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Evaluar el crecimiento de las microalgas Scenedesmus obliquus, y

Haematoccus pluvialis a diferentes temperaturas.



Anteproyecto del Trabajo de Grado



Investigadores
Laura Jaramillo Uparela
David Zapata Ruiz



Asesora:
Ana Crdenas Orrego
Candidato a Msc. Ingeniera Qumica



Co-asesor:
Alex Saez Vega





Universidad EAFIT
Decanatura de Ingeniera
Departamento de Ingeniera de Procesos
2013
2
Contenido
1. Planteamiento del problema .............................................................................. 4
2. Preguntas De Investigacin .............................................................................. 6
3. Hiptesis ............................................................................................................. 7
4. Justificacin ....................................................................................................... 8
5. Objetivos ........................................................................................................... 10
5.1. Objetivo general........................................................................................................... 10
5.2. Objetivos especficos ................................................................................ 10
5.3. Alcance del proyecto ................................................................................. 10
6. Marco terico .................................................................................................... 11
6.1. Antecedentes ............................................................................................. 11
7. Marco terico ...................................................... Error! Bookmark not defined.
7.1. Microalgas .................................................................................................. 13
7.2. Como afecta el gradiente de temperatura en la produccin de biomasa
de las microalgas? .............................................................................................. 14
8. Materiales y mtodos ....................................................................................... 16
8.1. rea experimental ...................................................................................... 16
8.2. Microalgas .................................................................................................. 16
8.3. Metodologa ................................................................................................ 16
9. Presupuesto del proyecto ............................................................................... 17
10. Cronograma ................................................................................................... 18
Referencias bibliogrficas ......................................................................................... 19


3
ndice de Tablas

Tabla 1. Presupuesto del proyecto ............................. Error! Bookmark not defined.




ndice de figuras

Figura 1. Cronograma de actividades 1 ...................... Error! Bookmark not defined.
4
Evaluacin del crecimiento de diferentes cepas de microalgas a
diferentes temperaturas.

Estudiante de Pregrado: Laura Jaramillo Uparela, David Zapata Ruiz
Asesor: Ana Crdenas Orrego
Entidades Participantes: Universidad EAFIT
Nombre de Grupos de Investigacin Partcipes:

1. Planteamiento del problema

Uno de los principales problemas ambientales del siglo 21, a nivel mundial es la
emisin de dixido de carbono a la atmosfera. Estas emisiones son generadoras de
gases de efecto invernadero (GEI) que provocan que la radiacin infrarroja se
detenga en la atmsfera, por lo que se calienta la superficie de la Tierra y la parte
inferior de la atmsfera generando el 48,3% en el planeta.
La fuente de energa ms utilizada en el mundo son los combustibles fsiles, el 86%
de la energa mundial procede de fuentes fsiles y su combustin es responsable del
75% de las emisiones de co2 y contaminacin ambiental en forma de desechos
qumicos y biolgicos
La regin de Amrica Latina y el Caribe es responsable de un alto porcentaje de las
emisiones de dixido de carbono a nivel mundial por el cambio de uso del suelo que
se esta experimentando en los ultimos tiempos debido a cambios de las actividades
economicas(Martinez Garcia, 2012).
En la ltima dcada el sector de la construccin ha experimentado un incremento del
1.7% y es el que ms emisiones aporta, sntoma del aumento de poblacin y del
nivel de vida y tema de gran inters para investigaciones actuales (Naciones Unidas,
2009)


