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Este documento describe los procedimientos realizados en un coprocultivo para identificar bacterias en muestras fecales. Se analizaron las muestras macro y microscópicamente usando varios métodos como el de Willis. Se cultivaron las muestras en diferentes agares y se realizaron pruebas bioquímicas. Los resultados mostraron la presencia de E. coli, una bacteria normal de la flora intestinal.
Este documento describe los procedimientos realizados en un coprocultivo para identificar bacterias en muestras fecales. Se analizaron las muestras macro y microscópicamente usando varios métodos como el de Willis. Se cultivaron las muestras en diferentes agares y se realizaron pruebas bioquímicas. Los resultados mostraron la presencia de E. coli, una bacteria normal de la flora intestinal.
Este documento describe los procedimientos realizados en un coprocultivo para identificar bacterias en muestras fecales. Se analizaron las muestras macro y microscópicamente usando varios métodos como el de Willis. Se cultivaron las muestras en diferentes agares y se realizaron pruebas bioquímicas. Los resultados mostraron la presencia de E. coli, una bacteria normal de la flora intestinal.
4 TO A EQUIPO #2 (20%) - GABRIELA AYALA RODRIGUEZ (20%) - ARIENNE MARTNEZ JASSO (20%) - ELOY EMMANUEL ROMERO MARTNEZ (20%) - MIGUEL MORALES GALINDO (20%) - RICARDO MILAN AGUIRRE
M.C. HCTOR DANIEL FLORES CHAVEZ
23 DE MAYO DEL 2014
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2. NDICE
1. Portada
2. ndice
3. Resumen
4. Marco terico
5. Objetivos
6. Materiales y Mtodos
7. Resultados
8. Discusin
9. Conclusiones
10. Referencia
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RESUMEN En esta prctica se realiz la tcnica de coprocultivo, para poder identificar diversas enterobacterias que se pueden llegar a encontrar en las heces de una persona. Paso a paso, a lo largo del documento se explicaran todos los procedimientos, as como tambin los resultados ms importantes que se obtuvieron. Para empezar, se obtuvo la muestra de heces de la persona, por medio de una deposicin normal; ya la muestra en el laboratorio, primero que nada se realiz un examen macroscpico, tomando en cuenta que la muestra tena una consistencia pastosa, color caf claro, con presencia de fibras de alimentos no digeridos del todo. Para el examen microscpico se realiz la tcnica de Willis-Molloy, que se trat de colocar un fragmento de las heces, aproximadamente de un gr en el tubo de ensayo, posteriormente se diluyo en una solucin salina saturada (hasta el tope del tubo de ensayo), y ya que quedo completamente homognea, se dej reposar. Todo este procedimiento se utiliza principalmente, como ya se haba mencionado, para identificar la presencia de patgenos en el tubo digestivo (heces); como bien podran ser salmonela, shigella, campylobacter, e. Coli, Vibrio cholera, estos entre otros. En este paciente tambin se observaron al microscopio restos de polen, lo que indica que tal vez viva o se desarrolle en un ambiente donde halla flores silvestres, etc. Se realizaron procedimientos de siembra en las cajas Petri con diferentes agares y posteriormente con las colonias que resultaron de estas se realiz siembra en caldos; tambin realizamos dos tinciones Gram de las muestras de los agares, dando como resultado Gram negativo. De todos estos procedimientos se obtuvo como resultado presencia de E. Coli, lo cual muestra una flora normal en el paciente.
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MARCO TEORICO Las enterobacterias se tratan de microorganismos Gram negativas que principalmente se caracterizan por tener una morfologa de lo que se conoce como bacilos o cocos. Este tipo de bacterias se encuentran principalmente en la flora intestinal del paciente; aunque tambin pueden llegar a ser transitorias ya que se pueden encontrar en diversas estructuras, ms que nada en regiones hmedas, como lo son la cavidad bucal, perineo, fosas nasales y genitales femeninas. Estos se expulsan por medio de las heces, as que su manera de contagio es la va ano-mano-boca, o si el paciente ha tenido contacto con objetos inanimados previamente contaminados. Estos se expulsan por medio de las heces. La enterobacteria ms comn es la Escherichia Coli ya que constituye casi el 80% de la flora aerbica intestinal, por lo que siempre se encuentra en la materia fecal. El coprocultivo o tambin llamado coproparacitoscopico se trata de un examen de laboratorio llevado a cabo en forma de cultivo de la materia fecal. Este se utiliza principalmente para un diagnostico microbiolgico e identificar diversos organismos causantes de las enfermedades gastrointestinales. Este examen est indicado cuando se sospecha de infecciones en sistema gastrointestinal, principalmente todas aquellas que son provocadas por bacterias o las enterobacterias; estas infecciones la mayora de las veces presentan sintomatologa y las ms comunes de estas es la diarrea severa, persistente o recurrente sin alguna causa conocida.
