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El documento describe el proceso de cromatografía en columna para la separación de compuestos orgánicos. La cromatografía en columna implica el paso de una fase móvil a través de una columna que contiene una fase estacionaria, normalmente gel de sílice, reteniendo los compuestos de manera selectiva según su polaridad. Las variables clave que afectan la separación son el diámetro y longitud de la columna, la elección del eluyente y su gradiente de polaridad, y el tamaño de las partículas del adsor
El documento describe el proceso de cromatografía en columna para la separación de compuestos orgánicos. La cromatografía en columna implica el paso de una fase móvil a través de una columna que contiene una fase estacionaria, normalmente gel de sílice, reteniendo los compuestos de manera selectiva según su polaridad. Las variables clave que afectan la separación son el diámetro y longitud de la columna, la elección del eluyente y su gradiente de polaridad, y el tamaño de las partículas del adsor
El documento describe el proceso de cromatografía en columna para la separación de compuestos orgánicos. La cromatografía en columna implica el paso de una fase móvil a través de una columna que contiene una fase estacionaria, normalmente gel de sílice, reteniendo los compuestos de manera selectiva según su polaridad. Las variables clave que afectan la separación son el diámetro y longitud de la columna, la elección del eluyente y su gradiente de polaridad, y el tamaño de las partículas del adsor
Es el mtodo ms utilizado para la separacin de compuestos orgnico a escala
preparativa. La fase estacionaria se deposita en el interior de una columna de vidrio que termina con una placa porosa que impide su paso y en un estrechamiento con una llave. La mezcla se deposita sobre la parte superior de la fase estacionaria mientras que la fase mvil atraviesa el sistema. Los compuestos van saliendo por separado de la columna y se recogen en fracciones, los ms polares quedan ms retenidos y para que salgan generalmente hace falta aumentar la polaridad del disolvente. El tiempo necesario para eluir un compuesto de la columna se llama tiempo de retencin.
El adsorbente ms utilizado para cromatografa de columna es gel de slice, aunque tambin se puede emplear almina y florisil. La elucin de la cromatografa puede realizarse por gravedad o mediante presin (Flash chromatography), la diferencia en ambos casos est en el tamao de las partculas de gel de slice (0,063-0,200 nm, slice de columna, 0,040-0,063 nm, slice flash). Debido a que la disminucin del tamao de las partculas de adsorbente conduce a una separacin ms eficaz, la cromatografa a media presin (flash) proporciona mejores resultados, adems de ser ms rpida. Las variables que ms influyen en la eficacia de la separacin en cromatografa de columna y utilizando gel de slice como adsorbente son las siguientes: a) Dimetro de la columna y cantidad de gel de slice. La altura del adsorbente est relacionada con la diferencia de Rf de los componentes de la mezcla. El dimetro de la columna con la cantidad de producto a separar. b) Eleccin del disolvente. El disolvente tiene que conducir a una buena separacin de los componentes de la mezcla en capa fina, utilizndose en muchos casos mezclas de disolventes y se realiza una elucin en gradiente. Una de las mezclas ms utilizadas es hexano/acetato de etilo.
EQUIPO UTILIZADO SOPORTE UNIVERSAL PINZAS DE DOBLE PRESION COLUMNA PARA CROMATOGRAFIA VASOS DE PRECIPITADOS VARILLA DE VIDRIO ALGODN MUESTRA DE CHILE GEL DE SILICE DISOLVENTES
RELACION DEL DIAMETRO CON LA LONGITUD DE LA COLUMNA
Dimensiones de la columna: el adsorbente se debe empacar en sta una proporcin de altura/ diametro de 10:1 ejemplo Cunto gel de silice se requiere, para llenar 4/5 partes de una columna de 18mm de diametro y una longitud de 57cm? En el diagrama se muestra que para un dimetro de 18mm,26g del gel slice (empacado como suspensin) dar 18 cm (diam.:altura 10:1) de empaquetamiento. Por lo tanto, para 45.6 cm (4/5 de 57) se requieren 66g (45.6/18x26) de gel de silice.