As mismo uno de los principales problemas ambientales del siglo 21, a nivel
mundial es la emisin de dixido de carbono a la atmosfera (Martinez Garca, 2012), estas
emisiones son generadoras de los gases de efecto invernadero (GEI) (Suebsiri, Wilson e
Tontiwachwuthikul, 2005), estos gases provocan que la radiacin infrarroja se detenga en
5
la atmsfera, por lo que se calientan la superficie de la Tierra y la parte inferior de la
atmsfera (Echeverri Londoo, 2006). Por esta razn se ha visto la necesidad de
incrementar los estudios relacionados con la solucin de este problema y sobre todo
en la forma ms eficiente y efectiva para capturarlo y poder mitigar las emisiones al
ambiente(Suebsiri, Wilson e Tontiwachwuthikul, 2005), para la captura de CO
2,
existen
diferentes estrategias tales como absorcion por medio de la post combustion de
monoetanolamida (MEA), almacenamiento subterrneo de dixido de carbono y la
captura de dixido de carbono con microalgas (Cassidy, 2011).
Una tecnologa prometedora es la captura biolgica de CO
2
con microalgas. Estos
microorganismos pueden fijar el CO
2
utilizando la energa solar con eficacia diez
veces mayor que las plantas terrestres (Pires et al., 2012)
A partir de lo anterior y analizando la problemtica vemos la nesecidad de realizar un
proyecto en el cual se buscara analizar el crecimiento de diferentes cepas de
microalgas al ser sometidas a una variacin de temperatura, debido a la fuerte
influencia de esta en la composicin qumica celular , la absorcin de los nutrientes,
la fijacin del dixido de carbono y las tasas de crecimiento de todas las especies de
algas(Ono e Cuello, 2007) . No obstante para poder llevar a cabo dicha propuesta es
necesario analizar la cintica de crecimiento y la productividad de las microalgas al
ser sometidas a diferentes temperaturas(Cassidy, 2011).
6
2. Preguntas De Investigacin

Cmo varia el crecimiento celular de dos diferentes cepas de microalgas,
Scenedesmus obliquus y Haematoccus pluvialis, cuando su inoculo se
obtiene de los fotobioreactores semillas del mdulo SP1, al ser evaluadas a
tres temperaturas diferentes?

Cul es la productividad obtenida de dos cepas de microalgas,
Scenedesmus obliquus y Haematoccus pluvialis con su inoculo obtenido de
cultivos de activacin, al ser expuestas a tres diferentes temperaturas, 30, 35
y 45C?

Pregunta de investigacin de contenido de lpidos?

7
3. Hiptesis

Al someter las microalgas Scenedesmus obliquus, y Haematococcus pluvialis a
diferentes temperaturas: 25C (ambiente), 30, 35 y 40C se promover la tasa de
crecimiento.

8
4. Justificacin

Al analizar el estado actual del pas, y detenernos a pensar en la problemtica
ambiental que se est presentando, nos damos cuenta que se han desarrollado
diferentes soluciones y tratados; tales como el protocolo de Kioto, el protocolo de
Montreal, la declaracin de rio, entre otros, en pro del desarrollo sostenible del pas,
los cuales se unen en la bsqueda de una solucin a la problemtica ambiental
sobre todo al impacto generado por el calentamiento global, el cual permite el paso
de la luz solar hacia la tierra, pero absorbe una gran parte de la radiacin de calor
reflejada de la superficie de la tierra y la devuelve en un 50%, con lo que contribuye
al aumento del efecto invernadero natural. ("2495 greenhouse effect [n]," 2010) este
es causado por la emisin de algunos gases entre los cuales se encuentran el
dixido de carbono [CO
2
], el metano [CH
4
], el gas hilarante [N
2
O], el ozono cercano
al suelo [O
3
] y los compuestos fluroclorocarbonados [FCC]. (Demarty & Bastien,
2011),en partculas las emisiones de CO
2
son las que presentan un mayor aumento
Una alternativa para disminuir el CO
2
atmosfrico es su captura a travs del uso de
microalgas (Toledo Cervantes, 2010) debido a que este proceso presenta diversas
ventajas al ser un mtodo sostenible del medio ambiente, su crecimiento est dado
directamente a travs de la energa solar y son co-productores de materias primas
de alto valor aadido a partir de la biomasa (Pires, Alvim-Ferraz, Martins, & Simes,
2012), adems de la eficiencia en la captura del dixido de carbono diversos
estudios han encontrado que la temperatura es un factor a tener en cuenta, ya que
sta influye en los coeficientes de velocidad de reacciones biosintticas, la relacin
entre temperatura y velocidad de crecimiento crece exponencialmente hasta que se
alcanza la temperatura ptima.(Martinez Garcia, 2012)