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OBJETIVOS Conocer las bases para realizar un estudio coproparasitolgico Conocer el mtodo de Willis Conocer las caractersticas microscpicas y macroscpicas de las heces
MATERIALES Y MTODOS En esta prctica se utilizaron varios materiales para poder llegar a determinar qu tipo de parsitos se encontraban en el contenido fecal, que fueron los siguientes: Solucin fisiolgica de NaCl Solucin sobresaturada de NaCl Lugol Agar salmonella- Shigella (SS) Agar Sulfito de Bismuto Agar EMB Agar MacConkey Agar Sulfa Caldo tetrationato Palillos Guantes de Ltex Cubrebocas 2 Matraces de 250 ml 2 Portaobjetos Cubreobjetos Microscopio 2 cajas de Petri Tubo para cultivo 12 tubos de ensayo Pruebas bioqumicas de: TSI, SIM, LIA, MIO, Citrato de Simmons, Urea. 5 gr de heces
Toma de Muestras Toma de Heces 6
Para que la toma de heces sea recogida adecuadamente se le pide al paciente que 72 horas antes reduzca en la dieta las fculas y verduras, en cuanto a medicamentos no ingiera sales de bario, magnesio, bismuto y pergantes oleosos.
Examen macroscpico El anlisis macroscpico las heces presentaron los siguientes aspectos: a) Consistencia fecal: Las heces tenan consistencia semislida, de color caf claro, un olor ftido b) Presencia de elementos no fecales Tena presencia de granos de elotes c) Presencia de parsitos y pseudoparasitos Con la presencia del parasito de E. Coli Examen microscpico 1. Colocar en un tubo de ensayo un 1gr (tamao de chcharo) de las heces a examinar 2. Aadir poco a poco solucin salina fisiolgica hasta que se homogenizan las heces, todo esto con ayuda del abate lenguas. 3. Colocar en un portaobjetos limpio, una gota de suspensin fecal 4. Sobre la gota de suspensin, colocar una gota de Lugol concentrado 5. Cubrir con un cubreobjetos y observar al microscopio
Mtodo de Willis 1. Diluir 1 o 2 g de heces en solucin sobresaturada 2. Verter la suspensin fecal homognea en un recipiente de unos 2.5 cm de dimetro hasta que est totalmente lleno y forme un menisco en la superficie 3. Colocar un portaobjetos en contacto con el menisco liquido de 30-35 minutos 4. Ya pasados los 30-35 minutos, retirar rpidamente el portaobjetos, cubrirlo y observar los posibles elementos parasitarios retenidos en la porcin liquida adherida al portaobjetos. 7
Coprocultivo 1. Preparar caldo tetrationato con .915 gr de polvo y 10 ml de solucin salina 2. Se tom 1 ml de la mezcla principal de heces con solucin salina 3. Se deja incubar por 5 das
Agares 1. Agar EMB: se tom .72 gr 2. Agar MacConkey: 1 gr 3. Agar Salmonella- Shigella: 1.2 gr 4. Agar Sulfito de Bismuto: 1.4 gr Se prepar 4 cultivos en los cuales el agar EMB y MacConkey se esterilizan por 15 minutos y el sulfito y salmonella.
Pruebas Bioqumicas SIM: .363 gr MIO: .460 gr TSI: .890 gr LIA: .490gr Urea: .580 gr Citrato de Simmons: .363 gr Se preparan las pruebas bioqumicas para poder determinar los tipos de parsitos, se colocan en tubos de ensayo.
RESULTADOS De los agares se encontr: EMB: se encontr colonia verdes metlicos y otros rosas lo cual es caracterstico de Coli: circulares convexos y enteros SS: se observ color rosado en todo el medio. Son circulares y convexos con margen entero. SB: colonia con un cultivo negro y opaco en forma puntiforme con elevacin convexa y margen entero 8
MacConkey: colonias de color rosados y fiusha, en forma puntiforme elevacin convexa y margen entero.
Pruebas bioqumicas EMB TSI: K/A SIM: + I: - LIA: K/K M:+ I: + O:+ CITRATO: - UREA: - CON RESULTADO CARACTERISTICO DE E. COLI
SULFITO TSI: A/A SIM: + I: + LIA: - M: + I: + O:+ CITRATO: - UREA: - CON REULTADO DE E. COLI TRADICIONAL
DISCUSION Con esta prctica pudimos observar y descubrir que las bacterias que se encontraban en las muestras fecales de nuestro compaero, eran E. Coli, de acuerdo a las distintas caractersticas que presentaba macroscpicamente y a cmo reaccion ante las pruebas qumicas que preparamos. CONCLUSIN Esta prctica nos ayud a conocer la forma en cmo se realizan las distintas pruebas para realizar correctamente un coprocultivo, aprendimos a realizar el mtodo de Willis, al momento de preparar las muestras fecales para poder 9
estudiarlas. Aprendimos a identificar las caractersticas principales de la bacteria ms comn en heces, E. Coli. Adems de practicar otra vez las pruebas bioqumicas las cuales tuvimos que preparar 2 para los cultivos que ms llamaban la atencin. BIBLIOGRAFIA Cabello, R. R. (2007). Microbiologia y parasitologia humana / Microbiology and Human Parasitology: Bases etiologicas de las enfermedades infecciosas y parasitarias. Ed. Mdica Panamericana. Jimenez, L. M. (2002). Ayudas diagnsticas: anlisis e interpretacin. caldas. Santiago Escalante, J.-M. G. (1999). Atlas coprocultivo: manual de procedimientos: ilustraciones. Ecuador.