Universidade Estadual do Paran campus Unio

da Vitria



Gustavo Kotarski
Vitor Sena Kosera
Julio Csar de Paula


REAES DE INDENTIFICAO DE PROTENAS, AMINOCIDOS
SULFURADOS, COM ANEL AROMTICOE REAO DE SAKAGUSHI


Relatrio apresentado como requisito parcial
para obteno de conceito na disciplina de
Bioqumica do curso de Licenciatura em
Qumica pela UNESPAR Universidade
Estadual do Paran campus Faculdade
Estadual de Filosofia Cincias e Letras de
Unio da Vitria.
Prof
o
Marcos Joaquim Vieira


UNIO DA VITRIA
2014

1. INTRODUO

Devido s ligaes peptdicas e presena de diferentes aminocidos,
as protenas reagem com uma variedade de reagentes, formando produtos
coloridos. Algumas reaes de colorao so especficas para aminocidos
encontrados na composio das protenas, por exemplo: reao xantoproteca
(tirosina, triptofano e fenilalamina), reao de Millon (tirosina), reao de
HopkinsCole (triptofano), reao de Sakaguchi (arginina), etc. Estas reaes,
so importantes tanto na deteco como na dosagem de aminocidos e
protenas. Outras reaes, mais importantes, so aquelas chamadas de gerais,
porque iro caracterizar grupamentos comuns a todas as protenas, ou seja,
grupo amino e ligaes peptdicas.
Aminocidos contendo enxofre (sulfurados) tambm exercem um papel
importante no metabolismo. Pode ser obtida a partir de alimentos, tais como as
sementes de gergelim, castanhas do Brasil, peixe, carne, ou atravs da
suplementao. Deficincia de metionina rara, mas quando presente, ainda
que parcialmente, pode levar reduo da taxa de crescimento, juntamente
com leses no fgado, perda de massa muscular, edema, leses na pele e
letargia.

2. OBJETIVOS

Esta prtica teve como objetivos caracterizar a presena de protenas
atravs de testes que reconheam a presena de peptdeos com mais de trs
resduos de aminocidos (reao do Biureto); a presena de arginina na cadeia
peptdica (reao de Sakaguchi); a presena de aminocidos sulfurados
(reao para aminocidos sulfurados).
3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
3.1 REAO DE IDENTIFICAO DE PROTENAS (cido-Base de Lewis):
Utilizou-se 4 tubos de ensaio, que foram separados em tubo com leite,
clara de ovo, gelatina e gua (Branco). Adicionou-se 1 mL de cada amostra em
seu respectivo tubo de ensaio. Em seguida foi adicionado mais 1 mL de
NaOH(2,5M). Os tubos foram homogeneizados, e se adicionou mais 1 mL de
CuSO4 (5%), onde foi homogeneizada e anotada as mudanas de cor.
Tubo 1
(Leite)
Tubo 2
(Clara de ovo)
Tubo 3
(Gelatina)
Tubo 4
(gua)
Amostra 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
CuSO
4
1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
NaOH (2,5N) 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

3.2 REAO PARA AMINOCIDOS SULFURADOS:
Esta reao utilizada para verificar a presena de aminocidos
sulfurados em soluo. Separou-se 3 tubos de ensaio para a realizao das
reaes. Foi pipetado em um tubo de ensaio 1 ml de leite, clara de ovo e
soluo de gelatina. Em seguida, adicionou-se 1 ml de NaOH 2,5 N e a soluo
foi aquecida durante um minuto. Juntou-se, ento, 5 gotas de acetato de
chumbo e a soluo foi aquecida durante 5 minutos.
3.3 Reao de identificao de aminocidos com anel aromtico:
Em 2 tubos de ensaio, respectivamente, foi adicionados 1mL de leite e
clara de ovo, cada uma em um tubo de ensaio. Aps isso, foram adicionados
as solues nos tubos de ensaio, com uma pipeta, nos 2 tubos de ensaio, mais
1 mL de cido ntrico (HNO3), homogeneizou-se e levou para aquecer por 5
min. Aps o aquecimento adicionou-se mais 4mL de NaOH(10M), e
homogeneizado novamente, e anotou-se os resultados.


Amostra HNO
3

Aquecer em
banho-maria
5 min
NaOH 10M
Tubo 1
(Clara de ovo)
1 mL 1 mL 4 mL
Tubo 2 (Leite) 1 mL 1 mL 4 mL

3.4 REAO DE SAKAGUCHI:
Esta reao utilizada para verificar a presena da arginina em soluo.
Foi pipetado 1 ml das amostras em seus respectivos tubos de ensaio. Em
seguida, adicionou se 5 mL de NaOH 2,5 N, 5 gotas da soluo de alfa-naftol e
4 gotas de hipoclorito de sdio.
4. RESULTADOS E DICUSSES
4.1Na reao de identificao de protenas (cido-Base de Lewis), o
sulfato de cobre (CuSO
4
) interage com o aminocido, porm essa reao s
acontece em soluo alcalina, por isso foi adicionado NaOH (2,5 N), com essa
atrao ouve uma mudana tanto em sua estrutura, quanto na sua cor, que
ficou violeta, que deu positivo para biureto, assim conseguiu-se identificar qual
das solues possui protena em sua constituio, e qual era apenas gua
(branco). A cor desenvolvida numa reao de ons de Cu
2+
em meio alcalino
com estas protenas deve-se exclusivamente s ligaes peptdicas e a sua
intensidade proporcional quantidade de tais ligaes.
4.2 Na reao para aminocidos sulfurados, o aquecimento de protenas
em meio alcalino resulta na liberao de enxofre da cistena e da cistina, sob a
forma de sulfato. O sulfato evidenciado pela adio de acetato de chumbo,
dando precipitado castanho ou preto de sulfeto de chumbo. A soluo com
protenas apresentou colorao escura, o mesmo no pode ser observado na
soluo controle, com gua destilada no lugar da soluo de protenas.
4.3 Na reao de identificao de aminocidos com anel aromtico, teve
2 amostras, sendo que uma era clara de ovo e outra era leite, que so
identificadas por possurem anel aromticos. O tubo contendo a clara de ovo
mudou de colorao, ficando marrom, ento a amostra constituda por
protenas. O tubo contendo leite mudou de colorao para um tom de marrom
(ch), em decorrncia de a amostra possuir mais de um anel aromtico em sua
composio.
4.4 Na reao de Sakaguchi, o grupamento guanidina presente na
arginina reage em meio alcalino com o alfa-naftol e hipoclorito, resultando em
um produto de colorao avermelhada. O tubo de ensaio com a soluo de
protenas apresentou colorao avermelhada, indicando a presena de arginina
no peptdeo.

5. CONSIDERAES FINAIS

A partir dos resultados observados, conclui-se que possvel determinar
a presena de protenas em soluo com o auxlio de reaes qumicas
conhecidas, bem como a natureza de alguns aminocidos presentes nestas
protenas.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
- SACHS, L. G. Aminocidos e Protenas Disponvel em <
http://dbt.ffalm.br/sachs/Bioquimica%20I/Aminoac&Prot.pdf > Acessado :
20/05/2014 s 20:33 hrs.
- STEFANI, R. Propriedades Fsicas e Reaes de Protenas Disponvel em
< http://pt.slideshare.net/ricstefani/q-alimentos-proteinas-reaes > Acessado:
21/05/2014 s 9:13 hrs.