Teniendo en cuenta lo anterior este proyecto pretende evaluar el crecimiento de las
microalgas Scenedesmus obliquus, y Haematoccus pluvialis obteniendo su inoculo
de diferentes fuentes y exponindolas a diferentes temperaturas, debido a la
posibilidad que ofrecen estas cepas en cuanto a una solucin al problema de las
emisiones de CO
2
debido a su eficiencia en la captura de este mismo.

9
Se determinar cules microalgas presentan un alto crecimiento celular al ser
expuestas a altas temperaturas y al ser obtenidas de diferentes inoculos y
condiciones de asepsia, igualmente cul es su productividad y contenido de lpidos
mediante la medicin de su biomasa y densidad ptica durante 15 das, todos los
das y como es su comportamiento en base a las observaciones durante su etapa de
crecimiento.
Con esta evaluacin se podr determinar y seleccionar con mejor criterio las
microalgas con mayor temperatura de crecimiento y productividad. A la par, este
proyecto de grado busca complementar el perfil del estudiante de ingeniera de
procesos, y de esta forma adquirir capacidades para la realizacin de proyectos de
investigacin, ser personas innovadoras abiertas a los cambios, abiertas a los
cambios que se presenten en su vida personal y laboral y ser personas capaces de
llevar a cabo proyectos propios que los lleven al xito.

Con base a lo citado anteriormente y con el fin de llevar a cabo este proyecto, se
pretenden resolver las siguientes preguntas de investigacin:

Cmo varia el crecimiento celular de dos diferentes cepas de microalgas,
Scenedesmus obliquus y Haematoccus pluvialis, cuando su inoculo se
obtiene de los fotobioreactores semillas del modulo SP1, al ser evaluadas a
tres temperaturas diferentes?

Cul es la productividad obtenida de dos cepas de microalgas,
Scenedesmus obliquus y Haematoccus pluvialis con su inoculo obtenido de
cultivos de activacin, al ser expuestas a tres diferentes temperaturas, 30, 35
y 45C?

Pregunta de investigacin de contenido de lipidos?


10
5. Objetivos

5.1. Objetivo general

Evaluar el crecimiento celular de las microalgas Scenedesmus obliquus, y
Haematoccus pluvialis, bajo dos condiciones diferentes de inoculo.

5.2. Objetivos especficos

Estimar la productividad para las microalgas Scenedesmus obliquus, y
Haematoccus pluvialis, al obtener el inoculo de los fotobioreactores semilla,
del mdulo SP1, a cuatro diferentes temperaturas.

Evaluar el crecimiento de las microalgas Scenedesmus obliquus, y
Haematoccus pluvialis partiendo de un inoculo adquirido de los cultivos de
activacin cuatro diferentes temperaturas.

Caracterizar la biomasa obtenida de cada cepa bajo las dos condiciones
diferentes de inoculo a cuatro diferentes temperaturas.

5.3. Alcance del proyecto

Al culminar el proyecto de grado se tendrn como resultados:

Un informe escrito para la biblioteca de la universidad EAFIT, el cual
contenga una amplia revisin bibliogrfica, la metodologa utilizada y los
resultados obtenidos en el proyecto de investigacin.


