas Petri por un espacio de 5 a 10 minutos. (FIGURA3)
d) Luego incubar a una temperatura de 25 a 30"C, por un espacio de 4 a 5 das.
(FIGURA4)



















8

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES
Despus de alrededor de 45 horas hemos podido observar la formacin de colonias y
mohos. (FIGURA5)
Contamos las colonias al azar a partir de un cuentacolonias casero, una hoja de
cuadriculada, 1 cm de dimetro por cada cuadrado.





FIGURA5
4.1. CUADRO DE CONTEO DE COLONIAS.






4.2. APLICANDO LA ECUACION DEL AREA, PARA HALLAR LA CANTIDAD PROMEDIO EN LA
PLACA PETRI.


V. CONCLUCIONES




N DE VECES AL AZAR N DE COLONIAS
1 CONTEO
2 CONTEO
3 CONTEO
4 CONTEO
9

VI. BIBLIOGRAFIA