LIMPIEZA DEL MATERIAL EMPAQUE POR VIA HUMEDA Y SECA Se purga la columna con el solvente menos polar y se empaca con ese mismo disolvente 1-por medio de CCF se optimiza el sistema (adsorbente,eluyente) para la separacin. 2-cantidad de adsorbente que se requiere: de 30 a 100 veces el peso de la muestra (50 veces es un buen promedio). 3-diensiones de la columna el adsorbente se debe empacar en esta en una proporcin de altura/dimetro de 10:1; para estimar la cantidad de adosbente en relacin con el dimetro de la columna. 4-sujete firmemente la columna en forma vertical. 5-llene la columna con el eluyente (o, si se utiliza una mezcla de disolventes,use el componente menos polar). 6-coloque un pedazo de algodn en el fondo de la columna con una varilla de vidrio. 7-vacie el adsobente previamente pesado: Alumina: en forma de un fluido, mientras la columna se golpea suavemente con un pedazo de manguerqa de hule Gel de slice: como una papilla en el disolvente. 8-permita que el disolvente corra (golpeando suavemente la columna) hasta que quede aproximadamente 1mm por arriba de la parte superior del adsorbente. 9-disuelva la sustancia en la en la minima cantidad de gel de slice y aplquelo concuidado y uniformente en la parte superior de la columna. Despues, abra la llave y corra el disolvente hasta que quede nuevamente una capa de 1mm por arriba del adsorbente. Repita la misma operacin varias veces utilizando cantidades pequeas de eluyente. 10-llene cuidadosamente con el eluyente el volumen de la columna que queda por arriba del adsorbente, para proteger la suerficie de este, se puede depositar una capa de gel de slice seco de .5cm de espesor en la parte superior de la columna. 11-colecte el eluyente en fracciones(fracciones de x ml por x g de adsorbente). 12-velocidad del flujo: las velocidades altas proporcionan malas separaciones. Una regla emprica indica de 3 a 4 ml por minuto en una columna de 40cm de altura. 13- evapore cada fraccin, pese el residuo e incluya la informacin del registro.
Cmo se lleva a cabo la cromatografa en columna de sustancias incoloras? Si las sustancias sometidas a cromatografa no son coloreadas, se necesitan mtodos especiales para su localizacin. Generalmente se emplea una lmpara ultravioleta, para los que presentan fluorescencia.
Adsorcin La adsorcin es la propiedad que tienen ciertos slidos de aumentar la concentracin en su superficie de otras sustancias. La separacin se debe a las diferencias de adsorcin de los componentes de una mezcla sobre la fase estacionaria.
Absorcin Es la retencin de una especie qumica por parte de una masa, y debido a la tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera, absorcin pura, o a reaccionar qumicamente con la misma, absorcin con reaccin qumica.
Eluyente (Fase mvil). Es el disolvente que pasa a travs de la fase estacionaria en la columna.
Eluato Disolucin que sale despus de pasar por la fase estacionaria y que es recolectada. Fase estacionaria generalmente slida, su funcin es retener la muestra, posee cierta porosidad. Fase mvil: generalmente lquido (o gas) que debe interaccionar con la muestra arrastrndola a travs de la fase estacionaria.
Grado de resolucin
El grado de separacin o resolucin de dos bandas adyacentes se define como la distancia entre los picos de las bandas (o centros) dividida entre el ancho promedio de las bandas. Si la retencin y el ancho de la banda se miden en unidades de tiempo, como en la Fig, la resolucin est dada por: Rs = (tR,2 - tR,1)/(0.5(W2+W1))
Velocidad de flujo:
Fc=velocidad de flujo de la fase mvil (ml/minuto) a la temperatura de la columna; t'R = tR - tM Vm = tM Fc
t'R=tiempo de retencin corregido; t'M=tiempo muerto (lo que demora en salir una especie no retenida,t0); Vm=volumen muerto o volumen intersticial de la columna; V'R = t'R.FcV'R=volumen de retencin corregido.
KD en cromatografa
Kd es el coeficiente de distribucin del soluto en gel y puede calcularse como: Kd = (VR V0) / Vi = (VR V0) / Vt V0 Kd oscila entre 0 y 1 Si Kd = 0, comprende a las molculas cuyo tamao es mayor al de los poros del gel. Si Kd = 1, comprende a las molculas cuyo tamao les permite penetrar completamente en los poros del gel. Si 0 < Kd < 1, las sustancias se separan selectivamente en el rango de fraccionamiento del gel. Si Kd > que 1, significa que existen mecanismo de retencin adicionales, diferentes de la exclusin molecular. Cromatografa de Particin / Adsorcin La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y mvil, que son ambas lquidas. CICLOHEXANO SPARTAN