11
6. Marco terico

6.1. Antecedentes

Se han investigado varias estrategias para lograr la mitigacin de las emisiones de
gases de efecto invernadero a la atmosfera, especialmente las de CO
2
, pues la
reduccin de estas emisiones representa un aspecto importante en el desarrollo
sostenible de las actividades industriales. Jacob-Lopes et al., (2009) evaluo
diferentes estrategias operativas de fotobioreactores y encontro que el secuestro de
CO
2
por reacciones fotosintticas lograria ser una estrategia adecuada desde este
punto de vista, debido a que puede ser transformado en diversos productos que
pueden ser reutilizados en diferentes maneras. (Jacob-Lopes, Revah, Hernndez,
Shirai, & Franco, 2009)
Al llevar a cabo el anlisis de la fijacin de CO
2
mediante microalgas, especies de
rpido crecimiento, se encontr que este ofrece una alternativa muy prometedora
para la mitigacin del CO
2
, el gas de efecto invernadero con mayores emisiones. El
mrito principal de esta estrategia radica en el hecho de que, a travs del cultivo de
microalgas, la mitigacin de CO
2
y la produccin de biocombustibles podran
combinarse de una manera econmicamente viable y ecolgicamente sostenible. La
viabilidad de esta estrategia podra ser mejorada an ms mediante la fijacin de
CO
2
de los gases de escape industriales, tales como los gases de combustin y
mediante la integracin de cultivo de microalgas con tratamiento de aguas
residuales.(Wang, Li, Wu, & Lan, 2008)
Adicionalmente, otro estudio realizado en la captura de CO
2
que buscaba

maximizar
tanto la eficiencia energtica del proceso como la eficiencia econmica, encontr que
el uso de especies de microalgas, permite esta captura de forma rpida y efectiva
debido a que tienen como una de sus caractersticas la alta fijacin de CO
2,
la
eficiencia de conversin de energa solar, son capaces de convertir la energa solar
en H
2
, y tienen la capacidad de producir una alta cantidad de biomolculas valiosas
(Skjnes, Lindblad, & Muller, 2007)
12

Las microalgas son un grupo diverso de microorganismos fotosintticos procariotas y
eucariotas que pueden crecer rpidamente debido a su estructura simple, estos
microorganismos pueden producir una gran variedad de nuevos bioproductos con
amplias aplicaciones en la medicina, la alimentacin, y cosmtica industrias. (Chisti,
2007)

El Trabajo de Carvalho, Meireles e Malcata (2006) concluto en que para alcanzar la
mxima productividad, de las microalgas varios parmetros deben ser controladas,
como lo son el nivel suficiente de nutrientes una ptima temperatura y monitorizacin
del pH, as como una mezcla adecuada de aire y la turbulencia del mismo, junto con
posibilidad de desgasificacin del oxgeno y control de la luz (Carvalho, Meireles, &
Malcata, 2006)

Al realizar estudios de las diferentes microalgas que sern evaluadas en el presente
trabajo se encontraron los siguientes resultados basados en la temperatura de
crecimiento. La microalga Haematococcus pluvialis ha sido objeto de una serie de
estudios en los cuales ha intentado determinar la temperatura ptima y la
combinacin de irradiancia para el crecimiento esta cepa. al explorar
simultneamente los efectos de la temperatura y la irradiacin en una sola cepa de
H. pluvialis (UTEX 2505) a travs de una regin experimental que abarcaba las
combinaciones reportadas de estos factores para mltiples cepas.
Para este fin, se cre un diseo experimental de dos dimensiones basado en la
metodologa de superficie de respuesta (RSM). Las tasas mximas de crecimiento
para UTEX 2505 se obtuvieron a 27C y 260 mol fotones m
2
s
-1
(Evens, Niedz, &
Kirkpatrick, 2008).


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6.2. Microalgas
Las microalgas son organismos fotosintticos; capaces de transformar la energa
luminosa en energa qumica con una eficiencia cuatro veces mayor a la de las
plantas, estas tambin corren con la caracterstica de ser no vasculares que
contienen clorofila a como su pigmento fotosinttico primario y poseen estructuras
reproductoras simples; algunas micro algas adems de clorofila constan de
pigmentos carotenoides y biliproteinas que enmascaran el color (dawes,1986; brock
y madigan 1993).
Las microalgas son organismos microscpicos fotosintticos que se encuentran en
medios de agua marina y agua fresca. El mecanismo fotosinttico es similar al de las
plantas terrestres, debido a su estructura celular simple y el factor que estn
sumergidas en un ambiente acuoso, donde ellas tienen un eficiente acceso al agua,
al CO
2
o ms y ms nutrientes, generalmente son mucho ms eficientes que las
plantas terrestres para convertir energa en biomasa (John et al. 2010)
Las clulas de algunas microalgas son de naturaleza eucariota las cuales contienen
en su citoplasma organelos limitados por membranas, como los cloroplastos,
mitocondrias ncleo; o bien son procariotas las cuales carecen de lo antes
mencionado (pelezar, 1982).
Las condiciones ptimas de temperatura, intensidad luminosidad, salinidad,
nutrientes y PH para el cultivo de microalgas, varan ampliamente de una especie a
otra, estos parmetros fisicoqumicos, han sido determinados en laboratorio y nos
ayudan a comprender las condiciones ptimas para el desarrollo de las diferentes
especies de cultivo. Actualmente a nivel comercial, los cultivos masivos de
microalgas al exterior y los fotobioreactores cobran mayor importancia para la
producciones de compuestos qumicos de alta pureza, con: biocombustibles,
biofertilizantes, intercambiadores inicos y carotenos (John et al. 2010).
La necesidad de datos cuantitativos en el estudio del efecto del crecimiento de las
microalgas es evidente si se acepta el rol de la temperatura en las aguas frescas de
nacimiento (Epley, 1972) y el impacto de la contaminacin trmica del agua (Algal
growth in crossed gradients of light)
14
6.3. Como afecta el gradiente de temperatura en la produccin de
biomasa de las microalgas?
La temperatura es uno de los factores ambientales ms importantes que afectan el
crecimiento y desarrollo de los organismo vivos. El crecimiento de algas depende
tambin de la temperatura, por lo que se requiere conocer un valor ptimo para una
tasa mxima de crecimiento. Los sistemas fotosintticos siempre generan calor a
causa de la ineficiencia de la fotosntesis de convertir la energa luminosa a energa
qumica. La conversin terica de la luz roja en energa qumica es de un 31 % y el
69 % restante se pierde como calor. Por ello, la cantidad de enfriamiento en un
sistema de cultivo depender de la intensidad de la luz y de la concentracin celular,
sin embargo, el enfriamiento del reactor es slo utilizado en sistemas cerrado.
En este momento estudios demuestran que los efectos de la temperatura,
porcentajes de co2 e intensidad de luz, son importantes en la multiplicacin de las
microalgas, en los ltimos aos se ha tornado un tema fundamental en el estudio de
las condiciones optimas para la produccin de microalgas. (effects of temperatura
co2-02 concentration and light intensity on)
Las micro algas son particularmente atractivas como stock por su alta produccin
de biomasa a base de lpidos e hidrogeno, desde que ellos han sido adaptados para
crecer en un rango de condiciones ambientales como a diferentes gradientes de
temperatura en muchos casos se ha duplicado su crecimiento y produccin de
biomasa , (Mata et al.,2010), puesto que la composicin qumica de las microalgas
es influenciada por las condiciones ambientales incluyendo la temperatura y la luz
(S.M Renaud et al/ aquaculuture.. effect of temperatura on growth chemical
composition and fatty acids).

Efecto invernadero
los cuerpos emiten radiacin; estos rayos o fotones son ondas electromagnticas
que no necesitan ningn medio mate- rial para propagarse, ms bien la materia
dificulta su avance. Como cual- quier onda, las electromagnticas se caracterizan por
su longitud de onda o alternativamente por su frecuencia, siendo ambas
15
cantidades inversamente proporcionales: una onda larga es de baja frecuencia y una
corta es de alta frecuencia. Se llama espectro electromagntico el (o un) conjunto
total (o parcial) de ondas de diversas frecuencias (libro 437)

Gran parte de la radiacin que recibimos surge de los pisos y paredes de los
recintos que habitamos, ya que los materiales utilizados para la construccin se
obtienen a partir de elementos naturales que contienen radio nucledos. Por otra
parte, los alimentos que ingerimos, el agua que bebemos y el aire que respiramos
tambin tienen en su composicin una pequea porcin de elementos radioactivos Y
no olvidemos que nuestro propio organismo contiene potasio, parte del cual es
tambin radioactivo. Pensemos ahora, por ejemplo, en aquellas personas que son
viajeros frecuentes o personal areo. Ellas estn expuestas a una cantidad extra de
radiacin csmica en comparacin con quienes acostumbran a estar con los pies en
la tierra, ya que el filtro y la proteccin que brinda la atmsfera es menor a grandes
alturas.(prontuario de la radiacin electromagntica)
Productos frescos como lechuga, pepino, hierbas y tomate es una parte importante
de una dieta saludable y se exige por parte del consumidor moderno. En las regiones
del norte del mundo, la produccin se lleva a cabo principalmente en invernaderos
modernos, en los que el cultivo en el suelo ha sido reemplazado por cultivos sin
suelo, debido a la exigencia de mano de obra inferior y la disminucin del riesgo de
la planta transportados por el suelo enfermedad. Hay diferentes diseos de sistema
de cultivo sin suelo, pero todos comparten la necesidad de utilizar una solucin de
nutrientes con el fin de proporcionar el crecimiento de plantas(Treatment of drainage
solution from hydroponic greenhouse production with microalgae)

La tasa de aumento de las emisiones de gases de efecto invernadero (GEI) en el
siglo 20, se cree que es la principal causa del cambio climtico global, esto ha
llevado a la formacin de numerosos acuerdos internacionales para controlar la
generacin de gases de efecto invernadero por las diferentes actividades industriales
en todo el mundo. Plantas de tratamiento de aguas residuales (EDAR) se han
reportado como una de las fuentes industriales de GEI que tienen el potencial de
produccion para producir dixido de carbono (CO2), el metano (CH4) y xido nitroso
(N 2 O) a travs de varios procesos biolgicos como qumicos y as como las
secciones de produccin de energa, la combustin y el transporte.( Greenhouse gas
emission by wastewater treatment plants of the pulp and paper industry Modeling
and simulation)


16
7. Materiales y mtodos

7.1. rea experimental

Los ensayos y pruebas a realizar en este proyecto sern llevados a cabo en los
laboratorios de la Universidad EAFIT, sede Medelln, Antioquia, Colombia.

7.2. Microalgas

Se trabajara con las microalgas Scenedesmus obliquus(UTEX), y Haematoccus
pluvialis(UTEX) almacenadas en -----------------

Medio de cultivo BBM, para la S. Obliquus las concentraciones son 0.99 NaNO
3
(g/L)
y 0.14 K
2
HPO
4
(g/L) y para H. pluvialis 0.73 NaNO
3
(g/L) y 0.08 K
2
HPO
4
(g/L) -----------
---.

Estas microalgas fueron aisladas segn la metodologa de-------------.

Las muestras fueron recolectadas de diferentes -----------.

Estas microalgas fueron identificas por la tcnica -------

7.3. Metodologa

Para Objetivo 1:

17
8. Presupuesto del proyecto

En el siguiente cuadro se detalla el presupuesto necesario para llevar a cabo la
realizacin del proyecto de grado:

CONCEPTO VALOR
Asesor de proyecto de grado $ 560,000
Estudiante de pregrado $3,000,000
Materiales y reactivos $
Papelera $
Equipos $
TOTAL $
Figura 1. Presupuesto del proyecto
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9. Cronograma


El cronograma propuesto para poder cumplir los objetivos es el siguiente:



Figura 2. Cronograma de actividades
19
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